Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Ecologia, Programa de Pós-Graduação em Ecologia, 2017. / Submitted by Raquel Almeida (raquel.df13@gmail.com) on 2017-06-19T18:54:30Z No. of bitstreams: 1 2017_DarianeIsabelDornelesSchneider.pdf: 1809937 bytes, checksum: ca9e8ce24096fc0d9224d6dba5053242 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2017-08-22T17:31:48Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_DarianeIsabelDornelesSchneider.pdf: 1809937 bytes, checksum: ca9e8ce24096fc0d9224d6dba5053242 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-22T17:31:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_DarianeIsabelDornelesSchneider.pdf: 1809937 bytes, checksum: ca9e8ce24096fc0d9224d6dba5053242 (MD5) Previous issue date: 2017-08-22 / Vespas parasitoides (Hymenoptera) colocam um ou mais ovos em seu hospedeiro, matando-o antes que ele termine seu desenvolvimento. Dentre os insetos que podem ser parasitados estão as pequenas moscas (3-4 mm) da família Drosophilidae (Diptera), cujos estágios imaturos podem ser atacados nas fases de larva ou pupa. O conhecimento das relações entre hospedeiros e parasitoides contribui para o entendimento de redes ecológicas e tem potencial para controle biológico, porém a taxonomia dessas vespas e suas relações com hospedeiros ainda são pouco conhecidas. O presente estudo buscou identificar e caracterizar potenciais parasitoides de drosofilídeos, com base dados obtidos no campo no laboratório. No campo, foram coletadas vespas com uma metodologia já tradicional (coleta de frutos) e duas metodologias novas: as armadilhas com iscas de banana fermentada e armadilhas com iscas de drosofilídeos imaturos, sendo que esta última metodologia foi desenvolvida no presente estudo. As coletas foram realizadas em diferentes épocas do ano em três tipos de ambiente: mata de galeria, cerrado sentido restrito e área urbana. Esse esforço amostral resultou em 845 parasitoides e potenciais parasitoides de drosofilídeos, representando cinco espécies e oito morfoespécies, entre elas possíveis novas espécies, pertencentes tanto a famílias de parasitoides de larvas, Figitidae e Braconidae, como em parasitoides de pupas, Pteromalidae, Dipriidae e Eurytomidae. Todas elas são novas ocorrências para o Distrito Federal. A proporção entre os grupos de vespas variou de acordo com a metodologia, local e época da coleta. Nas áreas naturais a abundância de parasitoides foi maior na mata de galeria e na época chuvosa, o que provavelmente reflete a maior disponibilidade de drosofilídeos nessas condições. Testes em campo e em laboratório revelaram que cinco espécies de vespas parasitaram pelo menos uma das sete espécies de drosofilídeos testadas. Pachycrepoideus vindemiae (Pteromalidae) se desenvolveu em todas as espécies de drosofilídeos testadas, tanto no campo como no laboratório, enquanto que outras vespas se restringiram a determinados hospedeiros ou condições experimentais. Nesse contexto, o presente trabalho contribuiu para o conhecimento da diversidade de vespas parasitoides de drosofilídeos no Cerrado, para o desenvolvimento e avaliação de novas metodologias para a captura desses insetos, e para a compreensão das interações hospedeiro-parasitoide. Essas informações são importantes para o entendimento de redes ecológicas, destacam o papel fundamental da taxonomia para o conhecimento dos parasitoides, e podem contribuir para aprimorar o controle biológico de pragas. / Parasitoid wasps (Hymenoptera) oviposit one or more eggs in its host, killing it before concluding its development. Among their hosts are the small flies (3-4 mm) of the family Drosophilidae (Diptera), which can be attacked during the stage of larvae (larval parasitoids) or pupa (pupal parasitoids). The knowledge about host-parasitoid relationships contribute to the understanding of ecological networks and, in some cases, has a potential for biological control. However, such relationships are still poorly known. This study aimed to characterize parasitoids and possible parasitoids of drosophilids, based on field and laboratory data. For capturing the wasps in the field, we used a conventional method (collection of fruits) and two innovative approaches: traps baited with fermented bananas and traps baited with immature drosophilids specially developed for this study. Three different areas were surveyed at various times of the year: gallery forest, savanna vegetation, and an urbanized environment. The 845 parasitoids and possible parasitoids of drosophilids accessed in this study were classified in five species and eight morphospecies of wasps, including probable new species. They represent two families of larval parasitoids (Figitidae and Braconidae) and three families of pupal parasitoids (Pteromalidae, Dipriidae, and Eurytomidae). All of them are new records in Distrito Federal, Brazil. The relative abundance of parasitoids groups varied among methods of collection, vegetation, and season of the year. In natural areas, the abundance of parasitoids was higher in gallery forest and during the rainy season, probably reflecting the higher drosophilid availability in these conditions. Field and laboratory tests have confirmed the parasitism of five species of parasitoids in at least one of the seven drosophilid species tested. The wasp species Pachycrepoideus vindemiae (Pteromalidae) developed in all drosophilid species both in field and in laboratory, while other parasitoids were restricted to certain species of drosophilids or experimental conditions. In sum, this study characterized parasitoids of drosophilids in the Cerrado, contributing to the knowledge of its biodiversity and distribution using new methodologies that worked successfully, and established new host-parasitoid interactions. This information is important to understand ecological networks, highlight the fundamental role of taxonomy for identifying parasitoids, and potentially contribute for biological control.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2015. / Texto parcialmente liberado pelo autor. Conteúdo restrito: capítulos I, II e III. / Submitted by Ana Cristina Barbosa da Silva (annabds@hotmail.com) on 2015-06-29T16:49:59Z No. of bitstreams: 1 2015_RayssaAlmeidaGarcia_Parcial.pdf: 404317 bytes, checksum: 9c6cd5a3cdd519dad13504c7fdb4b4e4 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2015-07-20T12:06:44Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_RayssaAlmeidaGarcia_Parcial.pdf: 404317 bytes, checksum: 9c6cd5a3cdd519dad13504c7fdb4b4e4 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-07-20T12:06:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_RayssaAlmeidaGarcia_Parcial.pdf: 404317 bytes, checksum: 9c6cd5a3cdd519dad13504c7fdb4b4e4 (MD5) / O algodão é uma das principais commodities da economia brasileira, alavancando o País ao posto de quinto maior produtor mundial. Entre as diferentes pragas da cotonicultura, o bicudo-do-algodoeiro é o inseto-praga mais destrutivo. Pela biotecnologia, um dos métodos alternativos de controle de insetos-praga é o silenciamento gênico, por meio do RNA interferente. Contudo, em insetos, absorção do RNA fita dupla (dsRNA) produzidos por plantas é dificultada, principalmente em decorrência da clivagem do dsRNA na planta e da ação de nucleases presentes no intestino dos insetos. Assim, os objetivos do presente estudo foram estudar o papel de nucleases intestinais de Anthonomus grandis na degradação do dsRNA e aumentar a estabilidade das moléculas de dsRNA. Primeiramente, a atividade nucleásica ácida foi detectada no homogenato intestinal de A. grandis. Por meio da busca no transcritoma de A. grandis foram encontradas três contigs codificadores de nucleases, denominados AgNuc1, AgNuc2 e AgNuc3, cujas sequências foram caracterizadas e validadas por RNAi. As três sequências apresentaram similaridade acima de 50 % em relação às outras nucleases de insetos. A análise por qPCR demonstrou que AgNuc2 e AgNuc3 foram altamente expressas no intestino de A. grandis. O silenciamento específico de AgNuc2 culminou na redução da degradação do dsRNA; demonstrando ser a principal nuclease associada à degradação de dsRNA no lúmen intestinal de A. grandis. Além disso, visando aumentar a estabilidade do dsRNA, foram desenhados dsRNAs, baseados na arquitetura de viróide, que são resistentes à ação de nucleases. A análise do movimento de dsRNA-viróide marcado com Cy3 no sistema vascular de Arabidopsis thaliana demonstrou uma localização celular específica para a estrutura do dsRNA. O dsRNA baseado na arquitetura da família Pospiviroidae, foi localizado no núcleo das células, enquanto que o dsRNA, baseado na arquitetura da família Avsunviroidae, foi localizado nos cloroplastos das células. Os dsRNAs estabilizados mostraram uma capacidade de silenciamento gênico 8 vezes superior, quando comparado ao dsRNA linear não estruturado Os dados aqui gerados contribuem para o conhecimento do mecanismo de RNAi em insetos e demonstram que as moléculas de dsRNA estabilizados apresentam grande potencial para a aplicabilidade da tecnologia do RNAi visando o controle de insetos-praga. / Cotton is one of the most important Brazilian commodities and Brazil is the fifth largest world producer. Nonetheless, productivity is constantly crippled by a variety of agricultural pests. Among the different cotton insect pests, cotton boll weevil is the most destructive. By using biotechnology strategies, one of the alternative methods for controlling crop pests is gene silencing through RNA interference. However, in insects, the absorption of double stranded RNA produced by plants is hampered due to dsRNA cleavage in plants tissues and due to the presence of insect gut nucleases. In this context, the objects of this study were to investigate the dsRNA degradation by Anthonomus grandis gut nucleases and improve the stability of dsRNA. Nucleasic activity was detected in A. grandis intestinal homogenate. After searching in A. grandis transcriptome, three contigs codifying nucleases were found, called AgNuc1, AgNuc2 and AgNuc3, whose sequences were characterized and validated by RNAi. The three sequences showed similarity above 50% when compared to other insect nucleases. qPCR analysis showed that AgNuc2 and AgNuc3 are highly expressed in A. grandis midgut. AgNuc2 gene silencing resulted on reduction of dsRNA degradation; thereby, we concluded that AgNuc2 is the main nuclease associated with dsRNA degradation in A. grandis gut lumen. Additionally, in order to increase dsRNA stability, dsRNA with viroid architecture were designed, wich are resistant to plant nucleases. Viroid-dsRNA were marked with Cy3 and analysed regarding their movement in A. thaliana vascular system, wich showed that they are adressed to a specif cellular localization. dsRNA based on Pospiviroidae family architecture was located on cell nuclei while dsRNA based on Avsunviroidae family was located in chloroplasts. Moreover, these stabilized dsRNAs showed high gene silencing activity, eight times higher than linear dsRNA. The data here generated contribute to our understandings of RNAi mechanisms in insects and show that stabilized dsRNAs exhibit great pontential in RNAi applicability aiming crop insect pest control.

Orientador: Alcebíades Ribeiro Campos / Banca: Arlindo Leal Boiça Júnior / Banca: Edson Lazarini / Resumo: O tripes do prateamento Enneothrips flavens é considerado uma praga limitante a produção de amendoim e o uso de cultivares resistentes evita ou reduz a aplicação de inseticida proporcionando uma maior segurança e lucratividade à atividade. O trabalho foi realizado com os objetivos de avaliar a resistência ao tripes e o potencial produtivo de genótipos de amendoim. Os experimentos foram conduzidos na Fazenda de Ensino e Pesquisa da UNESP/Ilha Solteira, localizada no município de Selvíria-MS. Os dois primeiros experimentos foram instalados na época das águas com semeadura realizada em 12/11/2001 com os genótipos: 1 - IAC-Tatu-ST, IAC 81-12, IAC 88-1, IAC 88-2, IAC 22 e IAC 24, de hábito de crescimento ereto; 2 - Nahuel, IAC Caiapó, IAC Jumbo, Cavalo, Tégua e IAC 5024, hábito de crescimento rasteiro. O terceiro e quarto experimentos foram instalados na época da seca com semeadura realizada em 03/02/2002 com os genótipos: 3 - IAC-Tatu-ST, IAC 81- 12, IAC 88-1, IAC 88-2, IAC 22 e IAC 24, hábito de crescimento ereto, com e sem inseticida e 4 - Nahuel, IAC Caiapó, IAC Jumbo, Cavalo, Tégua e IAC 5024, de hábito de crescimento rasteiro, com e sem inseticida. Nas amostragens foram realizadas contagens de adultos e ninfas de tripes; avaliações de sintomas de danos, de área foliar, de altura de plantas e da produção. Os resultados mostram que as ninfas e adultos mais ninfas por apresentarem populações mais expressivas são mais adequadas para avaliação da resistência de genótipos de amendoim a E. flavens; o sistema de avaliação por atribuição de notas mostrou-se adequado para avaliação de resistência de genótipos de amendoim a E. flavens; nos genótipos de crescimento ereto a maior população de E. flavens ocorre dos 30 aos 72 dias após a emergência das plantas... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The silvering thrips Enneothrips flavens is considered to be a restrictive plague regarding the peanut production, and the use of resistant cultivars avoids or decreases the insecticide application turning the activity and profitability safer. The study was performed in order to evaluate peanut genotypes resistance to thrips and their production potential. The experiments were conducted at the Research and Teaching Facilities Farm of the Engineering University-FE/UNESP, located in Selvíria-MS. The first two experiments were installed at that time of the waters with planting accomplished in 12/11/2001 with the genotypes: 1 - IAC- Tatu-ST, IAC 81-12, IAC 88-1, IAC 88-2, IAC 22 and IAC 24, habit of erect growth; 2 - Nahuel, IAC Caiapó, IAC Jumbo, Cavalo, Tégua and IAC 5024, habit of low growth; The third and fourth experiments were installed at that time of the drought with planting accomplished in 03/02/2002 with the genotypes: 3 - IAC-Tatu-ST, IAC 81-12, IAC 88-1, IAC 88-2, IAC 22 and IAC 24, habit of erect growth, with and without insecticide and 4 - Nahuel, IAC Caiapó, IAC Jumbo, Cavalo, Tégua and IAC 5024, habit of low growth, with and without insecticide. In the samplings, adults and nymphs were counted and damage symptoms of the leaf area and the plants' height and production were evaluated. The results show that populations of nymphs and populations of nymphs plus adults are more appropriate for the evaluation of the peanut genotypes resistance to E. flavens, as they are more expressive; the grading system proved itself to be appropriate to the evaluation of the peanut genotypes resistance to E. flavens; in the erect growth genotypes, the larger population of E. flavens occurs from the 30 th to the 72 nd day after the plants emerge; the erect growth genotypes IAC 88-1 and IAC-Tatu-ST... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:43Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-08-09Bitstream added on 2014-06-13T21:00:05Z : No. of bitstreams: 1 tabet_vg_me_ilha.pdf: 296081 bytes, checksum: c03f5ec675d051d3c1f3fdad607d8f60 (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / A videira é uma cultura de elevada importância econômica, e assim como outras culturas, sofre o ataque de diversas pragas e doenças. Videiras da região do município de Jales, Estado de São Paulo, tem sido intensamente infestadas pelo ácaro-rajado, Tetranychus urticae Koch (Tetranychidae), gerando aumento na utilização de acaricidas. O uso indiscriminado destes acaricidas pode contaminar o meio ambiente, os agricultores e os consumidores dos alimentos. Na busca por um controle alternativo, o presente trabalho teve por objetivo testar o efeito acaricida de produtos naturais sobre os ácaros dessa espécie. Para isso, fêmeas de T. urticae, criadas em laboratório a partir de espécimes coletados em videiras daquele local, foram pulverizadas em torre de Potter. Foram testados três produtos a base de nim (Azadirachta indica Juss.) e extrato pirolenhoso em diferentes concentrações, extratos aquosos e hidroetanólicos de dez plantas e óleos essenciais de seis plantas. Cada tratamento foi testado duas vezes, para confirmação dos resultados. A parcela experimental consistiu de uma placa de Petri com um disco de folha de feijão-de-porco (Canavalia ensiformes L.) contendo cinco fêmeas adultas de T. urticae, utilizando-se dez placas por tratamento. As avaliações foram realizadas após 24, 48, 72, 96 e 120 horas, para contagem do número de fêmeas mortas no disco e fêmeas encontradas no algodão umedecido, utilizado como barreira. As maiores mortalidades foram registradas nos tratamentos com Natuneem, óleo emulsionado de sementes de nim, extrato hidroetanólico de camomila (Matriacaria chamomilla L.) e extrato aquoso de erva doce (Pimpinella anisum L.). Óleos essenciais não tiveram efeito acaricida sobre T. urticae. Extratos aquosos de hortelã (Mentha x piperita L.), melissa (Melissa officinalis L.) e losna (Artemisia absinthium L.) e hidroetanólicos... / The vine is a culture of high economic importance, and as other cultures, it is attacked by various pests and diseases. Vines of the municipality of Jales, Sao Paulo State, there has been heavy infestations by two spotted spider mite, Tetranychus urticae Koch (Tetranychidae), generating an use of acaricides increased. The indiscriminate use of acaricides can contaminate the environment, farmers and food consumers. In the search for an alternative control, this study aimed to test the acaricidal effect of natural products on mites of this species. For this, T. urticae females, reared in the laboratory from specimens collected in vines that place, were sprayed in tower Potter. We tested three products based on neem (Azadirachta indica Juss.) and pyroligneous acid in different concentrations, aqueous and hydroethanolic extracts of ten plants and essential oils of six plants. Each treatment was tested twice to confirm the results.The experimental plot consisted of a Petri dish with a Canavalia ensiformis L. leaf disk containing five T. urticae female, using ten plates per treatment. The evaluations were realized after 24, 48, 72, 96 and 120 hours, with counting of females killed in the disk and in cotton wool barrier. The highest mortalities were recorded in Natuneem, emulsified oil from neem seeds, chamomile (Matricaria chamomilla L.) aqueous extract and fennel (Pimpinella anisum L.) hydroethanolic extract treatments. Essential oils have no acaricide effect on T. urticae. High mortalities were recorded with peppermint (Mentha x piperita L.), lemon balm (Melissa officinalis L.) and wormwood (Artemisia absinthium L.) aqueous extracts and with pacari (Lafoensia pacari Saint-Hilaire) and oregano (Origanum vulgare L.) hydroethanolic extract... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:43Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2003-02-05Bitstream added on 2014-06-13T19:18:10Z : No. of bitstreams: 1 perozini_ac_me_ilha.pdf: 1652133 bytes, checksum: a55293b026be090f954cffe9b68dff43 (MD5) / O tripes do prateamento Enneothrips flavens é considerado uma praga limitante a produção de amendoim e o uso de cultivares resistentes evita ou reduz a aplicação de inseticida proporcionando uma maior segurança e lucratividade à atividade. O trabalho foi realizado com os objetivos de avaliar a resistência ao tripes e o potencial produtivo de genótipos de amendoim. Os experimentos foram conduzidos na Fazenda de Ensino e Pesquisa da UNESP/Ilha Solteira, localizada no município de Selvíria-MS. Os dois primeiros experimentos foram instalados na época das águas com semeadura realizada em 12/11/2001 com os genótipos: 1 - IAC-Tatu-ST, IAC 81-12, IAC 88-1, IAC 88-2, IAC 22 e IAC 24, de hábito de crescimento ereto; 2 - Nahuel, IAC Caiapó, IAC Jumbo, Cavalo, Tégua e IAC 5024, hábito de crescimento rasteiro. O terceiro e quarto experimentos foram instalados na época da seca com semeadura realizada em 03/02/2002 com os genótipos: 3 - IAC-Tatu-ST, IAC 81- 12, IAC 88-1, IAC 88-2, IAC 22 e IAC 24, hábito de crescimento ereto, com e sem inseticida e 4 - Nahuel, IAC Caiapó, IAC Jumbo, Cavalo, Tégua e IAC 5024, de hábito de crescimento rasteiro, com e sem inseticida. Nas amostragens foram realizadas contagens de adultos e ninfas de tripes; avaliações de sintomas de danos, de área foliar, de altura de plantas e da produção. Os resultados mostram que as ninfas e adultos mais ninfas por apresentarem populações mais expressivas são mais adequadas para avaliação da resistência de genótipos de amendoim a E. flavens; o sistema de avaliação por atribuição de notas mostrou-se adequado para avaliação de resistência de genótipos de amendoim a E. flavens; nos genótipos de crescimento ereto a maior população de E. flavens ocorre dos 30 aos 72 dias após a emergência das plantas... / The silvering thrips Enneothrips flavens is considered to be a restrictive plague regarding the peanut production, and the use of resistant cultivars avoids or decreases the insecticide application turning the activity and profitability safer. The study was performed in order to evaluate peanut genotypes resistance to thrips and their production potential. The experiments were conducted at the Research and Teaching Facilities Farm of the Engineering University-FE/UNESP, located in Selvíria-MS. The first two experiments were installed at that time of the waters with planting accomplished in 12/11/2001 with the genotypes: 1 - IAC- Tatu-ST, IAC 81-12, IAC 88-1, IAC 88-2, IAC 22 and IAC 24, habit of erect growth; 2 - Nahuel, IAC Caiapó, IAC Jumbo, Cavalo, Tégua and IAC 5024, habit of low growth; The third and fourth experiments were installed at that time of the drought with planting accomplished in 03/02/2002 with the genotypes: 3 - IAC-Tatu-ST, IAC 81-12, IAC 88-1, IAC 88-2, IAC 22 and IAC 24, habit of erect growth, with and without insecticide and 4 - Nahuel, IAC Caiapó, IAC Jumbo, Cavalo, Tégua and IAC 5024, habit of low growth, with and without insecticide. In the samplings, adults and nymphs were counted and damage symptoms of the leaf area and the plants’ height and production were evaluated. The results show that populations of nymphs and populations of nymphs plus adults are more appropriate for the evaluation of the peanut genotypes resistance to E. flavens, as they are more expressive; the grading system proved itself to be appropriate to the evaluation of the peanut genotypes resistance to E. flavens; in the erect growth genotypes, the larger population of E. flavens occurs from the 30 th to the 72 nd day after the plants emerge; the erect growth genotypes IAC 88-1 and IAC-Tatu-ST... (Complete abstract click electronic access below)

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Departamento de Biologia Molecular, 2014. / Submitted by Bruna Cares (brunacares@gmail.com) on 2014-09-03T19:28:19Z No. of bitstreams: 1 2014_LilianSilveiraTravassosdoCarmo.pdf: 5759602 bytes, checksum: 2869ee49cd065fb61c7f9f9a0c1fea8b (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Ferreira de Souza(jaquefs.braz@gmail.com) on 2014-09-17T12:46:01Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_LilianSilveiraTravassosdoCarmo.pdf: 5759602 bytes, checksum: 2869ee49cd065fb61c7f9f9a0c1fea8b (MD5) / Made available in DSpace on 2014-09-17T12:46:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_LilianSilveiraTravassosdoCarmo.pdf: 5759602 bytes, checksum: 2869ee49cd065fb61c7f9f9a0c1fea8b (MD5) / O tomate é uma cultura de grande importância econômica em todo o mundo, mas é severamente afetada por vários geminivírus, como o begomovírus Tomato chrolotic mottle virus (ToCMoV) que causam perdas significativas na cultura. O objetivo desse estudofoi identificar proteínas diferencialmente expressas na interação ToCMoV-planta hospedeira. Primeiramente foi verificado o efeito do gene AC2 de ToCMoV na planta modelo Nicotiana benthamiana. A proteína AC2 é um fator de virulência que tem um papel crucial no sucesso da interação vírus-planta, atuando como ativador transcricional e em alguns begomovírus, como supressor de silenciamento de RNA. Entretanto, a função ou funções da proteína AC2 do begomovírus ToCMoV ainda não foram determinadas. Para esta etapa do trabalho, plantas de N. benthamiana foram inoculadas com Agrobacterium tumefaciens contendo o vetor viral Potato virus X (PVX) e com a construção PVX-AC2. Eletroforese bidimensional foi realizada e a análise por MALDI TOF-TOF revelou proteínas diferencialmente expressas envolvidas em estresse oxidativo, fotossíntese, defesa contra patógenos, entre outros. Na segunda etapa do trabalho, foi aplicada a metodologia 2D-nanoUPLC/HDMSE para a análise de folhas de tomateiro infectadas com o begomovírus ToCMoV. Foram analisados, pela primeira vez, os perfis proteômicos dos genótipos de tomateiro suscetível (Santa Clara) e resistente (LAM 157 contendo o locus de resistência tcm-1) inoculados com ToCMoV. Proteínas diferencialmente expressas em resposta ao ToCMoV foram identificadas. Os resultados obtidos neste estudo revelaram proteínas que podem estar associadas com a suscetibilidade ao ToCMoV, como a ubiquitina e a proteína de choque térmico 70 (HSP 70). Os efeitos causados pelo fator de patogenicidade AC2 do ToCMoV e pelo vírus íntegro foram semelhantes e resultaram no recrutamento de proteínas envolvidas nas vias de ubiquitinação, tradução e processamento proteíco. Por outro lado, as plantas hospedeiras também desencadearam resposta de defesa na XIV tentativa de combater o avanço viral aumentando a expressão de proteínas como, a histona H4. Os resultados obtidos neste estudo trazem importantes contribuições para a melhor compreensão das interações ToCMoV-planta hospedeira e poderão contribuir para o desenvolvimento de estratégias de controle da infecção por este begomovírus. __________________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Tomato is a highly important crop cultivated worlwide, which is severely affected by begomoviruses such as Tomato chrolotic mottle virus (ToCMoV). The aim of the present study was to identify differentially expressed proteins in the ToCMoV-host plant interaction. The virulence factor AC2 is considered crucial for a successful virus-plant interaction and is known to act as a transcriptional activator and in some begomoviruses to function as an RNA silencing suppressor factor. However, the function or functions of the AC2 protein of the begomovírus ToCMoV are not yet determined. In the first part of this study, the model plant Nicotiana benthamiana was inoculated with Agrobacterium tumefaciens containing the viral vector Potato virus X (PVX) and with the PVX-AC2 construction. Bidimensional electrophoresis was performed and MALDI TOF-TOF analysis revealed differentially expressed proteins involved in oxidative stress, photosynthesis, host defence, among others. In the second part of this study, we have applied the 2D-nanoUPLC/HDMSE methodology to analyse tomato plants infected with the begomovirus ToCMoV. For the first time, the proteomic profiles of the susceptible tomato genotypes (Santa Clara) and resistant (LAM 157 containing the locus of resistance tcm-1) inoculated with ToCMoV were analyzed. Differentially expressed proteins in response to ToCMoV were identified. The results of this study revealed proteins that may be associated with the infectivity of ToCMoV, such as ubiquitin and heat shock 70 (HSP 70). The effects caused by the pathogenicity factor AC2 of ToCMoV and the intact virus were similar and resulted in the recruitment of proteins involved in ubiquitination pathways, translation and protein processing. Moreover, the host plant defense response was also triggered in an attempt to combat viral breakthrough increasing the expression of proteins such as histone H4. The results obtained provide important XVI contributions to the understanding of plant-ToCMoV interactions and may contribute to the development of strategies to control this infection caused by begomoviruses.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2012. / Submitted by Jaqueline Ferreira de Souza (jaquefs.braz@gmail.com) on 2012-06-22T12:36:21Z No. of bitstreams: 1 2012_IngriddeSouzaFreire.pdf: 4672884 bytes, checksum: eb0ae147522c3726ce9dce8103ff2c88 (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Ferreira de Souza(jaquefs.braz@gmail.com) on 2012-06-25T10:46:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_IngriddeSouzaFreire.pdf: 4672884 bytes, checksum: eb0ae147522c3726ce9dce8103ff2c88 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-06-25T10:46:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_IngriddeSouzaFreire.pdf: 4672884 bytes, checksum: eb0ae147522c3726ce9dce8103ff2c88 (MD5) / Os esporos-cristais de Bacillus thuringiensis (Bt) têm sido usados no controle biológico de insetos como uma alternativa para o uso de agrotóxicos na agricultura. As δ-endotoxinas, ou proteínas Cry do B. thuringiensis, possuem atividade inseticida para diferentes ordens de insetos. Mesmo como esporos-cristais, já apresentaram toxicidade e têm sido usadas para proteger diferentes culturas. Objetivou-se avaliar o potencial genotóxico, citotóxico e hematotóxico do complexo esporo-cristal das estirpes recombinantes contendo os genes BtCry1Ia, BtCry10Aa e BtCry1Ba6 de Bacillus thuringiensis, em dois organismos não-alvo. Com esporos-cristais dessas estirpes recombinantes foram realizados três concentrações/doses nos tratamentos com peixe e com camundongo, incluindo um grupo de controle negativo para ambos organismos. Grupos de 10 Oreochromis niloticus, foram expostos às concentrações de 25, 50 e 100 mg/L, que variaram de 107 a 9 x 107 esporos viáveis por mL por 96 horas. Grupos de 6 camundongos foram expostos via gavagem as concentrações de 27, 136 e 270 por 72 horas com variações de 4 x 108 a 1010 esporos viáveis. A genotoxicidade em peixes foi realizada por meio de três diferentes testes, o teste do cometa, micronúcleo e anomalias nucleares em eritrócitos periféricos corados com giemsa. A genotoxicidade em camundongos foi avaliada pelo teste do micronúcleo, a citotoxicidade através da proporção entre eritrócitos policromáticos e normocromáticos, obtidos de sangue periférico e corados com laranja de acridina. A hematotoxicidade foi estudada por meio de hemograma completo. Nossos resultados mostraram que os esporos-cristais Cry1Ba6 e Cry10Aa não foram genotóxicos para peixes da espécie O. niloticus. Entretanto, o esporo-cristal Cry1Ia induziu dano no DNA por meio do teste do cometa elevando o índice de danos moderados. Em camundongos, esses esporos-cristais não apresentaram genotoxicidade e citotoxicidade. No entanto, alguns dos parâmetros hematológicos foram significativamente alterados, o que parece estar relacionado com os níveis de exposição. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Spore-crystal of Bacillus thrungiensis have been widely used in the biological control of insects to replace chemical pesticides in the agriculture. The δ-endotoxins or cry proteins from B. thuringiensis have insecticide activity against several different ordens of insects. Even as spore-crystal, they already show toxicity being used to protect many different crops. This study was carried out to evaluate the genotoxic, cytotoxic and haematotoxic potential of different recombinant strains of the complex spore-crystal BtCry1Ia, BtCry10Aa and BtCry1Ba6 from B. thuringiensis on two in vivo biological models. Groups of ten Orechromis niloticus were exposed at concentrations of 25, 50 and 100 mg/L, which means a range from 107 up to 9 x 107 viable spores per ml of water for 96 h. Groups of six mice were exposed by gavage at concentrations of 27, 136 and 270 mg/kg for 72h, which means a range from 4 x 108 up to 1010 viable spores per ml of water. Genotoxic evaluations in fish were done using three different endpoints comet assay, micronucleus test and nuclear abnormalities in peripheric erythrocytes stained by giemsa. Otherwise, the genotoxicity to mice was evaluated by micronucleus test and cytotoxicity through the relationship between polychromatic and normochromatic erythrocytes from peripheric blood stained by acridine orange. Haematotoxicity was studied through automated counter, considering erythrogram, leukogram and platelets from peripheral blood samples. Our results showed that spore-crystals Cry1Ba6 and Cry10Aa did not have genotoxicity to fish species O. niloticus. On the other hand, Cry1Ia induced DNA damage by the comet assay in some exposure levels. In mice, the three tested spore-crystals did not show genotoxicity nor cytotoxicity. However, some haematological parameters were significantly changed, which could be related to exposure levels.

The influence of habitat loss on biodiversity is related to a set of non-linear processes, which strongly affect isolation and connectivity and determine both extinction and colonization rates. Landscape changes due anthropogenic disturbances are driving not only species loss per se, but also loss of functions performed by those species, which could have important impacts on the provision of ecosystem services and ecosystem function. The objective of this dissertation is to move beyond our current understanding about landscape processes underpinning bird persistence and avian-mediated pest control in fragmented landscapes. In chapter 1, we systematically review the empirical evidence of landscape structure effects on avian-mediated pest control in agricultural systems worldwide in order to point out the main landscape processes underpinning ecosystem service provision and gaps in knowledge where research efforts should be focused. We have found 226 bird species that provide pest regulation worldwide, and a substantial proportion of those are native habitat-dependent species in tropical systems. Moreover, more heterogeneous landscapes, increased habitat amount, and decreased isolation among patches are positively associated with increased avian-mediated pest control rates. Then, using bird data collected in fragmented landscapes in the Brazilian Atlantic forest, in chapter 2 we test for community-level extinction thresholds across a range of biodiversity indices (taxonomic, functional, and phylogenetic diversity) in order to evaluate how much habitat is need to maintain sustainable ecosystem functioning and ecosystem resilience, and how matrix composition might affect these thresholds. In general, we have found that more permeable matrices are able to postpone species loss in fragmented landscapes. However, since habitat loss reaches 20% of habitat remaining, all aspects of biodiversity are compromised. Finally, in chapter 3 we investigate the cross-habitat spillover process - one of the main processes regulating avian-mediated pest control in tropical regions. Matrix composition is a key factor in facilitating species movement into matrices, as 24% of the species pool can spill over into coffee plantations, while spillover into pasture is nearly non-existent. Moreover, the interaction between forest cover and edge density is an important predictor of spillover when habitat amount is low. Our results suggest that landscape configuration and matrix composition should be considered when planning agricultural landscapes in order to ensure long-term persistence of biodiversity and ecosystem services provision / O efeito da perda de habitat sobre a biodiversidade está ligado a um conjunto de processos não-lineares que fortemente afetam a conectividade e o isolamento da paisagem, e determinam taxas de extinção e colonização. Mudanças na estrutura da paisagem desencadeadas por distúrbios antropogênicos levam não somente à perda de espécies per se, mas também a perda de funções que estas espécies desempenham no ecossistema, com importantes implicações em termos de funcionalidade e provisão de serviços ecossistêmicos. O objetivo geral desta tese é elucidar os processos, que ocorrem no nível da paisagem, que modulam a persistência de aves e, consequentemente, as funções destas aves na provisão do controle de pragas em paisagens fragmentadas. No primeiro capítulo da tese, nós revisamos sistematicamente as evidências empíricas dos efeitos da estrutura da paisagem sobre o controle de pragas provido por aves em sistemas agrícolas ao redor do mundo, identificando os processos, no nível da paisagem, subjacentes a este controle e as lacunas de conhecimento onde futuros esforços devem ser concentrados. Identificamos 226 espécies de aves provendo controle de pragas em sistemas agrícolas, sendo que uma porção substancial destas espécies em sistemas tropicais são dependentes de habitats nativos. Em geral, paisagens mais heterogêneas, com elevada cobertura de habitat nativo e menor isolamento entre fragmentos estão positivamente relacionados com elevadas taxas de controle de pragas provido por aves. Por conseguinte, no segundo capítulo, usamos dados de aves em paisagens fragmentadas emersas em diferentes contextos de matriz agrícola na Mata Atlântica brasileira, para testar limiares de extinção ao nível de comunidade. Foram usadas diferentes métricas de diversidade biológica (taxonômica, funcional e filogenética), com o intuito de avaliar o quanto de habitat é necessário para garantir o funcionamento e resiliência do ecossistema. Nós encontramos que matrizes mais permeáveis são capazes de postergar a perda de espécies em paisagens fragmentadas, no entanto, quando a perda de habitat alcança o limiar crítico de 20%, todos os aspectos da biodiversidade estão comprometidos, independentemente do tipo de matriz. Por fim, no capítulo 3, nós investigamos o processo de \'transbordamento\' (i.e. spillover), um dos principais processos reguladores da provisão do serviço de controle de pragas pela biota dependente de habitats nativos. Nós demonstramos que a composição da matriz é um fator determinante facilitando o movimento de espécies para as matrizes agrícolas, sendo que 24% do pool de espécies consegue utilizar matrizes de cafezal, enquanto este movimento é quase inexistente em matrizes de pastagem. Ademais, em paisagens com pouca cobertura florestal, a interação entre cobertura florestal e densidade de borda é um importante preditivo do spillover. Nossos resultados sugerem que a configuração da paisagem e a composição da matriz devem ser consideradas no planejamento de paisagens agrícolas para garantir a persistência em longo prazo da biodiversidade e a provisão de serviços ecossistêmicos

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-06-27T18:00:05Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 880024 bytes, checksum: d6288cd9abe59c887ceae8a42a811ba8 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-27T18:00:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 880024 bytes, checksum: d6288cd9abe59c887ceae8a42a811ba8 (MD5) Previous issue date: 2001-02-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Estudou-se o crescimento populacional e as perdas causadas por Sitophilus zeamais e Rhyzopertha dominica em trigo com teor de umidade de 11,1% b.u., armazenado por 90 dias nas temperaturas de 16, 20, 24, 28, 32 e 36 °C, e infestados com as densidades populacionais de 1,3; 2,7; 4,0; 5,3; 6,7; 8,0, e 9,3 insetos/kg. Estimaram-se Nível de Dano Econômico (NDE) e Nível de Ação (NA) para o controle de S. zeamais e R. dominica, por fumigação e por aeração, em trigo armazenado, considerando-se as perdas econômicas em danos por inseto, em peso hectolítrico e em matéria seca. Para R. dominica, o maior crescimento ocorreu na temperatura de 33,3 °C. Comparados com outras pesquisas, os modelos obtidos superestimaram o crescimento para períodos superiores a 45 dias, porque foram obtidos a partir de níveis de infestação inicial muito superiores. Para a espécie S. zeamais , o maior crescimento populacional ocorreu na temperatura de 28 °C. O período de 90 dias de armazenagem sob 16 °C não foi suficiente para extinguir as populações. Na temperatura de 36 °C, todas as populações foram extintas. Para ambas as espécies, as populações de declinaram, mas não foram extintas em 90 dias de armazenagem em 16 °C; e o crescimento populacional foi afetado pelo tamanho da população que iniciou a infestação; quanto maior foi o nível de infestação inicial maior foi o crescimento populacional ao longo do tempo de armazenagem. Quanto ao estudo das perdas, realizou-se a regressão dos dados de população adulta em função dos dados de cada um dos fatores de perda. Pelos modelos obtidos, seria necessária uma população de S. zeamais de 180 insetos/kg para se atingir o percentual de 1,5% de grãos danificados, associado ao umedecimento de 0,13 ponto percentual, redução no peso hectolítrico de 0,4 kg/hl e perda de 0,7% de matéria seca. Para R. dominica, seria necessário 64 insetos/kg de trigo para que se atingisse 1,5% de grãos danificados, umedecimento de 0,07 ponto percentual, redução de 0,5 kg/hl no peso hectolítrico e perda de 0,5% de matéria seca. R. dominica causou mais perdas do que S. zeamais . Quanto às ferramentas econômicas, para ambas as espécies, o NDE foi de 0,004 inseto/kg no controle por fumigação e de 0,0023 inseto/kg