Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / El Distemper Canino (DC) es una de las patologías que provoca mayor tasa de morbilidad y mortalidad en los caninos domésticos a nivel mundial y representa también una importante enfermedad en varias familias de mamíferos terrestres: Canidae, Procyonidae, Mustelidae, Mephitidae, Hyaenidae, Ursidae, Ailuridae, Viverridae, Felidae y algunos mamíferos marinos, como la foca cáspica (pusa caspica). Esta enfermedad es causada por el Virus Distemper Canino (VDC), un virus ARN de hebra simple y polaridad negativa, cuyo genoma constituido por seis genes, codifica para seis proteínas estructurales. Entre ellas, la Hemaglutinina codificada por el gen H, presenta la mayor variabilidad aminoacídica, induce la producción de anticuerpos neutralizantes sintetizados por el sistema inmune del hospedero. Basado en la variabilidad del gen H, se ha descrito que a nivel mundial existirían al menos catorce linajes distintos del VDC y en nuestro país se ha descrito la presencia de al menos dos linajes circulando entre nuestros perros enfermos con la patología: América-1 y Europa-1/Sudamérica-1. Así, el objetivo de esta memoria de título fue implementar la detección del linaje América-1 del Virus Distemper Canino mediante la Reacción en Cadena de la Polimerasa asociada a transcripción reversa (RT-PCR) mediante partidores diseñados in silico. Para esto, los partidores se diseñaron a partir de las secuencias nucleotídicas usadas en el árbol filogenético del gen H de VDC realizado por (Ke et al., 2015, las que se encuentran en la base de datos Genbank®, Los partidores diseñados resultaron ser eficaces para la detección del VDC y la RT-PCR fue capaz de detectar un fragmento específico del gen H de las muestras positivas, por lo tanto se podría sugerir que estos partidores diseñados in silico efectivamente se pueden ocupar para detectar el linaje América-1 del VDC. / The Canine Distemper is one of the pathologies that causes the highest rate of morbidity and mortality in domestic dogs worldwide and represents an important disease in several families of terrestrial mammals: Canidae, Procyonidae, Mustelidae, Mephitidae, Hyaenidae, Ursidae, Ailuridae, Viverridae, Felidae and some marine mammals, like the cape seal (pusa caspica). This disease is caused by Canine Distemper Virus (CDV), a single-stranded RNA virus with negative polarity, whose genome consists of six genes codifying for six structural proteins. Among them, the Hemagglutinin encoded by the H gene, has the highest amino acid variability, inducing the production of neutralizing antibodies synthesized by the host's immune system. Based on the variability of the H gene, it has been described that worldwide there would be at least fourteen different VDC lineages and in our country the presence of at least two lineages circulating among our sick dogs has been described with the pathology: America-1 and Europe-1/South America-1. The objective of this title report was to implement the detection of the America-1 lineage of the Canine Distemper Virus through the Polymerase Chain Reaction associated with reverse transcription (RT-PCR) by means of in silico designed primers. For this, the primers were designed using the nucleotide sequences used in the phylogenetic tree constructed using the VDC H gene performed by Ke et al., 2015, and stored in the Genbank® database. The designed primers were found to be effective for the detection of VDC and the RT-PCR was able to detect a specific fragment of the H gene from the positive samples, therefore it could be suggested that these in silico designed primers can effectively be used to detect the VDC lineage America-1.

