Thesis (Ph. D.)--Medical College of Ohio, 2004. / "In partial fulfillment of the requirements for the degree of Doctor of Philosophy in Medical Sciences." Major advisor: Manohar Ratnam. Includes abstract. Document formatted into pages: iii, 293 p. Title from title page of PDF document. Includes bibliographical references (p. 175-281).

Glicocorticoides e outras drogas imunossupressoras são comumente utilizados para o tratamento de condições inflamatórias, como as Doenças Inflamatórias Intestinais (DIIs). Apesar dos avanços na terapia medicamentosa, a remissão da doença ainda é difícil de ser mantida. Devido às suas propriedades imunomodulatórias, as Células-Tronco Mesenquimais (MSCs – Mesenchymal Stem Cells) têm emergido como reguladoras da resposta imune, e sua viabilidade e propriedades migratórias são essenciais para o sucesso da terapia celular. Entretanto, pouco se conhece sobre os efeitos das drogas convencionalmente utilizadas no tratamento das DIIs no comportamento das MSCs. Portanto, o objetivo deste estudo foi avaliar a viabilidade, a morfometria nuclear, a polaridade celular, a distribuição da actina-F e da FAK (Focal Adhesion Kinase), e o comportamento migratório das MSCs na presença das drogas Azatioprina (AZA) e Dexametasona (DEXA). As células foram isoladas de membranas coriônicas humanas e caracterizadas pela diferenciação em adipócitos e osteócitos, bem como pela expressão de um painel de marcadores de superfície. As MSCs foram previamente tratadas com AZA ou DEXA por 24h ou 7d nas concentrações de 1μM ou 10μM, respectivamente. Ambas as drogas não afetaram a viabilidade celular analisada por MTT (3-(4,5-dimethyltiazol-2-yl)-2,5- diphenyltetrazolium bromide) e morfometria nuclear. Entretanto, a análise do índice de polaridade resultou em uma morfologia mais alongada após o tratamento com AZA, enquanto células mais arredondadas foram observadas na presença de DEXA. Os filamentos de actina foram marcados por Rodamina-Faloidina e sua análise mostrou que a AZA preservou parcialmente a formação de lamelipódios e aumentou a presença de fibras de estresse ventrais, enquanto que a DEXA inibiu a formação de lamelipódios, evidenciou uma maior presença de fibras de estresse ventrais e diminuiu a estabilidade das protrusões de membrana, observadas em vídeo. Através da análise de microscopia de série temporal, foi observado que as células sob o efeito da AZA por 7d migraram por maiores distâncias e tiveram um aumento em sua velocidade de migração (24,35%; P < 0,05; n = 4), ao passo que a DEXA diminuiu a velocidade migratória em 24h e 7d (-28,69% e -25,37%, respectivamente; P < 0.05; n = 4) e diminuiu a distância alcançada pelas células. Em conclusão, nossos dados sugerem que as drogas AZA e DEXA podem afetar diferentemente a morfologia e o comportamento migratório das MSCs, possivelmente afetando o resultado da terapia celular. O protocolo de migração celular utilizado neste estudo foi estabelecido por nosso grupo de pesquisa, sendo que um artigo científico contendo todas as etapas do protocolo foi escrito para que outros laboratórios possam utilizá-lo de maneira simples e eficaz. / Glucocorticoids and other immunosuppressive drugs are commonly used to treat inflammatory disorders, such as Inflammatory Bowel Disease (IBD) and, despite few improvements, the remission of IBD is still difficult to maintain. Due to its immunomodulatory properties, Mesenchymal Stem Cells (MSCs) have emerged as regulators of immune response, and its viability and activation of migratory properties are essential for a successful cell therapy. However, little is known about the effects of immunosuppressant drugs used on IBD treatment on MSCs behavior. In this way, the aim of this study was to evaluate MSCs viability, nuclear morphometry, cell polarity, F-actin and FAK (Focal Adhesion Kinase) distribution and cell migration properties in the presence of the immunosuppressive drugs Azathioprine (AZA) or Dexamethasone (DEX). MSCs were isolated from human chorionic membranes and characterized through adipogenic and osteogenic differentiations, as well as a panel of surface markers. Cells were previously treated with AZA or DEX for 24 hrs or 7 days at 1μM and 10μM, respectively. Both drugs had no effects on cell viability analyzed through MTT (3-(4,5- dimethyltiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) and nuclear morphometry. However, polarity index analysis showed that AZA treatment induced a more elongated cell shape while a greater presence of rounded cells was observed under DEX exposure. F-actin was stained by Rhodamine-Phalloidin and showed that AZA could partially preserve lamellipodia formation and increase the presence of ventral actin stress fibers, while DEX inhibited lamellipodia formation and increased the presence of ventral actin stress fibers while decreasing protrusion stability, observed in video. Through time-lapse microscopy, it was observed that after 7 days of treatment, AZA improved cell the spatial trajectory (ST) and increased migration speed (24.35%, P < 0.05, n = 4) while DEX impaired ST and migration speed after 24 hrs and 7 days treatment (- 28.69% and -25.37%, respectively; P < 0.05, n = 4). In conclusion our data suggests these immunosuppressive drugs can differently affect MSCs morphology and migration capacity, possibly impacting the success of cell therapy. The migration protocol used in this study was successfully established by our group, leading to the writing of a protocol paper to facilitate the usage of this technique by other laboratories in a simple and efficient manner.

In the field of regenerative medicine, regeneration of cartilage defects (caused either by injury or age-related degeneration, such as osteoporosis) has become a widely discussed topic. Nanofibrous scaffolds provide a suitable environment for cell adhesion, proliferation, differentiation, and also local involvement of bioactive substances. Nanofibrous scaffolds mimic the extracellular matrix (ECM) of hyaline cartilage and thus have the potential to treat cartilage defects. The aim of the work was modulation of chondrogenic differentiation medium through finding the ideal concentration of chondrogenic supplements, composed of ascorbate-2- phosphate and dexamethasone, in the culture of primary chondrocytes of pig origin seeded on a nanofibrous polycaprolactone (PCL) scaffold. The effect of different concentrations of the chondrogenic supplements on chondrocyte adhesion to the scaffold and their proliferation and differentiation was studied. Firstly, the influence of each of the supplements alone in the medium was studied, followed by study of effects of their combinations. Then, the supplements were incorporated into the nanofibers and their effect upon their release from the nanofibers was investiaged. The supplements were studied in 21-day experiments. The chondrogenic re- differentiation was best...

