Thesis (Ph. D.)--Oregon State University, 2007. / Printout. Includes bibliographical references (leaves 101-109). Also available on the World Wide Web.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2016-10-24T17:42:22Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 897910 bytes, checksum: 6d223abfcfc5662f26f3080c04b84c76 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-24T17:42:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 897910 bytes, checksum: 6d223abfcfc5662f26f3080c04b84c76 (MD5) Previous issue date: 2000-12-15 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Clostridium perfringens tipo B, bactéria anaeróbia, heterofermentativa, gram-positiva e produtora de toxina, é importante agente causador de doenças entéricas em animais. As toxinas inativadas α, β e ε produzidas por esse microrganismo estão presentes na composição das vacinas veterinárias contra clostridioses. Neste trabalho, estudou-se o efeito da composição do meio de cultura e do pH sobre o crescimento e produção de toxinas por Clostridium perfringens Tipo B para produção de vacinas veterinárias. Foram estudadas as concentrações iniciais da glicose e a presença de diferentes hidrolisados protéicos no meio – peptona de carne e peptona de caseína – e suas combinações. Os experimentos foram realizados em culturas conduzidas sob regime de batelada, com o uso de meio basal recomendado na literatura, observando-se a produção máxima de toxinas. Amostras foram coletadas a cada hora para determinação da concentração de células, ácido lático, ácido acético, ácido propiônico, ácido fórmico, etanol e glicose. Os melhores resultados foram obtidos quando o pH foi mantido em 6,5, utilizando-se 10,0 g.L-1 de glicose e 10,0 g.L-1 de hidrolisado protéico. A origem da proteína não teve influência significativa sobre o cultivo e a produção de toxinas. Pela análise da cinética de crescimento e produção, evidenciou-se que a formação de toxinas está associada ao crescimento. O presente estudo permitiu encontrar parâmetros satisfatórios de cultivo, que foram utilizados na ampliação de escala para produção industrial de vacinas contra clostridioses causadas por C. perfringens tipo B. / Type B Clostridium perfringens, anaerobic, hetero-fermentative, gram- positive and toxin producer bacteria is an important agent of enteric diseases in animals. The α, β and ε inactivated toxins produced by this microorganism are present in the composition of veterinary vaccines against diseases. In this work, the effects of culture medium composition and pH on growth and toxin production by the bacteria were studied. The initial glucose concentrations and the presence of different hydrolytic proteins in the medium – meat peptone and casein peptone – and their combination, were studied. The experiments were conducted in the batch system, using basal medium as recommended by literature. The best results were obtained when pH was kept at 6.5, using 10.0 gL-1 glucose and 10.0 gL-1 hydrolytic protein. The variation of the protein origin had no significant effect on the growth and toxin production. The analysis of the growth kinetics and production indicated that toxin formation is associated with growth. The present study permitted the finding of optimum growth parameters which were used in the amplification of scale for industrial production of vaccines against clostridial diseases caused by type B Clostridium perfringens. / Não foi localizado o cpf do autor.

