O gênero Mazama é composto por cinco espécies no Brasil. São animais de visualização dificultada por causa de comportamentos evasivos, o que torna as capturas e os estudos comportamentais quase impossíveis. Assim, o uso de metodologias não invasivas para estudos ecológicos e genéticos destas espécies se torna necessário. A análise do DNA fecal está dentro das técnicas mais promissoras para esse fim. Este estudo objetivou genotipar amostras fecais, de uma população de veado-mateiro (Mazama americana) para a obtenção de informações genéticas e ecológicas. Para tanto, foram coletadas, com auxílio de um cão farejador, georreferenciadas e estocadas em etanol absoluto, 52 amostras fecais de cervídeos. A coleta realizou-se em um fragmento (21o20S 47o17W) de 600 ha de floresta estacional semidecidual. Dessas amostras coletadas, 31% (n=16) foram classificadas como frescas e 69% (n=36) como não frescas. O DNA foi extraído em torno de 30 dias após a coleta, usando o kit comercial QIAamp® DNA Stool Mini Kit, seguindo o protocolo do fabricante. Das 52 amostras, 45 foram identificadas por PCR/RFLP como pertencentes a M. americana e as demais apresentaram problemas de amplificação e digestão, permanecendo sem identificação. Amplificaram-se por PCR cinco locos microssatélites, e o sucesso de amplificação, visualizado em gel de agarose, variou com o tamanho dos locos e com a classe das amostras. O sucesso de amplificação foi de 65% das amostras da categoria fresca e 35% das amostras da categoria não fresca. Encontrou-se uma correlação negativa (R= -0,82) entre o tamanho dos fragmentos dos locos de microssatélites e o sucesso de amplificação. Foi possível identificar o sexo do animal em 43,7% das amostras fecais, pela amplificação do gene da amelogenina. Os locos microssatélites amplificados foram analisados em sequenciador automático. Os eletroferogramas gerados pelo seqüenciador impossibilitaram a genotipagem da maioria dos locos e amostras, tornando inviável qualquer análise genética e ecológica com confiabilidade. Fica evidente a dificuldade de se trabalhar com a metodologia do DNA fecal para a identificação individual e sexagem de amostras obtidas de Cervídeos florestais em vida livre. Algumas melhorias metodológicas (coleta de amostras fecais frescas, seleção de iniciadores para locos menores e quantificação do DNA extraído por PCR em tempo real) são sugeridas para o aumento nos índices de sucesso na genotipgem em estudos futuros. / Mazama genus is composed by five species in Brazil. All of them are difficult to observe due to their evasive behaviors, what makes the captures and behavioral studies almost impossible. Thus, the use of non invasive methodologies is necessary to study the ecology and genetics of these species. The fecal DNA analysis is one of the most promising techniques for this purpose. This study aimed to genotype a Mazama americana population faecal samples for obtaining genetics and ecological information. For this, 52 deer faecal samples were collected in a 600ha seasonal semideciduos forest fragment (21o20S 47o17W), with the help of a detection dog, stored in ethanol and georeferenced. Of these samples 31% (n=16) was classified as fresh and 69% (n=36) as not fresh. About thirty days after the collection the DNA was extracted using the QIAamp® DNA Stool Mini Kit following the manufacturers instructions. From the 52 samples collected and extracted, 45 were identified by PCR/RFLP as M. americana and the others showed amplification and digestion problems, remaining without identification. Five microsatellite loci were amplified by PCR and the amplification success, visualized in agarose gel, varied with the loco size and age class. The amplifications success occurred in 65% of the fresh samples and in 35% of the non-fresh samples and a negative correlation (R= -0.82) was found between amplification success and loci sizes. It was possible to identify the animal sex in 43% of the samples by the amelogenin gene. The microsatellite loci amplifications were analyzed in an automatic sequencer. The majority of the samples and loci were impossible to genotype because of the quality of the elestroferograms, what made impossible any reliable genetic and ecological analysis. It is evident the difficulty to work with the faecal DNA methodology using field collected forests deer samples for individual and sexual identifications. Some methodological improvements (collect fresh samples, select primers for shorter loci and quantify the extracted DNA by real time PCR) are suggested to increase the genotyping success indexes in future studies

Dissertation (Ph.D.)--University of South Florida, 2007. / Title from PDF of title page. Document formatted into pages; contains 197 pages. Includes vita. Includes bibliographical references.

