O objetivo deste estudo foi de tentar isolar e cultivar células da polpa de dentes decíduos humanos hígidos com diferentes graus de rizólise e avaliá-las após a expansão in vitro para parâmetros apresentados por células-tronco. Para tanto, o tecido pulpar foi obtido a partir de 30 dentes de crianças de 6 a 12 anos. A exodontia dos dentes foi indicada pelo cirurgião-dentista responsável pelo tratamento da criança. Os responsáveis pelos pacientes assinaram um termo de doação de material biológico aprovado pelo comitê de ética da UFRGS. Do total de dentes, 21 estavam em processo avançado de rizólise (grupo I), sendo que 17 possuíam raiz totalmente reabsorvida e 4 apresentavam cerca de de raiz residual. Os 9 dentes restantes não apresentavam reabsorção visível (grupo II). Todos os dentes extraídos foram imersos em meio de cultura para o transporte ao laboratório. Na capela de fluxo laminar, o tecido pulpar foi removido e incubado com colagenase tipo I e submetido a dissociação mecânica. A suspensão obtida foi semeada em placa de 12 poços e o meio de cultura trocado após 24 horas e após a cada 4 dias até a confluência de 90% ser atingida, quando eram realizadas as passagens. Na quinta e décima passagens, as células foram avaliadas pela citometria de fluxo quanto a seu fenótipo para CD29, CD34, CD44, CD45, CD90, CD117, CD133, CD146, CD184, STRO-1 e HLA-DR e para determinar a presença/ausência da expressão gênica de OCT4, por meio de RT-PCR. Nas mesmas passagens, as células foram submetidas a avaliação do seu crescimento in vitro e foram induzidas à diferenciação adipogênica, osteogênica e condrogênica. O isolamento das células foi considerado com sucesso em 25 amostras nas quais células aderidas foram verificadas após 24h. Apenas 17 destas atingiram confluência de 90%. Não foi possível estabelecer cultura do grupo II (n=9). O estabelecimento das culturas e a capacidade de proliferação foram independentes da quantidade de tecido pulpar remanescente coletado. As células nas quinta e décima passagens foram positivas para CD29, CD44 e CD90 (>95%) e para a expressão gênica de OCT-4. Positividade moderada foi vista para CD117 e CD133 e expressão inferior a 3% para CD34, CD45, HLA-DR, CD184 e STRO-1 em todas as análises. Foi pequena também, a marcação de CD146. O CD146 está relacionado com as células-tronco localizadas nos pericitos, sendo descrito como possível nicho das células-tronco pulpares. Todas as culturas foram capazes de diferenciação nas 3 linhagens celulares citadas. Portanto, as células isoladas eram células-tronco, pois foram aderentes ao plástico, positivas para marcadores característicos de células-tronco mesenquimais e pluripotentes. Considerando os baixos níveis de expressão de CD146, nós podemos sugerir que o nicho perivascular não é o único provedor das células-tronco pulpares. A facilidade de obtenção das células parece estar ligada ao processo de rizólise, visto que as células do tecido pulpar do grupo I apresentaram-se capazes de proliferação in vitro, enquanto que no grupo II esta não foi suficiente para permitir o estabelecimento das culturas. / The aim of this study was to isolate and grow cells from the pulp of human sound deciduous teeth with different levels of resorption, and evaluate stem cell parameters after growing them in vitro. Pulp tissue was removed from 30 different patients, aged from 6 to 12. A free informed term of consent was signed by the patient’s next of kin, approved by UFRGS’s Ethical Committee. From all the teeth, 21 were in advanced levels of resorption (group I): 17 had completely reabsorbed roots and 4 had ⅓ of residual roots. The 9 teeth left did not show any visible re-absorption (group II). The teeth were immersed in culture medium to be transported to the lab. In aseptic conditions, pulp tissue was removed, incubated with type I collagenase and mechanically dissociated. The suspension was seeded onto 12 well plates and the medium was changed every 4 days until the culture reached 90% confluence, when a passage was performed. The phenotype of the cells was analyzed on fifth and tenth passages, by flow cytometry for the following markers: CD29, CD34, CD44, CD45, CD90, CD117, CD133, CD146, CD184, STRO-1 and HLA-DR; and RT-PCR for OCT-4. On the same passages, cells were differentiated into adipocytes, osteoblasts and chondrocytes. Cell isolation was successful in 25 