no controle por aeração, com uma vazão específica de 10 m³/h/m³. Partindo de uma infestação inicial de 0,001 inseto/kg, o NA para o controle de S. zeamais com fumigação foi de 0,0022 inseto/kg a 28 °C, o que corresponde a 16,7 dias após a detecção daquela infestação. Para R. dominica, o NA para o controle com fumigação foi de 0,001 inseto/kg a 32 °C, o que corresponde a 0 dias após a detecção. / The population growth of Sitophilus zeamais and Rhyzopertha dominica was studied on wheat at 11.1% moisture content, stored for 90 days at temperatures of 16, 20, 24, 28, 32 and 36 °C, and infested with population densities of 0.0, 1.3, 2.7, 4.0, 5.3, 6.7, 8.0 and 9.3 insects/kg. The Economic- Injury Level (EIL) and Action Threshold (AT) were developed for control with fumigation and aeration methods, evaluating different types of economic losses: percent of weight loss of insect damaged kernels, weight per hectoliter and dry matter loss of wheat grain. The biggest growth of R. dominica occurred at 33.3 °C. In contrast with other researchs, the models overestimated the population growth for storage periods over 45 days, because they were obtained from larger initial population densities. For S. zeamais, the greatest growth occurred at 28 °C. At temperature of 36 °C, all populations were extinguished. For both species, the period of 90 days of storage under 16 °C was not enough to extinguish the populations and the population growth was affected by initial population density; the highest it was, the highest was the population growth. For the losses, regression models are presented to predict the losses in function of number of adult insects in grain mass. The obtained models predict that would be necessary a S. zeamais population of 180 insects/kg to achieve 1.5% weight loss of insect damaged kernels, associated with a moistening of 0.13%, test weight reduction of 0.4 kg/hl and 0.7% of dry matter loss. For R. dominica, would be necessary a population of 64 insects/kg to achieve 1.5% weight loss of insect damaged kernels, associated with a moistening of 0.07%, test weight reduction of 0.5 kg/hl and 0.5% of dry matter loss. The R. dominica was more prejudicial than S. zeamais. Regarding the economic index, for both species, the EIL was 0,004 insects/kg for fumigation control and 0.0023 insects/kg for aeration control at specific airflow rate of 10 m³/h/m³. Departing from an initial infestation of 0.001 insects/kg, the NA for control of S. zeamais with fumigation was 0.0022 insects/kg at 28 °C, which corresponds to 16.7 days after detection that infestation. For R. dominica, the NA for control with fumigation was 0.001 insects/kg at 32 °C, which corresponds to 0 days after detection.

A preocupação com o desenvolvimento de novas tecnologias que priorizem o menor impacto ambiental, é cada vez maior. Esta tendência também ocorre na agroindústria, onde a preocupação com a redução de uso de defensivos agrícolas já é grande. Os problemas fitossanitários sempre foram barreiras que impediram o desenvolvimento da produtividade da citricultura, apenas ácaro da leprose (Brevipalpus phoenicis) representa cerca de 80 % dos custos destinados ao controle de pragas. O desenvolvimento de novas tecnologias, que colaborem com o controle de pragas e doenças já existentes, e outras que podem surgir, são uma necessidade deste setor. Nesta pesquisa foram utilizadas ferramentas informatizadas, utilizadas com sucesso no setor mineiro, no estudo dos ácaro da falsa ferrugem (Phyllocoptruta oleiva), ácaro branco (Plyphagotarsonemus latus) e ácaro da leprose (Brevipalpus phoenicis) com o objetivo de aprimorar o planejamento e gerenciamento da aplicação localizada de defensivos agrícolas, permitindo a verificação das variações espaciais e temporais dos fatores relacionados ao controle dessas pragas que prejudicam a produção citrícola. Estas ferramentas possuem análises geoestatísticas, que são primordiais para a modelagem espacial de fenômenos naturais, como as pragas e doenças, com características regionalizadas, a partir de amostras georreferenciadas. Como resultado tem-se a melhoria do processo de tomada de decisões na utilização de insumos agrícolas (defensivos), a partir do desenvolvimento de metodologia específica, testada e calibrada junto a um importante empreendimento no interior de São Paulo. / There is a great concern nowadays with the development of new technologies that prioritize environmental impact. This trend also occurs in the agribusiness, where one of the main concerns is the reduction in the use of agrochemicals. Phytosanitary issues have traditionally been a barrier for the increase in productivity of the citrus plants, as the leprosis mite (Brevipalpus phoenicis) responds for approximately 80 % of the pests control costs. The development of new technologies to control existing pests and diseases that affect citrus production is a major challenge of the agribusiness. In this research, software successfully developed for the mining industry has been applied to model the spatial distribution of citrus rust mite (Phyllocoptruta oleiva), broad mite (Plyphagotarsonemus latus) and leprosis mite (Brevipalpus phoenicis) with the objective of improving the planning and management of the localized application of agrochemicals. The resulting analysis have allowed the measurement of spatial variations of these pests and diseases. The spatial variation has then been used as the basis for planning the controlled application of agrochemicals for these pests and diseases. The research has applied geostatistical analysis for the detailed modeling of the regionalized behaviour of citrus pests and diseases according to the spatial positions of the field samples. The results obtained in the research include the improvement of the decisionmaking process of planning the application of agrochemicals and the development of a specific methodology which has been tested and calibrated in a test-implementation at an important agribusiness company in São Paulo.