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LD2668 .T4 1962 M43

Orientadora: Márcia Ferreira da Rosa Sobreira / Coorientador: Hélio José Montassier / Banca: Ketherson Rodrigues Silva / Banca: Ruben Pablo Schocken Iturrino / Banca: Marita Vedovelli Cardozo / Banca: Diane Meyre Rassi / Resumo: A cinomose canina é uma das enfermidades infectocontagiosas mais importantes que acomete os cães. É uma doença causada pelo vírus da Cinomose ("Canine Distemper Virus" - CDV), um Paramyxovirus, do gênero Morbillivirus, de ocorrência mundial, sem sazonalidade, sem predileção de sexo ou raça, apresenta maior incidência em animais jovens, podendo acometer todas as idades. No Brasil, pesquisas sobre o uso de técnicas que comparam os diferentes testes diagnósticos direto para o vírus da cinomose (CDV) associado a análise molecular e filogenética do mesmo ainda continuam escassas. Além disso, são poucos os estudos sobre epidemiologia molecular que relatam diferenças marcantes na análise filogenética do gene hemaglutinina (H) do CDV entre os isolados de campo e as cepas de referência do CDV, especialmente àquelas utilizadas na produção de vacinas. Dessa maneira, o presente trabalho tem como principal objetivo avaliar os principais métodos diagnósticos laboratoriais para identificação do CDV em cães com suspeita de cinomose associando à análise filogenética do gene H dos isolados de campo. O Ensaio imunocromatografico direto (IC), a RT-PCR e a Nested-PCR foram avaliados para detecção do CDV em diferentes amostras clínicas (urina, suabes retais e conjuntivais) de 62 animais suspeitos de cinomose, provenientes do atendimento ambulatorial do hospital veterinário da Unesp (Jaboticabal-SP) e de clínicas particulares da região. Após detecção viral as amostras foram submetidas a sequenciame... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Canine distemper is one of the most important infectious diseases that affects dogs. It is a Canine Distemper Virus (CDV), a Paramyxovirus, of the genus Morbillivirus, a global deforest, without seasonality, without predilection of sex or race, that is constituted by the majority of the animals, being able to affect all ages. In Brazil, research on the use of techniques that compare the different direct diagnostic tests for the distemper virus (CDV) associated with a molecular and phylogenetic analysis of the same are still scarce. In addition, there are some studies on molecular epidemiology that report differences in the phylogenetic analysis of the hemagglutinin (H) gene from CDV between the fields of action and as a reference for CDV, especially the practices used in the production of vaccines. Thus, the main objective of this study is to identify laboratory diagnoses for the identification of CDV in dogs with suspected pair association to the phylogenetic analysis of the H gene of the field isolates. The direct immunochromatographic (CI) assay, RT-PCR and nested-PCR were evaluated for the detection of CDV in different animal species (urine, swabs and conjunctival) of 62 suspected cases of distemper from the outpatient clinic of the Unesp (Jaboticabal-SP) and the private medical records of the region. After viral detection as sequential sequencing followed by phylogenetic analysis of the CDV H gene. A total of 42 animals were positive at least one of the experiment techni... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:24:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-03-03Bitstream added on 2014-06-13T20:27:07Z : No. of bitstreams: 1 mangia_sh_me_botfmvz.pdf: 1746429 bytes, checksum: 82e2d527d1969123d65920e8659de0fc (MD5) / Este estudo teve por objetivos testar a eficácia da ribavirina em cães acometidos de cinomose na fase neurológica; avaliar os efeitos colaterais da mesma através do monitoramento hematológico e provas bioquímicas; avaliar a resposta imunológica no sistema nervoso central dos cães através do exame de líquor; adaptar uma dose e via de administração adequada da ribavirina em cães e testar a eficácia do DMSO como permeante de membranas biológicas atuando como vetor da ribavirina. Foram utilizados 20 cães com sinais clínicos neurológica, divididos em dois grupos de tratamento, sendo que um grupo recebeu a ribavirina e outro a associação da ribavirina e o DMSO, sem distinção de sexo e raça, com idades até seis anos e tempo de evolução máximo de 10 dias. Todos os animais foram avaliados clinicamente e realizado o teste de imunofluorescência direta de sangue para inclusão no estudo. Os exames complementares foram realizados de forma rotineira, o líquor foi colhido antes e após o tratamento, as drogas foram administradas durante 15 dias consecutivos e realizada a avaliação clínica diária dos animais. Pelos resultados observamos que a ribavirina demonstrou atividade efetiva contra o vírus da cinomose, exercendo leves efeitos colaterais na medula óssea, sistema imune e sistema gastro-intestinal. No líquor observamos diminuição da produção de anticorpos e verificamos que o DMSO tornou a ação da ribavirina mais eficaz. / This study aimed to test the ribavirin efficacy in dogs infected with canine distemper virus in neurological stage; to evaluate this collateral effects by hematological and biochemical evaluation; to evaluate the immunological response on dogs central nervous system (CNS) by cerebrospinal fluid (CSF) analysis; to adapt a dose and an adequate administration route of ribavirin in dogs and to test the efficacy of dimethylsulphoxide (DMSO) in increasing the permeability of biological membranes acting as ribavirin vector. Twenty dogs with neurological signs, divided in two treatment groups, without sex and breed distinction, till six years old and a maximum evolution time of 10 days were used. All animals were selected based on clinical sings and the blood direct fluorescent test (DFA). The hemogram, biochemical and urinalsis test were carried out. At the complementary tests, CSF was collected before and after the treatment, and ribavirin and its association with DMSO were administered during 15 days, consecutive, and the animal clinical evaluation was carried out daily. Based on the results, ribavirin demonstrated effective activity against canine distemper virus, besides its light collateral effects in bone marrow, immune and gastrointestinal systems. In CSF, the lowering of antibody production, and the positive effects of DMSO on ribavirin efficacy were observed.

Orientador: João Pessoa Araújo Junior / Banca: Paulo Eduardo Brandão / Banca: Alexandre Secorum Borges / Resumo: A cinomose e a parvovirose canina são duas enfermidades infecto-contagiosas de grande importância para a clínica de pequenos animais onde a PCR vem sendo aplicada com ótimos resultados no diagnóstico. No entanto, para o sucesso da técnica, é necessário que o ácido nucléico esteja o mais puro possível e livre de inibidores das polimerases (Transcriptase reversa e/ou Taq DNA polimerase), desejando-se um método de extração simples e rápido. O teste de coaglutinação utilizando o Staphylococcus aureus (COA) é baseado na propriedade da proteína A de se ligar especificamente à porção Fc da imunoglobulina G de alguns mamíferos e algumas subclasses de IgG de camundongos. Assim, neste trabalho utilizou-se a coglutinação para obtenção de DNA ou RNA livres de inibidores, com capacidade de concentração de partículas virais dispersas nas amostras biológicas e de forma simples, rápida e de baixo custo. Para tanto, 10 amostras de fezes positivas para o vírus da parvovirose canina e 17 amostras de urina positivas para o vírus da cinomose foram submetidas à extração de ácidos nucléicos utilizando o COA e kits comerciais para posteriormente serem analisadas pela PCR em tempo real e PCR convencional respectivamente. As amostras de fezes foram diluídas de 1: 10 a 1: 100 000 e as amostras de urina foram utilizadas puras. A metodologia desenvolvida foi eficiente na extração dos dois tipos de amostra. O método proposto demonstrou ser confiável e de baixo custo para a preparação de DNA e RNA viral para o diagnóstico molecular. / Abstract: PCR presents excellent results for the diagnosis of canine distemper and canine parvoviruses, two important infectious and contagious diseases for small animal internal medicine. However, success of technique depends on nucleic acid samples free of polymerase inhibitors (Reverse Transcriptase and / or Taq DNA polymerase). The coagglutination test using Staphylococcus aureus (COA) is based on the property of specific binding of protein A to the Fc portion of immunoglobulin G of some mammals and some of IgG subclasses of mice. This work was carried out the coagglutination procedure to obtain nucleic acid inhibitors free, with capacity for viral particle concentration dispersed in biological samples, simply, quickly and low cost. For this purpose, 10 canine parvovirus positive stool samples and 17 canine distemper virus positive urine samples were submitted to the preparation of nucleic acids using the COA and commercial kits in order to be analyzed by real-time PCR or conventional PCR respectively. Fecal specimens were diluted from 1: 10 to 1: 100 000 and urine samples were used pure. The developed methodology was efficient in extracting the two types of sample. The method proposed demonstrated to be reliable and cheap to prepare viral DNA or RNA for molecular diagnosis. / Mestre

Orientador: Clarice Weis Arns / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-23T15:29:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rosa_GislaineNonino_M.pdf: 911936 bytes, checksum: 7194af83e7f30e4bcab42d6488202031 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: A cinomose canina tem sido relatada como uma das mais importantes doenças infecto contagiosas dos canídeos selvagens e domésticos. É causada por um agente viral denominado vírus da cinomose canina (CDV). Os vírus pertencem à família Paramyxoviridae , gênero Morbillivirus. São vírus envelopados, com genoma composto por uma fita simples de RNA, polaridade negativa, não segmentado. Alto grau de variabilidade genética no gene da hemaglutinina ( H) tem sido encontrada entre estirpes virais recentes e vacinais, e estas variações podem estar relacionadas ao aumento da ocorrência global da cinomose. No presente estudo, amostras biológicas de cães com sintomatologia sugestiva da cinomose foram analisadas geneticamente. Para a detecção de um fragmento de 882 pb do gene H do CDV padronizou-se uma RT-PCR que mostrou-se capaz de amplificar o material genético viral em amostras de urina, líquido céfalo-raquidiano, sistema nervoso central (SNC), baço , pulmão , fígado , rins, linfonodos, bexiga e timo. As amostras positivas de acordo com a RT-PCR foram encaminhadas para o sequenciamento e análise filogenética. Os resultados encontrados sugerem que estas amostras assemelham-se geneticamente aos vírus agrupados nas linhagens Européia e Ásia-1. A estirpe vacinal Lederle, utilizada como padrão, foi agrupada junto a linhagem América-1 onde encontram-se todas as estirpes vacinais , também conhecidas como "Old CDVs" . Os achados deste trabalho apontam para a ocorrência de estirpes geneticamente distintas daquelas utilizadas na produção de vacinas e mais estudos são necessários para a avaliação da eficácia das vacinas disponíveis, propiciando um melhor controle da doença / Abstract: Canine distemper has been reported as one of the most important infectious diseases of wild and domestic canids. It is caused by a viral agent called canine distemper virus (CDV). Viruses belonging to the family Paramyxoviridae, genus Morbillivirus. They are enveloped viruses with genome composed of a single strand of RNA, negative polarity, not segmented. High degree of genetic variability in the gene for hemagglutinin (H) has been found between recent viral strains and vaccination strains, and these variations may be related to increased overall occurrence distemper. In this study, biological samples from dogs with symptoms suggestive of distemper were analyzed genetically. For the detection of a 882 base pairs (bp) fragment of the gene of CDV H was standardized a RT-PCR wich proved to be capable of amplifying the viral genetic material in urine, cerebrospinal fluid, central nervous system (CNS), spleen , lungs, liver, kidneys, lymph nodes, bladder and thymus. Positive samples according to RT-PCR were sent for sequencing and phylogenetic analysis. The results suggest that these samples are similar to viruses genetically clustered lineages in European and Asia-1. The Lederle vaccine strain, used as standard, was grouped with Latin-1 lineages which are all vaccine strains, also known as "old CDVs." The findings of this study point to the occurrence of genetically distinct strains from those used in vaccine production and more studies are needed to assess the efficacy of vaccines available, providing better control of the disease / Mestrado / Microbiologia / Mestra em Genética e Biologia Molecular

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / El Distemper Canino es una enfermedad altamente prevalente, de distribución mundial y que presenta una variada pero alta morbilidad y mortalidad. El agente causal es el Virus Distemper Canino (VDC), el cual posee un amplio rango de hospederos donde es patogénico, entre ellos algunos primates, cetáceos y numerosas familias del orden de los carnívoros. Presenta un alto tropismo por tejido linfoide, neurológico y epitelial, conduciendo a una infección de casi todos los sistemas orgánicos, por lo que los signos clínicos observados son muy variados. El diagnóstico se realiza en base a la sospecha clínica, la que debe ser confirmada por un método diagnóstico de laboratorio, como la técnica molecular denominada Reacción en Cadena de la Polimerasa previa Transcripción Reversa (RT-PCR), la cual ha sido utilizada además para caracterizar las cepas virales en base al análisis del gen H. Este análisis ha determinado la presencia de 14 linajes circulantes en el mundo, dos de los cuales se han descrito en Chile, correspondientes a los linajes América-1 y Europa-1/Sudamérica-1. El objetivo de este trabajo fue implementar un protocolo de RT-PCR múltiple, diseñando partidores in silico en base a las secuencias nucleotídicas almacenadas en la base de datos Genbank®, el cual fuera capaz de detectar los dos linajes descritos en Chile de manera diferencial, con el fin de aportar una herramienta diagnóstica de apoyo para estudios epidemiológicos y en un futuro cercano conocer la prevalencia de estos linajes en el país. Los resultados obtenidos sugieren que los partidores diseñados para cada linaje son específicos. Además de indicar que el protocolo establecido fue exitoso, las muestras analizadas corresponderían en su totalidad al linaje América-1, permitiendo en un futuro, seguir analizando muestras positivas al VDC, para conocer la prevalencia real de ambos linajes en el país. / The Canine Distemper is a highly prevalent disease, of worldwide distribution and has a variable but high morbidity and mortality. The causative agent is the Canine Distemper Virus (CDV), which has a wide host range where it is pathogenic, among them some primates, cetaceans and numerous families of the order of carnivores. It presents a high tropism for lymphoid, neurological and epithelial tissue, leading to an infection of almost all organic systems, so the clinical signs observed are very varied. The diagnosis is made based on clinical suspicion, which must be confirmed by a laboratory diagnostic method, where the molecular technique called Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction (RT-PCR), which has also been used to characterize viral strains based on the analysis of the H gene, which has determined the presence of 14 circulating lineages in the world, two of them have been described in Chile, corresponding to the America-1 and Europe-1/South America-1 lineages. The objective of this work was to implement a multiple RT-PCR protocol, designing in silico primers based on the nucleotide sequences stored in the Genbank® database, which was capable of detecting the two lineages described in Chile in a differential way, to provide a support diagnostic tool for epidemiological studies and in near future to know the prevalence of these lineages in the country. The results obtained suggest that the primers designed for each lineage are selective against these. In addition to indicating that the established protocol was successful, observing that all the samples analyzed corresponded to the America-1 lineage, allowing in the future to keep analyzing positive samples to CDV, in order to know the prevalence of both lineages in Chile.

No abstract / Dissertation (DVSc)--University of Pretoria, 1953. / Companion Animal Clinical Studies / DVSc / Unrestricted

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