samples, where adherent cells were observed after 24h. Only 17 of these samples reached 90% confluence. It was not possible to establish cell culture from group II teeth (n=9). Cell growth and ability to proliferate in vitro were not dependent on the amount of pulp tissue that was collected. Cells on both fifth and tenth passages were positive for CD29, CD44 and CD90 (>95%) and also for the expression of OCT-4. Moderate labelling was observed for CD117 and CD133, while an expression lower than 3% for CD34, CD45, HLA-DR, CD 184 and STRO-1 was detected. Low amounts of CD146 were found in all analysis. CD146 is related to pericytes stem cells and therefore can be pulp stem cells niche. All cultures were able differentiate into all 3 cell types. According to these findings, the isolated pulp cells can be considered stem cells: they were adherent to plastic, positive for stem cell related markers and pluripotent. Considering the cells expressed low levels of CD146, we can infer that the perivascular niche isn’t the only source of pulpar stem cells. The easiness to obtain cells seems to be related to the root resorption process, because the cells from group I were able to proliferate in vitro, while group II cells were not.

Este estudo teve como objetivo analisar, longitudinalmente, a distância entre a junção cemento-esmalte (JCE) - crista óssea alveolar (COA) e o aspecto da COA em radiografias interproximais de molares decíduos. As radiografias foram digitalizadas e separadas de acordo com as variáveis: grupo etário, momento da avaliação (primeiro e segundo momento), característica radiográfica da superfície proximal (hígida→hígida; hígida→não-hígida; nãohígida→ não-hígida), dente e sistema de atendimento. As mensurações da distância entre a JCE-COA foram realizadas na distal do primeiro molar e/ou na mesial do segundo molar inferior no programa Image Tool. O aspecto radiográfico da COA foi classificado em escores e para sua inspeção foi realizado exame visual da crista na sua totalidade (região 74/75 e 84/85). Como resultados da distância JCE-COA, pôde-se constatar que houve interação entre as seguintes variáveis: avaliação-grupo etário, grupo etáriodente, avaliação-condição radiográfica da superfície proximal e grupo etáriocondição radiográfica da superfície proximal. Observou-se que a distância da JCE-COA aumentou significativamente com o evoluir da idade, principalmente no primeiro molar inferior decíduo. Ainda, houve aumento significativo das médias quando comparado o grupo de superfícies hígidas→hígidas com o de não-hígidas→não-hígidas. Em relação ao aspecto radiográfico da COA, não se obteve associação deste com a condição radiográfica da superfície proximal, bem como com o grupo etário. Desta forma, pode-se concluir que o tempo é um fator relevante para o aumento da distância da JCE-COA e que a existência de superfícies não-hígidas podem representar indicativo de risco à perda óssea alveolar. / The present study is a longitudinal radiographic assessment of the distance between the cemento-enamel junction (CEJ) - alveolar bone crest (ABC) and the aspect of ABC in bitewings of deciduous molar. Radiographs were digitized and divided into age groups, moment of evaluation (first and second), radiographic proximal surface condition (sound→sound; sound→unsound; unsound→unsound), tooth and form of service. The CEJ-ABC distances were measured on the distal site of the first deciduous molar and/or the mesial site of the second lower deciduous molar, using the Image Tool software. For the ABC analysis, the data was regrouped in regions (74/75 and 84/85) and a qualitative assessment by visual inspection was conducted. The results revealed interactions between the following variables: evaluation-age, age-tooth, evaluation-proximal surface condition, and age-proximal surface condition. It has been detected that CEJ-ABC distances have significantly increased with time, particularly in terms of assessment of primary lower first molars. Yet, this increase is greater in unsound when compared to sound surfaces. No relationship was observed between crest score and age groups, as well with the condition of the proximal surface. Therefore, this study suggests that time is a relevant factor in terms of increasing of CEJ-ABC mean distances and that the presence of unsound surfaces might be a sign of risk of alveolar bone loss.