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:46:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 201136 bytes, checksum: d353460c52709971fecf3b8e2ee9ed29 (MD5) Previous issue date: 2007-12-18 / This work consisted of a biological test with the objective to study the influences of the bifosfonates alendronate of sodium and sodic risedronate and of the statins calcic atorvastatine and lovasatatine in the recuperation of fractures of shin-bones of osteoporotics rats induced by the dexamethasone, in rats of the race Wistar, adults, weighing 250 ± 20g. The process of the induction of the osteoporosis consisted of the administration of dexamethasone, of the dosis of 7,5 mg / kg of physical weight, for road IM, once weekly, during four weeks, of six animals of all the groups, with the exception of the animals that there appointed the control group (G1). The animals of the group 2 (G2), called osteoporotics, received only dexamethasone. After the period of induction of the osteoporosis, the animals of all the groups were subjected to the proceeding of shut fracture of the leftt shin-bones, carried out by a veterinary doctor. Immediately after the induction of the fractures, one began the treatments where the group 3 (G3) received alendronate of sodium in the dosis of 0,25mg/kg; the group 4 (G4) received risedronate of sodium in the dosis of 1 mg / kg; the group 5 (G5) that received calcic atorvastatine in the dosis of 1,2 mg / kg and the group 6 (G6) what it received lovastatine in the dosis of 2mg/kg. All the substances were administered by oral road, daily. In the period of 35 days, after the beginning of the treatments, samples of blood were collected for dosages of calcium, phosphorus, albumin and total proteins in the multiparametric equipment of biochemistry Alizé with kits of the mark BioMerieux, and phosphatase alkaline bone in the equipment of quimioluminescence Access Immunoassay System of Beckman Coulter with kits Ostase. After the sacrifice, there was collected the left shin-bone of each animal what, once fixed they were morfometric analysed, X- rayed and when it was prosecuted for getting the blades, which parliament Masson Tricrômic was colored, for hitological study in light microscopie. The right shin-bone was collected to subject to biomechanical tests. All s measures of height, width and of the bone callus of the shin-bones they were carried out with help of a paquimeter. Besides, there were carried out gauging of the density of these bones, which took place through the relation of the values of weighing and dislocation of liquid in graduated container. The left shin- bones were X-rayed then in profile and the obtained image was subjected to an analysis of radiografic density through the program Image Tool he will be Windows 3.0, for tones of ash obtained of the image. The areas of the analyses were delimited in all the radiografic images of the shin-bones and only the selected areas were taken into account for analysis. Tests of flexing, in the right shin-bones they were carried out with the help of the appliance Instrom (Laboratory of Paper and Cellulose of the Department of Engineering Florestal/UFV). One proceeded the percentage calculation of the density trabecular bone, from the image amostral of trabecular bone, contained in the region subcondral, of each histological cut, in optical microscope equipped with digital camera (TCL-984 P), analysed in monitor of microcomputer of 14 inches, making use of the technique of histomorfometric of counting of points. The biological test was carried out according to delineation completely casualizado, with six treatments in six repetitions. The obtained results were subjected to the variance analysis and to the test F (p <0,05). Control the groups (G1 and G2) they were compared between you, through the test F. The treated groups (G3, G4, G5 and G6) were compared between you, through the test of Tukey to 5% of probability. The comparisons also were carried out between the treated groups and the controls G1 and G2, being that, for the same thing, the test of Dunnet was applied to 5 % of probability. The results did not show significant differences between the group control (G1) and the osteoporotic group (G2), as well as, between them and the treated groups (G3, G4, G5 and G6) and, also, between the groups treated between you, in all the periods, as for the values silken of calcium, phophorus and phosphatase alkaline bone. Through the morfometric and histomorfometric was possible the induction of the osteoporose noted with the glucorticoid, as well as the improvement in the bone density, density trabecular bone and thickness of the bone callus in all the treated groups when the group is prevailing treated with alendronate of sodium that presented better results. The results radiografics and biomechanical tests corroborate with the histomorfometric results. The biochemical results, principally phosphatase alkaline bone, what remained without significant differences in all the groups, when valued together with the morfometric, histomorfometri, radiografic and biomechanical test demonstrate what prevailed the properties antirreabsortives in relation the forming ones of bone in all the treated groups. In spite of the predominance of the properties antirreabsortives in all the treatments, the morfometric, histomorfometric, X-ray and biomechanical tests showed comparable results to the bone recuperation of the normal group, which demonstrates what same do not interfere negatively and which positively in the process of recuperation of fractures in osteoporotics animals. Is excepted, however, which subsequent studies of the dosages, interactions, biodisponibility, besides the toxicological effects of these pharmacological substances, make to themselves necessary. / Este trabalho consistiu de um ensaio biológico com o objetivo de estudar as influências do bifosfonatos alendronato de sódio e risedronato sódico e das estatinas atorvastatina cálcica e lovasatatina na recuperação de fraturas de tíbias de ratas osteoporóticas induzida pelo glicocorticóide dexametasona, em ratas da raça Wistar, adultas, pesando 250 ± 20g. O processo da indução da osteoporose consistiu na administração de dexametasona, na dose de 7,5 mg/kg de peso corporal, por via IM, uma vez por semana, durante quatro semanas, nos seis animais de todos os grupos, à exceção dos animais que constituiu o grupo controle (G1). Os animais do grupo 2 (G2), chamado osteoporótico, receberam apenas dexametasona. Após o período de indução da osteoporose, os animais de todos os grupos foram submetidos ao procedimento de fratura fechada das tíbias esquerdas, realizado por um médico veterinário. Imediatamente após a indução das fraturas, iniciou-se os tratamentos onde o grupo 3 (G3) recebeu alendronato de sódio na dose de 0,25mg/kg; o grupo 4 (G4) recebeu risedrnato de sódio na dose de 1 mg/kg ; o grupo 5 (G5) que recebeu atorvastatina cálcica na dose de 1,2 mg/kg e o grupo 6 (G6) que recebeu lovastatina na dose de 2mg/kg. Todas as substâncias foram administradas por via oral, diariamente. No período de 35dias, após o início dos tratamentos, foram coletados amostras de sangue para dosagens de cálcio, fósforo, albumina e proteínas totais no equipamento multiparamétrico de bioquímica Alizé com kits da marca BioMerieux, e fosfatase alcalina óssea no equipamento de quimioluminescência Access Immunoassay System da Beckman Coulter com kits Ostase. Após o sacrifício, foi coletado a tíbia esquerda de cada animal que, uma vez fixados foram analisados morfometricamente, radiografados, submetidas e processado rotineiramente para obtenção das lâminas, cujos cortes foram corados Tricrômico de Masson, para estudo histologico em microscopia de luz. As tíbias direitas foram também coletadas para realização de testes biomecânicos. Medidas de altura, largura e do calo ósseo das tíbias foram realizadas com auxílio de um paquímetro. Além disso, foram realizados aferições da densidade desses ossos, que ocorreram através da relação dos valores de pesagem e deslocamento de líquido em recipiente graduado. As tíbias esquerdas foram então radiografadas em perfil e a imagem obtida foi submetida a uma analise de densidade radiográfica através