Diss. (sammanfattning) Uppsala : Sveriges lantbruksuniv. / Härtill 4 uppsatser.

Dissertation (Ph.D.)--University of South Florida, 2007. / Includes vita. Includes bibliographical references (leaves 188-197). Also available online.

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:03:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 VirginiaPMS.pdf: 3411673 bytes, checksum: dfe2ec0cb317ad239d62da9c99560ecf (MD5) Previous issue date: 2008-09-04 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / Leishmaniasis are endemic diseases wild spread in the New and Old World, caused by the flagelated protozoan Leishmania. In the New World, the distribution of different forms of leishmaniasis is mostly in tropical regions. In the State of Rio Grande do Norte, Northeast Brazil, 85% of the captured sand flies fauna is Lutzomyia longipalpis. The distribution of the sand fly vector in the state overlaps with the disease distribution, where the presence of sand flies is associated with presence of animals shelters. The aim of this study was to analyse the blood meal preference of sand flies vector from the genus Lutzomyia spp. in laboratory conditions, to verify the vector life cicle at different temperatures sets and to identify the main blood meal source in endemic areas for visceral leishmaniasis (VL) at peri-urban regions of Natal. Sand flies samples were collected from the municipalities of S?o Gon?alo do Amarante and N?sia Floresta where female sand flies were grouped for the colony maintenance in the laboratory and for the analysis of the preferred source of sand fly blood meal in natural environment. The prevalence of blood meal preference and oviposition for the females sand flies was 97% for Cavia porcellus with oviposition of 19 eggs/female; 97% for Eqqus caballus with 19 eggs/female; 98% for human blood with 14 eggs/female; 71.3% for Didelphis albiventris with 8.4 eggs/female; 73% for Gallus gallus with 14 eggs/female; 86% for Canis familiaris with 10.3 eggs/female; 81.4% for Galea spixii with 26 eggs/female; 36% for Callithrix jachus with 15 eggs/female; 42.8% for Monodelphis domestica with 0% of oviposition. Female sand flies did not take a blood meal from Felis catus. Sand flies life cycle ranged from 32-40 days, with 21-50 oviposition rates approximately. This study also showed that at 32?C the life cycle had 31 days, at 28? C it had 50 days and at 22?C it increased to 79 days. Adjusting the temperature to 35?C the eggs did not hatch, thus blocking the life cycle. A total of 1540 sand flies were captured, among them, 1.310 were male and 230 were female. Whereas 86% of the sand flies captured were Lu. longipalpis as compared to 10.5% for Lu. evandroi and, 3.2% for L. lenti and 0.3% for Lu whitmani. The ratio between female and male sandfly was approximately 6 males to 1 female. In N?sia Floresta, 50.7% of the collected females took their blood meal from armadillo, 12.8% from human. Among the female sand flies captured in S?o Gon?alo do Amarante, 80 of them were tested for the Leishmania KDNA infectivity where 5% of them were infected with Leishmania chagasi. Female Lutzomyia spp. showed to have an opportunistic blood meal characteristic. The behavioral parameters seem to have a higher influence in the oviposition when compared to the level of total proteins detected in the host s bloodstream. A higher Lu. longipalpis life cycle viability was observed at 28?C. The increase of temperature dropped the life cycle time, which means that the life cycle is modified by temperature range, source of blood meal and humidity. Lu longipalpis was the most specie found in the inner and peridomiciliar environment. In N?sia Floresta, armadillos were the main source of