Orientador: Maria de Lourdes Ribeiro de Souza da Cunha / Banca: João César Lyra / Banca: Cilmery Suemi Kurokawa / Resumo: As infecções relacionadas a cateteres constituem uma das principais causas de bacteremias em UTIs neonatais. O objetivo do presente estudo foi analisar por meio de técnicas de tipagem molecular a similaridade dos microrganismos isolados de cateteres e hemoculturas para o diagnóstico de infecção da corrente sanguínea relacionada com cateteres em recém-nascidos. Foram avaliadas 124 pontas de cateteres e 155 hemoculturas concomitantes de 107 recém-nascidos da Unidade Neonatal. Foram utilizados para cultura de cateter o método semiquantitativo e qualitativo ou método semiquantitativo e quantitativo, e as hemoculturas cultivadas pelo sistema automatizado Bactec. Para a análise fenotípica da similaridade dos isolados de pontas de cateteres e hemoculturas foi utilizado o teste de sensibilidade às drogas antimicrobianas pela técnica da difusão da droga em ágar. Para análise genotípica do perfil de similaridade dos isolados de cateter e hemocultura concomitantes e para o delineamento do perfil clonal das amostras de S. epidermidis isoladas de hemoculturas foram utilizados as técnicas de RAPD-PCR (Random Amplified Polymorphic DNA based PCR) e REP-PCR (Repetitive Extragenic Palindromic Sequence based PCR). Dos 107 recém-nascidos estudados, 45 apresentaram o mesmo microrganismo na ponta de cateter e na hemocultura concomitantemente, desse total 86.7% apresentaram colonização por Staphylococcus coagulase-negativa, 4.4% por Staphylococcus aureus, 4.4% por Candida parapsilosis, 2.2% por Enterococcus faecalis e 2.2% por Pseudomonas aeruginosa. A determinação da similaridade dos isolados revelou que dos 45 recém-nascidos, 46.7% apresentaram infecções da corrente sanguínea relacionadas a cateter pelo método de disco difusão em ágar, 68.9% apresentavam infecções da corrente sanguínea relacionadas a cateter com a utilização da técnica de RAPD-PCR com os primers do grupo... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Catheter-related infections constitute one of the main causes of bacteremia in neonatal ICUs. The aim of the present study was to analyze, by means of molecular typing techniques, the similarity between microorganisms isolated from catheters and blood cultures for the diagnosis of catheter-related bloodstream infection in newborns. The evaluation included 124 catheter tips and 155 concomitant blood cultures from 107 newborns in a Neonatal Unit. For the catheter culture, the semiquantitative and qualitative method or the semiquantitative and quantitative method was used, as well as blood cultures kept by the automated system Bactec. For the phenotypic analysis of similarity between isolates from catheter tips and blood cultures, the test of sensitivity to antimicrobial drugs using the technique of drug diffusion in agar was adopted. For the genotypic analyses of similarity profiles between isolates from catheter and concomitant blood culture and for the clonal profile design of S. epidermidis samples isolated from blood cultures, the techniques RAPD-PCR (Random Amplified Polymorphic DNA-based PCR) and REP-PCR (Repetitive Extragenic Palindromic Sequence-based PCR) were employed. Of the 107 studied newborns, 45 had the same microorganism in the catheter tip and in the blood culture concomitantly; of this total, 86.7% were colonized with coagulase-negative Staphylococcus, 4.4% with Staphylococcus aureus, 4.4% with Candida parapsilosis, 2.2% with Enterococcus faecalis, and 2.2% with Pseudomonas aeruginosa. The assessment of similarity between isolates indicated that, of the 45 newborns, 46.7% had catheter-related bloodstream infections according to the agar disk diffusion method, and 68.9% had catheter-related bloodstream infections according to RAPD-PCR using group-1 primers (RAPD1 for Staphylococcus spp., RAPD 7 for Enterococcus faecalis, ERIC 1 for Pseudomonas aeruginosa, and OPR13... (Complete abstract click electronic acccess below) / Mestre