do programa Image Tool for Windows 3.0, por tons de cinza obtidos da imagem. As áreas das análises foram delimitadas em todas as imagens radiográficas das tíbias e só foram levadas em consideração para análise as áreas selecionadas.Testes de flexão, nas tíbias direitas foram realizados com o auxílio do aparelho Instrom (Laboratório de Papel e Celulose do Departamento de Engenharia Florestal/UFV). Procedeu-se o cálculo percentual da densidade trabecular óssea, à partir da imagem amostral de osso trabecular, contida na região subcondral, de cada corte histológico, em microscópio óptico equipado com câmara digital (TCL-984 P), analisada em monitor de microcomputador de 14 polegadas, utilizando-se da técnica de histomorfometria de contagem de pontos. O ensaio biológico foi realizado segundo delineamento inteiramente casualizado, com seis tratamentos em seis repetições. Os resultados obtidos foram submetidos à análise de variância e ao teste F (p<0,05). Os grupos controles (G1 e G2) foram comparados entre si, por meio do teste F. Os grupos tratados (G3, G4, G5 e G6) foram comparados entre si, através do teste de Tukey à 5% de probabilidade. As comparações também foram realizadas entre os grupos tratados e os controles G1 e G2, sendo que, para o mesmo, foi aplicado o teste de Dunnet à 5% de probabilidade. Os resultados não mostraram diferenças significativas entre o grupo controle (G1) e o grupo osteoporótico (G2), bem como, entre eles e os grupos tratados (G3, G4,G5 e G6) e, também, entre os grupos tratados entre si, em todos os períodos, quanto aos valores sérico de cálcio, fósforo e fosfatase alcalina óssea. Através da morfometria e histomorfometria foi possível constatar a indução da osteoporose com o glicorticóide, assim como a melhoria na densidade óssea, densidade trabecular óssea e espessura do calo ósseo em todos os grupos tratados prevalecendo o grupo tratado com alendronato de sódio que apresentou melhores resultados. Os resultados radiográficos e biomecânicos corroboram com os resultados histomorfometricos. Os resultados bioquímicos, principalmente fosfatase alcalina óssea, que permaneceram sem diferenças significativas em todos os grupos, quando avaliados em conjunto com a morfometria, histomorfometria, radiografia e teste biomecânicos demonstram que prevaleceram as propriedades antirreabsortivas em relação as formadoras de osso em todos os grupos tratados. Apesar da prevalência das propriedades antirreabsortivas em todos os tratamentos, a morfometria, histomorfométria, radiografia e testes biomecânicos mostrou resultados equiparáveis à recuperação óssea do grupo normal, o que demonstra que os mesmos não interferem negativamente e sim positivamente no processo de recuperação de fraturas em animais osteoporóticos. Ressalva- se, no entanto, que estudos posteriores das dosagens, interações, biodisponibilidades, além dos efeitos toxicológicos dessas substâncias farmacológicas, fazem-se necessários.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:46:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 3782291 bytes, checksum: 1fd6b4960573907eb1e0994ff35f7166 (MD5) Previous issue date: 2010-11-25 / This work was in an assay to study the possible treatment of osteoporosis induced by ovariectomy through the use of isolated and combined, using, in this case, half the doses of the compounds isolated etidronate, risedronate, pravastatin, and ipriflavone, which are agents that have shown positive effects on bone metabolism. Wistar rats, adult, weighing on average 250g were used. The process of induction of osteoporosis was made by surgery when the animals were 5 months old, for retroumbilical incision, giving access to the abdominal cavity under general anesthesia using the combination of ketamine and xylazine at doses of 50 and 5 mg / Kg , respectively, except for animals that constituted the control group (G1). After 12 weeks, was started to drug treatment. The animals were randomly divided into 11 experimental groups, with groups consisting of 6 animals. Group 1 (G1), control, consisted of animals that did not undergo surgery or treatment. In group 2 (G2) there was only surgery. The other groups, besides the surgical process, were treated with medication, group 3 (G3) received etidronate (6 mg / kg), group 4 (G4) risedronate (0.07 mg / kg), group 5 ( G5) pravastatin (0.6 mg / kg), group 6 (G6) ipriflavone (100 mg / kg), group 7 (G7) etidronate and pravastatin (3 mg / kg and 0.3 mg / kg), Group 8 (G8) etidronate and ipriflavone (3 mg / kg and 50 mg / kg), Group 9 (G9) risedronate and pravastatin (0.035 mg / kg and 0.3 mg / kg), group 10 (G10) risedronate and ipriflavone (0.035 mg / kg and 50 mg / kg) and Group 11 (G11) pravastatin and ipriflavone (0.3 mg / kg and 50 mg / kg). All substances were administered orally daily for 30 days. Immediately before the animals were euthanized at 35 days after treatment, blood was collected for serum calcium, phosphorus, albumin and total protein analyzed in the equipment Alizé multiparametric biochemistry and bone alkaline phosphatase analysis equipment Access Immunoassay System chemiluminescence of Beckman Coulter. Then, by the dissection of muscle tissue, the right tibias were collected and frozen for densitometric study using bone densitometry X-ray with Smart Scan DPX-ALPHA, with special software for small animals and the left tibias were collected after of fixed, decalcified and were routinely processed for histomorphometric study, the sections were stained with hematoxylin and eosin for evaluation of trabecular bone density was applied to the calculation method for planimetric point count. The assay was performed according to a randomized design with 11 treatments in six replicates. The results were subjected to analysis of variance. The control groups (G1 and G2) were compared using the F test (p <0.05). Treated groups (G3 to G11) were compared by the Tukey multiple comparison test, the 5% probability. Comparisons were also performed between treated groups and controls G1 and G2, applying Dunnett test at 5% probability. The results showed no significant between the control group (G1) and the osteoporotic group (G2), as well as between the treated groups (G3 to G11) for values of serum calcium, phosphorus, albumin, total protein and bone alkaline phosphatase. By densitometry, and histomorphometry was possible to observe the induction of osteoporosis by ovariectomy. Treated groups compared to the osteoporotic group G2, all treatments showed statistically significant differences, for density and histomorphometry. Thus, the drug etidronate, risedronate, pravastatin, and ipriflavone, used isolated or in combination, showed positive effects on bone metabolism and effective in restoring bone tissue in experimental conditions. Whereas the association of drugs constituted half of the doses used in isolation, the possibility of reduced side effects with the combination becomes a promising alternative for the treatment of osteoporosis. / Este trabalho constituiu em um ensaio biológico com o objetivo de estudar o possível tratamento da osteoporose induzida por ovariectomia, por meio do uso isolado e combinado, utilizando, neste caso, metade das doses dos compostos isolados etidronato, risedronato, pravastatina e ipriflavona, que são agentes que demonstraram efeitos positivos sobre o metabolismo ósseo. Ratas Wistar, adultas, pesando em média 250g foram utilizadas. O processo da indução da osteoporose foi feito por intervenção cirúrgica quando os animais completaram 5 meses de idade, por incisão retroumbilical, dando acesso a cavidade abdominal, sob anestesia geral, utilizando da associação de quetamina e xilazina nas doses de 50 e 5 mg/Kg, respectivamente, à exceção dos animais que constituiu o grupo controle (G1). Após 12 semanas, deu-se início ao tratamento farmacológico. Os animais foram distribuídos aleatoriamente em 11 grupos experimentais, sendo os grupos constituídos de 6 animais. O grupo 1 (G1), controle, foi constituído de animais que não foram submetidos a cirurgia ou ao tratamento. No grupo 2 (G2) houve somente a cirurgia. Os demais grupos, além do processo cirúrgico, foram tratados com os medicamentos; o grupo 3 (G3) recebeu etidronato (6 mg/kg), o grupo 4 (G4) risedronato (0,07 mg/kg), o grupo 5 (G5) pravastatina (0,6 mg/kg), o grupo 6 (G6) ipriflavona (100 mg/kg), o grupo 7 (G7) etidronato e pravastatina (3 mg/kg e 0,3 mg/kg), o grupo 8 (G8) etidronato e ipriflavona (3 mg/kg e 50 mg/kg), o grupo 9 (G9) risedronato e pravastatina (0,035 mg/kg e 0,3 mg/kg), o grupo 10 (G10) risedronato e ipriflavona (0,035 mg/kg e 50 mg/kg) e o grupo 11 (G11) pravastatina e ipriflavona (0,3 mg/ kg e 50 mg/kg). Todas as substâncias foram administradas por via oral, diariamente, durante 30 dias. Imediatamente antes dos animais serem eutanasiados, aos 35 dias, após o tratamento, foram coletados sangue para dosagens de cálcio, fósforo, albumina e proteínas totais, analisados no equipamento multiparamétrico de bioquímica Alizé e fosfatase alcalina óssea analisado no equipamento de quimioluminescência Access Immunoassay System da Beckman Coulter. A seguir, através de dissecção do tecido muscular, as tíbias direitas foram coletadas e congeladas para estudo densitométrico, utilizando densitômetro ósseo de Raio-X com Smart Scan modelo DPX-ALPHA, com software especial para pequenos animais e as tíbias esquerdas foram coletadas, depois de fixadas, foram descalcificadas e processadas rotineiramente para estudo histomorfométrico, os cortes foram corados com hematoxilina e eosina e para avaliação da densidade trabecular óssea foi aplicado o método de cálculo planimétrico por contagem de pontos. O ensaio biológico foi realizado segundo delineamento inteiramente casualizado, com 11 tratamentos em 6 repetições. Os resultados obtidos foram submetidos à análise de variância. Os grupos controles (G1 e G2) foram comparados entre si por meio do teste F (p<0,05). Os grupos tratados (G3 a G11) foram comparados entre si, através do teste de comparação múltipla Tukey, à 5% de probabilidade. As comparações também foram realizadas entre os grupos tratados e os controles G1 e G2, sendo que, para o mesmo, foi aplicado o teste de Dunnett à 5% de probabilidade. Os resultados não mostraram significativos entre o grupo controle (G1) e o grupo osteoporótico (G2), bem como, entre os grupos tratados (G3 a G11) quanto aos valores séricos de cálcio, fósforo, albumina, proteínas totais e fosfatase alcalina óssea. Através da densitometria e histomorfometria foi possível constatar a indução da osteoporose por meio da ovariectomia. Quando comparado grupos tratados ao grupo osteoporótico G2, todos os tratamentos apresentaram diferenças estatisticamente significativas, tanto para densitometria quanto para histomorfometria. Assim, os fármacos etidronato, risedronato, pravastatina e ipriflavona, usados isoladamente ou combinados, apresentaram efeitos positivos sobre o metabolismo ósseo, sendo eficazes em restaurar o tecido ósseo nas condições experimentais. Considerando que a associação dos medicamentos constituiu-se da metade das doses usadas isoladamente, a possibilidade de redução de efeitos colaterais com a associação torna-se uma alternativa promissora na terapêutica da osteoporose.

Glicocorticoides e outras drogas imunossupressoras são comumente utilizados para o tratamento de condições inflamatórias, como as Doenças Inflamatórias Intestinais (DIIs). Apesar dos avanços na terapia medicamentosa, a remissão da doença ainda é difícil de ser mantida. Devido às suas propriedades imunomodulatórias, as Células-Tronco Mesenquimais (MSCs – Mesenchymal Stem Cells) têm emergido como reguladoras da resposta imune, e sua viabilidade e propriedades migratórias são essenciais para o sucesso da terapia celular. Entretanto, pouco se conhece sobre os efeitos das drogas convencionalmente utilizadas no tratamento das DIIs no comportamento das MSCs. Portanto, o objetivo deste estudo foi avaliar a viabilidade, a morfometria nuclear, a polaridade celular, a distribuição da actina-F e da FAK (Focal Adhesion Kinase), e o comportamento migratório das MSCs na presença das drogas Azatioprina (AZA) e Dexametasona (DEXA). As células foram isoladas de membranas coriônicas humanas e caracterizadas pela diferenciação em adipócitos e osteócitos, bem como pela expressão de um painel de marcadores de superfície. As MSCs foram previamente tratadas com AZA ou DEXA por 24h ou 7d nas concentrações de 1μM ou 10μM, respectivamente. Ambas as drogas não afetaram a viabilidade celular analisada por MTT (3-(4,5-dimethyltiazol-2-yl)-2,5- diphenyltetrazolium bromide) e morfometria nuclear. Entretanto, a análise do índice de polaridade resultou em uma morfologia mais alongada após o tratamento com AZA, enquanto células mais arredondadas foram observadas na presença de DEXA. Os filamentos de actina foram marcados por Rodamina-Faloidina e sua análise mostrou que a AZA preservou parcialmente a formação de lamelipódios e aumentou a presença de fibras de estresse ventrais, enquanto que a DEXA inibiu a formação de lamelipódios, evidenciou uma maior presença de fibras de estresse ventrais e diminuiu a estabilidade das protrusões de membrana, observadas em vídeo. Através da análise de microscopia de série temporal, foi observado que as células sob o efeito da AZA por 7d migraram por maiores distâncias e tiveram um aumento em sua velocidade de migração (24,35%; P < 0,05; n = 4), ao passo que a DEXA diminuiu a velocidade migratória em 24h e 7d (-28,69% e -25,37%, respectivamente; P < 0.05; n = 4) e diminuiu a distância alcançada pelas células. Em conclusão, nossos dados sugerem que as drogas AZA e DEXA podem afetar diferentemente a morfologia e o comportamento migratório das MSCs, possivelmente afetando o resultado da terapia celular. O protocolo de migração celular utilizado neste estudo foi estabelecido por nosso grupo de pesquisa, sendo que um artigo científico contendo todas as etapas do protocolo foi escrito para que outros laboratórios possam utilizá-lo de maneira simples e eficaz. / Glucocorticoids and other immunosuppressive drugs are commonly used to treat inflammatory disorders, such as Inflammatory Bowel Disease (IBD) and, despite few improvements, the remission of IBD is still difficult to maintain. Due to its immunomodulatory properties, Mesenchymal Stem Cells (MSCs) have emerged as regulators of immune response, and its viability and activation of migratory properties are essential for a successful cell therapy. However, little is known about the effects of immunosuppressant drugs used on IBD treatment on MSCs behavior. In this way, the aim of this study was to evaluate MSCs viability, nuclear morphometry, cell polarity, F-actin and FAK (Focal Adhesion Kinase) distribution and cell migration properties in the presence of the immunosuppressive drugs Azathioprine (AZA) or Dexamethasone (DEX). MSCs were isolated from human chorionic membranes and characterized through adipogenic and osteogenic differentiations, as well as a panel of surface markers. Cells were previously treated with AZA or DEX for 24 hrs or 7 days at 1μM and 10μM, respectively. Both drugs had no effects on cell viability analyzed through MTT (3-(4,5- dimethyltiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) and nuclear morphometry. However, polarity index analysis showed that AZA treatment induced a more elongated cell shape while a greater presence of rounded cells was observed under DEX exposure. F-actin was stained by Rhodamine-Phalloidin and showed that AZA could partially preserve lamellipodia formation and increase the presence of ventral actin stress fibers, while DEX inhibited lamellipodia formation and increased the presence of ventral actin stress fibers while decreasing protrusion stability, observed in video. Through time-lapse microscopy, it was observed that after 7 days of treatment, AZA improved cell the spatial trajectory (ST) and increased migration speed (24.35%, P < 0.05, n = 4) while DEX impaired ST and migration speed after 24 hrs and 7 days treatment (- 28.69% and -25.37%, respectively; P < 0.05, n = 4). In conclusion our data suggests these immunosuppressive drugs can differently affect MSCs morphology and migration capacity, possibly impacting the success of cell therapy. The migration protocol used in this study was successfully established by our group, leading to the writing of a protocol paper to facilitate the usage of this technique by other laboratories in a simple and efficient manner.