Microrganismos do gênero Clostridium, particularmente Clostridium petfringens, permanecem como um grave problema na avicultura mundial, do ponta de vista de saúde animal, de saúde pública tanto quanto econômico. O Clostridiurn perfrngens é considerado um habitante comensal do trato intestinal de frangos de corte, no entanto, quando submetidos a alteraçóes na dieta ou mesmo então após a abolição de determinados promotores de crescimento pela Comissão das Comunidades da União Européia, o controle da população microbiana tornou-se reduzido. Uma dieta rica em grãos. trigo, cevada, e arroz aumentam a viscosidade intestinal através do aumento da produção de muco, como conseqüência do aumento de retenção de água no Iúmem intestinal e pela ausência de enzimas capazes de agir sobre os produtos da digestão destes carboidratos. De fato, o aumento do crescimento microbiano comprometem as funçóes da mucosa intestinal. A partir destes fatores, o presente trabalho tem como objetivo quantificar Clostridium perfrngens em duas diferentes dietas com e sem promotor de crescimento, utilizando um método analítico alternativo em dois segmentos do trato intestinal de frangos de corte. Para avaliar este método foi proposto a inclusão de alguns critérios de verificação do protocolo de validação para métodos microbiológicos alternativos, métodos quantitativos, referenciados na NordVal Validation (2005). Para avaliar o efeito das dietas foram analisadas 73 aves quanto a presença de Clostridium periringens pelo método bacteriológico convencional segundo MAPA e BAM adaptados de acordo com a natureza da amostra no laboratório do CDPA-UFRGS pelo seguinte protocolo: l g de inóculo de raspado de ileo e 1 g de conteúdo cecal acondicionados em 9 mL de água peptonada tamponada 0,1%, diluição 1:10, homogenizados e diluídos até a diluição 10º , posteriormente mantidos em banho-maria a 80°C durante 10 minutos seguido de refrigeração em água a 20°C. aliquotas de 1 mL eram inoculadas em ágar TSC e incubados a 37" C por 24 horas. Foram analisados 4 tratamentos: T1- dieta vegetal com promotor de crescimento, T2- dieta vegetal sem promotor de crescimento, T3- dieta vegetal milho e soja mais produtos de origem animal com promotor de crescimento e T4- dieta vegetal milho soja mais produtos de origem animal sem promotor de crescimento. A dieta do tratamento 3 obteve menor quantificação para Clostridium perfrngens nas diferentes idades de coleta. Algumas combinações de amostras intestinais diferiram com maior destaque. As amostras 26, 28, 42 e 48 são consideradas significativas com valores menores que o nível de 10% de significância (<0,10) - para interações triplices utiliza-se um nível de significância maior. Podemos considerar que a partir do 16" dia de idade iniciou a multiplicação de Clostridium perfringens no trato intestinal das aves e a partir do 25º dia de idade ocorreu uma redução mais significativa no ceco e íleo. Os ensaios para verificação do limite de detecção do método usado para ileo e ceco demonstraram um intervalo de detecção entre >40 células e c421 células por mL. Desta forma o método demonstrou um limite de detecçáo por perda de recuperação de células nas matrizes de ceco indicando que os resultados são quantitativamente maiores nas amostras. Possivelmente fatores interferentes tais como, analíticos, redução de ph, ácidos graxos de cadeia curta, exposição ao oxigênio podem ter interferido sob a recuperação das células. / Microorganism of the genus Clostridium particularly Clostridium perfringens, rernain a serious problern to the world's poultry industry, in aspects not only of animal and hurnan health but alço econornical. Clostridium perfringens considered a co mensal inhabitant of the intestinal tract of broiler chickens, however when subjected to diet alterations or even after elimination of certain growth prornoters by the Cornmission of the European Cornmunities, the control of the rnicrobial population has become reduced. A diet rich in grains such as wheat, barley and rice, increase the intestinal viscosity through increasing the production of mucous as a consequence of water retention in the intestinal lumen and the absence of enzyrnes capable of acting upon the products of the digestion of these carbohydrates. In fact, microbial growth affects the intestinal rnucous function. Based on these factors the following study has the objective to analyze the influente of two diets with or without growth prornoters under the evaluation of a new method for the isolation and quantification of Clostridium perfringens in two segrnents of the gastrointestinal tract of broiler chickens. To evaluate this method there were proposed the inclusion of some verification criteria for the validation protocol in alternative rnicrobiological methods, quantitative rnethods referred to in NordVal Validation (2005). To evaluate the effect of the diets, 73 birds were analyzed as to the presence of Clostridium perfrngens using the conventional bacteriological method according to MAPA and BAM adapted to the type of sample in the CDPAIUFRGS laboratory using the following protocol: l g of scraped inoculurn of the ileurn and 1 g of cecurn content suspended in 9 rnL of peptonated and parnptonated water at 0,1%, dilution 1:10, homogenized and diluted to 10". later maintained in a hot water bath of 80°C during 10 rninutes followed by refrigeration in water at 20°C, samples of 1 mL were suspended in agar TSC and incubated at 37" C for 24 hours. Four different treatments were analyzed: TI- vegetable diet with a growth promoter, T2- vegetable diet without a growth promoter, T3- vegetable diet of corn and soy beans with animal originated products and a growth promoter and T4- vegetable diet of corn and soy beans with animal originated products without a growth promoter. The diet of treatment 3 obtained the lowest quantification for Clostridium perfrngens at different collection times. Some combinations of ileum samples had outstanding differences. Samples 26,28, 42 and 48 are considered significant with values lower than the 10% level of significance (>0,10) -for the triple interactions a greater level of significance is utilized. We may consider that from the 16th day of development the multiplication of Clostridium perfringens began, in the gastrointestinal tract of the chickens and from the 25th day of development there occurred a more significant reduction in the ileum and cecum. The practices to verify the limit of detection of the method used for the ileum and cecum demonstrated an interval of detection between >40 cells and c421 cells per mL. As such, the method showed a limit of detection per loss of cell recuperation in the cecum matrix indicating results that are quantitatively greater in the samples. Possibly, interfering factors such as analyiical, reduction of ph, short-chain fatty acids, exposure to oxygen could have interfered with the recuperation of cells.