O objetivo desse estudo foi investigar longitudinalmente o desempenho clínico e radiográfico da Remoção Parcial de Tecido Cariado (RPTC) em dentes decíduos e avaliar a dentina cariada remanescente através da microdureza após sua esfoliação. A amostra desse estudo provém de um ensaio clínico randomizado controlado realizado em 20 pacientes com idade entre 4 e 7 anos. Trinta e nove molares decíduos com lesões cariosas agudas profundas, sem sinais de patologia pulpar irreversível foram submetidos à RPTC. Os dentes foram divididos em dois grupos de acordo com material forrador utilizado: hidróxido de cálcio (HC) - 20 dentes ou guta-percha (GP) - 19 dentes e restaurados com resina composta. Após 36 meses de acompanhamento, 29 dentes (15 pacientes) foram reavaliados; desses, 23 dentes obtiveram sucesso clínico e radiográfico: 11 HC (73,3%) e 12 GP (85,7%). O sucesso total nessa etapa da avaliação foi de 79,3% e não houve diferença entre os materiais capeadores. Esses dentes continuaram em avaliação até sua esfoliação (37 a 71 meses de permanência em boca), quando 18 dentes (6 HC e 12 GP) foram coletados para análise laboratorial. O objetivo dessa análise foi verificar se a RPTC viabilizou a remineralização da dentina cariada remanescente em molares decíduos. Os 18 dentes submetidos à RPTC foram agrupados (grupo tratado). Além disso, selecionou-se dez molares decíduos hígidos e dez, com lesões cariosas agudas profundas em dentina para os grupos controle, positivo e negativo, respectivamente. As restaurações do grupo tratado foram removidas e a profundidade da cavidade medida. Nos dentes do grupo controle positivo, foram realizados preparos cavitários oclusais em até 4 mm de profundidade (semelhante ao grupo tratado), e no grupo controle negativo, realizou-se a RPTC in vitro. Todos os dentes foram preparados para análise de microdureza, que foi realizada em três pontos lineares da cavidade, distante 100 μm entre si e nas profundidades de 10, 35, 60, 85 e 110 μm, totalizando 15 indentações por amostra. Além disso, a espessura da dentina remanescente foi medida (μm) para aferir a profundidade das cavidades. A espessura da dentina remanescente foi semelhante para os três grupos (médias: 921, 852, 833 μm, hígido, cariado e tratado, respectivamente; p≤0,01). Os valores de microdureza knoop obtidos mostraram diferença significativa entre os três grupos (hígido, cariado e tratado) em todas as profundidades: 10μm (54,8; 12,5; 38,3), 35μm (62,0; 13,0; 38,0), 60μm (56,8; 12,3; 39,1), 85μm (58,9; 13,0; 40,3), 110μm (55,7; 14,2; 42,0), p≤0,01. Houve aumento da dureza nos dentes tratados comparados aos cariados em todas as profundidades investigadas (p≤0,01), sugerindo ganho mineral após o tratamento. / The aim of this study was longitudinally to investigate the clinical and radiographic performance of the Partial Caries Removal (PCR) in deciduous teeth and evaluate the remaining carious dentin through the microhardness after exfoliation. The sample of this study comes from a randomized clinical controlled study in 20 patients with age between 4 and 7 years. Thirty nine primary molars with deep acute carious lesions, without irreversible signs of pulp pathology were submitted to PCR. The teeth were divided in two groups in accordance with capping material: calcium hydroxide (CH) - 20 teeth or gutta-percha (GP) - 19 teeth, both restored with composite resin. After 36 months of follow-up, 29 teeth (15 patients) had been reevaluated; of these, 23 teeth had clinical and radiographic success: 11 CH (73.3%) and 12 GP (85.7%). The overall success in this stage of the evaluation was 79.3% and it did not have difference between the capping material. These teeth were follow-up evaluated until its exfoliation (37 - 71 months of permanence in mouth), when 18 teeth (6 CH and 12 GP) were collected for laboratorial analysis. The aim of this analysis was to verify if PCR provides conditions for dentin remineralization in primary teeth. The 18 teeth submitted to PCR were grouped (treated