blood meal for Lutzomyia spp. At S?o Gon?alo do Amarante, humans were the main source of blood meal due to CDC nets placed inside their houses / As leishmanioses s?o doen?as end?micas em regi?es do Velho e Novo Mundo causadas por protozo?rios flagelados do g?nero Leishmania. No Novo Mundo, a distribui??o das diversas formas de leishmaniose ? quase que inteiramente intertropical. No Rio Grande do Norte, nordeste do Brasil, 85% da fauna flebotom?nica capturada no Estado, corresponde a Lutzomyia longipalpis e sua distribui??o se sobrep?e ? distribui??o da doen?a estando associada ? presen?a de abrigos de animais dom?sticos. A exposi??o de pessoas a esses ambientes aumenta a probabilidade de infec??o por diversas esp?cies de Leishmania. O estudo teve como objetivo avaliar a prefer?ncia alimentar de f?meas do g?nero Lutzomyia em condi??es laboratoriais, observar o ciclo biol?gico a diferentes temperaturas e identificar as principais fontes de repasto sangu?neo em ?reas end?micas de leishmaniose visceral na Grande Natal. Foram realizadas coletas nos munic?pios de S?o Gon?alo do Amarante e N?sia Floresta dos quais foram separados grupos de f?meas para manuten??o de col?nia em laborat?rio e para avalia??o da prefer?ncia alimentar em ambiente natural. As f?meas apresentaram um percentual de prefer?ncia alimentar e taxa de oviposi??o de 97,0% para Cavia porcellus com oviposi??o de 19 ovos/f?mea; 97,0% para Equus caballus, com 19 ovos/f?mea; 98,0% para sangue humano, com 14 ovos/f?mea; 71,3% em Didelphis albiventris, com 8,4 ovos/f?mea; 73,0% em Gallus gallus, com 14 ovos/f?mea; 86,0% em Canis familiaris, com 10,3 ovos/f?mea; 81,4% em Galea spixii, com 26 ovos/f?mea; 36,0% em Callithrix jachus, com 15 ovos/f?mea; 42,8% para Monodelphis domestica com 0,0% de oviposi??o. As f?meas n?o realizaram repasto sangu?neo em Felis catus. O ciclo de vida de flebotom?neos em laborat?rio ? de 32-40 dias, com taxa de oviposi??o de aproximadamente 21-50 ovos/f?mea. Foi observado que a 32?C o ciclo biol?gico ? de 31 dias, enquanto que a 28?C este aumenta para 50 dias e a 22?C para 79 dias. Com o aumento da temperatura para 35?C, os ovos n?o eclodiram, inviabilizando o curso do ciclo biol?gico. Foi coletado um total de 1.540 flebotom?neos, sendo 1310 machos e 230 f?meas. A esp?cie mais encontrada foi Lutzomyia longipalpis com 86,0%, Lutzomyia evandroi 10,5%, Lu. lenti com 3,2% e Lu. whitmani com 0,3%. A rela??o entre macho e f?mea foi de aproximadamente 6 machos para 1 f?mea. 50,7% das f?meas coletadas em N?sia Floresta realizaram repasto apenas em peba, 12,8% das f?meas coletadas em S?o Gon?alo do Amarante realizaram repasto sangu?neo somente em humanos. Dentre as f?meas coletadas em S?o Gon?alo do Amarante, 80 foram analisadas para a infectividade para o kDNA de Leishmania e 5% apresentaram amplifica??o para o kDNA de Leishmania. F?meas de Lutzomyia spp. apresentaram perfil alimentar oportunista. Os par?metros comportamentais parecem ter uma maior influ?ncia na oviposi??o do que os n?veis de prote?nas totais encontrados no sangue dos hospedeiros. Uma maior viabilidade do ciclo de Lu. longipalpis foi observada a temperatura de 28?C. A eleva??o da temperatura reduziu a dura??o do ciclo biol?gico, sendo este possivelmente influenciado pela temperatura, fonte de repasto e umidade relativa do ar. Lu. longipalpis foi a esp?cie mais encontrada em ambiente intra e peridomiciliar. Em N?sia Floresta, os pebas foram a principal fonte de repasto sangu?neo de f?meas Lutzomyia spp. No munic?pio de S?o Gon?alo do Amarante, os humanos foram a principal fonte de repasto em conseq??ncia das coletas terem sido realizadas no intradomic?lio