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Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2015. / Submitted by Guimaraes Jacqueline (jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2015-10-27T10:33:17Z No. of bitstreams: 1 2015_IgorDeOliveiraPoty.pdf: 923333 bytes, checksum: c7ebab31ea778a96493f6f986d77be55 (MD5) / Approved for entry into archive by Patrícia Nunes da Silva(patricia@bce.unb.br) on 2015-12-16T13:33:37Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_IgorDeOliveiraPoty.pdf: 923333 bytes, checksum: c7ebab31ea778a96493f6f986d77be55 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-12-16T13:33:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_IgorDeOliveiraPoty.pdf: 923333 bytes, checksum: c7ebab31ea778a96493f6f986d77be55 (MD5) / O objetivo deste trabalho foi pesquisar a presença de Clostridium perfringens em 54 amostras de carne bovina embaladas a vácuo comercializadas no Distrito Federal e Entorno, bem como detectar a produção da toxina cpe por PCR, ainda avaliar os meios de cultivo agar SPS® e agar TSC®, com e sem etapa de pré-enriquecimento das amostras em caldo infusão de cérebro e coração (BHI), e incubação tanto em jarra de anaerobiose quanto em câmara de anaerobiose. Na análise da incubação em Agar SPS® e TSC®, sem a etapa de pré-enriquecimento em caldo BHI, observou-se o crescimento em apenas uma (1,85%) das 54 amostras analisadas, em ambos os meios de cultivo e formas de incubação. Com a etapa de pré-enriquecimento com caldo BHI em câmara de anaerobiose, observou-se crescimento em todas as 54 amostras (100%), em ambos os meios de cultivo e formas de incubação. Na reação em cadeia de polimerase (PCR) nenhuma das cepas oriundas das amostras analisadas apresentaram a amplificação de fragmento do gene da toxina cpe. Os resultados evidenciam a presença de C. perfringens em carnes embaladas a vácuo comercializadas no Distrito Federal e Entorno, porém não foi detectada a toxina cpeem nenhuma cepa isolada analisada. Na comparação estatística aplicando o teste qui-quadrado de McNemar, observou-se que houve diferença significativa (p<0,001) entre as análises sem e com a etapa de pré-enriquecimento em caldo BHI, verificando-se a influencia positiva do meio na recuperação de esporos, destacando desta forma a importância do enriquecimento prévio em meio BHI e a incubação em câmara de anaerobiose, na recuperação de esporos deste microrganismo. ______________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The objective of this study was to evaluate the presence of Clostridium perfringens in vaccum packed beef samples commercialized at Distrito Federal and the Entorno area, as well as to detect the presence of the cpe toxin producing gene by Polymerase chain reaction (PCR), also evaluate the culture medium SPS® agar and TSC® agar, with and without pre-enrichment step of the samples in Brain Heart Infusion (BHI) broth, and to promote the incubation in anaerobic jar and anaerobic chamber. The results of the incubation on SPS® agar and TSC® agar, without the pre-enrichment step in BHI, growth was observed at only 1 (1,85%) of the 54 analyzed samples, in both culture media and incubation methods. With the pre-enrichment step in BHI broth at the anaerobic chamber, growth was observed in all of the 54 samples (100%), in both culture media and incubation methods. At the PCR, none of the strains detected from the analyzed samplespresented amplification of the fragment of the cpe toxin gene. The results showed the presence of C. perfringens in vaccum packed beef samples commercialized at the Distrito Federal and Entorno area, however the cpe toxin wasn’t detected in none of the analyzed samples. In statistical analysis, using McNemar’s qui-square test, a significant difference (p<0,001) was observed between the analysis with and without pre-enrichment step in BHI broth, verifying the positive influence of the medium in spore recovery, therefore to enhance the importance of the pre-enrichment stage in BHI broth and the incubation in anaerobic chamber in spore recovery for this microorganism.

