Apyrases (NTP-diphosphohydrolases, EC 3.6.1.5) are a family of enzymes that catalyze the hydrolysis of phosphoanhydride bonds of nucleoside tri- and di- phosphates in the presence of divalent cations. In Arabidopsis, AtAPY1 and AtAPY2 function in part as ectoapyrases and have been shown to play important roles in controlling the concentration of extracellular nucleotides, which, in turn, can regulate pollen germination and growth, and cell expansion in diverse plant tissues. We used an NCBI nucleotide blast keyed to Apyrase Conserved Regions (ACRs) to identify five other AtAPYs (3-7). To assess the biological function of each of these five AtAPY genes, the phenotypes of their T-DNA insertion mutants were analyzed. We did not observe any obvious phenotypes from the T-DNA insertion single knockout of any of these genes. However, double knockout mutants of AtAPY6 and 7 exhibited late anther dehiscence and low male fertility. Transmission and scanning electron microscopy revealed that the pollen grains of double knockout mutant of AtAPY6 and 7 are largely deformed in shape and in most cases, the cell walls of the pollen grains are interconnected. Using an AtAPY6-YFP fusion protein in transgenic Arabidopsis, AtAPY6 was localized to intracellular vesicles. Quantitative reverse transcription polymerase chain reaction (qRT-PCR) assays and promoter:GUS fusion analysis demonstrated that the transcripts of both AtAPY6 and 7 are expressed in mature pollen grains, AtAPY6 is also expressed in the veins and hydathode regions of rosette leaves, and AtAPY7 is expressed in more diverse tissues such as roots, leaves, stems, pistils and sepals. The tissue specificity of AtAPYs 3, 4 and 5 expression was also determined using qRT-PCR assays and promoter:GUS fusion analysis. AtAPY3 and AtAPY4 were primarily expressed in roots but not in rosette leaves. AtAPY5 was expressed primarily in rosette leaves but only weakly in roots. AtAPY5 and AtAPY7 were upregulated when the rosette leaves are wounded or exposed to drought stress. RNA interference (RNAi) was performed to simultaneously suppress the gene expression of AtAPYs 3, 4, 5 to around 10% of that of the wild type. However, we did not observe any obviously altered phenotypes in the RNAi lines. The suppression of AtAPYs 3, 4, 5 by RNAi in the background of AtAPY6 single knockout did not cause any phenotype either. A possible explanation for this lack of phenotype in the RNAi lines is that functional redundancy exists between AtAPYs 3-5 and AtAPYs 1-2 and/or AtAPYs 6-7. / text

Introduction: The procedure of longitudinal median sternotomy is the most commonly used approach in cardiac surgery with the necessary complex postoperative treatment. A multifactorial approach is particularly important to prevent later complications, which can be very serious or fatal. The theoretical part of the thesis is not just about the risk factors that may interfere with the healing process but also about nutritional measures that could reduce the risk or completely prevent the profound dehiscence of the sternotomic wound. Methodology: The research method consisted of a retrospective analysis of the risk factors of deep sternal dehiscence in 22 patients who underwent cardiac surgery using the technique of longitudinal median sternotomy over a ten-year interval. 11 patients with sternal healing disorder were selected and included in group 1. Subsequently, an additional 11 patients were selected without sternal dehiscence. These patients were selected in such a way that their characteristics corresponded to the characteristics of patients of the first group in terms of statistical evaluation and comparison of both groups (type of exercise, length of operation, use of extracorporeal circulation, LIMA / BIMA, etc.). In the selection of patients in the control group 2, the laboratory nutrition...

Anther dehiscence is an important process taking place at the end of the plant life cycle. This process consists of various follow-up steps which result in anther opening and pollen grains exposure. Good timing of the anther dehiscence must be synchronized with pollen grains maturation and flower opening. Atmospheric precipitation is a high-risk factor for the anther dehiscence. Male fitness of plants can be reduced when anthers open during poor weather conditions. The aim of this study was to investigate the effect of atmospheric precipitation, rain and dew, on Arabidopsis arenosa anther dehiscence. We observed that rain and dew led to a postponed final stage of the anther dehiscence. This caused delayed pollen release. The effect of aqueous and nonaqueous environment on the anther dehiscence was also tested. Experiments with transformation of A. arenosa using Agrobacterium tumefaciens were performed. Key words: anther dehiscence, flower opening, rain, dew, Arabidopsis arenosa, Agrobacterium tumefaciens, transformation

