Submitted by Livia Mello (liviacmello@yahoo.com.br) on 2016-09-21T11:59:44Z No. of bitstreams: 1 DissALMA.pdf: 2116583 bytes, checksum: 861fa4205ebf733687fc393be85c2953 (MD5) / Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2016-09-21T18:32:25Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DissALMA.pdf: 2116583 bytes, checksum: 861fa4205ebf733687fc393be85c2953 (MD5) / Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2016-09-21T18:32:37Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DissALMA.pdf: 2116583 bytes, checksum: 861fa4205ebf733687fc393be85c2953 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-21T18:32:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DissALMA.pdf: 2116583 bytes, checksum: 861fa4205ebf733687fc393be85c2953 (MD5) Previous issue date: 2016-02-26 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Pain, according to the International Association for the Study of Pain (IASP) can be defined as "an unpleasant sensory and emotional experience that is associated with actual or potential damage or described in terms of such damage". Lesions of the central or peripheral nervous system can lead to a special type of pain, called neuropathic pain. The methods used for the treatment of neuropathic pain injuries include medications, physical therapy, psychotherapy and anesthetics and neurosurgical procedures. Among the resources used by physiotherapists to low intensity laser therapy (LLLT) has been showing good results in controlling neuropathic pain. Because few studies and controversial data on the laser dosimetry in neuropathic pain judges is of great importance to research in establishing appropriate parameters for the application of this therapeutic resource. 50 mice of Swiss-albino strain were used, males weighing 25-30 grams. The experimental model of neuropathy was used by the partial sciatic nerve injury by chronic constriction surgery sciatic nerve (CCI). The animals were divided randomly into 5 groups: sham (GS) Group: Simulation of chronic constriction surgery sciatic nerve (CCI); control group (CG): induction of neuropathy by CCI surgery with application of laser off; laser therapy group 10 J / cm2 (GL10): induction of neuropathy by CCI surgery with application of LLLT (808 nm), with fluency of 10 J / cm2; Laser therapy group 20 J / cm2 (GL20): induction of neuropathy by CCI surgery with application of LLLT (808nm), with fluency of 20J / cm2; gupo laser therapy 40 J / cm2 (GL40): induction of neuropathy by CCI surgery with application of LLLT (808nm), with fluency of 40J / cm2. Pain treatment was performed by LLLT 3 times a week, every other day, in a ninety days period with different dosimetry (10 J / cm2, 20 J / cm2, 40J / cm). For nociceptive evaluations were used the Hot Plate Test for the thermal hyperalgesia and mechanical hyperalgesia and the Ralndall Selitto test. ELISA assay was used to quantify β-endorphin. The results showed that LLLT induced a significant increase in nociceptive threshold mainly in the groups using LLLT with higher fluence (20 J / cm2, 40 J / cm2), and demonstrate an increase in β-endorphin levels in the same groups. Thus we can conclude that LLLT significantly reduces neuropathic pain, being a mechanism of stimulation of β-endorphin. / A dor, segundo a Associação Internacional para o Estudo da Dor (IASP), pode ser definida como “uma experiência sensorial e emocional desagradável que está associada com lesões reais ou potenciais ou descrita em termos de tais lesões”. Lesões do sistema nervoso central ou periférico podem levar a um tipo especial de dor, denominado dor neuropática. Os métodos utilizados para o tratamento da dor por lesões neuropáticas incluem medicamentos, fisioterapia, psicoterapia e procedimentos anestésicos e neurocirúrgicos. Dentre os recursos utilizados pelos fisioterapeutas a terapia laser de baixa intensidade (LLLT) vem apresentando bons resultados no controle da dor neuropática. Devido a poucos estudos e dados controversos sobre a dosimetria do laser em dor neuropática julga-se de grande importância a investigação no estabelecimento de parâmetros adequados para a aplicação deste recurso terapêutico. Foram utilizados 50 camundongos da cepa Suíço-albino, machos, pesando 25-30 gramas. O modelo experimental de neuropatia utilizado foi através da lesão parcial do nervo ciático através da cirurgia de constrição crônica do nervo ciático (CCI). Os animais foram distribuídos de forma aleatória em 5 grupos: grupo sham (GS): simulação da cirurgia de constrição crônica do nervo isquiático (CCI); grupo controle (GC): indução da neuropatia por meio da cirurgia CCI, com aplicação do laser desligado; grupo terapia laser 10 J/cm2 (GL10): indução da neuropatia por meio da cirurgia CCI, com aplicação da LLLT (808 nm), com fluência de 10J/cm2; Grupo terapia laser 20 J/cm2 (GL20): indução da neuropatia por meio da cirurgia CCI, com aplicação da LLLT (808nm), com fluência de 20J/cm2; gupo terapia laser 40 J/cm2 (GL40): indução da neuropatia por meio da cirurgia CCI, com aplicação da LLLT (808nm), com fluência de 40J/cm2. O tratamento da dor foi realizado através da LLLT 3 vezes por semana, em dias alternados, em uma período de noventa dias com diferentes dosimetrias (10J/cm2, 20J/cm2, 40J/cm2). Para as avaliações nociceptivas foram utilizados o Teste de Placa Quente para hiperalgesia ao térmica e para hiperalgesia mecânica o teste de Ralndall e Selitto. Foi utilizado o ensaio ELISA para quantificação de β-endorfina. Os resultados demonstraram que a LLLT induziu um aumento significativo no limiar nociceptivo principalmente nos grupos que utilizaram a LLLT com maiores fluências (20 J/cm2, 40 J/cm2), além de demonstrar um aumento nos níveis de β-endorfina nos mesmos grupos. Assim podemos concluir que a LLLT reduz significativamente a dor neuropática, sendo um dos mecanismo a estimulação de β-endorfina.

O peptídeo sintético idêntico ao C-terminal da proteína S100A9 murina (pS100A9m) possui efeito antinociceptivo em diferentes modelos de dor inflamatória aguda. No presente estudo, o efeito do pS100A9m foi avaliado sobre a dor neuropática induzida pela constrição crônica (CCI) do nervo ciático em ratos. Ainda, foram investigados os possíveis mecanismos envolvidos neste efeito. A nocicepção foi avaliada pelos testes de hiperalgesia, alodinia e dor espontânea. Os animais foram tratados com diferentes doses do pS100A9m pelas vias intraplantar, oral ou intratecal 14 dias após a CCI e a nocicepção avaliada após 1 hora. As três vias de administração bloquearam a hiperalgesia, a alodinia e a dor espontânea decorrentes da dor neuropática. A duração do efeito do pS100A9m varia de acordo com a via utilizada e com o fenômeno nociceptivo testado. Ainda, a injeção intraplantar do peptídeo, na pata contralateral à CCI, inibiu a hiperalgesia e a alodinia observadas após a constrição do nervo. Quando o pS100A9m foi administrado pela via intraplantar no 7° dia após a CCI, ele também induziu inibição da hiperalgesia inflamatória que é observada nesse período. Os prováveis mecanismos envolvidos no efeito antinociceptivo do pS100A9m foram investigados pela administração de antagonistas de receptores de serotonina, noradrenalina, GABA (A e B) e opióides. Os resultados obtidos demonstraram que apenas o antagonista de receptor GABAB reverteu completamente o efeito