Orientador: Yara Marcondes Machado Castiglia / Banca: Simone Maria D'Angelo Vanni / Banca: Marco Aurélio Marangoni / Resumo: Este estudo investigou a influência do inibidor não-seletivo da ciclooxigenase, cetoprofeno (ceto) intravenoso, em alterações histológicas e dos níveis das citocinas renais - fator α de necrose tumoral (TNF-α) e interleucina 1 (IL-1) - após hemorragia de 30% da volemia (10%, três vezes, em intervalos de 10 min) em ratos. Sob anestesia com sevoflurano (sevo), os grupos sevo e sevo+ceto (10 ratos cada) foram preparados cirurgicamente para leitura de pressão arterial média (PAM) e administração de solução de Ringer (5 mL.kg-1.h) e de cetoprofeno (1,5 mg.kg-1), no início da anestesia, no grupo sevo+ceto. Mediu-se temperatura retal continuamente. Os valores de temperatura e PAM foram observados antes da primeira hemorragia (T1), após a terceira hemorragia (T2) e 30 min após T2 (T3). Realizada nefrectomia bilateral nos dois grupos para análise histológica e imuno-histoquímica. Nos dois grupos, temperatura e PAM diminuíram com relação aos valores normais do rato. Hipotermia foi mais acentuada no grupo sevo (p=0,0002). Necrose tubular foi mais frequente no grupo sevo (p=0,02). As citocinas estiveram igualmente presentes nos rins dos dois grupos. Cetoprofeno foi mais protetor no rim de rato durante anestesia com sevoflurano e hipovolemia, porém parece que TNF-α e IL-1 não estão envolvidas nessa proteção / Abstract: This study investigated the influence of intravenous nonselective cyclooxygenase inhibitor, ketoprofen (keto), on kidney histological changes and kidney cytokines, tumor necrosis factor-α (TNF-α) and interleukin-1 (IL-1), levels after hemorrhage of 30% of volemia (three times 10%, intervals of 10 min) in rats. Under sevoflurane (sevo) anesthesia, sevo and sevo+keto groups (10 rats each) were instrumented for Ringer solution (5mL.kg-1.h-1) administration and mean arterial pressure (MAP) evaluation, plus keto (1.5mg.kg-1) administration in sevo+keto group in the beginning of anesthesia. Rectal temperature was continuously measured. The baseline data of temperature and MAP were collected at the first hemorrhage (T1), the third hemorrhage (T2) and 30min after T2 (T3). Bilateral nephrectomy was achieved for histology and immunohistochemistry. In both groups, temperature and MAP diminished from normal values of these animals. Hypothermia was greater in sevo group (p=0.0002). Tubular necrosis was more frequent in sevo group (p=0.02). The studied cytokines were equally present in the kidneys of both groups. Ketoprofen was more protective to the rat kidney in condition of anesthesia with sevoflurane and hypovolemia, but it seems that TNF-α and IL-1 were not involved in that protection / Mestre

Orientador: Silvio Luis de Oliveira / Banca: José Maurício Sforcin / Banca: Orlando Garcia Ribeiro Filho / Resumo: Leucotrienos são mediadores clássicos da resposta inflamatória, descritos como agentes quimiotáticos e reguladores da atividade microbicida de células do sistema imune inato, tendo papel protetor contra diferentes agentes infecciosos. Neste estudo, nós investigamos o envolvimento de leucotrienos no curso da paracoccidioidomicose murina a partir dos seguintes parâmetros imunológicos: influxo celular, atividade da mieloperoxidase, produção de NO, produção de citocinas e recuperação fúngica em pulmões de camundongos selecionados de acordo com a intensidade da sua resposta inflamatória aguda máxima (AIRmax) e mínima (AIRmin). Observamos que a infecção por P. brasiliensis induz considerável produção de citocinas IL-6, IL-10, IFN- e TNF-, promove o recrutamento celular e produção de NO nos pulmões em diferentes períodos de estudo. Nos animais tratados com um inibidor as síntese de leucotrienos (MK886) observamos uma menor produção das citocinas IFN-, IL-6 e TNF- concomitante com a queda do influxo de neutrófilos, e também diminuição na produção de NO, esses resultados podem explicar uma maior carga fungica nos pulmões de animais que tiveram a síntese de leucotrienos inibida, sugerindo aos leucotrienos um possível papel protetor na paracoccidioidomicose experimental. Animais da linhagem AIRmax apresentaram menor carga fungica quando comparado com animais AIRmin, este resultado pode ser relacionado ao fenótipo da AIR quanto à migração de neutrófilos, além de uma menor produção de NO e citocinas pró-inflamatórias, conferindo aos camundongos com background AIRmax maior