Traumatismo em dentes decíduos pode causar sequelas tanto na dentição decídua como permanente. Em dentes decíduos, uma destas sequelas é a alveólise. Este estudo teve como objetivos: adequar a definição do termo alveólise e sugerir sua classificação em incisivos decíduos traumatizados; verificar sua ocorrência no Centro de Pesquisa e Atendimento de Traumatismo em Dentes Decíduos da Disciplina de Odontopediatria da FOUSP e fazer análise descritiva dos tipos de alveólise com as variáveis relacionadas a criança, ao trauma e ao dente. Um examinador avaliou 2516 prontuários (fichas, radiografias e fotografias) e selecionou 64 casos. Após critérios de inclusão e exclusão, foram analisados 61 prontuários apresentando 73 incisivos superiores decíduos com alveólise. A ocorrência de alveólise foi de 2,4%, sendo 43,8% das crianças entre 4,1 a 5 anos de idade e 63% do sexo masculino. O dente mais afetado foi o incisivo central superior decíduo (89%). Após a classificação de alveólise, verificou-se ocorrência de 9,6% dos dentes com fenestração apical, 19,2% com deiscência total e 71,2% com deiscência parcial. A média de tempo decorrido entre o trauma e o diagnóstico de alveólise foi de 15 meses para fenestração apical, 23,5 meses para deiscência total e 7,5 meses para deiscência parcial. A oclusão em 57,5% das crianças no diagnóstico era normal. O traumatismo periodontal ocorreu em 86,3% dos dentes, sendo que os traumatismos do tipo luxação e luxação lateral foram os mais encontrados em: 42,8% dos dentes com fenestração apical, 35,7% com deiscência total e 57,7% com deiscência parcial. O traumatismo de alta severidade ocorreu na maioria dos dentes com alveólise (82,2%). Clinicamente, 71,2% dos dentes apresentaram padrão angular e 8,2% padrão linear. Em 21,9% dos dentes observou-se perda óssea proximal. Em 89% dos dentes não ocorreu lesões de cárie e 87,7% não tiveram trauma de repetição. O tratamento endodôntico prévio não foi realizado em 94,5% dos dentes. A necrose pulpar foi observada em todos os casos de fenestração apical e em 92,9% dos casos de deiscência total. Em 76,9% dos casos de deiscência parcial não observouse necrose. Todos os dentes com fenestração apical e 85,7% dentes com deiscência total foram extraídos. Nos casos de deiscência parcial, quase metade dos dentes (44,2%) foram acompanhados. Neste estudo, a alveólise em incisivos decíduos foi definida como patologia ósseo-gengival, caracterizada pela exposição da porção apical e/ou vestibular da raiz do decíduo na cavidade bucal, devido a reabsorção da tábua óssea vestibular, com ou sem envolvimento do osso alveolar marginal, causada por infecção periapical e/ou periodontal originada por cárie, traumatismo dentário ou pela pressão do dente no osso alveolar no momento do trauma. Alveólise pode ser classificada: fenestração apical e deiscência total ou parcial. Clinicamente pode apresentar padrões tipo linear ou angular (mesial, vestibular, distal). Radiograficamente, a perda óssea proximal pode ser classificada em horizontal ou vertical. Alveólise é uma sequela de baixa ocorrência, e o tratamento de escolha para fenestração apical e deiscência total é a exodontia e para deiscência parcial pode ser o acompanhamento clínico e radiográfico ou exodontia, dependendo da gravidade do caso. / Dental trauma in primary teeth may cause sequelae in both primary and permanent dentition. One sequelae in primary teeth is alveolysis. This study aimed: to adjust the definition of alveolysis and to suggest its classification in traumatized primary incisors; to verify its occurrence at the Center of Research and Treatment of Dental Trauma in Primary Teeth of the School of Dentistry of the University of Sao Paulo and to do a descriptive analysis of the variables child, trauma and tooth related to the types of alveolysis. One examiner evaluated 2516 charts (records, radiographs and photographs) and found 64 eligible cases. After inclusion and exclusion criteria, 61 records were analyzed. Alveolysis was found in 73 upper primary incisors. Its occurrence was 2.4% and it was mostly present in male (63%) and children aged between 4.1 to 5 years (43.8%). The primary upper central incisor was the most affected tooth (89%). After classification of alveolysis, the evaluated teeth presented: apical fenestration (9.6%), total dehiscence (19.2%) and partial dehiscence (71.2%). The meantime between trauma and diagnosis of alveolysis was 15 months for apical fenestration, 23.5 months for total dehiscence and 7.5 months for partial dehiscence. The occlusion at diagnosis was normal in 57.5% of the cases. Periodontal trauma occurred in 86.3% of teeth; luxation and lateral luxation were found in 42.8% of teeth with apical fenestration, 35.7% of teeth with complete dehiscence and 57,7% of teeth with partial dehiscence. Trauma severity was high in mostly teeth (82.2%). Clinically, it was found that 71.2% of the teeth presented angular pattern and 8.2% of the teeth presented linear pattern. Proximal bone loss was observed in 21.9% of teeth. We observed that 89% of the teeth did not presented caries and 87.7% of the teeth did not repeated trauma. The previous endodontic treatment was performed in 94.5% of the teeth. Pulp necrosis was observed in all cases of apical fenestration and in 92.9% of the cases of total dehiscence; 76.9% of the cases of partial dehiscence, pulp necrosis was not observed. All teeth with apical fenestration and 85.7% of the teeth with total dehiscence were extracted. In cases related to partial dehiscence, almost half of the teeth (44.2%) were followed up. In this study, alveolysis in primary incisors was defined as a bone-gingival pathology characterized by the exposure of the apical and/or buccal root portion in the oral cavity. The root exposure is due to the bone resorption of the buccal bone plate with or without marginal alveolar bone involvement. This resorption is caused by periapical and/or periodontal infection caused by tooth decay, dental trauma or pressure of the alveolar bone at the time of dental trauma. Alveolysis can be classified into: apical fenestration and total/partial dehiscence. Clinically, patterns such as linear or angular (mesial, buccal, distal) may be observed. Radiographically, the proximal bone loss may be classified in horizontal or vertical. Alveolysis has low incidence and the chosen treatment for apical fenestration and total dehiscence is the tooth extraction, and for partial dehiscence, the treatment can be clinical/radiographic monitoring and extraction, which depends on the case severity.