group). Additionally, ten sound molars and ten molars with deep acute carious lesions were selected to serve as positive and negative control groups, respectively. In the treated group, restorations and pulp-capping materials were removed. In the positive control group, 3 to 4 mm deep cavities were prepared and in the negative control group the carious tissue was removed according to the same in vitro PCR criteria. All teeth were prepared for microhardness analysis to be performed in three linear points with 100 μm between each one and at 10, 35, 60, 85 and 110 μm from the cavity floor resulting in 15 indentations for each sample. Furthermore, thickness of remaining dentin was measured to estimate cavity depth. There were no significant differences in the thickness of the remaining dentin between the three groups (means 921, 852, 833 μm for sound, carious and treated, respectively; p≤0.01). There was a statistically significant difference among the groups sound, carious and treated, for microhardness in all distances: 10 μm (54.8, 12.5, 38.3), 35 μm (62.0, 13.0, 38.0), 60 μm (56.8, 12.3, 39.1), 85 μm (58.9, 13.0, 40.3), 110 μm (55.7, 14.2, 42.0), p≤0.01. The results showed hardness increase in treated teeth when compared to carious teeth in all dentin depths investigated, (p≤0.01) suggesting mineral gain after treatment.

Alguns estudos caracterizaram a microbiota de canais radiculares de dentes decíduos com necrose pulpar como polimicrobiana, com predomínio de microrganismos anaeróbios. No entanto, nenhum estudo até o presente momento investigou a presença de genes de resistência a antimicrobianos em diferentes ecossistemas da cavidade oral de crianças. Este estudo tem por objetivo determinar a presença de espécies de Prevotella e do gene cfxa/cfxa2 associados à resistência à beta-lactâmicos, em diferentes ecossistemas orais de crianças com necrose pulpar. Vinte e sete crianças, que estavam sob cuidados odontológicos no Ambulatório de Clínica Infanto-Juvenil da Faculdade de Odontologia da UFRGS, e que apresentavam, pelo menos, um dente decíduo com necrose pulpar foram selecionados para este estudo. Foram coletadas amostras de saliva, biofilme supragengival, biofilme da câmara pulpar e do canal radicular de 32 dentes (27 posteriores e 5 anteriores). Após isolamento do DNA microbiano, a presença das bactérias Prevotella intermedia, Prevotella nigrescens, Prevotella tannerae e do gene cfxA/cfxA2 foi avaliada através do método de PCR. A amostra foi composta de pacientes com idade média de 5,5 anos (± 1,76). A taxa total de espécies de Prevotella foi de 29,1%, 25%, 21,8% e 32,29% em amostras de saliva, biofilme, câmara pulpar e canal radicular, respectivamente. As três espécies juntas não foram detectadas em todos os micro-ambientes do mesmo paciente, mas estavam presentes em 3,1% (n=1) de amostras do canal radicular. Prevotella nigrescens foi a bactéria mais frequentemente encontrada em todos os ecossistemas estudados. Foram observadas diferenças estatisticamente significativas em relação à presença de P. nigrescens em pelo menos um local e idade do paciente (teste t, p = 0,04). Também foi encontrada associação entre a presença desta bactéria, em pelo menos um local e uso de antimicrobianos (teste exato de Fisher, p = 0,014). A presença do gene de resistência à beta-lactâmicos, cfxA/cfxA2, foi testada em 12 pacientes da amostra, nos quatro micro-ambientes orais. Entre esses pacientes, 55,6% eram meninas, com idade média de 6 anos (± 2,5). Não foi detectada a presença deste gene em nenhuma amostra investigada. Os dados sugerem que a cavidade bucal de crianças com necrose pulpar apresenta presença diversificada de espécies de Prevotella em diferentes micro-ambientes orais. A ausência do gene cfxA/cfxA2 foi observada em todas as amostras investigadas. Estudos futuros, testando a presença de outros genes de resistência à beta-lactâmicos, são importantes para uma investigação abrangente. / Some studies characterized the microbiota of root canals of primary teeth with pulp