resistência a infecção por P.brasiliensis. / Abstract: Leukotrienes are classic inflammatory response mediators considered chemotactic agents and microbicide activity regulators in cells of the innate immune system, playing a protective role against different infectious agents. In this study, we investigated the involvement of leukotrienes in the course of murine paracoccidioidomycosis based on the following immunologic parameters: cell influx, mieloperoxydase activity, NO production, cytokine production, and fungal recovery in lungs of mice selected according to the intensity of their low (AIRmin) and high (AIRmax) acute inflammatory response. Infection by P. brasiliensis induced considerable production of the cytokines IL-6, IL-10, IFN-, and TNF-, and led to cell recruitment, as well as NO production, in lungs at different study periods. In animals treated with MK886, a leukotriene biosynthesis inhibitor, IFN-, IL-6 and TNF- production was lower, while neutrophil influx and NO production decreased. These results may explain the higher fungal load in lungs of animals in which leukotriene synthesis was inhibited, suggesting that leukotrienes have a possible protective role in experimental paracoccidioidomycosis. AIRmax animals had lower fungal load relative to AIRmin ones, which can be related to the AIR phenotype regarding neutrophil migration, besides lower production of NO and pro-inflammatory cytokines; thus, mice presenting AIRmax background are more resistant to infection by P.brasiliensis. / Mestre

Orientador: Regina Maria Barretto Cicarelli / Banca: Dulce Helena Siqueira Silva / Banca: Sergio de Albuquerque / Resumo: A tripanosomíase americana ou doença de Chagas é uma doença parasitária causada pelo protozoário Trypanosoma cruzi. Atualmente a doença é considerada negligenciada devido à falta de investimentos para obtenção de fármacos capazes de tratar e curar a doença com menos efeitos colaterais do que o benzonidazol, utilizado até o momento. Desta forma, a busca por novos agentes terapêuticos contra a doença de Chagas é uma estratégia importante para eliminar ou, pelo menos, diminuir a incidência desta doença debilitante e que afeta aproximadamente 10 milhões de pessoas na América Latina. Neste trabalho foi avaliada a atividade tripanocida do ácido gálico e seus ésteres semi-sintéticos contra formas epimastigotas de Trypanosoma cruzi, assim como a citotoxicidade sobre células de mamíferos (HepG2). Informações adicionais foram obtidas sobre o perfil de produção de citocinas por macrófagos murinos não infectados e tratados com os galatos; também realizou-se o estudo do efeito apoptótico destas substâncias em formas epimastigotas de T. cruzi. Os resultados obtidos foram bastante interessantes e animadores, uma vez que, alguns ésteres de ácido gálico apresentaram atividade tripanocida maior do que aquela observada com benzonidazol e baixa citotoxicidade em células de mamíferos. Além disso, a avaliação do perfil de produção de citocinas, induzido pelas substâncias mostrou resposta favorável à resistência do hospedeiro contra a doença de Chagas. Nos experimentos realizados para avaliar a atividade apoptótica das substâncias em T. cruzi, aquelas que tiveram maior atividade tripanocida apresentaram baixa taxa de apoptose, o que sugere um mecanismo de ação mais relacionado com a característica surfactante destas substâncias; por outro lado, as que apresentaram menor atividade tripanocida, e provocaram apoptose, podem estar atuando como inibidoras da biossíntese de ergosterol / Abstract: The American trypanosomiasis or Chagas disease is a parasitic disease caused by Trypanosoma cruzi protozoan. Currently, it is a neglected disease due to the lack of investments in order to obtain drugs able to treat and cure the disease with fewer side effects than benzonidazole, used until now. Thus, the search for new therapeutic agents against Chagas disease is an important strategy to eliminate or at least reduce the incidence of this debilitating disease that affects approximately 10 million people in Latin America. In this study were evaluated the trypanocidal activity of gallic acid and its semi synthetic esters against epimastigotes forms of Trypanosoma cruzi, as well as, the