Introduction: The synthetic glucocorticoids are important adjuvants in the treatment of diseases involved with the immune system and pro inflammatory diseases. Despite its importance, the indiscriminate and / or abusive use of these drugs may cause adverse effects such as iatrogenic diseases, and increased spending on public health. In this context, patients subjected to continued treatment with glucocorticoids in order to reduce the adverse effects of this drug can be used as an exercise no pharmacological strategy. Objective: To evaluate the effects of resistance exercise on blood glucose and resistance to insulin action in animals with dexamethasone. Methods: 40 males rats were used randomly into four groups: 1) Control + Sedentary (CS) 2) Control + Trained (CT) 3) Dexamethasone + Sedentary (DS) 4) Dexamentasona + Trained (DT). The training protocol was performed in squat machine (three sets, 10 reps, one-minute rest, with an intensity of 75% of one repetition maximum for four weeks). CS and CT groups received daily saline intraperitoneally whereas DT and DS groups received dexamethasone (0.2g / kg). At the end of the protocol were conducted glucose tolerance test, insulin sensitivity and maximum force test. Results: The DS and DT groups lost weight significantly following treatment with dexamethasone, CT and DT when compared groups gained strength tests of the 1st and 4th week (CT = 14.78%; DT = 36.87%) instead of CS and DS groups in the same period (p <0.05). In the glucose tolerance test, CT and DT groups showed lower area under the curve (12.99%; 22.33% respectively) compared to their respective control groups. In insulin sensitivity test, resistance exercise attenuated the action of insulin resistance induced by treatment with dexamethasone 23.81% in the DT group compared to the DS. Conclusion: Resistive Exercise was able to mitigate the deleterious effects induced by chronic use of dexamethasone on blood glucose and resistance to insulin action. / Introdução: Os glicocorticoides sintéticos são importantes adjuvantes no tratamento de doenças envolvidas com o sistema imune e de doenças pró inflamatórias. Apesar da sua importância, o uso indiscriminado e/ou abusivo desses fármacos podem causar efeitos adversos como doenças iatrogênicas, e aumento nos gastos com a saúde pública. Sob este contexto, pacientes submetidos ao tratamento continuado com glicocorticoides com o intuito de diminuir os efeitos adversos deste fármaco podem utilizar o exercício físico como uma estratégia não farmacológica. Objetivo: Avaliar os efeitos do exercício resistido sobre a glicemia e resistência à ação da insulina em animais submetidos ao dexametasona. Métodos: Foram utilizados 40 ratos machos divididos randomicamente em quatro grupos: 1) Controle + Sedentário (CS) 2) Controle + Treinado (CT) 3) Dexametasona + Sedentário (DS) 4)Dexamentasona + Treinado (DT). o protocolo de treinamento foi realizado em aparelho de agachamento (três séries, 10 repetições, um minuto de intervalo, com intensidade de 75% de uma repetição máxima durante quatro semanas). Os grupos CS e CT receberam diariamente solução salina intraperitonialmente enquanto que os grupos DS e DT receberam dexametasona (0,2g/kg). Ao final do protocolo foram realizados testes de tolerância à glicose, sensibilidade à insulina e teste de força máxima. Resultados: Os grupos DS e DT perderam peso significativamente após o tratamento com dexametasona, os grupos CT e DT ganharam força quando comparados os testes da 1ª e 4ª semana (CT=14,78%; DT=36,87%) ao contrário dos grupos CS e DS no mesmo período (p<0,05). No teste de tolerância a glicose, os grupos CT e DT tiveram menor área sob a curva (12,99%; 22,33% respectivamente) comparados aos seus respectivos grupos controles. No teste de sensibilidade a insulina, o exercício resistido atenuou a resistência à ação da insulina induzida pelo tratamento com dexametasona em 23,81% no grupo DT quando comparado ao DS. Conclusão: O Exercício Resistido foi capaz de atenuar os efeitos deletérios induzidos pelo uso crônico com dexametasona sobre a glicemia e a resistência à ação da insulina.

Orientador: Jose Roberto Bosqueiro / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-15T15:50:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Abrantes_JuliaLauraFernandes_M.pdf: 1271639 bytes, checksum: 76791cec4029d58aa9205ace9ab4b491 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: Quando em excesso, a administração de glicocorticóides pode induzir hiperglicemia, fator que tem sido associado ao aumento do estresse oxidativo em diversos tecidos. No pâncreas endócrino, o estresse oxidativo tem sido relacionado à perda de função e massa de células P pancreáticas, contribuindo para o desenvolvimento do diabetes tipo 2. Por melhorar a sensibilidade à insulina e a capacidade antioxidante em diversos tecidos, o treinamento físico moderado poderia ser uma importante ferramenta na prevenção do estresse oxidativo em pâncreas endócrino. Para testar essa hipótese, o presente trabalho investigou o efeito do treinamento físico de intensidade moderada, realizado previamente a administração de dexametasona (DEX - 1mg/kg dep.c., durante 5 dias), sobre vários parâmetros metabólicos e sobre o estado redox de ilhotas pancreáticas de ratos. Quatro grupos experimentais foram utilizados: sedentário controle (SC), sedentário tratado com DEX (SD), treinado controle (TC) e treinado tratado com DEX (TD). O tratamento com DEX induziu hiperglicemia (níveis glicêmicos: 90.8 ± 3.9, 299.2 ± 24.3, 84.3 ± 2.9, 229.9 ± 19.2 mg/dL para SC, SD, TC, TD, respectivamente; n = 10; P < 0.05), hipertrigliceridemia (níveis de triglicerídeos: 94.2 ± 4.3, 416.6 ± 54.3, 92.7 ± 6.0, 322.5 ± 48.7 mg/dL para SC, SD, TC, TD, respectivamente; n = 5; P < 0.05) e hiperinsulinemia (níveis insulinêmicos: 1.10 ± 0.2, 23.01 ± 0.8, 1.21 ± 0.2, 21.66 ± 0.6 ng/mL para SC, SD, TC, TD, respectivamente; n = 5; P < 0.05) de jejum em ratos SD e TD e resistência à insulina (RI) apenas em ratos SD (Taxa de decaimento da glicose - Kitt: 3 ± 0.2, 1.8 ± 0.1, 3.6 ± 0.2, 3.2 ± 0.4 para SC, SD, TC, TD, respectivamente; n = 5; P < 0.05). Além disso, reduziu o conteúdo total de insulina (CT: 191.6 ± 21.5, 97.1 ± 17.1, 370.3 ± 46.5, 185.6 ± 16.3 ng/ilhota para SC, SD, TC, TD, respectivamente; n = 10; P < 0.05) e aumentou os níveis de espécies reativas de oxigênio (EROs) em ilhotas pancreáticas de ratos SD e TD vs respectivos controles (EROs: 2.8 mM de glicose: 41.3 ± 2.6, 54 ± 1.3, 23.4 ± 1.5, 38.9 ± 4 UF/ug proteína; 22 mM de glicose: 33.3 ± 1.7, 38.4 ± 0.5, 10.1 ± 1.6, 28 ± 1.2 UF/ug proteína para SC, SD, TC, TD, respectivamente; n = 10; P < 0.05). Já o treinamento físico foi capaz de prevenir a RI e reduzir em 23% os níveis glicêmicos de jejum dos ratos TD vs SD. Foi observado, ainda, aumento no CT e na secreção de insulina estimulada por glicose (11.1mM) em ilhotas isoladas de ratos TC e TD (Secreção em 11.1 mM de glicose: 1.4 ± 0.2, 4.2 ± 0.2, 3.3 ± 0.2, 5.6 ± 0.5 ng/mL por ilhota por hora, para SC, SD, TC, TD, respectivamente; n = 12; P < 0.05). Além disso, o treinamento físico induziu aumento no nível protéico da enzima antioxidante catalase (CAT: 100 ± 14.1, 113.8 ± 14.2, 151.6 ± 10.2, 183.2 ± 11.2, expresso como % SC, para SC, SD, TC, TD, respectivamente; n = 6; P < 0.05), bem como redução nos níveis de EROs em ilhotas de ratos TC e TD. Baseados nesses dados, nós sugerimos que o treinamento físico deva contribuir para melhora na homeostase glicêmica, além de aumentar a resistência de ilhotas pancreáticas ao estresse oxidativo. / Abstract: When in excess, glucocorticoid administration can induce hyperglycemia, which has been associated to increased oxidative stress in numerous tissues. In endocrine pancreas, the oxidative stress has been related to the loss of pancreatic P-cell function and mass, contributing to the development of type 2 diabetes. By improving the insulin sensitivity and the antioxidative capability in several tissues, moderate exercise training could be an important tool in the prevention of oxidative stress. To test this hypothesis, the present study aimed to investigate the effect of a moderate exercise training plan, executed previous to dexamethasone challenge (DEX - lmg/kg per b.w., for 5 days), on numerous metabolical parameters, as well as on the redox state of the pancreatic islets in rats. For this, four experimental groups were designed: sedentary control (SC), sedentary treated with DEX (SD); trained control (TC) and trained treated with DEX (TD). DEX treatment induced fasting hyperglycemia (blood glucose levels: 90.8 ± 3.9, 299.2 ± 24.3, 84.3 ± 2.9, 229.9 ± 19.2 mg/dL for SC, SD, TC, TD, respectively; n = 10; P < 0.05), hypertriglyceridemia (blood triglyceride levels: 94.2 ± 4.3, 416.6 ± 54.3, 92.7 ± 6.0, 322.5 ± 48.7 mg/dL for SC, SD, TC, TD, respectively; n = 5; P < 0.05) and hyperinsulinemia (blood insulin levels: 1.10 ± 0.2, 23.01 ± 0.8, 1.21 ± 0.2, 21.66 ± 0.6 ng/mL for SC, SD, TC, TD, respectively; n = 5; P < 0.05) in SD and TD rats and insulin resistance (IR) only in SD rats (Rate for glucose disappearance - Kitt: 3 ± 0.2, 1.8 ± 0.1, 3.6 ± 0.2, 3.2 ± 0.4 for SC, SD, TC, TD, respectively; n = 5; P < 0.05). Additionally, it reduced total insulin content (CT: 191.6 ± 21.5, 97.1 ± 17.1, 370.3 ± 46.5, 185.6 ± 16.3 ng/islet for SC, SD, TC, TD, respectively; n = 10; P < 0.05) and increased reactive oxygen species levels (ROS) in pancreatic islets from SD and TD rats vs respective controls (ROS: 2.8 mMof glucose: 41.3 ± 2.6, 54 ± 1.3, 23.4 ± 1.5, 38.9 ± 4 UF/ug proteína; 22 mM of glucose: 33.3 ± 1.7, 38.4 ± 0.5, 10.1 ± 1.6, 28 ± 1.2 UF/ug protein for SC, SD, TC, TD, respectively; n = 10; P < 0.05). Of note, the exercise training was able to prevent IR and to reduce by 23% the fasting blood glucose levels in TD vs. SD rats. Exercise training also induced an augmentation in CT and in insulin response to stimulating glucose concentration (11.1mM) in isolated islets from TC and TD rats (Insulin secretion in 11.1 mM of glucose: 1.4 ± 0.2, 4.2 ± 0.2, 3.3 ± 0.2, 5.6 ± 0.5 ng/mL per islet per hour, for SC, SD, TC, TD, respectively; n = 12; P < 0.05).. Still, exercise training induced an increase in the catalase protein levels, an antioxidant enzyme (CAT: 100 ± 14.1, 113.8 ± 14.2, 151.6 ± 10.2, 183.2 ± 11.2, expressed as % SC, for SC, SD, TC, TD, respectively; n = 6; P < 0.05), as well as reduction in ROS levels in TC and TD islets. Based on these data, we suggest that the moderate exercise training may improve glucose homeostasis and prevent oxidative stress in pancreatic islets. / Mestrado / Fisiologia / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Jose Roberto Bosqueiro / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-10T23:23:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Giozzet_VanessaAparecidaGoncalves_D.pdf: 2125921 bytes, checksum: 5e1d4923fcc0268442cc60af14fa58dd (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: A desnutrição e a resistência periférica à insulina induzida por administração de glicocorticóides induzem compensações funcionais e morfológicas em ilhotas pan creáticas a fim de manter a homeostase glicêmica. Deste modo, investigamos as alterações desenvolvidas pelo tratamento com dexametasona (Dex) em animais submetidos à restrição protéica. Foram analisados: parâmetros metabólicos, secreção de insulina em resp osta a glicose e proteínas envolvidas na via de sinalização da insulina em ilhotas pancreáticas isoladas. Ratos submetidos à dieta hipoprotéica (LP) apresentaram características padrões que caracterizam a desnutrição como: diminuição de ganho de massa corp oral, redução dos níveis séricos de albumina, proteína total e insulina. Adicionalmente, os ratos LP exibiram aumento da sensibilidade periférica à insulina e redução da área das ilhotas pancreáticas comparadas ao grupo controle ( P < 0,05). Todos estes parâmetros apresentaram valores similares ao grupo controle nos ratos submetidos à dieta hipoprotéica e submetidos ao tratamento com Dex (LPD), exceto para o peso corpóreo ( P < 0,05). A secreção de insulina em ilhotas pancreáticas isoladas de ratos LPD aprese ntou maior responsividade à glicose, em níveis estimulatórios, comparados a secreção em ilhotas de ratos LP (P < 0,05). Paralelo aos resultados de secreção, os ratos LPD exibiram redução do conteúdo protéico de IRS-1, IRS-2 e aumento dos níveis protéicos d e p-FoxO1, p-ERK e PKC comparados ao grupo LP (P < 0,05). Concomitantemente, as ilhotas dos ratos LPD mostraram ¿se hipertrofiadas comparadas com ilhotas de ratos LP ( P < 0,05). Em conclusão, o tratamento com dexametasona reverte, ao menos parcialmente, os efeitos no metabolismo analisados e no funcionamento das ilhotas pancreáticas causados pela restrição protéica, confirmando a grande plasticidade das células ß frente a condições adversas facultativas e/ou permanentes / Abstract: Malnutrition caused by protein restriction and dexamethasone -induced insulin resistance, in vivo treatment (Dex) are conditions associated with morphological and functional alterations in pancreatic islets. Thus, the present study evaluated the dexamethasone treatment effects on the metabolic parameters, glucose-stimulated insulin secretion and proteins involved in the insulin - signalling pathway over low protein diet fed rats (LP). LP rats showed decrease in body weight, serum insulin, total serum protein, and serum albumin, patte rns that characterize the LP rats. Moreover, LP rats presented improved peripheral insulin sensibility and reduced islets area (P < 0,05). Except for the body weight (P < 0,05), all these parameters were proned to be normalized in rats exposed to a low protein diet and treated with dexamethasone (LPD), whose islets showed increased glucose stimulated insulin secretion (GSIS). In addition, LPD rats showed lower protein expression of IRS-1, IRS-2 and higher in p-FoxO1, p-ERK and PKC, while presenting pancreatic islet hypertrophy compared to LP rats islet. In conclusion, dexamethasone treatment revert the effects related to metabolism and islet function caused by diet protein restriction, confirming ß-cells wide plasticity, even in transient or lasting adverse conditions / Doutorado / Fisiologia / Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / The disabling effects of central nervous system (CNS) tumors are out of proportion to their low incidence. Theyâre second only to stroke as neurologic mortality causes. Brain metastases are the commonest intracranial tumors in adults, almost 10 times more frequent than primary brain tumors. Their diagnosis and treatment have met significant advances, although much more research about drug resistance and new treatment modalities are needed. New and even better brain tumor animal models will help to evaluate novel drug regimens and adjuvant therapies for CNS neoplasms. In the present work, the author presents a simple and easily reproducible brain tumor model utilizing the tumor cell line W256 transplanted to Wistar rats. They tested a drug widely used for palliative treatment of tumoral brain edema (dexamethasone), for survival impact. They also have tested the effects of a drug newly proposed as multidrug resistance reversal agent (cyclosporin â CS). Wistar albino rats had stereotaxic intracranial tumor inoculation after the surgical installation of a permanent canulla on the area of interest (right subfrontal caudate). The brain tumor model, as a model of metastatic brain disease, was successful, with reproducible tumor growth (95%), low incidence of extracranial tumor implantation (21% local, no distant metastasis) and few evidence of surgical site infection (21%). The median survival of the animals was 12.5 days (control), 13 days (CS vehicle treated), 11 days (CS treated), 9.5 and 9 days (dexamethasone 0.3 and 3.0 mg/kg/day). These differences were not significant, although the survival rates on the 12th day post-inoculation have showed a significant survival decrease for the case of dexamethasone 3,0 mg/kg/day (p < 0.05), but not for CS treatment (Fischerâs Exact Test). The estimated tumor volume was 17.08  6.7 mm3 (control) and 12.61  3.6 mm3 (CS treatment, not significant, Studentâs t-test). The tumor volume in the 9th day post-inoculation was estimated in 67,25  19,8 mm3. The doubling time was 24.25 h. This model behaved as an undifferentiated tumor, with local invasiveness features compared with that of primary brain tumors. It fits well, in this way, for the study of tumor cell migration on CNS parenchyma. Phenomena like neuronal degeneration, neuron cell edema and death, and gliosis, as well as perivascular cell infiltrates, were seen frequently. One could find, also, neoangiogenesis, satellite tumor growth, and tumor cell migration in normal brain parenchyma. Besides heavy parenchymatous infiltration, it was also disclosed markedly tumor cell migration along white matter tracts, such as callosal fibers and infiltration in the Virchow-Robins perivascular space. The model presents as a dual brain tumor and leptomeningeal carcinomatosis model. It could be used for the study and treatment test in the scenario of these two pathologies. The intracerebral tumor growth induced peripheral blood neutrophil count elevation (ANOVA, p < 0.01), higher chance for neutrophilia (Fischerâs Exact Test, p < 0.01), higher chance for lymphopenia (Fischerâs Exact Test, p < 0.01) and brain weight increase (Studentâs t-test, p < 0.001) comparing to control. There was no significant change in any of the other hematologic, biochemical and biological parameters tested. CS treatment did not alter any of the tests, as compared to non-treated brain tumor animals. The only exception was the mean animal weight on the first week post-inoculation (ANOVA, p < 0.05). CS, in this way, was responsible for an early cachexia in the brain tumor inoculated animals. CS treatment of brain tumor animals did show non-significant effects indicating a volume (26%) and weight tumor decrease, and tumor infiltrating neutrophil increase (odds ratio - OR = 5.6). This indicates the necessity to further study morphologically and functionally the local inflammation in brain tumor inoculated animals, as well the effects of CS administration. In conclusion, the W256 intracerebral tumor model is simple, easily performed, reproducible and of great potential utility. In this model, tumor inoculation can lead to hematologic and biologic modifications in the experimental animals. CS could apparently lead to early tumor caquexia in this tumor model. However, CS treatment did not modify the survival chance of the brain tumor animals, in sharp contrast to dexamethasone 3.0mg/kg/day, a much-used drug in the treatment of brain tumors, which decreased the animal survival. / Os importantes efeitos incapacitantes dos tumores do sistema nervoso central (SNC) sÃo desproporcionais a sua baixa incidÃncia. Mesmo assim, entre as doenÃas neurolÃgicas, ficam atrÃs apenas dos acidentes vasculares do SNC como causa de morte. MetÃstases cerebrais constituem os tumores intracranianos mais comuns do adulto, ocorrendo atà 10 vezes mais freqÃentemente que tumores primÃrios. AvanÃos significativos ocorreram em seu diagnÃstico e tratamento, embora mais pesquisa sobre os fenÃmenos que diminuem o efeito de drogas em metÃstases cerebrais e tratamentos eficazes para estas patologias sejam cada vez mais necessÃrios. O desenvolvimento de melhores modelos animais de tumores do SNC serà necessÃrio para a avaliaÃÃo in vivo de novas formas de quimioterapia (QT) e terapia adjuvante para tumores cerebrais. No presente trabalho, o autor objetivou desenvolver um modelo de tumor cerebral simples e de fÃcil reproduÃÃo utilizando a linhagem W256, alÃm de testar o efeito na sobrevida animal de uma droga largamente usada para o tratamento de efeitos secundÃrios a edema cerebral (dexametasona). O autor tambÃm testou uma droga envolvida numa nova proposta de reversÃo de multirresistÃncia a drogas anti-neoplÃsicas em tumores cerebrais (ciclosporina â CS). Ratos albinos (Wistar) tiveram o tumor inoculado atravÃs de estereotaxia, apÃs a instalaÃÃo cirÃrgica de uma cÃnula no ponto escolhido (caudato subfrontal direito). O modelo de tumor implantado no cÃrebro de ratos, simulando uma metÃstase cerebral, mostrou-se bem sucedido e reprodutÃvel (95% de crescimento tumoral), com baixa incidÃncia de disseminaÃÃo tumoral extracraniana local (21%), baixa evidÃncia de infecÃÃo local (21%), ausÃncia de metÃstases à distÃncia e ausÃncia de sinais de infecÃÃo sistÃmica. Os animais sobreviveram uma mediana de 12,5 dias (grupo controle), 13 dias (tratados com veÃculo da CS), 11 dias (tratados com CS), 9,5 e 9 dias (dexametasona 0,3 e 3,0 mg/kg/dia, respectivamente). As diferenÃas entre estas medianas nÃo foram significantes (teste de Kruskal-Wallis), embora as diferenÃas entre as taxas de sobrevida no 12o dia apÃs a inoculaÃÃo tenham mostrado reduÃÃo significante no grupo que recebeu dexametasona 3,0 mg/kg/dia (p < 0,05), mas nÃo no grupo tratado com CS (teste de Fischer). O volume tumoral estimado (VTE) no sÃtimo dia pÃs-inoculaÃÃo (7DPI) foi de 17,08  6,7 mm3 no controle e 12,61 3,6 mm3 apÃs tratamento com CS, sem diferenÃa significante (teste t-Student). O VTE no 9DPI de animais do grupo Tumor foi de 67,25  19,8 mm3. O tempo de duplicaÃÃo foi de 24,25 h. O modelo comportou-se como um tumor de caracterÃsticas indiferenciadas, apresentando invasividade local comparada à de tumores primÃrios do SNC, prestando-se ao estudo da migraÃÃo de cÃlulas tumorais no SNC. Observaram-se fenÃmenos como degeneraÃÃo neuronal hidrÃpica, edema celular neuronal, sinais de morte celular neuronal e gliose, alÃm da presenÃa de infiltrados celulares tumorais e inflamatÃrios perivasculares. Observaram-se, tambÃm, neoformaÃÃo vascular, formaÃÃo de nÃdulos tumorais satÃlites ao tumor principal e migraÃÃo celular tumoral no parÃnquima cerebral normal. Observou-se, alÃm da infiltraÃÃo parenquimatosa, marcante migraÃÃo celular tumoral ao longo de tratos de substÃncia branca (corpo caloso) e ao longo dos espaÃos perivasculares de Virchow-Robins. O modelo apresenta-se como um misto de tumor cerebral intraparenquimatoso e carcinomatose leptomenÃngea, podendo ser utilizado para estudar o comportamento e testar formas de tratamento para ambas as patologias. O crescimento tumoral intracerebral induziu aumento do nÃmero de neutrÃfilos no sangue perifÃrico (ANOVA, p < 0,01), maior chance de apresentar neutrofilia (teste de Fischer, p < 0,01), maior chance de apresentar linfopenia (teste de Fischer, p < 0,01) e aumento do peso dos cÃrebros dos animais experimentais (teste t-Student, p < 0,001) em relaÃÃo ao controle. Nenhum dos outros valores hematolÃgicos, bioquÃmicos e biolÃgicos foi alterado de maneira significante. O tratamento de animais inoculados com tumor com a CS, nÃo alterou nenhuma das medidas hematolÃgicas, bioquÃmicas ou biolÃgicas em relaÃÃo aos animais inoculados com tumor e nÃo tratados, exceto o peso dos animais na primeira semana apÃs inoculaÃÃo tumoral (ANOVA, p < 0,05). A CS, dessa forma, induziu significantemente uma caquexia precoce nos animais inoculados com tumor cerebral. O tratamento com CS de animais inoculados com tumor mostrou tendÃncias nÃo significantes a diminuir volume (26%) e massa (7%) tumorais e aumentar nÃmero de neutrÃfilos infiltrantes de tumor (razÃo de chance - RC = 5,6) e necrose tumoral, indicando a necessidade de posteriores estudos para caracterizar morfolÃgica e funcionalmente a resposta inflamatÃria local em animais inoculados com tumor e a influÃncia da CS neste processo, alÃm do efeito da CS na angiogÃnese tumoral. Concluindo, o modelo de W256 intracerebral mostrou-se simples, de fÃcil execuÃÃo, reprodutÃvel e Ãtil. Neste modelo, a inoculaÃÃo tumoral induz modificaÃÃes hematolÃgicas e biolÃgicas nos animais. A CS pareceu exarcebar a caquexia tumoral neste modelo. A CS, todavia, nÃo alterou a chance de sobrevida de animais inoculados com tumor cerebral, ao contrÃrio da dexametasona 3,0 mg/kg/dia, que reduziu esta chance. A CS, assim, parece ser mais segura neste modelo tumoral que uma droga largamente utilizada para tratamento de pacientes com metÃstase cerebral.