O veado-mão-curta (Mazama nana) é uma espécie de cervídeo que ocupa a região Sul do Brasil, norte da Argentina e leste do Paraguai, tendo sido severamente afetada pela redução drástica das áreas florestadas. Trata-se, também, da espécie de cervídeo neotropical menos estudada pela ciência. Frente a essa situação, o presente projeto propôs-se a entender como essa espécie se distribui em sua área de ocorrência, propôs áreas prioritárias para sua conservação e estimou a densidade de duas populações. Dada a raridade e a alta elusividade da espécie, propôs-se o uso de metodologias indiretas para se atingir o objetivo proposto. Assim, foram usadas metodologias baseadas na coleta de amostras fecais, extração do DNA e posterior análises molecular e genética. Foram coletadas amostras fecais com o auxílio de um cão farejador em unidades de conservação distribuídas ao longo do Sul do Brasil. Após a identificação da espécie por meio da amplificação de um fragmento do citocromo B e corte com enzimas de restrição (PCR/RFLP) e com os dados de localização das amostras, foram feitas modelagens de distribuição com o software Maxent. Foram escolhidas duas unidades de conservação, onde foram realizadas coletas de amostras fecais, baseadas em faixas, para possibilitar a estimativa da densidade de animais nestas populações. Estabeleceu-se a distribuição geográfica potencial de M. nana no Brasil para os Estados do Paraná, Santa Catarina, norte e centro do Rio Grande do Sul, extremo sul de São Paulo e Mato Grosso do Sul. Porção leste do Paraguai e, na Argentina para a província de Missiones. A densidade da espécie para a região norte do Parque Nacional do Iguaçu foi de 1,9 ind/km2 e para o Parque Estadual Vila Rica do Espírito Santo foi de 5,5 ind/km2. A população potencial da espécie foi de 152.991 indivíduos, sendo 15.524 indivíduos a população dentro das áreas protegidas. Sugere-se a manutenção do estado de conservação da espécie como Vulnerável, tanto na lista Brasileira como na lista Internacional de fauna ameaçada de extinção. / The Brazilian dwarf brocket (Mazama nana) is a deer species that occupies the forests of southern Brazil, north of Argentina and east of Paraguay. It has been greatly affected by the drastic reduction of forested areas. It is also the less studied neotropical deer. Considering this situation, this project aimed to shed light on the species distribution along its range, to indicate conservation priority areas and estimate the density of two populations. Given the rarity and high elusiveness of the species, it is proposed the use of indirect methods to achieve this goal. Fecal samples collection based methodologies were used, followed by DNA extraction and subsequent molecular and genetic analysis. Fecal samples were tracked and collected in protected areas spread over south Brazil, with the help of a scat detection dog. After species identification by PCR/RFLP and samples spatialization, species distribution modeling was carried out using Maxent software suit. Two protected areas were chosen for a faecal sampling based on transects, in order to estimate the population density. Potential geographical distribution of M. nana in Brazil was stablished at states of Paraná, Santa Catarina, northern and center Rio Grande do Sul, extreme South of São Paulo and Mato Grosso do Sul. Also at Eastern Paraguay and Missiones province in Argentina. Species density at the northern area of Iguaçu National Park was 1.9 ind/km2 and at the State Park of Vila Rica do Espírito Santo was 5.5 ind/km2. The species potential population was 152,991 individuals, including 15,524 individuals inside protected areas. It is suggested to maintain species conservation status as vulnerable on the Brazilian and on the International red list of threatened species.

O gênero Mazama é composto por cinco espécies no Brasil. São animais de visualização dificultada por causa de comportamentos evasivos, o que torna as capturas e os estudos comportamentais quase impossíveis. Assim, o uso de metodologias não invasivas para estudos ecológicos e genéticos destas espécies se torna necessário. A análise do DNA fecal está dentro das técnicas mais promissoras para esse fim. Este estudo objetivou genotipar amostras fecais, de uma população de veado-mateiro (Mazama americana) para a obtenção de informações genéticas e ecológicas. Para tanto, foram coletadas, com auxílio de um cão farejador, georreferenciadas e estocadas em etanol absoluto, 52 amostras fecais de cervídeos. A coleta realizou-se em um fragmento (21o20S 47o17W) de 600 ha de floresta estacional semidecidual. Dessas amostras coletadas, 31% (n=16) foram classificadas como frescas e 69% (n=36) como não frescas. O DNA foi extraído em torno de 30 dias após a coleta, usando o kit comercial QIAamp® DNA Stool Mini Kit, seguindo o protocolo do fabricante. Das 52 amostras, 45 foram identificadas por PCR/RFLP como pertencentes a M. americana e as demais apresentaram problemas de amplificação e digestão, permanecendo sem identificação. Amplificaram-se por PCR cinco locos microssatélites, e o sucesso de amplificação, visualizado em gel de agarose, variou com o tamanho dos locos e com a classe das amostras. O sucesso de amplificação foi de 65% das amostras da categoria fresca e 35% das amostras da categoria não fresca. Encontrou-se uma correlação negativa (R= -0,82) entre o tamanho dos fragmentos dos locos de microssatélites e o sucesso de amplificação. Foi possível identificar o sexo do animal em 43,7% das amostras fecais, pela amplificação do gene da amelogenina. Os locos microssatélites amplificados foram analisados em sequenciador automático. Os eletroferogramas gerados pelo seqüenciador impossibilitaram a genotipagem da maioria dos locos e amostras, tornando inviável qualquer análise genética e ecológica com confiabilidade. Fica evidente a dificuldade de se trabalhar com a metodologia do DNA fecal para a identificação individual e sexagem de amostras obtidas de Cervídeos florestais em vida livre. Algumas melhorias metodológicas (coleta de amostras fecais frescas, seleção de iniciadores para locos menores e quantificação do DNA extraído por PCR em tempo real) são sugeridas para o aumento nos índices de sucesso na genotipgem em estudos futuros. / Mazama genus is composed by five species in Brazil. All of them are difficult to observe due to their evasive behaviors, what makes the captures and behavioral studies almost impossible. Thus, the use of non invasive methodologies is necessary to study the ecology and genetics of these species. The fecal DNA analysis is one of the most promising techniques for this purpose. This study aimed to genotype a Mazama americana population faecal samples for obtaining genetics and ecological information. For this, 52 deer faecal samples were collected in a 600ha seasonal semideciduos forest fragment (21o20S 47o17W), with the help of a detection dog, stored in ethanol and georeferenced. Of these samples 31% (n=16) was classified as fresh and 69% (n=36) as not fresh. About thirty days after the collection the DNA was extracted using the QIAamp® DNA Stool Mini Kit following the manufacturers instructions. From the 52 samples collected and extracted, 45 were identified by PCR/RFLP as M. americana and the others showed amplification and digestion problems, remaining without identification. Five microsatellite loci were amplified by PCR and the amplification success, visualized in agarose gel, varied with the loco size and age class. The amplifications success occurred in 65% of the fresh samples and in 35% of the non-fresh samples and a negative correlation (R= -0.82) was found between amplification success and loci sizes. It was possible to identify the animal sex in 43% of the samples by the amelogenin gene. The microsatellite loci amplifications were analyzed in an automatic sequencer. The majority of the samples and loci were impossible to genotype because of the quality of the elestroferograms, what made impossible any reliable genetic and ecological analysis. It is evident the difficulty to work with the faecal DNA methodology using field collected forests deer samples for individual and sexual identifications. Some methodological improvements (collect fresh samples, select primers for shorter loci and quantify the extracted DNA by real time PCR) are suggested to increase the genotyping success indexes in future studies