Dehiscence or wound spacing is characterized by failure of wound healing and it is a very serious postoperative complication that occurs most frequently in patients who suffer from an associated disease. It usually develops between the fifth and ninth postoperative day. The cause of dehiscence is an infection in the wound, which is caused by proliferation of bacterial strains. The thesis on "Cardiac surgery patient with surgical wound dehiscence{\crqq} is focused on theoretical and practical parts. The theoretical part deals with the development of cardiac surgery and important personalities, medical indications for a cardiac surgery, cardiac surgery, surgical wound healing, surgical wound complications and nursing care of patients with dehiscence. The practical part was carried out by a quality - quantitative survey. The research sample for the qualitative research, which was conducted by the semi-structured interview technique with open questions, consisted of four cardiac surgery patients with wound dehiscence. The research sample for the quantitative research, which was carried out through anonymous questionnaires, consisted of 100 nurses working in cardiac surgery centers, Czech Republic, and 30 cardiac surgery patients with wound dehiscence. The results were processed into tables, graphs and diagrams. This work may serve as a resource for the interpretation of the subject matter or as a source of information for Cardiac Surgery Centers to improve the needs satisfaction in patients with wound dehiscence.

Traumatismo em dentes decíduos pode causar sequelas tanto na dentição decídua como permanente. Em dentes decíduos, uma destas sequelas é a alveólise. Este estudo teve como objetivos: adequar a definição do termo alveólise e sugerir sua classificação em incisivos decíduos traumatizados; verificar sua ocorrência no Centro de Pesquisa e Atendimento de Traumatismo em Dentes Decíduos da Disciplina de Odontopediatria da FOUSP e fazer análise descritiva dos tipos de alveólise com as variáveis relacionadas a criança, ao trauma e ao dente. Um examinador avaliou 2516 prontuários (fichas, radiografias e fotografias) e selecionou 64 casos. Após critérios de inclusão e exclusão, foram analisados 61 prontuários apresentando 73 incisivos superiores decíduos com alveólise. A ocorrência de alveólise foi de 2,4%, sendo 43,8% das crianças entre 4,1 a 5 anos de idade e 63% do sexo masculino. O dente mais afetado foi o incisivo central superior decíduo (89%). Após a classificação de alveólise, verificou-se ocorrência de 9,6% dos dentes com fenestração apical, 19,2% com deiscência total e 71,2% com deiscência parcial. A média de tempo decorrido entre o trauma e o diagnóstico de alveólise foi de 15 meses para fenestração apical, 23,5 meses para deiscência total e 7,5 meses para deiscência parcial. A oclusão em 57,5% das crianças no diagnóstico era normal. O traumatismo periodontal ocorreu em 86,3% dos dentes, sendo que os traumatismos do tipo luxação e luxação lateral foram os mais encontrados em: 42,8% dos dentes com fenestração apical, 35,7% com deiscência total e 57,7% com deiscência parcial. O traumatismo de alta severidade ocorreu na maioria dos dentes com alveólise (82,2%). Clinicamente, 71,2% dos dentes apresentaram padrão angular e 8,2% padrão linear. Em 21,9% dos dentes observou-se perda óssea proximal. Em 89% dos dentes não ocorreu lesões de cárie e 87,7% não tiveram trauma de repetição. O tratamento endodôntico prévio não foi realizado em 94,5% dos dentes. A necrose pulpar foi observada em todos os casos de fenestração apical e em 92,9% dos casos de deiscência total. Em 76,9% dos casos de deiscência parcial não observouse necrose. Todos os dentes com fenestração apical e 85,7% dentes com deiscência total foram extraídos. Nos casos de deiscência parcial, quase metade dos dentes (44,2%) foram acompanhados. Neste estudo, a alveólise em incisivos decíduos foi definida como patologia ósseo-gengival, caracterizada pela exposição da porção apical e/ou vestibular da raiz do decíduo na cavidade bucal, devido a reabsorção da tábua óssea vestibular, com ou sem envolvimento do osso alveolar marginal, causada por infecção periapical e/ou periodontal originada por cárie, traumatismo dentário ou pela pressão do dente no osso alveolar no momento do trauma. Alveólise pode ser classificada: fenestração apical e deiscência total ou parcial. Clinicamente pode apresentar padrões tipo linear ou angular (mesial, vestibular, distal). Radiograficamente, a perda óssea proximal pode ser classificada em horizontal ou vertical. Alveólise é uma sequela de baixa ocorrência, e o tratamento de escolha para fenestração apical e deiscência total é a exodontia e para deiscência parcial pode ser o acompanhamento clínico e radiográfico ou exodontia, dependendo da gravidade do caso. / Dental trauma in primary teeth may cause sequelae in both primary and permanent dentition. One sequelae in primary teeth is alveolysis. This study aimed: to adjust the definition of alveolysis and to suggest its classification in traumatized primary incisors; to verify its occurrence at the Center of Research and Treatment of Dental Trauma in Primary Teeth of the School of Dentistry of the University of Sao Paulo and to do a descriptive analysis of the variables child, trauma and tooth related to the types of alveolysis. One examiner evaluated 2516 charts (records, radiographs and photographs) and found 64 eligible cases. After inclusion and exclusion criteria, 61 records were analyzed. Alveolysis was found in 73 upper primary incisors. Its occurrence was 2.4% and it was mostly present in male (63%) and children aged between 4.1 to 5 years (43.8%). The primary upper central incisor was the most affected tooth (89%). After classification of alveolysis, the evaluated teeth presented: apical fenestration (9.6%), total dehiscence (19.2%) and partial dehiscence (71.2%). The meantime between trauma and diagnosis of alveolysis was 15 months for apical fenestration, 23.5 months for total dehiscence and 7.5 months for partial dehiscence. The occlusion at diagnosis was normal in 57.5% of the cases. Periodontal trauma occurred in 86.3% of teeth; luxation and lateral luxation were found in 42.8% of teeth with apical fenestration, 35.7% of teeth with complete dehiscence and 57,7% of teeth with partial dehiscence. Trauma severity was high in mostly teeth (82.2%). Clinically, it was found that 71.2% of the teeth presented angular pattern and 8.2% of the teeth presented linear pattern. Proximal bone loss was observed in 21.9% of teeth. We observed that 89% of the teeth did not presented caries and 87.7% of the teeth did not repeated trauma. The previous endodontic treatment was performed in 94.5% of the teeth. Pulp necrosis was observed in all cases of apical fenestration and in 92.9% of the cases of total dehiscence; 76.9% of the cases of partial dehiscence, pulp necrosis was not observed. All teeth with apical fenestration and 85.7% of the teeth with total dehiscence were extracted. In cases related to partial dehiscence, almost half of the teeth (44.2%) were followed up. In this study, alveolysis in primary incisors was defined as a bone-gingival pathology characterized by the exposure of the apical and/or buccal root portion in the oral cavity. The root exposure is due to the bone resorption of the buccal bone plate with or without marginal alveolar bone involvement. This resorption is caused by periapical and/or periodontal infection caused by tooth decay, dental trauma or pressure of the alveolar bone at the time of dental trauma. Alveolysis can be classified into: apical fenestration and total/partial dehiscence. Clinically, patterns such as linear or angular (mesial, buccal, distal) may be observed. Radiographically, the proximal bone loss may be classified in horizontal or vertical. Alveolysis has low incidence and the chosen treatment for apical fenestration and total dehiscence is the tooth extraction, and for partial dehiscence, the treatment can be clinical/radiographic monitoring and extraction, which depends on the case severity.