citotoxicity on mammalian cells (HepG2). Additional information was obtained about the profile of cytokine production by murine macrophages uninfected treated with gallates; also it was studied the apoptotic effect of these substances in epimastigotes forms of T. cruzi. The results obtained were very interesting and encouraging since some esters of gallic acid showed trypanocidal activity greater than that observed with benzonidazole and low citotoxicity in mammalian cells. Moreover, the evaluation of the profile of cytokine production induced by the substances showed a favorable response to the host resistance against Chagas disease. In the experiments performed to evaluate apoptosis activity of the substances in T. cruzi, those who had greater trypanocidal activity, presented a low apoptosis rate, which suggests a mechanism of action based on the surfactant feature of these substances; by the other hand, the substances that showed low trypanocidal activity and caused apoptosis, can act as inhibitors of the ergosterol biosynthesis / Mestre

Orientador: Silvio Luis de Oliveira / Banca: Maria Terezinha Serrão Peraçoli / Banca: Eduardo Bagagli / Banca: Luis Florêncio Franco Margatho / Banca: Carlos Alberto Sorgi / Resumo: A Paracoccidioidomicose é uma micose sistêmica humana causada por um fungo imperfeito e dimórfico denominado Paracoccidioides brasilienis (P.brasiliensis), sendo os conídeos sua forma infectante. Camundongos geneticamente selecionados para Resposta Inflamatória Aguda Máxima (AIRmax) e Mínima (AIRmin), foram usados como modelo experimental da paracoccidioidomicose. Os animais foram inoculados pela via intraperitoneal com P. brasiliensis (cepa 18) e sacrificados após 6, 12 e 24 horas e 3, 7 e 14 dias de infecção. Nestes períodos foram removidos fragmentos de baço, fígado e pulmão para avaliação do grau de infecção de células fúngicas nestes órgãos, avaliação da atividade macrofágica por macrófagos peritoneais e esplênicos pela determinação das concentrações de óxido nítrico e produção de citocinas pró e anti-inflamatórias de sobrenadantes de homogenatos de pulmão e baço. No presente trabalho observamos que as linhagens AIRmax apresentaram maior contenção do processo infeccioso que as linhagens AIRmin nos compartimentos analisados. Quanto a produção de NO observamos que animais AIRmax produziram mais deste metabólito em períodos tardios, o que pode ter ajudado esta linhagem na maior contenção do processo infeccioso nos órgãos analisados. Quanto a produção de citocinas observamos que a produção de INF- , TNF- , IL-1, IL- 6, IL-8, IL-12, estão aumentadas nas linhagens AIRmax na maioria dos órgãos e períodos analisados, contribuindo para a maior resistência destas linhagens frente à infecção pelo fungo em relação aos AIRmin, com exceção da IL-4 e IL-10 que apresentaram sua produção diminuída na linhagem AIRmax e aumentada na linhagem AIRmin reproduzindo seu efeito biológico supressor. Frente aos resultados observamos que a linhagem AIRmax apresentou maior contenção do processo infeccioso, com importante envolvimento... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Paracoccidioidomycosis is a systemic human mycosis caused by Paracoccidioides brasiliensis (P. brasiliensis), an imperfect dimorphic fungus whose conidia are its infectant form.Mice genetically selected for Maximum (AIRmax) and Minimum (AIRmin) Acute Inflammatory Response were used as an experimental paracoccidioidomycosis model. The animals were intraperitoneally inoculated with P. brasiliensis (strain 18) and sacrificed after 6, 12 and 24 hours and after 3, 7 and 14 days of infection. In these periods, fragments from their spleen, liver and lung were removed for evaluation of the level of infection by fungal cells in those organs, evaluation of macrophagic activity by peritoneal and splenic macrophages through the determination of the concentrations of nitric oxide (NO) and production of pro- and anti-inflammatory cytokines of lung and spleen homogenate supernatants. In the present study, it was observed that the AIRmax lineages presented greater control of the infectious process than did the AIRmin lineages in the analyzed compartments. As regards NO production, it was found that AIRmax animals produced more of such metabolite in late periods, which may have helped that lineage with the greater control of the infectious process in the analyzed organs. Concerning cytokine production, it was observed that the production of INF- , TNF- , IL-1, IL-6, IL-8 and IL-12 were increased for the AIRmax lineages in most analyzed organs and periods, thus contributing to the greater resistance exhibited by such lineages against infection with the fungus in relation to AIRmin, except for IL-4 and IL-10, which showed decreased production for the AIRmax lineage, reproducing its suppressive biological effect. From these results, it was observed that the AIRmax lineage showed greater control over the infectious process with an important involvement of the analyzed cytokines. These findings... (Complet abstract click electronic access below) / Doutor

Resumo: Yersinia enterocolitica é um enteropatógeno que pode levar ao desenvolvimento de artrite reativa. Um dos mecanismos imunomoduladores usados pelos patógenos artritogênicos é a ativação policlonal de linfócitos. O objetivo deste estudo foi verificar se ocorre ativação policlonal de linfócitos B e comparar o padrão isotípico de imunoglobulinas produzidas durante a infecção com Y. enterocolitica O:8 em linhagens de camundongos suscetíveis (BALB/c) e resistentes (C57BL/6), bem como analisar o padrão de secreção de citocinas pró-inflamatórias e regulatórias pelas populações de células T CD4+ e CD8+. / Abstract: Yersinia enterocolitica is an enteropathogen that can lead to the development of reactive arthritis. One of the immunomodulating mechanisms used by arthritogenic pathogens is the polyclonal activation of lymphocytes. The objective of this study was to verify if the polyclonal activation of B-lymphocytes occur and to compare the different immunoglobulin (Ig) isotypes produced during the infection with Y. enterocolitica O:8 in susceptible (BALB/c) and resistant (C57BL/6) mice strains. We also analyzed the production of pro-inflammatory and regulatory cytokines in T CD4+ and T CD8+ lymphocytes populations. / Orientador: Beatriz Maria Machado de Medeiros / Coorientador: Iracilda Zeppone Carlos / Banca: Maria Regina D'Império Lima / Banca: Phileno Pinge / Banca: Ângela Maria Victoriano de Campos Soares / Banca: Deise Pasetto Falcão / Doutor

Orientador: Nereu Carlos Prestes / Banca: Maria Denise Lopes / Banca: João Carlos Pinheiro Ferreira / Banca: Márcia Guimarães da Silva / Banca: Daniel Bartole de Sousa / Resumo: Tendo em vista, a incidência de problemas fetais observados no momento do parto de animais produzidos in vitro (PIV) e a escassez de literatura nesta área, o presente estudo teve por objetivo determinar os níveis de fator de necrose tumoral-alfa (TNF-), interferon-gama (IFN-), interleucina-6 (IL-6) e IL-8 no fluido amniótico de bezerros oriundos de PIV comparando com aqueles obtidos pela transferência de embrião convencional e inseminação artificial no momento do parto, na tentativa de auxiliar na resolução de problemas ainda pouco conhecidos que são observados a campo durante emprego comercial da PIV. Foram utilizados sessenta animais divididos em grupo 01: vinte vacas gestando bezerros da raça Nelore PO de inovulações de embriões oriundos de doadoras superovuladas pelo método convencional (TE); grupo 02: vinte vacas gestando bezerros Nelore PO de inovulações de embriões oriundos de PIV; grupo 03: vinte vacas Nelore PO gestando bezerros oriundos de inseminação artificial (IA) - controle. Todos os partos dos animais do experimento foram observados. Durante a fase de expulsão e após a ruptura do alantocórion, foi realizada a punção do âmnion para a colheita de 15mL de líquido amniótico utilizando-se agulhas e seringas descartáveis compatíveis. O material foi depositado em tubo plástico e congelado em freezer para posterior análise laboratorial. O acompanhamento do padrão de desenvolvimento dos bezerros no periparto foi realizado. Após a descongelação das amostras foi realizado ensaio imunoenzimático (ELISA) para a dosagem de TNF-, com emprego do Kit comercial: ESS0011 - Bovine TNF Alpha, para IFN- foi Kit comercial: ESS0026 - Bovine IFN-, para IL-6 foi Kit comercial: ESS0029 - Bovine IL-6 da Pierce Biotechnology e para IL-8 Kit... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: In view, the incidence of fetal problems seen at the time of birth of animals in vitro production and the be short of the literature in this area, this study aimed to determine the levels of tumor necrosis factor (TNF-), interferon-gamma (IFN-), interleukin-6 (IL-6) and IL-8 in amniotic fluid of calves from in vitro production (IVP) compared with those obtained by conventional embryo transfer and artificial insemination at the delivery, in an attempt to assist in solving problems that are still little known observed in simulations and the experimental field of commercial employment during IVP. Sixty animals used were divided into groups: 1 - Twenty Nelore cross-breed cows pregnant with Nelore calves of embryos transfer conventional method (ET); 2 - Twenty Nelore cross-breed cows pregnant with Nelore calves obtained by in vitro production after follicular aspiration; 3 - Twenty pregnant Nelore cows bearing calves obtained by artificial insemination (AI). All births of the animals of the experiment were observed. During the expulsion phase the amnion was punctured and 15mL of fluid were collected using a needle and syringes compatible. The material was deposited on plastic tube and frozen in freezer for later analysis. Monitoring the pattern of development of the calves in peripartum was performed. The cytokines levels were measured by immunoenzymatic assay (ELISA). The commercial kit used was: ESS0011 - Bovine TNF Alpha, ESS0026 - Bovine IFN- gamma, ESS0029 - Bovine IL-6 Pierce Biotechnology and comercial Kit: D8000C - Human IL-8 of the R & D Systems. The protocol was performed according to the manufacturer's recommendations. The densities were evaluated in automatic optical reader ELISA. The well plates were read at 450nm. The Kruskal-Wallis Test was used for statistical analysis... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Valéria Marçal Felix de Lima / Banca: Hélio José Montassier / Banca: Hiro Goto / Resumo: O objetivo do estudo foi avaliar o papel imunomodulatório das citocinas TGF-ß1, IL-10 e INF-g nos extratos de baço e de fígado e no sobrenadante de cultura de células brancas esplênicas, em cães machos assintomáticos e sintomáticos, naturalmente infectados por Leishmania (Leishmania) chagasi. Trinta cães oriundos da cidade de Araçatuba, SP, área endêmica para leishmaniose visceral, selecionados por reação sorológica ELISA positiva para Leishmania sp. foram divididos em dois grupos: cães sem sintomas (n=15) que constituíram o grupo assintomático, e os cães com pelo menos três dos sinais clínicos característicos (febre, dermatites, linfoadenopatias, onicogrifose, perda de peso, caquexia, problemas de locomoção, conjuntivite, epistaxe, hepato-esplenomegalia, edema, apatia), que constituíram o grupo sintomático (n=15). Após a eutanásia, fragmentos de baço e de fígado foram coletados para quantificação de TGF-ß1, IL-10 e INF-g ex vivo. O TGF-ß1 ativo naturalmente produzido in vitro também foi avaliado no sobrenadante de cultura de células esplênicas. O extrato de baço e de fígado do grupo de cães assintomáticos apresentou níveis médios maiores de TGF-ß1, quando comparado ao grupo de cães sintomáticos. A citocina IL-10 foi detectada em altas concentrações no extrato de baço e, principalmente, de fígado dos dois grupos de cães avaliados. O INF-g foi encontrado no extrato de baço, do grupo de cães assintomáticos, e de fígado, do grupo de cães sintomáticos. Embora a citocina INF-g tenha sido detectada na infecção canina, os níveis médios de TGF-ß1 e IL-10 no extrato de baço e de fígado foram mais elevados, sugerindo que tanto em cães assintomáticos quanto em sintomáticos a resposta imune predominante foi do tipo Ta2. / Abstract: The aims of this study were to evaluate the immunomodulatory role of TGF-ß1, IL-10, & INF-g in spleen and liver extracts and supernatant cultures of white spleen cells from male symptomatic and asymptomatic dogs, naturally infected by Leishmania (Leishmania) chagasi. Thirty dogs from Araçatuba, SP, an endemic leishmaniasis area, were selected by positive ELISA serological reaction for Leishmania sp. and divided into two groups: asymptomatic (n=15), and symptomatic (n=15) consisting of animals with at least three characteristic signs (fever, dermatitis, lymphoadenopathy, onychogryphosis, weight loss, cachexia, locomotion problems, conjunctivitis, epistaxis, hepatosplenomegaly, edema, and apathy). After euthanasia, spleen and liver fragments were collected for ex vivo quantification of TGF-ß1, IL-10, and INF-g. Naturally active in vitro produced TGF-ß1 was also evaluated in spleen cell culture supernatant. Spleen and liver extract of asymptomatic dogs had higher mean TGF-ß1 levels than symptomatic dogs. High concentrations of IL-10 were found in spleen, and mainly in liver extract of both groups. Higher INF-g concentrations were found in spleen extracts of asymptomatic dogs, and in liver extracts of symptomatic dogs. Although INF-g is being produced in canine infection, mean levels of TGF-ß1 and IL-10 from spleen and liver extracts were much higher, suggesting that immune response in both asymptomatic and symptomatic dogs was predominantly type Th2. / Mestre

Resumo: Evidências sugerem existir correlação positiva entre diabetes mellitus e destruição periodontal. Com intuito de estudar a influência do Diabetes Mellitus sobre a evolução da doença periodontal induzida, o presente estudo apresenta como objetivos, avaliar alterações metabólicas como, peso corporal, níveis séricos de cálcio, fósforo e fosfatase alcalina, alterações macroscópicas e óssea, e a expressão tecidual de mieloperoxidase e das citocinas IL-1β, IL-6, TNF-α, IFN-γ. Foram utilizados ratos machos Wistar divididos em 4 grupos de 24 ratos, sendo: Grupo I controle; Grupo II diabético; Grupo III controle com doença periodontal induzida e Grupo IV diabético com doença periodontal induzida. Após dois dias da confirmação do estado diabético induzido por estreptozotocina, foi realizada a colocação da ligadura. Oito animais de cada grupo foram sacrificados nos períodos experimentais de 3, 7, 15 e 30 dias após colocação da ligadura. Foi utilizado testes bioquímicos para avaliação das enzimas séricas, lupa esteroscópica para análise macroscópica, programa analisador de imagens digital para mensuração da perda óssea, leito de ELISA para determinar a concentração de MPO e Real-time PCR para expressão das citocinas. Os resultados demonstraram que o estado diabético perdurou até o final do experimento nos grupos II e IV, com níveis glicêmicos elevados. Dentre os marcadores bioquímicos, somente a ALP apresentou-se estatisticamente maior nos grupos diabéticos (II e IV). Macroscopicamente, houve diferença somente entre os grupos com e sem doença periodontal, independente da presença do diabetes, com maior alteração tecidual, caracterizada por migração apical da gengiva marginal, perda de contorno marginal e de tecido interdental, nos períodos tardios de periodontite (15 e 30 dias). / Abstract: Evidences suggest the existence of a positive correlation between diabetes mellitus and periodontal collapse. In order to evaluate the influence of Diabetes Mellitus on the progression of periodontal disease induced in rats, the objective of the present study was to verify glycemic, calcium, phosphorus and alkaline phosphatase serum levels, to evaluate tissue and alveolar bone loss, myeloperoxidase (MPO) gingival levels, as IL-1β, IL-6, TNF-α, IFN-γ tissue expression. Wistar male rats were used in this study. They were divided into 4 groups of 24 rats each, as follows: Group I - control; Group II - diabetic; Group III - control with periodontal disease induced; and Group IV - diabetic with periodontal disease induced. After streptozotocin diabetic state was confirmed, a ligature was placed on the mandibular first molar teeth of Groups III and IV rats. Eight animals of each group were killed at the experimental periods of 3, 7, 15 and 30 days after the ligature placement. Was used biochemical tests for evaluation of serum enzymes, magnifying glass to macroscopic analysis, digital image analyzer program for measurement of bone loss, ELISA to determine the concentration of MPO and Real-time PCR for expression of cytokines. Results demonstrated that the diabetic state lasted up to the end of the experiment at groups II and IV. Significant increases in serum alkaline phosphatase were observed at diabetic