necrosis as polymicrobial, with a predominance of anaerobic microorganisms. However, no study to date has investigated the presence of antimicrobial resistance genes in different ecosystems of the oral cavity of children. This study aims to determine the presence of Prevotella species and genes associated with resistance to beta-lactams in different oral enviroments of children with pulp necrosis. Twenty-seven children who were under dental care at the Children and Youth Clinic (Dental School, UFRGS, Porto Alegre, Brazil), and who had at least one primary tooth with pulp necrosis were selected for this study. Saliva, supragingival biofilm, pulp chamber biofilm and root canal biofilm were collected of 32 teeth (27 posterior and 5 anterior). After isolation of microbial DNA, the presence of Prevotella intermedia, Prevotella nigrescens, Prevotella tannerae and cfxA/cfxA2 gene were evaluated using the PCR. The sample consisted of patients with a mean age of 5.5 years (± 1.76). The total rate of Prevotella species was 29.1%, 25%, 21.8% and 32.29% in saliva samples, biofilm, pulp chamber and root canal, respectively. The three strains were not detected in all enviroments of the same patient, but were present at 3.1% (n = 1) of the root canal samples. Prevotella nigrescens was the most common bacteria in all oral enviroments. Statistical significant differences were observed for the presence of P. nigrescens at least one oral enviroment and age of the patient (t-test, p = 0.04). Also an association was observed, among the presence of these bacteria in at least one enviroment and use of antimicrobials (Fisher's exact test, p = 0.014). The presence of the resistance gene to beta-lactams, cfxA/cfxA2, was tested on 12 patients of the sample at all four oral enviroments. Among these patients, 55.6% were girls with a mean age of 6 years (± 2.5). Absence of this gene in the sample investigated was detected. The absence of cfxA/cfxA2 gene was observed in all the investigated samples. Future studies testing the presence of other resistance genes to beta-lactams, are important for a comprehensive investigation.

O objetivo deste estudo clínico controlado de boca dividida foi avaliar longitudinalmente a progressão radiográfica de lesões de cárie em superfícies proximais de molares decíduos após o selamento com infiltrante resinoso em crianças de 3 a 8 anos. Foram incluídos neste estudo 16 pacientes que possuíam no mínimo duas lesões em superfície proximal de molares decíduos, com imagem radiográfica até o terço externo de dentina. As lesões foram alocadas de forma aleatória em dois grupos: teste (infiltrante resinoso) e controle (sem infiltrante). Os pacientes foram avaliados clinicamente quanto a presença de placa visível (IPV), sangramento gengival (ISG) e exame visual de cárie. Radiografias digitais interproximais foram realizadas em todos os pacientes, de ambas as lesões. Todos os pacientes receberam tratamento para a atividade de cárie que consistiu em aconselhamento dietético, instrução de higiene bucal incluindo fio dental e quatro aplicações tópicas de flúor. Ao final de 3 meses de acompanhamento os exames foram repetidos e as radiografias digitais foram comparadas utilizando a imagem original e dois filtros de tratamento de imagem a fim de observar presença ou ausência de progressão radiográfica das lesões dos grupos teste e controle. Em um total de 16 pacientes (64 radiografias digitais usando cada filtro) não foi observada diferença estatisticamente significante entre os grupos teste e controle (teste McNemar, p=1,00), apesar de ter sido observada uma tendência de progressão das lesões em ambos os grupos. Diferenças significativas (teste Wilcoxon, p=0,01) foram observadas entre IPV inicial (30,5 ±22,0) e final (14,0 ± 7,5) e entre ISG inicial (13,5 ±18,5) e final (2,8 ± 3,4). Não foi observada relação significante entre IPV, ISG e risco à carie com a progressão radiográfica das lesões (Teste Mann Whitney, p>0,05). Este estudo mostrou que não houve diferença significante