Objetivo: Identificar a frequência das fístulas após a palatoplastia primária dos pacientes com fissura transforame unilateral do Estudo Clínico Randomizado (ECR) - Projeto Flórida (PF), de acordo com dados registrados pelos profissionais de Cirurgia plástica (CP) e Fonoaudiologia (FGA); descrever a terminologia utilizada pelos profissionais ao reportar a localização das fístulas e descrever o tamanho, a sintomatologia e o gerenciamento destas complicações; e verificar a concordância entre as áreas da CP e FGA quanto às informações sobre presença e localização das fístulas em relação ao forame incisivo (pré ou pós-forame incisivo). Métodos: Foram analisados 466 prontuários de pacientes com fissura transforame unilateral não sindrômica e operada. Os dados quanto a presença de fístula, a localização, o tamanho e a sintomatologia, foram compilados e analisados, de modo descritivo, em duas janelas de tempo. O primeiro tempo abrangeu todos os registros datados até três anos após a realização da palatoplastia primária e o segundo tempo abrangeu os registros durante e após a expansão rápida da maxila (ERM). Comparou-se os achados com uma classificação Padrão Ouro das fístulas no ECR-PF, verificando o nível de concordância entre as informações registradas pela CP e FGA (Estatística Kappa). Resultados: A área da CP reportou um total de 117 (25,1%) fístulas, enquanto a FGA reportou 171 (36,7%), comparados às 164 (35,2%) fístulas identificadas na classificação Padrão Ouro. Combinando as duas áreas, obteve-se um total de 184 (39,5%) casos de fístulas, sendo que 104 (56,5%) foram registradas por ambas as áreas, 67 (36,4%) foram identificadas apenas nas documentações da FGA e 13 (7,1%) somente nos registros da CP. Quanto ao tamanho, dos 104 casos com esta informação, a maioria foi classificada como fístula de tamanho pequeno (N=50; 48%). A sintomatologia mais reportada nos 184 casos foi o refluxo nasal de alimentos em 125 (68%), seguido do escape de ar nasal em 62 (33,6%) e hipernasalidade em 56 (30,4%). Durante a análise do segundo tempo deste estudo (ERM), observou-se um total de 50 (14%) casos de fístulas em 359 pacientes que realizaram esse tratamento ortopédico, sendo que 39 (78%) destas fístulas foram localizadas em região pré-forame incisivo. Quanto ao tamanho, a maioria foi classificada como fístula de tamanho pequeno (N=25; 50%) e a sintomatologia mais encontrada foi o escape de ar nasal em 29 (58%). Tanto no primeiro, quanto no segundo tempo de análise, observou-se o uso de terminologia variada entre as duas áreas, aspecto este que dificultou a classificação da localização das fístulas em relação forame incisivo. Obteve-se uma concordância moderada entre a classificação Padrão Ouro e os dados reportados no prontuário pelo CP (Kappa = 0,32) e uma concordância substancial entre a classificação Padrão Ouro e os dados reportados no prontuário pela FGA (Kappa = 0,63). Conclusão: Com base no levantamento dos registros cirúrgicos e fonoaudiológicos, os dados encontrados indicaram uma concordância moderada e substancial entre as áreas em relação ao Padrão Ouro. Dessa forma, fica claro a necessidade de se estabelecer e validar um protocolo para a utilização em rotina clínica e multiprofissional. / Purpose: To identify the frequency of fistulas after primary palatoplasty of patients with unilateral cleft lip and palate at a Randomized Clinical Trial (RCT) - Florida Project (FP), according to the data registered in patients records by the areas of Plastic surgery (PS) and Speech-language pathology (SLP); to describe the terminology used by this professionals to record the location of the fistulas, as well as to describe the size, symptoms and management of these complications; and to verify the agreement between the areas of PS and SLP regarding the presence and location of fistula in relation with the incisive foramen (pre- or post-foramen). Methods: A total of 466 medical records of patients with unilateral, nonsyndromic and operated cleft lip and palate were analyzed. The data about presence of fistula, location, size and symptoms, were compiled and analyzed descriptively considering two time-windows regarding the primary palatoplasty. The first window included all data registered up to three years after the primary palatoplasty, and the second window included data registered during and after rapid maxillary expansion (RME). The findings were compared to a Gold Standard classification of fistula from the RCT, with the verification of the level of agreement (Kappa Statistics) between the information recorded by the two areas. Results: A total of 117 (25,1%) fistulas were reported by the PS while 171 (36,7%) were reported by the SLP area compared to 164 (35,2%) fistulas identified with the RCT-Gold Standard classification. A total of 184 (39,5%) cases of fistula was indicated, and 104 (56,5%) were recorded in both areas, 67 (36,4%) were recorded only in the SP and 13 (7,1%) were identified only in CP records. Considering the 104 cases with information regarding fistula size, most were classified as small (N=50, 48%). The most common symptom reported for the 184 cases with fistula was nasal regurgitation in 125 cases (68%), followed by nasal air escape in 62 (33,6%) and hypernasality in 56 (30,4%). A total of 50 (14%) fistulas were identified for the 359 patients who received rapid maxillary expansion (RME), and 39 (78,0%) fistulas were located prior to the incisive foramen. The most of fistulas were classified as small (N=25, 50%) and the most common symptom reported was nasal air escape in 29 cases (58%). On the first and second time-window, a large variation was found regarding terminology used by both areas to refer to fistula, making it very difficult to classify the location regarding to the incisive foramen. The agreement between the Gold Standard classification of fistula and the findings reported by the PS was moderate (Kappa = 0,32) while it was substantial for the SLP (Kappa = 0,63). Conclusion: Based on the survey of surgical and speech records, the data found indicated a moderate and substantial agreement between the findings regarding fistula occurrence reported by the areas of PS and SLP when compared to the Gold Standard classification for the RCT-FP. Thereby, it is clear the need to establish and validate a protocol for use in clinical and multidisciplinary routine.