antinociceptivo do pS100A9m sobre a dor neuropática, detectada no 14º dia pós-cirúrgico. Além disso, foram avaliadas as expressões das proteínas Egr-1, Fos e TNFα na medula dos ratos submetidos à CCI e tratados com o peptídeo 7 ou 14 dias do procedimento cirúrgico. O aumento na expressão das proteínas Egr-1 e Fos foi evidenciado tanto no 7º como no 14º dia após a CCI, em animais que não receberam nenhum tratamento ou aqueles que foram tratados com o veículo do peptídeo. Por outro lado, o pS100A9m inibiu a expressão destas duas proteínas no lado ipsolateral à CCI no corno dorsal da medula espinhal dos animais. Com relação ao TNFα, apenas no 7º dia após a CCI foi detectado o aumento na expressão desta proteína. Ainda, foi neste período que o pS100A9m acarretou inibição da expressão do TNFα no corno ventral de animais submetidos ao procedimento cirúrgico. Estes resultados demonstram que o C-terminal da S100A9 murina inibe a dor neuropática experimental por uma ação dependente de receptores GABAB, sugerindo que este peptídeo possivelmente promova uma ativação dos mecanismos inibitórios espinhais, acarretando em redução da ativação de neurônios na medula. Desta forma, o pS100A9m demonstra um potencial terapêutico para o tratamento de dores persistentes. / The synthetic peptide identical to the C-terminus of murine S100A9 protein (mS100A9p) has antinociceptive effect on different acute inflammatory pain models. In this study, the effect of mS100A9p was evaluated on neuropathic pain induced by chronic constriction injury (CCI) of the sciatic nerve in rats, and the possible mechanisms involved in this effect were investigated. Hyperalgesia, allodynia, and spontaneous pain were assessed to evaluate nociception. Rats were treated with different doses of mS100A9p by intraplantar, oral, or intrathecal routes on day 14 after CCI, and nociception was evaluated 1 hour later. These three routes of administration blocked hyperalgesia, allodynia and spontaneous pain. The duration of mS100A9p effect depends on the route used and the phenomenon analyzed. Moreover, intraplantar injection of mS100A9p in the contralateral paw inhibited the hyperalgesia and allodynia induced by CCI. When mS100A9p was administered by intraplantar route on day 7 after CCI, it reversed the inflammatory hyperalgesia observed in this period. The mechanisms likely involved in the antinociceptive effect of mS100A9p were investigated by administration of antagonists of serotonin, norepinephrine, GABA (A and B) and opioid receptors. Only the GABAB receptor antagonist completely reversed the antinociceptive effect of mS100A9p on neuropathic pain on day 14 after CCI. Besides, the expression of Egr-1, Fos and TNFα proteins was evaluated in the spinal cord of rats submitted to CCI and treated with mS100A9p on days 7 or 14 after CCI. The expression of Egr-1 and Fos was increased in animals not treated or treated with vehicle on days 7 and 14 after CCI. On the other hand, mS100A9p inhibited the expression of these two proteins in the dorsal horn of spinal cord ipsilateral to CCI. The increase in TNFα expression was observed exclusively on day 7 after CCI. In the same time period, mS100A9p nhibited the expression of TNFα in the ventral horn of spinal cord of animals submitted to CCI. The results obtained herein demonstrate that the C-terminus of murine S100A9 protein inhibits the experimental neuropathic pain by a GABAB-dependent action, suggesting that this peptide promotes the activation of spinal inhibitory mechanisms leading to the reduction of activation of spinal neurons. Therefore, mS100A9p demonstrates a potential therapeutic use in persistent pain syndromes.

O peptídeo sintético idêntico ao C-terminal da proteína S100A9 murina (pS100A9m) possui efeito antinociceptivo em diferentes modelos de dor inflamatória aguda. No presente estudo, o efeito do pS100A9m foi avaliado sobre a dor neuropática induzida pela constrição crônica (CCI) do nervo ciático em ratos. Ainda, foram investigados os possíveis mecanismos envolvidos neste efeito. A nocicepção foi avaliada pelos testes de hiperalgesia, alodinia e dor espontânea. Os animais foram tratados com diferentes doses do pS100A9m pelas vias intraplantar, oral ou intratecal 14 dias após a CCI e a nocicepção avaliada após 1 hora. As três vias de administração bloquearam a hiperalgesia, a alodinia e a dor espontânea decorrentes da dor neuropática. A duração do efeito do pS100A9m varia de acordo com a via utilizada e com o fenômeno nociceptivo testado. Ainda, a injeção intraplantar do peptídeo, na pata contralateral à CCI, inibiu a hiperalgesia e a alodinia observadas após a constrição do nervo. Quando o pS100A9m foi administrado pela via intraplantar no 7° dia após a CCI, ele também induziu inibição da hiperalgesia inflamatória que é observada nesse período. Os prováveis mecanismos envolvidos no efeito antinociceptivo do pS100A9m foram investigados pela administração de antagonistas de receptores de serotonina, noradrenalina, GABA (A e B) e opióides. Os resultados obtidos demonstraram que apenas o antagonista de receptor GABAB reverteu completamente o efeito antinociceptivo do pS100A9m sobre a dor neuropática, detectada no 14º dia pós-cirúrgico. Além disso, foram avaliadas as expressões das proteínas Egr-1, Fos e TNFα na medula dos ratos submetidos à CCI e tratados com o peptídeo 7 ou 14 dias do procedimento cirúrgico. O aumento na expressão das proteínas Egr-1 e Fos foi evidenciado tanto no 7º como no 14º dia após a CCI, em animais que não receberam nenhum tratamento ou aqueles que foram tratados com o veículo do peptídeo. Por outro lado, o pS100A9m inibiu a expressão destas duas proteínas no lado ipsolateral à CCI no corno dorsal da medula espinhal dos animais. Com relação ao TNFα, apenas no 7º dia após a CCI foi detectado o aumento na expressão desta proteína. Ainda, foi neste período que o pS100A9m acarretou inibição da expressão do TNFα no corno ventral de animais submetidos ao procedimento cirúrgico. Estes resultados demonstram que o C-terminal da S100A9 murina inibe a dor neuropática experimental por uma ação dependente de receptores GABAB, sugerindo que este peptídeo possivelmente promova uma ativação dos mecanismos inibitórios espinhais, acarretando em redução da ativação de neurônios na medula. Desta forma, o pS100A9m demonstra um potencial terapêutico para o tratamento de dores persistentes. / The synthetic peptide identical to the C-terminus of murine S100A9 protein (mS100A9p) has antinociceptive effect on different acute inflammatory pain models. In this study, the effect of mS100A9p was evaluated on neuropathic pain induced by chronic constriction injury (CCI) of the sciatic nerve in rats, and the possible mechanisms involved in this effect were investigated. Hyperalgesia, allodynia, and spontaneous pain were assessed to evaluate nociception. Rats were treated with different doses of mS100A9p by intraplantar, oral, or intrathecal routes on day 14 after CCI, and nociception was evaluated 1 hour later. These three routes of administration blocked hyperalgesia, allodynia and spontaneous pain. The duration of mS100A9p effect depends on the route used and the phenomenon analyzed. Moreover, intraplantar injection of mS100A9p in the contralateral paw inhibited the hyperalgesia and allodynia induced by CCI. When mS100A9p was administered by intraplantar route on day 7 after CCI, it reversed the inflammatory hyperalgesia observed in this period. The mechanisms likely involved in the antinociceptive effect of mS100A9p were investigated by administration of antagonists of serotonin, norepinephrine, GABA (A and B) and opioid receptors. Only the GABAB receptor antagonist completely reversed the antinociceptive effect of mS100A9p on neuropathic pain on day 14 after CCI. Besides, the expression of Egr-1, Fos and TNFα proteins was evaluated in the spinal cord of rats submitted to CCI and treated with mS100A9p on days 7 or 14 after CCI. The expression of Egr-1 and Fos was increased in animals not treated or treated with vehicle on days 7 and 14 after CCI. On the other hand, mS100A9p inhibited the expression of these two proteins in the dorsal horn of spinal cord ipsilateral to CCI. The increase in TNFα expression was observed exclusively on day 7 after CCI. In the same time period, mS100A9p nhibited the expression of TNFα in the ventral horn of spinal cord of animals submitted to CCI. The results obtained herein demonstrate that the C-terminus of murine S100A9 protein inhibits the experimental neuropathic pain by a GABAB-dependent action, suggesting that this peptide promotes the activation of spinal inhibitory mechanisms leading to the reduction of activation of spinal neurons. Therefore, mS100A9p demonstrates a potential therapeutic use in persistent pain syndromes.