Invasive species are generally problematic where they occur, especially in terms of ecology, economy and disease. Members of the genus Rattus Fischer, 1803 particularly, are known as one of the most destructive invasive species to date since they cause widespread damage on terrestrial and island ecosystems. Two Rattus species have historically been reported as invasive species in South Africa, Rattus rattus Linnaeus, 1758, which has a widespread distribution throughout the country and Rattus norvegicus Berkenhout, 1769 which is primarily distributed along the coast of South Africa. A third species, Rattus tanezumi Temminck, 1844 (which forms part of the R. rattus species complex), a south-east Asian endemic, was first reported in 2005 to also occur in South Africa (and Africa). As this species is morphologically similar to R. rattus, its identification is reliant on molecular typing approaches. In the current study, molecular, morphological and disease aspects of South African Rattus were assessed. The nature and extent of variation between the three species was investigated using cytochrome b sequences and extensive mitochondrial d-loop database for comparative purposes. D-loop data identified one, four and two haplotypes for R. tanezumi, R. rattus and R. norvegicus, respectively whereas cytochrome b data identified additional haplotypes for R. rattus and R. tanezumi. Pairwise sequence divergence was highest between R. norvegicus and R. tanezumi (12.5% for D-loop and 12.0% for cyt b). Rattus norvegicus was recovered in the central parts of South Africa for the first time and occurred sympatrically with R. tanezumi at one locality, whereas Rattus rattus and R. tanezumi occurred sympatrically at three localities. The external and qualitative cranial morphology of all three species was compared in an attempt to find differences that could be used to morphologically differentiate between these Rattus species. Whereas R. norvegicus can easily be distinguished from R. rattus and R. tanezumi, there are no discernible morphological differences to distinguish R. rattus and R. tanezumi. A taxonomic synthesis and an identification key of the three species of Rattus based on qualitative morphology, molecular and cytogenetic data using genetically-identified individuals is provided. Members of South African Rattus were also found to be carriers of the bacteria Bartonella Strong et al., 1915 and Helicobacter Goodwin et al., 1989 emend. Vandamme et al., 1991. Bartonella elizabethae (Daly et al., 1993) Brenner et al., 1993, occurring in Rattus around the world was for the first time recovered from South African Rattus. This bacterium has been associated with infective endocarditis in humans and may pose a threat to immuno-compromised individuals in rural South African communities where Rattus occurs commensally. Two Helicobacter species, H. rodentium Shen et al., 1997 and H. muridarum Lee et al., 1992, were identified neither of which have known zoonotic potential. Apart from contributing to general small mammal studies in Africa, the present study may have implications in epidemiological, agricultural, biological conservation, and invasion biology research associated with problem rodents in the southern African subregion and beyond. / Dissertation (MSc)--University of Pretoria, 2010. / Zoology and Entomology / unrestricted

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Summary: The thesis comprises from the introduction and five main parts: three of them are published papers, the rest two are manuscripts prepared for submitting to the scientific journals. The first two are published phylogenetic studies of the cichlasomatine cichlids based on (1) molecular characters, and (2) both morphological and molecular data with the description of a new genus Andinoacara. The third (3) is the already published description of the new species Andinoacara stalsbergi from Peru combining both morphological and phylogenetic approaches and including the detailed phylogeny of the genus Andinoacara. The next unpublished manuscript (4) is the more detailed comprehensive phylogeography of the two non-relative genera (including Andinoacaras) of the trans-Andean cichlids. Including all valid species from the majority of their distribution areas it was reconstructed the ancestral area of both genera in the Choco region, Colombia, and revealed the directions of their distribution spreading. The last (5) unpublished manuscript is the phylogeographical study of the cichlid genus Serranochromis from the headwaters of the totally unknown Central Angola. It showed several evidences of the faunal exchange among the adjacent river systems. Lastly, the thesis is supplemented by several appendices...