Microrganismos do gênero Clostridium, particularmente Clostridium petfringens, permanecem como um grave problema na avicultura mundial, do ponta de vista de saúde animal, de saúde pública tanto quanto econômico. O Clostridiurn perfrngens é considerado um habitante comensal do trato intestinal de frangos de corte, no entanto, quando submetidos a alteraçóes na dieta ou mesmo então após a abolição de determinados promotores de crescimento pela Comissão das Comunidades da União Européia, o controle da população microbiana tornou-se reduzido. Uma dieta rica em grãos. trigo, cevada, e arroz aumentam a viscosidade intestinal através do aumento da produção de muco, como conseqüência do aumento de retenção de água no Iúmem intestinal e pela ausência de enzimas capazes de agir sobre os produtos da digestão destes carboidratos. De fato, o aumento do crescimento microbiano comprometem as funçóes da mucosa intestinal. A partir destes fatores, o presente trabalho tem como objetivo quantificar Clostridium perfrngens em duas diferentes dietas com e sem promotor de crescimento, utilizando um método analítico alternativo em dois segmentos do trato intestinal de frangos de corte. Para avaliar este método foi proposto a inclusão de alguns critérios de verificação do protocolo de validação para métodos microbiológicos alternativos, métodos quantitativos, referenciados na NordVal Validation (2005). Para avaliar o efeito das dietas foram analisadas 73 aves quanto a presença de Clostridium periringens pelo método bacteriológico convencional segundo MAPA e BAM adaptados de acordo com a natureza da amostra no laboratório do CDPA-UFRGS pelo seguinte protocolo: l g de inóculo de raspado de ileo e 1 g de conteúdo cecal acondicionados em 9 mL de água peptonada tamponada 0,1%, diluição 1:10, homogenizados e diluídos até a diluição 10º , posteriormente mantidos em banho-maria a 80°C durante 10 minutos seguido de refrigeração em água a 20°C. aliquotas de 1 mL eram inoculadas em ágar TSC e incubados a 37" C por 24 horas. Foram analisados 4 tratamentos: T1- dieta vegetal com promotor de crescimento, T2- dieta vegetal sem promotor de crescimento, T3- dieta vegetal milho e soja mais produtos de origem animal com promotor de crescimento e T4- dieta vegetal milho soja mais produtos de origem animal sem promotor de crescimento. A dieta do tratamento 3 obteve menor quantificação para Clostridium perfrngens nas diferentes idades de coleta. Algumas combinações de amostras intestinais diferiram com maior destaque. As amostras 26, 28, 42 e 48 são consideradas significativas com valores menores que o nível de 10% de significância (<0,10) - para interações triplices utiliza-se um nível de significância maior. Podemos considerar que a partir do 16" dia de idade iniciou a multiplicação de Clostridium perfringens no trato intestinal das aves e a partir do 25º dia de idade ocorreu uma redução mais significativa no ceco e íleo. Os ensaios para verificação do limite de detecção do método usado para ileo e ceco demonstraram um intervalo de detecção entre >40 células e c421 células por mL. Desta forma o método demonstrou um limite de detecçáo por perda de recuperação de células nas matrizes de ceco indicando que os resultados são quantitativamente maiores nas amostras. Possivelmente fatores interferentes tais como, analíticos, redução de ph, ácidos graxos de cadeia curta, exposição ao oxigênio podem ter interferido sob a recuperação das células. / Microorganism of the genus Clostridium particularly Clostridium perfringens, rernain a serious problern to the world's poultry industry, in aspects not only of animal and hurnan health but alço econornical. Clostridium perfringens considered a co mensal inhabitant of the intestinal tract of broiler chickens, however when subjected to diet alterations or even after elimination of certain growth prornoters by the Cornmission of the European Cornmunities, the control of the rnicrobial population has become reduced. A diet rich in grains such as wheat, barley and rice, increase the intestinal viscosity through increasing the production of mucous as a consequence of water retention in the intestinal lumen and the absence of enzyrnes capable of acting upon the products of the digestion of these carbohydrates. In fact, microbial growth affects the intestinal rnucous function. Based on these factors the following study has the objective to analyze the influente of two diets with or without growth prornoters under the evaluation of a new method for the isolation and quantification of Clostridium perfringens in two segrnents of the gastrointestinal tract of broiler