Objetivo: Identificar a frequência das fístulas após a palatoplastia primária dos pacientes com fissura transforame unilateral do Estudo Clínico Randomizado (ECR) - Projeto Flórida (PF), de acordo com dados registrados pelos profissionais de Cirurgia plástica (CP) e Fonoaudiologia (FGA); descrever a terminologia utilizada pelos profissionais ao reportar a localização das fístulas e descrever o tamanho, a sintomatologia e o gerenciamento destas complicações; e verificar a concordância entre as áreas da CP e FGA quanto às informações sobre presença e localização das fístulas em relação ao forame incisivo (pré ou pós-forame incisivo). Métodos: Foram analisados 466 prontuários de pacientes com fissura transforame unilateral não sindrômica e operada. Os dados quanto a presença de fístula, a localização, o tamanho e a sintomatologia, foram compilados e analisados, de modo descritivo, em duas janelas de tempo. O primeiro tempo abrangeu todos os registros datados até três anos após a realização da palatoplastia primária e o segundo tempo abrangeu os registros durante e após a expansão rápida da maxila (ERM). Comparou-se os achados com uma classificação Padrão Ouro das fístulas no ECR-PF, verificando o nível de concordância entre as informações registradas pela CP e FGA (Estatística Kappa). Resultados: A área da CP reportou um total de 117 (25,1%) fístulas, enquanto a FGA reportou 171 (36,7%), comparados às 164 (35,2%) fístulas identificadas na classificação Padrão Ouro. Combinando as duas áreas, obteve-se um total de 184 (39,5%) casos de fístulas, sendo que 104 (56,5%) foram registradas por ambas as áreas, 67 (36,4%) foram identificadas apenas nas documentações da FGA e 13 (7,1%) somente nos registros da CP. Quanto ao tamanho, dos 104 casos com esta informação, a maioria foi classificada como fístula de tamanho pequeno (N=50; 48%). A sintomatologia mais reportada nos 184 casos foi o refluxo nasal de alimentos em 125 (68%), seguido do escape de ar nasal em 62 (33,6%) e hipernasalidade em 56 (30,4%). Durante a análise do segundo tempo deste estudo (ERM), observou-se um total de 50 (14%) casos de fístulas em 359 pacientes que realizaram esse tratamento ortopédico, sendo que 39 (78%) destas fístulas foram localizadas em região pré-forame incisivo. Quanto ao tamanho, a maioria foi classificada como fístula de tamanho pequeno (N=25; 50%) e a sintomatologia mais encontrada foi o escape de ar nasal em 29 (58%). Tanto no primeiro, quanto no segundo tempo de análise, observou-se o uso de terminologia variada entre as duas áreas, aspecto este que dificultou a classificação da localização das fístulas em relação forame incisivo. Obteve-se uma concordância moderada entre a classificação Padrão Ouro e os dados reportados no prontuário pelo CP (Kappa = 0,32) e uma concordância substancial entre a classificação Padrão Ouro e os dados reportados no prontuário pela FGA (Kappa = 0,63). Conclusão: Com base no levantamento dos registros cirúrgicos e fonoaudiológicos, os dados encontrados indicaram uma concordância moderada e substancial entre as áreas em relação ao Padrão Ouro. Dessa forma, fica claro a necessidade de se estabelecer e validar um protocolo para a utilização em rotina clínica e multiprofissional. / Purpose: To identify the frequency of fistulas after primary palatoplasty of patients with unilateral cleft lip and palate at a Randomized Clinical Trial (RCT) - Florida Project (FP), according to the data registered in patients records by the areas of Plastic surgery (PS) and Speech-language pathology (SLP); to describe the terminology used by this professionals to record the location of the fistulas, as well as to describe the size, symptoms and management of these complications; and to verify the agreement between the areas of PS and SLP regarding the presence and location of fistula in relation with the incisive foramen (pre- or post-foramen). Methods: A total of 466 medical records of patients with unilateral, nonsyndromic and operated cleft lip and palate were analyzed. The data about presence of fistula, location, size and symptoms, were compiled and analyzed descriptively considering two time-windows regarding the primary palatoplasty. The first window included all data registered up to three years after the primary palatoplasty, and the second window included data registered during and after rapid maxillary expansion (RME). The findings were compared to a Gold Standard classification of fistula from the RCT, with the verification of the level of agreement (Kappa Statistics) between the information recorded by the two areas. Results: A total of 117 (25,1%) fistulas were reported by the PS while 171 (36,7%) were reported by the SLP area compared to 164 (35,2%) fistulas identified with the RCT-Gold Standard classification. A total of 184 (39,5%) cases of fistula was indicated, and 104 (56,5%) were recorded in both areas, 67 (36,4%) were recorded only in the SP and 13 (7,1%) were identified only in CP records. Considering the 104 cases with information regarding fistula size, most were classified as small (N=50, 48%). The most common symptom reported for the 184 cases with fistula was nasal regurgitation in 125 cases (68%), followed by nasal air escape in 62 (33,6%) and hypernasality in 56 (30,4%). A total of 50 (14%) fistulas were identified for the 359 patients who received rapid maxillary expansion (RME), and 39 (78,0%) fistulas were located prior to the incisive foramen. The most of fistulas were classified as small (N=25, 50%) and the most common