na progressão de lesões de cárie em superfícies proximais seladas com infiltrante resinoso comparadas com tratamento placebo no período de tempo avaliado. / The prevalence of proximal caries lesions in primary molars is high in many countries. This split-mouth placebo-controlled randomized clinical trial aimed to assess the progression of early proximal caries lesions on primary molars after resin infiltration. Sixteen children aged 3 to 8 years old took part of this study. Participants had to have at least two proximal lesions radiographically extending to enamel or outer dentine. Visual examination was performed after tooth separation. Digital bitewing radiographs were taken, visual plaque (VPI) and gingival bleeding indexes (GBI) were recorded and visual examination of caries was performed (baseline assessments). Proximal lesions were randomly allocated to two groups: resin infiltration (test) and no infiltration (control). All patients received 4-week topical fluoride application, dietary counseling, toothbrushing and flossing instructions. After a 3 months follow-up period, baseline assessments of all patients were repeated and digital radiographs were taken. Original digital images and enhanced images, using two different filters, were compared aiming the observation of lesion progression in both test and control groups. Evaluation of digital radiographs of the 16 children (64 digital images for each filter) showed no statistical significant differences (McNemar test, p=1,00) when test and control groups were compared. However, a tendency of lesion progression could be observed in both groups. Significant differences (Wilcoxon t-test, p=0.01) were observed for VPI between baseline (30.5 ±22.0) and follow-up (14.0 ±7.5) and for GBI at baseline (13.5 ±18.5) and follow-up (2.8 ± 3.4). No significant relation between lesion progression and VPI, GBI and caries experience was observed (Mann Whitney Test, p>0.05). This study showed no significant differences in the progression of resin infiltrated proximal caries lesions compared to the placebo treatment in this follow-up period.

A técnica da remoção seletiva de tecido cariado (RSTC) para lesões de cárie profundas em dentina de dentes decíduos e permanentes, já é consenso na literatura e é sustentada por pesquisas que demonstram excelentes resultados clínicos, radiográficos e microbiológicos. No entanto, a longevidade de restaurações adesivas realizadas após a RSTC, principalmente na dentição decídua, vem gerando algumas dúvidas e preocupações quanto ao seu desempenho, merecendo esclarecimentos. O objetivo deste estudo randomizado, controlado e multicêntrico foi comparar a taxa de sucesso de restaurações adesivas realizadas em dentes decíduos posteriores após a remoção total (RTTC) ou seletiva (RSTC) de tecido cariado ao longo de 30 meses. Métodos: Crianças de 4 a 8 anos de idade portadoras de pelo menos duas lesões cavitadas ativas em metade interna de dentina (metade interna da dentina na avaliação do RX interproximal e com pelo menos 1mm de dentina separando a lesão cariosa da polpa) e que se enquadrassem nos critérios de inclusão e exclusão participaram do estudo. Para cada criança os dentes (no mínimo dois, mas podendo ser mais) foram aleatoriamente divididos de acordo com os seguintes tratamentos: RTTC (grupo controle) ou RSTC (grupo teste). Nos casos em que ocorreu exposição pulpar, o dente foi devidamente tratado e excluído da amostra, os dados em relação ao tipo de remoção de tecido cariado que levou à exposição foram coletados. Quatro instituições participaram do estudo (Universidade Federal do Rio Grande do Sul; Universidade de São Paulo; Universidade Peruana Cayetano Heredia; Universidade Internacional do Equador), resultando em quatro odontopediatras que realizaram os procedimentos de remoção de tecido cariado e posterior restauração em resina composta, avaliadas clinicamente no baseline, 6, 12, 18, 24 e 30 meses. Todos os procedimentos foram realizados sob anestesia local e isolamento absoluto. