JUNQUEIRA JÚNIOR, Jerônimo. Efeito gastroprotetor da amifostina (ETHYOL®) na lesão gástrica induzida por etanol em ratos: papel dos grupos sulfidrílicos não-protéicos e neurônios sensoriais aferentes. 2008. 117 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia)- Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2008. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-04-09T16:13:22Z No. of bitstreams: 1 2008_dis_jjjunior.pdf: 1074158 bytes, checksum: b7e916481ef77de648f0b03ef0223ffa (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-04-09T16:16:57Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_dis_jjjunior.pdf: 1074158 bytes, checksum: b7e916481ef77de648f0b03ef0223ffa (MD5) / Made available in DSpace on 2012-04-09T16:16:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_dis_jjjunior.pdf: 1074158 bytes, checksum: b7e916481ef77de648f0b03ef0223ffa (MD5) Previous issue date: 2008 / Amifostine (WR-2721) has been widely tested as a cytoprotective agent against a number of aggressors in different organs. Recently, a gastroprotective effect was observed for this drug in a model of indomethacin-induced gastric injury (MOTA et al., 2007). OBJECTIVES: We investigated the effect of amifostine on ethanol-induced gastric injury and the role played by afferent sensory nerves, non-protein sulfhydryl groups, nitric oxide, ATP-sensitive potassium channels and cyclooxygenase-2 in the mechanism. METHODS: Wistar rats were treated with amifostine (22.5, 45, 90 or 180 mg/kg, p.o. or s.c.). Thirty minutes after amifostine administration, the animals were given 100% ethanol (5 ml/kg p.o.). Sixty minutes after ethanol administration the animals were euthanized. Macroscopic and histological studies were carried out and stomach fragments were retrieved and submitted to analysis for non-protein sulfhydryl groups and hemoglobin. Some animals were pretreated with L-NAME (10 mg/kg i.p.), glibenclamide (10 mg/kg p.o.), celecoxib (10 mg/kg p.o.) or saline solution. Thirty minutes after pretreatment the animals were given amifostine (90 mg/kg p.o. or s.c.) and, after another 30 minutes, 100% ethanol (5 ml/kg). The animals were euthanized 60 minutes later. Other rats were desensitized with capsaicin (125 mg/kg s.c.) 10-14 days before amifostine treatment. RESULTS: Amifostine treatment significantly reduced ethanol-induced macroscopic stomach injury at 45, 90 and 180 mg/kg p.o. and at 90 and 180 mg/kg s.c. The histological parameters (edema, hemorrhage and epithelial cell loss) were also reduced (p<0.05) when the animals were treated with amifostine. Animals receiving ethanol only presented reduced GSH levels in the stomach. Amifostine reverted this effect either by stimulating de novo GSH production or by preventing the consumption of GSH. Amifostine-promoted gastroprotection against ethanol-induced stomach injury was reversed by pretreatment with neurotoxic doses of capsaicin, but not by L-NAME, glibenclamide or celecoxib. CONCLUSIONS: Amifostine protects against ethanol-induced gastric injury by increasing GSH levels and stimulating the afferent sensory nerves in the stomach independently of ATP-sensitive potassium channels activation, nitric oxide synthase and cyclooxygenase-2 activity. / A amifostina (WR-2721) tem sido largamente estudada como agente citoprotetor em diferentes órgãos e contra os mais diversos agressores do organismo humano. Recentemente, um efeito gastroprotetor deste fármaco foi observado em modelo de lesão gástrica induzida por indometacina (MOTA et al., 2007). OBJETIVOS: Este trabalho investigou o efeito da amifostina na lesão gástrica por etanol e o papel dos neurônios sensoriais aferentes, grupos sulfidrílicos não-protéicos, óxido nítrico, canais de potássio sensíveis ao ATP e ciclooxigenase-2 nesse processo. MÉTODOS: Ratos Wistar foram tratados com amifostina (22,5, 45, 90 ou 180 mg/kg, v.o. ou s.c.). Após 30 minutos, os animais receberam etanol absoluto (5 ml/kg v.o.). Decorridos 60 minutos da administração de etanol, os animais foram sacrificados. Foram realizados estudos macroscópicos e histológicos, bem como dosagem de grupos sulfidrílicos não-protéicos e de hemoglobina em fragmentos de estômago. Outros grupos foram pré-tratados com L-NAME (10 mg/kg i.p.), glibenclamida (10 mg/kg v.o.), celecoxibe (10 mg/kg v.o.) ou salina. Após 30 minutos os ratos receberam amifostina (90 mg/kg v.o. ou s.c.) e depois de mais 30 minutos etanol absoluto (5 ml/kg), com sacrifício ocorrendo 60 minutos depois. Um grupo de animais foi desensibilizado com capsaicina (125 mg/kg s.c.) entre 10 a 14 dias antes do protocolo de tratamento com amifostina. RESULTADOS: A amifostina preveniu de forma significativa o dano macroscópico causado por etanol no estômago nas doses de 45, 90 e 180 mg/kg quando administrada por via oral e 90 e 180 mg/kg quando utilizada por via subcutânea. Os parâmetros histológicos, edema, hemorragia e perda de células epiteliais, também foram reduzidos (p<0,05) com o uso de amifostina. Os animais que receberam apenas etanol apresentaram níveis reduzidos de GSH no estômago. A amifostina reverteu esse efeito através de um estímulo à produção de novo de GSH ou pela prevenção do consumo destes grupos. A gastroproteção da amifostina na lesão induzida pelo etanol foi revertida pela administração prévia de doses neurotóxicas de capsaicina, mas não pelo uso de L-NAME, glibenclamida ou celecoxibe. CONCLUSÕES: A amifostina protege a mucosa gástrica contra a injúria induzida pelo etanol através de um aumento dos níveis de GSH e estimulação de neurônios sensoriais aferentes no estômago. Esse efeito parece ser independente da ativação de canais de potássio sensíveis ao ATP e da atividade de óxido nítrico sintase e ciclooxigenase-2.

Foram preparadas redes poliméricas com propriedades elastoméricas de poli(dimetilsiloxano) (PDMS) funcionalizadas com os grupos tiol ou sulfônico. Os materiais preparados foram caracterizados por Espectroscopia na região do Infravermelho (IV), Análise Termogravimétrica (TG), Calorimetria Diferencial de Varredura (DSC), Difração de Raios X (DRX) e Ressonância Magnética Nuclear de 13C e 29Si (RMN). Os resultados destas análises sugerem que os materiais foram funcionalizados com os grupos citados e que são constituídas de segmentos lineares de PDMS reticulados por nós silsesquioxanos que contém silícios do tipo T3 e/ou T2. As redes poliméricas se apresentam no estado amorfo e com alta estabilidade térmica em atmosfera inerte. A potencialidade dos materiais como adsorventes de íons metálicos de soluções etanólicas foram avaliadas obtendo-se isotermas de adsorção para o íon Cd2+. O material com o grupo ácido sulfônico apresentou maior eficiência em reter este metal quando comparado com os materiais contendo o grupo tiol. A quantidade total de cádmio adsorvido foi de 0,89 mmol g-1 e 0,33 mmol g-1, respectivamente. Pelo estudo da linearização dos dados das isotermas, o modelo que melhor representa a interação adsorvente-adsorvato para os materiais preparados é o descrito por Langmuir. / Poly (dimethylsiloxane) (PDMS) networks functionalized with thiol or sulfonic groups have been prepared. The materials were characterized by Infrared Spectroscopy (IR), Thermogravimetric Analysis (TGA), Differential Scanning Calorimetry (DSC), X-Ray Diffraction (XRD) and 13C / 29Si Nuclear Magnetic Resonance (NMR). The results suggest that the materials were functionalized with above cited groups and the networks are constituted of linear segments of PDMS crosslinked by nodes of silsesquioxanes which contains T3 and/or T2 silicon types. The polymeric networks are in an amorphous state and with high thermal stability, when in an inert atmosphere. The potential of the materials to act as adsorbents for metal ions from ethanol solutions were studied by obtaining adsorption isotherms for Cd2+ ion. The material functionalized with the sulfonic group was the most efficient when compared to the thiol group. The total amount of cadmium adsorbed was 0.89 mmol g-1 and 0.33 mmol g-1, respectively. Evaluation of the linearized isotherms data shows that the model which better represents the interaction between the adsorbate-adsorbent for the prepared materials is the described by Langmuir. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

Made available in DSpace on 2016-08-17T17:39:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO_ELYJANY MORAIS LIMA SENA.pdf: 1561186 bytes, checksum: 888156a1b9f61af2c114710a272cf739 (MD5) Previous issue date: 2014-10-17 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Protein disulfide isomerase (PDI) plays an important role in platelet aggregation involving thiol containing surface proteins in both dependent pathways and independent of ADP. Recently it has been shown that one dodecapeptide (CXXC) containing the catalytic motif PDI was able to decrease the reductase activity of PDI opening the perspective of using the same as antithrombotic therapeutic agent. This study aimed to investigate the effects of peptides PDI - like on platelet aggregation in vitro and molecular mechanism of action of the same. For in silico analysis using a molecular docking program, it was observed that the CXXC peptide as well as its control peptide, scrambled (SCR) and AXXA were all capable of binding to the substrate site of the lligação PDI. Posteriorly, Western blot, it was demonstrated that the peptide CXXC (25  M) induced a slight but significant reduction of free thiols marking PDI suggesting physical association between the peptide and the protein. The same was not observed in samples incubated with Scr and AXXA peptides at the same concentration. In platelet aggregation assays, the platelet-rich plasma (PRP) was pre-incubated with the CXXC, Scr and AXXA peptides using ADP (5  M) as aggregating agent. CXXC found that the peptide reduced the maximum aggregation by 14%, 27% and 30% at concentrations of 3, 10 and 30μM, respectively. The Scr AXXA peptide and the peptide had no effect on platelet aggregation induced by ADP in the same concentrations. Thus, all the data presented here suggest that the CXXC peptide is associated with PDI surface and partially inhibits platelet aggregation via mechanisms mediated by thiol-disulfide exchange. / A Proteína dissulfeto isomerase (PDI) desempenha um importante papel na agregação de plaquetas, envolvendo