symptom reported was nasal air escape in 29 cases (58%). On the first and second time-window, a large variation was found regarding terminology used by both areas to refer to fistula, making it very difficult to classify the location regarding to the incisive foramen. The agreement between the Gold Standard classification of fistula and the findings reported by the PS was moderate (Kappa = 0,32) while it was substantial for the SLP (Kappa = 0,63). Conclusion: Based on the survey of surgical and speech records, the data found indicated a moderate and substantial agreement between the findings regarding fistula occurrence reported by the areas of PS and SLP when compared to the Gold Standard classification for the RCT-FP. Thereby, it is clear the need to establish and validate a protocol for use in clinical and multidisciplinary routine.

Orientador: Sandra Maria Carmello Guerreiro / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-25T23:22:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Milani_JulianaForesti_D.pdf: 4831941 bytes, checksum: 1e831abd54a3b76f7aa5f9a4b31ca239 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: A morfologia externa e interna dos frutos e sementes de Passifloraceae Juss. ex Roussel é pouco conhecida ou até desconhecida para muitas espécies. Estudos morfoanatômicos de frutos e sementes têm grande importância já que os mesmos exibem pequena plasticidade fenotípica. Neste contexto, este trabalho teve como objetivo elucidar a ontogenia do fruto e da semente de quatro espécies de Passiflora L. subgênero Decaloba (DC.) Rchb. superseção Decaloba (DC.) J.M. Macdougal & Feulliet seção Xerogona (Raf.) Killip que apresentam frutos do tipo cápsula, condição incomum na família. Para tanto, o material vegetal foi coletado e processado segundo técnicas convencionais em microscopia de luz e eletrônica, além da aplicação de técnica específica (TUNEL) para detecção de morte celular programada no estádio de deiscência do fruto. Foram estabelecidos estádios de desenvolvimento para os frutos e as sementes: Estádio I: Ovário e óvulo; Estádio II - fruto e semente em início de desenvolvimento: frequentes divisões celulares; Estádio III - fruto e semente jovens: alongamento celular; Estádio IV - fruto e semente maduros: diferenciação celular e deiscência do fruto. Nos estádios II a IV do fruto, o epicarpo e o endocarpo são uniestratificados e as maiores modificações decorrentes do desenvolvimento do fruto ocorrem no mesocarpo. Ao longo do desenvolvimento aumentam os espaços intercelulares a partir do endocarpo em direção ao epicarpo. Não há a formação de uma linha de deiscência. Os espaços intercelulares ocorrem devido à morte celular programada formando lacunas que acabam por romper o pericarpo. Os testes histoquímicos indicaram a presença de idioblastos contendo compostos fenólicos e proteínas no tecido fundamental do ovário e no mesocarpo. As sementes das espécies estudadas são bitegumentadas. A testa é constituída de duas camadas: exotesta e endotesta. O tégmen é composto por três camadas: exotégmen, mesotégmen e endotégmen. No início do desenvolvimento da semente observou-se o arilo de origem funicular, formado por células parenquimáticas e idioblastos contendo compostos fenólicos e amido. O desenvolvimento dos tegumentos da semente se dá pelo alongamento diferencial das células do exotégmen e da endostesta. Esse processo resulta na ruminação do endosperma. Na semente madura o tegumento externo formará a sarcotesta. Neste estádio, o exotégmen constitui a camada mecânica formada por macroesclereídes em paliçada, representando a esclerotesta. As informações encontradas no presente estudo revelam que as características morfoanatômicas de fruto e semente são bastante conservadas e unificadoras na seção. Diante do exposto, destaca-se a importância de novos estudos abrangendo mais espécies e abordando a evolução de caracteres e a inclusão de outros novos para facilitar a elucidação das relações infragenéricas de Passiflora que tem sido ampliada graças à cooperação de estudos morfoanatômicos e genéticos / Abstract: External and internal morphology of Passifloraceae Juss. ex Roussel fruits and seeds is little known or even unknown for many species. Morphological and anatomical studies of fruits and seeds have great importance since they exhibit little phenotypic plasticity. In this context, this study aimed to elucidate the fruit and seed ontogeny of four species of Passiflora L. Decaloba (DC.) Rchb. subgenus Decaloba (DC.) J.M. Macdougal & Feulliet supersection Xerogona (Raf.) Killip section that present capsule type of fruit, unusual condition in the family. For this, the plant material were collected and processed according to conventional techniques for light and electron microscopy; specific technique (TUNEL) were also applied to detect programmed cell death in the stage of fruit dehiscence. Four developmental stages were established: Stage I: Ovary and ovule; Stage II - fruit and seed in early development: frequent cell divisions; Stage III - young fruit and young seed: cell elongation; Stage IV - mature fruit and mature seed: cell differentiation and fruit dehiscence. In the stages II to IV of the fruit, epicarp and endocarp are unistratified and major changes from the development of the fruit occurs on mesocarp. During the development, the intercellular spaces increase from the endocarp towards the epicarp. There is no line of dehiscence. The intercellular spaces occur due to programmed cell death forming gaps that breaks the pericarp. Histochemical test indicated the presence of phenolic compounds and idioblasts containing proteins in fundamental tissue of ovary and mesocarp. The seeds of all species were bitegmic. The testa consists of two layers: exotesta and endotesta. The tegmen is composed of three layers: exotegmen, mesotegmen and endotegmen. At the beginning of seed development, aryl of funicular origin, formed by parenchyma cells that may containing phenolic compounds and starch, was observed. The development of the integument of the seed occurs by differential cell elongation of exotegmen and endostesta. This process results in a ruminate endosperm. In the mature seed, the outer integument forms the sarcotesta. At this stage, the exotegmen is the mechanical layer formed by macrosclereids in palisade, representing esclerotesta. Information found in this study reveals that morphoanatomical characteristics of fruit and seed are quite conserved and unified in the section. Given that, we highlight the importance of further studies including more species and addressing the evolution of characters and adding new ones to facilitate the elucidation of infrageneric relationships in Passiflora which has been expanded due to the cooperation of morpho-anatomical and genetic studies / Doutorado / Biologia Vegetal / Doutora em Biologia Vegetal

[ES] El éxito de la fertilización en las Angiospermas depende del adecuado y coordinado desarrollo de los diferentes tejidos del gineceo: ovario, estilo y estigma. Los mecanismos moleculares asociados a la correcta formación y desarrollo del gineceo han sido bien estudiados en la especie modelo Arabidopsis thaliana. Diversos genes pertenecientes a múltiples familias de factores de transcripción han sido sugeridos como reguladores indispensables en la correcta formación del estilo y el estigma de las Angiospermas. Entre ellas se encuentran la familia basic Helix Loop Helix, bHLH. Los genes HECATE (HEC) pertenecen al linaje de genes HEC1/2/3/IND. Análisis filogenéticos han revelado que las Angiospermas poseen, al menos, tres copias de genes HEC (HEC1/2/3), mientras que el gen INDEHISCENT (IND) es un parálogo especifico de HEC3 en Brassicaceae; las demás Angiospermas poseen homólogos preduplicación más similares a HEC3 que a IND. Funcionalmente, en Arabidopsis, los genes HEC1/2/3 son redundantes en la correcta formación de gineceo, mientras que IND tiene funciones en la diferenciación de la zona de dehiscencia del fruto. Así, nos propusimos conocer las funciones de los genes HEC, previas a la diversificación de Brassicaceae. Particularmente estudiamos los ortólogos de los genes HEC1/2/3 en Nicotiana benthamiana. En nuestro estudio, los genes NibeHEC1/2 solo se expresan en meristemos vegetativos y hojas, mientras que NibeHEC3 se expresa predominantemente durante el desarrollo de la flor y aumenta su expresión progresivamente hasta la antesis en el tracto de transmisión del estilo, el estigma y las zonas de dehiscencia de anteras y frutos, de un modo similar al que lo hacen conjuntamente los genes HEC1/2/3/IND en Arabidopsis. La caracterización funcional por VIGS y CRISPR-Cas9 nos confirmó que NibeHEC3 está implicado en la elongación de la región estilar y la diferenciación de las papilas estigmáticas. Además, NibeHEC3 es importante en el desarrollo de las anteras y los frutos de Nicotiana benthamiana. En conjunto, los datos reportados más nuestra caracterización funcional sugieren que los genes HEC3, previos al evento de duplicación del linaje HEC3/IND, conservan las funciones ancestrales en el desarrollo de la región más distal del gineceo y la diferenciación de la zona de dehiscencia de frutos, mientras que en Brassicacaceae, luego de la duplicación del linaje HEC3/IND, estas dos funciones parecen haberse subfuncionalizado durante la diversificación de la familia Brassicaceae entre los genes HEC1/2/3 e IND respectivamente. Además, describimos una novedosa función para los genes HEC3 asociada al desarrollo de las anteras en Nicotiana benthamiana, una función con la cual no se había asociado a los genes HEC con anterioridad. Así, el dilucidar detalles adicionales acerca de las funciones de los genes HEC y sugerir como estos interactúan para la formación del gineceo en eudicotiledóneas fuera de Brassicaceae ayudará a proporcionar información sobre diversos aspectos en la evolución y desarrollo del gineceo y del fruto en Angiospermas. / [CA] L'èxit de la fertilització en les Angiospermes depén de l'adequat i coordinat desenvolupament dels diferents teixits del gineceu: ovari, estil i estigma. Els mecanismes moleculars associats a la correcta formació i desenvolupament del gineceu han sigut ben estudiats en l'espècie model Arabidopsis thaliana. Diversos gens pertanyents a múltiples famílies de factors de transcripció han sigut suggerits com a reguladors indispensables en la correcta formació de l'estil i l'estigma de les Angiospermes. Entre elles es troben la família basic Helix Loop Helix, bHLH. Els gens HECATE (HEC) pertanyen al llinatge de gens HEC1/2/3/IND. Anàlisis filogenètiques han revelat que les Angiospermes posseeixen, almenys, tres còpies de gens HEC (HEC1/2/3), mentre que el gen INDEHISCENT (IND) és un paràleg específic d'HEC3 en Brassicaceae; les altres Angiospermes posseeixen homòlegs preduplicació més similar a HEC3 que a IND. Funcionalment, en Arabidopsis, els gens HEC1/2/3 són redundants en la correcta formació de gineceu, mentre que IND té funcions en la diferenciació de la zona de dehiscència del fruit. Així, ens vam proposar conéixer les funcions dels gens HEC, previs a la diversificació de Brassicaceae. Particularment estudiem els ortòlegs dels gens HEC1/2/3 en Nicotiana benthamiana. En el nostre estudi, els gens NibeHEC1/2 només s'expressen en meristemes vegetatius i fulles; mentre que NibeHEC3 s'expressen predominantment durant el desenvolupament de la flor i augmenten la seua expressió progressivament fins a l'antesi; aquests es mantenen expressats en el tracte de transmissió de l'estil, l'estigma i les zones de dehiscència d'anteres i fruits. Igual que ho fan conjuntament els gens HEC1/2/3/IND en Arabidopsis. La caracterització funcional per VIGS i CRISPR-Cas9 ens va confirmar que NibeHEC3 està implicat en l'elongació de la regió estilar i la diferenciació de les papil·les estigmàtiques. A més, NibeHEC3 és important en la diferenciació de les anteres y la zona de dehiscència de fruits de Nicotiana. Així mateix, les variacions detectades entre les seqüències dels ortòlegs del clade HEC3/IND podria explicar els canvis funcionals i els patrons d'expressió diferencials entre les espècies d'angiospermes. En conjunt, les dades reportades més la nostra caracterització funcional suggereixen que els gens HEC3, previs a la duplicació del llinatge HEC3/IND, conserven les funcions ancestrals en el desenvolupament de la regió més distal del gineceu i la diferenciació de la zona de dehiscència de fruits, mentre que en Brassicacaceae, després de la duplicació del llinatge HEC3/IND, aquestes dues funcions semblen haver-se subfuncionalitzat durant la diversificació de la família Brassicaceae entre els gens HEC1/2/3 i IND respectivament. A més, descrivim una nova funció per als gens HEC3 associada a la diferenciació de les anteres en Nicotiana benthamiana, una funció amb la qual no s'havia associat als gens HEC amb anterioritat. Així, el dilucidar detalls addicionals sobre les funcions dels gens els HEC i suggerir com aquests interactuen per a la formació del gineceu en eudicotiledònies fora de Brassicaceae ajudarà a proporcionar informació sobre diversos aspectes en l'evolució i desenvolupament del gineceu i del fruit en Angiospermes. / [EN] Successful fertilization in Angiosperms depends on the proper and coordinated development of the different tissues of the gynoecium: ovary, style and stigma. The molecular mechanisms associated with the correct formation and development of the gynoecium have been well studied in the model species Arabidopsis thaliana. Several genes belonging to multiple families of transcription factors have been suggested as indispensable regulators in the correct formation of the style and stigma in Angiosperms. Among them are the basic Helix Loop Helix family, bHLH. The HECATE (HEC) genes belong to the HEC1/2/3/IND gene lineage. Phylogenetic analyses have revealed that Angiosperms possess at least three copies of HEC genes: HEC1/2/3, whereas the INDEHISCENT (IND) gene is a specific HEC3 paralog in Brassicaceae; the other Angiosperms possess pre-duplication homologs more like to HEC3 than to IND. Functionally, in Arabidopsis, HEC1/2/3 genes are redundant in proper gynoecium formation while IND has functions in the differentiation of the fruit dehiscence zone. Thus, we set out to understand the functions of HEC genes prior to diversification of Brassicaceae In particular, we studied the orthologs of the HEC1/2/3 genes in Nicotiana benthamiana. In our study, NibeHEC1/2 genes are only expressed in vegetative meristems and leaves; while NibeHEC3 genes are predominantly expressed during flower development and increase their expression progressively until anthesis; they remain expressed in the style transmission tract, stigma and dehiscence zones of anthers and fruits. The same is true for the HEC1/2/3/IND genes in Arabidopsis. Functional characterization by VIGS and CRISPR-Cas9 confirmed that NibeHEC3 is involved in the elongation of the stylar region and differentiation of stigmatic papillae. In addition, NibeHEC3 is important in anther development and the differentiation of the dehiscence zone of Nicotiana benthamiana fruits. Taken together, the reported data plus our functional characterization suggest that HEC3 genes, prior to the HEC3/IND lineage duplication event, retain ancestral functions in the development of the most distal region of the gynoecium and the differentiation of the fruit dehiscence zone, whereas in Brassicaceae, after the duplication of the HEC3/IND lineage, these two functions appear to have been sub-functionalized during the diversification of the Brassicaceae family between the HEC1/2/3 and IND genes, respectively. In addition, we describe a novel function for the HEC3 genes associated with anther development in Nicotiana benthamiana, a function not previously reported for the HEC genes. Thus, elucidating additional details about the functions of the HEC genes and suggesting how they interact for gynoecium formation in eudicots outside Brassicaceae will help to provide insights into various aspects of gynoecium and fruit evolution and development in Angiosperms. / Agradezco a la beca Santiago Grisolia (GRISOLIA/2017/170), al Ministerio de Ciencias e Innovación BIO2015-64531-R, RTI2018-099239-B-I00 y el ExpoSeed H2020-MSCA- RISE-2015-691109 por facilitar la realización de esta investigación. / Ortiz Ramírez, CI. (2023). Evolución y caracterización funcional de los genes HEC3 en el desarrollo de flores y fruto de Nicotiana benthamiana [Tesis doctoral]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/193298