chickens. To evaluate this method there were proposed the inclusion of some verification criteria for the validation protocol in alternative rnicrobiological methods, quantitative rnethods referred to in NordVal Validation (2005). To evaluate the effect of the diets, 73 birds were analyzed as to the presence of Clostridium perfrngens using the conventional bacteriological method according to MAPA and BAM adapted to the type of sample in the CDPAIUFRGS laboratory using the following protocol: l g of scraped inoculurn of the ileurn and 1 g of cecurn content suspended in 9 rnL of peptonated and parnptonated water at 0,1%, dilution 1:10, homogenized and diluted to 10". later maintained in a hot water bath of 80°C during 10 rninutes followed by refrigeration in water at 20°C, samples of 1 mL were suspended in agar TSC and incubated at 37" C for 24 hours. Four different treatments were analyzed: TI- vegetable diet with a growth promoter, T2- vegetable diet without a growth promoter, T3- vegetable diet of corn and soy beans with animal originated products and a growth promoter and T4- vegetable diet of corn and soy beans with animal originated products without a growth promoter. The diet of treatment 3 obtained the lowest quantification for Clostridium perfrngens at different collection times. Some combinations of ileum samples had outstanding differences. Samples 26,28, 42 and 48 are considered significant with values lower than the 10% level of significance (>0,10) -for the triple interactions a greater level of significance is utilized. We may consider that from the 16th day of development the multiplication of Clostridium perfringens began, in the gastrointestinal tract of the chickens and from the 25th day of development there occurred a more significant reduction in the ileum and cecum. The practices to verify the limit of detection of the method used for the ileum and cecum demonstrated an interval of detection between >40 cells and c421 cells per mL. As such, the method showed a limit of detection per loss of cell recuperation in the cecum matrix indicating results that are quantitatively greater in the samples. Possibly, interfering factors such as analyiical, reduction of ph, short-chain fatty acids, exposure to oxygen could have interfered with the recuperation of cells.

Microrganismos do gênero Clostridium, particularmente Clostridium petfringens, permanecem como um grave problema na avicultura mundial, do ponta de vista de saúde animal, de saúde pública tanto quanto econômico. O Clostridiurn perfrngens é considerado um habitante comensal do trato intestinal de frangos de corte, no entanto, quando submetidos a alteraçóes na dieta ou mesmo então após a abolição de determinados promotores de crescimento pela Comissão das Comunidades da União Européia, o controle da população microbiana tornou-se reduzido. Uma dieta rica em grãos. trigo, cevada, e arroz aumentam a viscosidade intestinal através do aumento da produção de muco, como conseqüência do aumento de retenção de água no Iúmem intestinal e pela ausência de enzimas capazes de agir sobre os produtos da digestão destes carboidratos. De fato, o aumento do crescimento microbiano comprometem as funçóes da mucosa intestinal. A partir destes fatores, o presente trabalho tem como objetivo quantificar Clostridium perfrngens em duas diferentes dietas com e sem promotor de crescimento, utilizando um método analítico alternativo em dois segmentos do trato intestinal de frangos de corte. Para avaliar este método foi proposto a inclusão de alguns critérios de verificação do protocolo de validação para métodos microbiológicos alternativos, métodos quantitativos, referenciados na NordVal Validation (2005). Para avaliar o efeito das dietas foram analisadas 73 aves quanto a presença de Clostridium periringens pelo método bacteriológico convencional segundo MAPA e BAM adaptados de acordo com a natureza da amostra no laboratório do CDPA-UFRGS pelo seguinte protocolo: l g de inóculo de raspado de ileo e 1 g de conteúdo cecal acondicionados em 9 mL de água peptonada tamponada 0,1%, diluição 1:10, homogenizados e diluídos até a diluição 10º , posteriormente mantidos em banho-maria a 80°C durante 10 minutos seguido de refrigeração em água a 20°C. aliquotas de 1 mL eram inoculadas em ágar TSC e incubados a 37" C por 24 horas. Foram analisados 4 tratamentos: T1- dieta vegetal com promotor de crescimento, T2- dieta vegetal sem promotor de crescimento, T3- dieta vegetal milho e soja mais produtos de origem animal com promotor de crescimento e T4- dieta vegetal milho soja mais produtos de origem animal sem promotor de crescimento. A dieta do tratamento 3 obteve menor quantificação para Clostridium perfrngens nas diferentes idades de coleta. Algumas combinações de amostras intestinais diferiram com maior destaque. As amostras 26, 28, 42 e 48 são consideradas significativas com valores menores que o nível de 10% de significância (<0,10) - para interações triplices utiliza-se um nível de significância maior. Podemos considerar que a partir do 16" dia de idade iniciou a multiplicação de Clostridium perfringens no trato intestinal das aves e a partir do 25º dia de idade ocorreu uma redução mais significativa no ceco e íleo. Os ensaios para verificação do limite de detecção do método usado para ileo e ceco demonstraram um intervalo de detecção entre >40 células e c421 células por mL. Desta forma o método demonstrou um limite de detecçáo por perda de recuperação de células nas matrizes de ceco indicando que os resultados são quantitativamente maiores nas amostras. Possivelmente fatores interferentes tais como, analíticos, redução de ph, ácidos graxos de cadeia curta, exposição ao oxigênio podem ter interferido sob a recuperação das células. / Microorganism of the genus Clostridium particularly Clostridium perfringens, rernain a serious problern to the world's poultry industry, in aspects not only of animal and hurnan health but alço econornical. Clostridium perfringens considered a co mensal inhabitant of the intestinal tract of broiler chickens, however when subjected to diet alterations or even after elimination of certain growth prornoters by the Cornmission of the European Cornmunities, the control of the rnicrobial population has become reduced. A diet rich in grains such as wheat, barley and rice, increase the intestinal viscosity through increasing the production of mucous as a consequence of water retention in the intestinal lumen and the absence of enzyrnes capable of acting upon the products of the digestion of these carbohydrates. In fact, microbial growth affects the intestinal rnucous function. Based on these factors the following study has the objective to analyze the influente of two diets with or without growth prornoters under the evaluation of a new method for the isolation and quantification of Clostridium perfringens in two segrnents of the gastrointestinal tract of broiler chickens. To evaluate this method there were proposed the inclusion of some verification criteria for the validation protocol in alternative rnicrobiological methods, quantitative rnethods referred to in NordVal Validation (2005). To evaluate the effect of the diets, 73 birds were analyzed as to the presence of Clostridium perfrngens using the conventional bacteriological method according to MAPA and BAM adapted to the type of sample in the CDPAIUFRGS laboratory using the following protocol: l g of scraped inoculurn of the ileurn and 1 g of cecurn content suspended in 9 rnL of peptonated and parnptonated water at 0,1%, dilution 1:10, homogenized and diluted to 10". later maintained in a hot water bath of 80°C during 10 rninutes followed by refrigeration in water at 20°C, samples of 1 mL were suspended in agar TSC and incubated at 37" C for 24 hours. Four different treatments were analyzed: TI- vegetable diet with a growth promoter, T2- vegetable diet without a growth promoter, T3- vegetable diet of corn and soy beans with animal originated products and a growth promoter and T4- vegetable diet of corn and soy beans with animal originated products without a growth promoter. The diet of treatment 3 obtained the lowest quantification for Clostridium perfrngens at different collection times. Some combinations of ileum samples had outstanding differences. Samples 26,28, 42 and 48 are considered significant with values lower than the 10% level of significance (>0,10) -for the triple interactions a greater level of significance is utilized. We may consider that from the 16th day of development the multiplication of Clostridium perfringens began, in the gastrointestinal tract of the chickens and from the 25th day of development there occurred a more significant reduction in the ileum and cecum. The practices to verify the limit of detection of the method used for the ileum and cecum demonstrated an interval of detection between >40 cells and c421 cells per mL. As such, the method showed a limit of detection per loss of cell recuperation in the cecum matrix indicating results that are quantitatively greater in the samples. Possibly, interfering factors such as analyiical, reduction of ph, short-chain fatty acids, exposure to oxygen could have interfered with the recuperation of cells.

The first study was conducted to evaluate the dietary inclusion of effective microorganisms (EM) on body weight (BW), feed intake, feed conversion ratio (FCR) and mortality of broilers, which had been either challenged or non-challenged with Clostridium perfringens (1mL of 1 x 108 CFU/mL orally). Six hundred and forty day-old Ross 788 broiler chicks were randomly allocated to thirty-two pens in groups of twenty birds per pen, giving a stocking density of ±18 birds per square meter from zero to forty days of age. The facility consisted of two rooms with sixteen pens per room. All the chicks were fed on a commercial maize-soya type diet, including a mash starter and a mash grower/finisher feed. At two weeks of age 320 chicks were inoculated with Clostridium perfringens type A through oral administration. The study had a randomised block design with four replicates and four treatments as: 1) Control-unmedicated; 2) antibiotic growth promoters (AGP) added to feed at 33g/kg; 3) EM added to feed and water at 50g/kg and 50mL/L respectively; and 4) AGP in feed at 33g/kg and EM (50g/kg) in feed and water (50mL/L). The inclusion of EM negatively affected water palatability that resulted in reduced water intake and increased FCR for the non-challenged broilers at 21 days of age. However, because feed intake was not affected, it was suggested that EM should rather be supplemented through the feed rather than through the water. The use of AGP alone or in combination with EM proved (P<0.05) broiler production performance. The cumulative feed intake, BW, FCR, average daily gain (ADG), cumulative water intake and production efficiency factor (PEF) of challenged broilers were not different (P>0.05) at 40 days of age. In this study the incidence of mortality was low (2.2%) and examination of livers and intestines showed only mild necrotic enteritis lesions. In conclusion, the findings of this study showed that EM under the current dosage failed to improve broiler production performance. A second experiment was conducted as a follow-up study to evaluate the effect of EM on broiler performance when supplemented through the feed only. Cloacal swabs were taken from all day-old chicks and a day after inoculation with Clostridium perfringens for laboratory analysis of the microorganisms in the gut. All the chicks were fed on a commercial two-phase maize-soya type diet consisting of a mash starter and a mash grower/finisher feed with additional fishmeal. The chicks from one room were inoculated orally with Clostridium perfringens, while the chicks from the other room remained unchallenged. The challenged group was inoculated orally with 1 mL (1 x 108 CFU/mL) of Clostridium perfringens as a single dose on day 14. The EM was supplemented to the broilers from day one through the feed. The supplementation of EM through the feed showed a poor performance for non-challenged whilst for the challenged showed an improved performance at 3 weeks. Both non-challenged and challenged broilers given EM had a poor performance at 6 weeks of age, and this showed inconsistent results throughout the experiment. However, it was found that the combination of both AGP and EM had a better performance than EM alone. It is noted when the results of broilers nonchallenged versus challenged control groups were compared, the challenged ones showed a better performance. The broilers showed a low mortality of 1.3% and the causes were not related to the incidence of necrotic enteritis. The gross examination of the broilers inoculated orally with Clostridium perfringens showed mild intestinal lesions. Copyright / Dissertation (MSc(Agric))--University of Pretoria, 2010. / Animal and Wildlife Sciences / unrestricted

A 67-years-old male presented with periumbilical abdominal pain, fever and jaundice. His anaerobic blood culture was positive for clostridium perfringens. Computed tomogram scan of the abdomen and abdominal ultrasound showed normal gallbladder and common bile duct (CBD). Subsequently magnetic resonance cholangiopancreaticogram showed choledocholithiasis. Endoscopic retrograde cholangiopancreaticogramwith sphincterotomy and CBD stone extraction was performed. The patient progressively improved with antibiotic therapy Choledocholithiasis should be considered as a source of clostridium perfringens bacteremia especially in the setting of elevated liver enzymes with cholestatic pattern.