proteínas tiólicas de superfície tanto em vias dependentes, quanto independentes de ADP. Recentemente foi demostrado que um dodecapeptídeo (CxxC), contendo o motivo catalítico da PDI, era capaz de diminuir a atividade redutase da PDI, abrindo a perspectiva do uso do mesmo como agente terapêutico antitrombótico. Assim, este trabalho teve como objetivo investigar os efeitos de peptídeos PDI símile sobre a agregação plaquetária in vitro e o mecanismo molecular de ação dos mesmos. Por análises in silico utilizando um programa de ancoragem molecular, observou-se que o peptídeo CxxC, bem como os seus peptídeos controle, scrambled (Scr) e AxxA, foram todos capazes de se ligar ao sítio de lligação do substrato na PDI. Posteriomente, por western blot ,demonstrou-se que o peptídeo CxxC (25 M) promoveu uma discreta, mas importante, redução da marcação de tióis livres da PDI sugerindo associação física entre o peptídeo e a proteína. O mesmo não foi observado nas amostras incubadas com os peptídeos Scr e AxxA, na mesma concentração. Nos ensaios de agregação plaquetária, o plasma rico em plaquetas (PRP) foi pré-incubado com os peptídeos CxxC, Scr e AxxA utilizando ADP (5M) como agente agregante. Encontramos que o peptídeo CxxC reduziu a agregação máxima em 14%, 27% e 30% nas concentrações de 3, 10 e 30μM, respectivamente. O peptídeo Scr e o peptídeo AxxA, não afetaram a agregação plaquetária induzida por ADP nas mesmas concentrações. Sendo assim, o conjunto dos dados aqui apresentados sugerem que o peptídeo CxxC associa-se à PDI de superfície e inibe parcialmente a agregação plaquetária via mecanismos mediados por trocas tiol-dissulfeto.

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:20Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-02-29. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:26:18Z : No. of bitstreams: 1 Publico-13280.pdf: 1828173 bytes, checksum: df8fb9928c37e920c5f9a2281ba9c092 (MD5) / O presente trabalho trata do estudo conformacional de S-nitrosotióis com potencial atividade biológica, 2–acetamido-3-metil-3-nitrosossulfanil-N-arilbutanamidas, e de seus tióis precursores, 2–acetamido-3-mercapto-3-metil-N-arilbutanamidas. As conformações de menor energia dos S-nitrosotióis e tióis em estudo são estabilizadas por ligações de hidrogênio intramoleculares que promovem uma maior estabilidade dos confôrmeros. A análise geométrica do grupo R-SNO mostra que esses compostos preferem a conformação trans. O cálculo das interações orbitalares pelo método NBO (Natural Bond Orbital) para as 2–acetamido-3-mercapto-3-metil-N-arilbutanamidas mostrou que as mesmas são estabilizadas pelas seguintes interações: no (N2) → &#61552;&#61482; (C3-O4) e no(N10) → (C11-O12). Os resultados de NBO para os S-nitrosotíois mostraram que a interação hiperconjugativa é bastante efetiva nas conformações estáveis desses compostos, enfraquecendo a ligação que resulta no aumento do comprimento da ligação S-N em S-Nitrosotióis. A forte delocalização , induz caráter parcial a ligação S-N. A fraca ligação S-N indica uma forte delocalização do par de elétrons do O(NO) devido a interação, que é responsável pelo alongamento da ligação S-N, aumentando e a potencial capacidade do óxido nítrico ser liberado. / We carried out a conformational study on the S-nitrosothiols (R-SNO), 2-acetamido-3-methyl-3-(nitrososulfanyl)-N-arylbutanamides and their thiol precursors 2-acetamido-3-mercapto-3-methyl-N-arylbutanamides. The lowest energy conformation for both compounds is stabilized by intramolecular hydrogen bonds. Trans conformation was determined as the predominant conformation after geometrical analysis of R-SNO. Orbital interactions for 2-acetamido-3-mercapto-3-methyl-N-arylbutanamides were calculated using Natural Bond Orbital (NBO) methodology. Calculations indicated that orbital interactions for these compounds are stabilized by the following interactions: no (N2) → &#61552;&#61482; (C3-O4) and no(N10) → (C11-O12). NBO results showed that the hyperconjugative interaction is very effective, weakening the σ bond and resulting in increasing length of the S-N bond in R-SNO. The strong delocalization induces partial character to the S-N bond. The bond S-N indicates a strong delocalization of the electron pair of O(NO) due to interaction. This interaction is responsible for the elongation of the S-N bond which increases the ability of the compound to release nitric oxide (NO). Based on the enhanced capacity to release NO by these compounds, our findings suggest that both compounds may display biological activity. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações