Spelling suggestions: "subject:"4rαlox system"" "subject:"4rαflox system""
1 |
Κλωνοποίηση του γονιδίου της geminin του ποντικού και δημιουργία πλασμιδιακού / Cloning of gemininΚοταντάκη, Πανωραία 29 June 2007 (has links)
Η geminin είναι ένα σχετικά καινούριο μόριο το οποίο διαθέτει καίριο ρόλο κατά την ανάπτυξη και την διαφοροποίηση, εξαιτίας του νευροποιητικού δυναμικού της, της ικανότητάς της να αλληλεπιδρά με μέλη των Hox και polycomb πρωτεϊνών, καθώς επίσης και να δρα σαν ρυθμιστής του κυτταρικού κύκλου, λειτουργώντας ως αναστολέας του παράγοντα αδειοδότησης της αντιγραφής του DNA, CDT1. Στα πλαίσια της εργασίας αυτής, κλωνοποιήσαμε το γονίδιο της geminin στο ποντίκι το οποίο αποτελείται από 7 εξώνια και καλύπτει μία περιοχή γύρω στα 10Kb. Σχεδιάσαμε και κλωνοποιήσαμε ένα πλασμιδιακό όχημα στόχευσης για το γονίδιο της mgeminin και εισήγαμε 3 θέσεις loxP στο γενωμικό locus αυτής, με σκοπό να δημιουργήσουμε υπό συνθήκη ελλειμματικούς ποντικούς για το γονίδιό της. Χρησιμοποιώντας το συγκεκριμένο φορέα στόχευσης αδρανοποιήσαμε το γονίδιο της Geminin σε pc3 (protamine Cre 3) πολυδύναμα κύτταρα ποντικού, δημιουργώντας ετερόζυγους ES κλώνους που φέρουν το «floxed» αλληλόμορφο, καθώς επίσης και το αλληλόμορφο αγρίου τύπου. Το μεταλλαγμένο αλληλόμορφο ελέγχθηκε τόσο με PCR όσο και με ανάλυση κατά Southern για την ορθότητα του ομόλογου ανασυνδυασμού. Ταυτοποιήσαμε 15 ορθά ανασυνδυασμένους ES κλώνους, οι οποίοι μπορούν να χρησιμοποιηθούν για τη δημιουργία υπό συνθήκη knockout ποντικών για το γονίδιο της geminin, μετά από έγχυση σε B6 βλαστοκύστεις και επακόλουθη μεταφορά αυτών σε θετές μητέρες. / Geminin is a novel bifunctional molecule with a pivotal role in the processes of differentiation and cell cycle regulation, due to its neuralizing potential, its ability to interact through Hox and polycomb group members, as well as in the inhibition of cell cycle progression through protein-protein interactions with the licensing factor Cdt1. We have cloned the mouse Geminin gene, which consists of 7 exons and spans approximately a region of 10Kb. We have generated a vector and introduced 3 loxP sites in the Geminin locus, in order to create conditional knockout mice. Using this knockout construct we inactivated the geminin locus in pc3 mouse embryonic stem cells, creating heterozygous ES clones, carrying a “floxed” and a “WT” allele for geminin. The mutant allele in the targeted ES cells has been verified with Southern blotting and PCR for the correct homologous recombination events. We identified 15 correctly targeted ES clones, which can be used for the generation of conditional geminin knockout mice, upon injection into B6 blastocysts and subsequent transfer to foster mothers.
|
2 |
Vliv ISL1 na vývoj neurosenzorických buněk vnitřního ucha / Role of ISL1 in development of neurosensory cells of inner earVochyánová, Simona January 2020 (has links)
To understand the pathophysiology of hearing loss, it is necessary to identify genes responsible for embryonic development of neurosensory cells in the inner ear. The aim of this work is to clarify the role of LIM-homeodomain transcription factor ISL1 in the development of these cells. Using Cre-loxP recombination strategy, we generated a mouse line with time and site- specific deletion of Isl1 gene in NEUROD1-Cre expressing cells (Isl1 CKO). Although the early development of stato-acoustic ganglion was not affected by Isl1 deletion, at E14,5, we observed abnormalities in neuronal migration, formation of spiral ganglion and axon guidance in the Isl1 CKO cochlea. The length of the cochlear sensory epithelium was shortened by 20% as a consequence of lower proliferation activity of sensory precursor cells. Our results suggest that ISL1 is necessary for spiral ganglion formation and innervation of the Organ of Corti. Key words: transcription factor ISL1, neurons, Cre-loxP system, mouse model
|
3 |
Construction and Evaluation of a Cre-lox-Based Fluorescent Conjugation Tracking SystemBrännström, Carl January 2022 (has links)
Plasmids are small, circular, extrachromosomal double-stranded genetic elements present in bacteria. Plasmids can replicate independently of the bacterial chromosome and play an important role as a transmitter of antibiotic resistance genes between bacteria. Antibiotic resistance genes have been shown to be selected for even in the presence of subinhibitory levels of antibiotics, but the effect of antibiotics on conjugation is not as well understood. To study this, we designed a novel conjugation tracking system utilizing a Cre-expressing plasmid and a chromosomal floxed blue fluorescent protein (BFP) gene. We found that our model worked opposite as intended as cells expressed BFP before conjugation and lost BFP expression upon recombination. An issue with the system was isolated to the direction of the single loxP site remaining after recombination. Both loxP sites were inverted but this did not restore the intended expression of BFP after recombination. Subsequently the system was modified to increase the space between the promoter region and the single loxP site remaining after recombination. This extension produced the desired result as BFP expression now increased upon recombination. Still, further work needs to be done to construct a Cre-expressing plasmid, tune expression of BFP, and show expression of yellow fluorescent protein (YFP) in our model before the system can be applied to clinical isolates.