groups (II and IV). Macroscopically, in the groups where periodontal disease was induced, it was possible to observe more tissue alterations and it was higher in the 30-day experimental period. The MPO levels were significantly higher in induced periodontitis groups (III and IV) (p<0.05). The Group IV showed higher bone loss significantly when compared to the other groups (p < 0.05). The cytokines IL-6 and IFN-γ were elevated in groups III and IV at 30 ° day. The cytokine IL-1β was reduced at group II. / Orientador: Denise Madalena Palomari Spolidorio / Coorientador: Carlos Rossa Junior / Banca: Marinella Holzhausen / Banca: Solange Alonso Vergani / Banca: Joni Augusto Cirelli / Banca: Benedicto Egbert Corrêa de Toledo / Doutor

Orientador: Juliana Regina Peiró / Banca: Valéria Marçal Felix de Lima / Banca: Carlos Augusto Araújo Valadão / Resumo: A endotoxemia é um importante distúrbio sistêmico que se origina da resposta do hospedeiro a um componente das bactérias Gram-negativas, o lipopolissacarídeo (LPS) ou endotoxina, que é liberado após bacteriólise ou rápida multiplicação. A ativação do sistema imune inato pelo LPS é um fator chave para o disparo da resposta inflamatória pelo hospedeiro e que acarreta a produção de mediadores inflamatórios, responsáveis pelos eventos patológicos da endotoxemia. A interação dos receptores Toll-like (TLRs) com antígenos específicos deflagram a resposta inflamatória, sendo que o receptor Toll-like-4 (TLR-4) é ativado pela ação das endotoxinas, enquanto o receptor Toll-like-2 (TLR-2) interage com uma variedade de componentes microbianos. Uma exposição prévia a baixas concentrações de LPS pode tornar os cavalos "tolerantes" a um desafio letal subsequente, acarretando uma diminuição na produção de citocinas inflamatórias por um período transitório. Pouco se sabe a respeito do mecanismo celular deste fenômeno em equinos, supondo-se o envolvimento dos receptores Toll-like semelhante ao encontrado em outras espécies. Com este estudo investigaram-se os mecanismos celulares da tolerância à endotoxina em um modelo ex vivo com sangue total. Foi demonstrado redução na síntese de citocinas pró-inflamatórias (TNF-α, IL-1 e IL-6), aumento da expressão gênica da citocina anti-inflamatória IL-10, e ausência de expressão do TGF-β, após o desafio secundário com LPS. A maior expressão dos receptores TLR-2 e -4 após o segundo estímulo de LPS demonstrou que a tolerância à endotoxina não acarreta diminuição da expressão de ambos os receptores em equinos. / Abstract: Endotoxemia is an important systemic disease originated from host response to a component of Gram-negative bacteria, lipopolysaccharide (LPS) or endotoxin, which is released after bacteria death or quick replication. The innate immune recognition of LPS has a key role triggering host inflammatory answer and is due to inflammatory mediator's synthesis, which are responsible for pathologic events of endotoxemia. Signs initiated by interaction of Toll-like receptors (TLRs) with specific products induce the inflammatory response. Toll-like receptor-4 (TLR- 4) is activated by endotoxin action while Toll-like receptor-2 (TLR-2) interacts with a range of microbial compounds. Some studies demonstrate that both can act like LPS receptors, although by independent pathways. It was demonstrated that a previous exposition to low concentrations of LPS can render horses "tolerant" to a lethal subsequent challenge with endotoxin, leading to a diminished release of inflammatory cytokines during a transient period. However, little is known about the cellular mechanisms involved in this phenomenon in horses, suspecting that there is involvement of cell surface receptors, similarly to other species. This study investigated cellular mechanisms of endotoxin tolerance in a whole blood ex vivo model, demonstrating a reduction on pro-inflammatory cytokines synthesis (TNF- α, IL-1 and IL-6), increased gene expression of anti-inflammatory cytokine IL-10 and no alteration in TGF-β expression, after a secondary stimulus with LPS. The Toll-like receptors-2 and -4 increased expression after a second stimulus with LPS showed that endotoxin tolerance does not lead to a decreased expression of both receptors in horses. / Mestre