|
4 |
Regulation of sodium iodide symporter expression/function and tissue-targeted gene transfer of sodium iodide symporterLin, Xiaoqin January 2003 (has links)
No description available.
|
5 |
Étude de la fonction ovarienne chez les souris déficientes des enzymes hyaluronidasesDumaresq-Doiron, Karine 08 1900 (has links)
Les mammifères femelles naissent avec un très grand nombre de
follicules ovariens primordiaux (104-106); par contre, la grande majorité (99%)
de ces follicules n’atteignent jamais la maturité et subissent l’atrésie,
principalement par l’apoptose des cellules de la granulosa. Notre laboratoire a
démontré que les hyaluronidases des mammifères induisent l’apoptose des
cellules de la granulosa et sont impliquées dans l’atrésie des follicules mais que
cet effet apoptotique ne serait pas dû à leur activité enzymatique. Notre modèle
propose que les hyaluronidases aient un rôle dans les follicules non destinés à
ovuler. Le but de la présente étude est d’évaluer la folliculogénèse et la fertilité
des souris déficientes de ces enzymes. Les résultats montrent que la délétion
de Hyal-3 ne semble pas affecter la fonction ovarienne des souris mais qu’il
pourrait y avoir un effet compensatoire par Hyal-1 chez les souris déficientes de
Hyal-3 étant donné que son expression est augmentée chez ces souris. La
délétion de Hyal-1 a pour effet d’augmenter le nombre des follicules
primordiaux, primaires et secondaires, particulièrement chez les souris de bas
âge, et de diminuer le niveau d’apoptose des cellules de la granulosa. Afin
d’évaluer la fonction de Hyal-1, -2 et -3 sans effet compensatoire entre elles,
nous avons voulu créer une souris déficiente des ces 3 hyaluronidases
spécifiquement dans les gonades en utilisant le système Cre/loxP. Un vecteur
contenant la séquence Cre sous le contrôle du promoteur de Inhibin-α, qui
conduit l’expression des gènes en aval chez les cellules somatiques des
gonades, a été construit avec succès. En conclusion, cette étude nous révèle
que Hyal-3 ne semble pas affecter la fonction ovarienne mais que la délétion de
Hyal-1 augmente la folliculogénèse et diminue l’apoptose des cellules de la
granulosa. / Female mammals are born with a large number of ovarian primordial
follicles, though the vast majority of these never reach the preovulatory stage
and undergo atresia, mainly through granulosa cell apoptosis. Our laboratory
has established that mammalian hyaluronidases induce apoptosis of ovarian
granulosa cells and that they are involved in follicular atresia but that their
apoptotic effect is not due to their enzymatic activity. Our model suggests that
mammalian hyaluronidases might have a role in follicles not destined to ovulate.
The aim of this study was to evaluate the folliculogenesis and fertility of mice
devoid of these enzymes. Our results showed that Hyal-3 KO mice have normal
folliculogenesis, which could be explained by a compensatory effect of Hyal-1
since its expression is upregulated in these mice. In contrast, Hyal-1 KO mice
had increased numbers of primordial, primary and secondary follicles,
particularly in young mice, and lower levels of granulosa cell apoptosis. In order
to investigate the effect of the three hyaluronidases, Hyal-1, -2 and -3, without a
compensatory effect by one another, we decided to create a transgenic mouse
deficient in all these three hyaluronidases but only in the gonads by using the
Cre/loxP system. We successfully created a plasmid containing the Cre
sequence under the control of Inhibin-α promoter, which conducts gene
expression in somatic cells of the gonads. In conclusion, the present work
demonstrates that Hyal-3 does not have any effect on ovarian function, but that
deletion of Hyal-1 in mice promotes increased folliculogenesis and lowers
granulosa cell apoptosis.
|
6 |
Étude de la fonction ovarienne chez les souris déficientes des enzymes hyaluronidasesDumaresq-Doiron, Karine 08 1900 (has links)
Les mammifères femelles naissent avec un très grand nombre de
follicules ovariens primordiaux (104-106); par contre, la grande majorité (99%)
de ces follicules n’atteignent jamais la maturité et subissent l’atrésie,
principalement par l’apoptose des cellules de la granulosa. Notre laboratoire a
démontré que les hyaluronidases des mammifères induisent l’apoptose des
cellules de la granulosa et sont impliquées dans l’atrésie des follicules mais que
cet effet apoptotique ne serait pas dû à leur activité enzymatique. Notre modèle
propose que les hyaluronidases aient un rôle dans les follicules non destinés à
ovuler. Le but de la présente étude est d’évaluer la folliculogénèse et la fertilité
des souris déficientes de ces enzymes. Les résultats montrent que la délétion
de Hyal-3 ne semble pas affecter la fonction ovarienne des souris mais qu’il
pourrait y avoir un effet compensatoire par Hyal-1 chez les souris déficientes de
Hyal-3 étant donné que son expression est augmentée chez ces souris. La
délétion de Hyal-1 a pour effet d’augmenter le nombre des follicules
primordiaux, primaires et secondaires, particulièrement chez les souris de bas
âge, et de diminuer le niveau d’apoptose des cellules de la granulosa. Afin
d’évaluer la fonction de Hyal-1, -2 et -3 sans effet compensatoire entre elles,
nous avons voulu créer une souris déficiente des ces 3 hyaluronidases
spécifiquement dans les gonades en utilisant le système Cre/loxP. Un vecteur
contenant la séquence Cre sous le contrôle du promoteur de Inhibin-α, qui
conduit l’expression des gènes en aval chez les cellules somatiques des
gonades, a été construit avec succès. En conclusion, cette étude nous révèle
que Hyal-3 ne semble pas affecter la fonction ovarienne mais que la délétion de
Hyal-1 augmente la folliculogénèse et diminue l’apoptose des cellules de la
granulosa. / Female mammals are born with a large number of ovarian primordial
follicles, though the vast majority of these never reach the preovulatory stage
and undergo atresia, mainly through granulosa cell apoptosis. Our laboratory
has established that mammalian hyaluronidases induce apoptosis of ovarian
granulosa cells and that they are involved in follicular atresia but that their
apoptotic effect is not due to their enzymatic activity. Our model suggests that
mammalian hyaluronidases might have a role in follicles not destined to ovulate.
The aim of this study was to evaluate the folliculogenesis and fertility of mice
devoid of these enzymes. Our results showed that Hyal-3 KO mice have normal
folliculogenesis, which could be explained by a compensatory effect of Hyal-1
since its expression is upregulated in these mice. In contrast, Hyal-1 KO mice
had increased numbers of primordial, primary and secondary follicles,
particularly in young mice, and lower levels of granulosa cell apoptosis. In order
to investigate the effect of the three hyaluronidases, Hyal-1, -2 and -3, without a
compensatory effect by one another, we decided to create a transgenic mouse
deficient in all these three hyaluronidases but only in the gonads by using the
Cre/loxP system. We successfully created a plasmid containing the Cre
sequence under the control of Inhibin-α promoter, which conducts gene
expression in somatic cells of the gonads. In conclusion, the present work
demonstrates that Hyal-3 does not have any effect on ovarian function, but that
deletion of Hyal-1 in mice promotes increased folliculogenesis and lowers
granulosa cell apoptosis.
|
7 |
Étude du rôle de Pax6 dans la gliogenèseCannizzaro, Enrica 08 1900 (has links)
Les astrocytes sont des cellules gliales présentes dans le système nerveux central, qui exercent de nombreuses fonctions physiologiques essentielles et sont impliquées dans la réponse aux lésions et dans plusieurs pathologies du cerveau. Les astrocytes sont générés par les cellules de la glie radiale, les précurseurs communs de la plupart des cellules neuronales et gliales du cerveau, après le début de la production des neurones. Le passage de la neurogenèse à la gliogenèse est le résultat de mécanismes moléculaires complexes induits par des signaux intrinsèques et extrinsèques responsables du changement de propriété des précurseurs et de leur spécification. Le gène Pax6 code pour un facteur de transcription hautement conservé, impliqué dans plusieurs aspects du développement du système nerveux central, tels que la régionalisation et la neurogenèse. Il est exprimé à partir des stades les plus précoces dans les cellules neuroépithéliales (les cellules souches neurales) et dans la glie radiale, dérivant de la différenciation de ces cellules. L’objectif de cette étude est d’analyser le rôle de Pax6 dans la différenciation et dans le développement des astrocytes. À travers l’utilisation d’un modèle murin mutant nul pour Pax6, nous avons obtenu des résultats suggérant que la suppression de ce gène cause l'augmentation de la prolifération et de la capacité d'auto-renouvellement des cellules souches neurales embryonnaires. In vitro, les cellules mutantes prolifèrent de façon aberrante et sous-expriment les gènes p57Kip2, p16Ink4a, p19Arf et p21Cip1, qui inhibent la progression du le cycle cellulaire. De plus, Pax6 promeut la différenciation astrocytaire des cellules souches neurales embryonnaires et est requis pour la différenciation des astrocytes dans la moëlle épinière. Les mutants nuls pour Pax6 meurent après la naissance à cause de graves défauts développementaux dus aux fonctions essentielles de ce gène dans le développement embryonnaire de plusieurs organes. En utilisant un modèle murin conditionnel basé sur le système CRE/ loxP (hGFAP-CRE/ Pax6flox/flox) qui présente l’inactivation de Pax6 dans les cellules de la glie radiale, viable après la naissance, nous avons montré que Pax6 est impliqué dans la maturation et dans le développement post-natal des astrocytes. Le cortex cérébral des souris mutantes conditionnelles ne présente pas d’astrocytes matures à l’âge de 16 jours et une très faible quantité d’astrocytes immatures à l’âge de trois mois, suggérant que Pax6 promeut la différenciation et la maturation des astrocytes. De plus, Pax6 semble jouer un rôle même dans le processus de différenciation et de maturation de cellules gliales rétiniennes. L’étude des gènes et des mécanismes moléculaires impliqués dans la génération des astrocytes est crucial pour mieux comprendre le rôle physiologique et les altérations pathologiques des ces cellules. / Astrocytes, a subtype of glial cells present in the central nervous system, have multiple physiological functions and are involved in the response to lesions and in several brain pathologies. Astrocytes are generated by radial glia cells, the common precursors of most neural and glial cells of the brain, after the beginning of neurons production. The transition from neurogenesis to gliogenesis is the result of complex molecular mechanisms induced by both intrinsic and extrinsic signals responsible for the change of precursors properties and commitment. The Pax6 gene encodes a highly conserved transcription factor, involved in several aspects of central nervous system development, such as regionalization and neurogenesis. It is expressed from the earliest stages in the neuroepithelial cells (neural stem cells) and in their more differentiated radial glia progeny. The aim of this study was to analyze the role of Pax6 in the differentiation and development of astrocytes. By using a Pax6 null mutant mouse, we obtained results suggesting that the suppression of this gene increases the proliferation and the self-renewal ability of embryonic neural stem cells. In vitro mutant cells overproliferate and overexpress p57Kip2, p16Ink4a, p19Arf et p21Cip1 genes, which inhibit the cell cycle progression. Moreover Pax6 promotes astrocytic differentiation of embryonic neural stem cells and is required for astrocyte differentiation in spinal cord. Pax6 null mutants die after birth because of severe developmental defects, due to the essential functions of this gene in embryonic development of several organs. Using a conditional mutant mouse of Pax6 in radial glia (hGFAP-CRE/ Pax6flox/flox, based on site-specific Cre/loxP-mediated gene excision), which is viable after birth, we obtained evidences showing that Pax6 is involved in astrocyte maturation and postnatal development. The cerebral cortex of sixteen-day-old conditional mutant mice doesn’t present mature astrocytes, and the three-month-old mice cortex presents only few immature astrocytes, suggesting that Pax6 promotes astrocyte differentiation and maturation. Moreover Pax6 seems to play a role also in the maturation and differentiation of retinal glial cells. The identification of genes and molecular pathways involved in the generation of astrocytes is crucial to better understand the physiological function and pathological alterations of these cells.
|
8 |
Étude du rôle de Pax6 dans la gliogenèseCannizzaro, Enrica 08 1900 (has links)
Les astrocytes sont des cellules gliales présentes dans le système nerveux central, qui exercent de nombreuses fonctions physiologiques essentielles et sont impliquées dans la réponse aux lésions et dans plusieurs pathologies du cerveau. Les astrocytes sont générés par les cellules de la glie radiale, les précurseurs communs de la plupart des cellules neuronales et gliales du cerveau, après le début de la production des neurones. Le passage de la neurogenèse à la gliogenèse est le résultat de mécanismes moléculaires complexes induits par des signaux intrinsèques et extrinsèques responsables du changement de propriété des précurseurs et de leur spécification. Le gène Pax6 code pour un facteur de transcription hautement conservé, impliqué dans plusieurs aspects du développement du système nerveux central, tels que la régionalisation et la neurogenèse. Il est exprimé à partir des stades les plus précoces dans les cellules neuroépithéliales (les cellules souches neurales) et dans la glie radiale, dérivant de la différenciation de ces cellules. L’objectif de cette étude est d’analyser le rôle de Pax6 dans la différenciation et dans le développement des astrocytes. À travers l’utilisation d’un modèle murin mutant nul pour Pax6, nous avons obtenu des résultats suggérant que la suppression de ce gène cause l'augmentation de la prolifération et de la capacité d'auto-renouvellement des cellules souches neurales embryonnaires. In vitro, les cellules mutantes prolifèrent de façon aberrante et sous-expriment les gènes p57Kip2, p16Ink4a, p19Arf et p21Cip1, qui inhibent la progression du le cycle cellulaire. De plus, Pax6 promeut la différenciation astrocytaire des cellules souches neurales embryonnaires et est requis pour la différenciation des astrocytes dans la moëlle épinière. Les mutants nuls pour Pax6 meurent après la naissance à cause de graves défauts développementaux dus aux fonctions essentielles de ce gène dans le développement embryonnaire de plusieurs organes. En utilisant un modèle murin conditionnel basé sur le système CRE/ loxP (hGFAP-CRE/ Pax6flox/flox) qui présente l’inactivation de Pax6 dans les cellules de la glie radiale, viable après la naissance, nous avons montré que Pax6 est impliqué dans la maturation et dans le développement post-natal des astrocytes. Le cortex cérébral des souris mutantes conditionnelles ne présente pas d’astrocytes matures à l’âge de 16 jours et une très faible quantité d’astrocytes immatures à l’âge de trois mois, suggérant que Pax6 promeut la différenciation et la maturation des astrocytes. De plus, Pax6 semble jouer un rôle même dans le processus de différenciation et de maturation de cellules gliales rétiniennes. L’étude des gènes et des mécanismes moléculaires impliqués dans la génération des astrocytes est crucial pour mieux comprendre le rôle physiologique et les altérations pathologiques des ces cellules. / Astrocytes, a subtype of glial cells present in the central nervous system, have multiple physiological functions and are involved in the response to lesions and in several brain pathologies. Astrocytes are generated by radial glia cells, the common precursors of most neural and glial cells of the brain, after the beginning of neurons production. The transition from neurogenesis to gliogenesis is the result of complex molecular mechanisms induced by both intrinsic and extrinsic signals responsible for the change of precursors properties and commitment. The Pax6 gene encodes a highly conserved transcription factor, involved in several aspects of central nervous system development, such as regionalization and neurogenesis. It is expressed from the earliest stages in the neuroepithelial cells (neural stem cells) and in their more differentiated radial glia progeny. The aim of this study was to analyze the role of Pax6 in the differentiation and development of astrocytes. By using a Pax6 null mutant mouse, we obtained results suggesting that the suppression of this gene increases the proliferation and the self-renewal ability of embryonic neural stem cells. In vitro mutant cells overproliferate and overexpress p57Kip2, p16Ink4a, p19Arf et p21Cip1 genes, which inhibit the cell cycle progression. Moreover Pax6 promotes astrocytic differentiation of embryonic neural stem cells and is required for astrocyte differentiation in spinal cord. Pax6 null mutants die after birth because of severe developmental defects, due to the essential functions of this gene in embryonic development of several organs. Using a conditional mutant mouse of Pax6 in radial glia (hGFAP-CRE/ Pax6flox/flox, based on site-specific Cre/loxP-mediated gene excision), which is viable after birth, we obtained evidences showing that Pax6 is involved in astrocyte maturation and postnatal development. The cerebral cortex of sixteen-day-old conditional mutant mice doesn’t present mature astrocytes, and the three-month-old mice cortex presents only few immature astrocytes, suggesting that Pax6 promotes astrocyte differentiation and maturation. Moreover Pax6 seems to play a role also in the maturation and differentiation of retinal glial cells. The identification of genes and molecular pathways involved in the generation of astrocytes is crucial to better understand the physiological function and pathological alterations of these cells.
|
Page generated in 0.0543 seconds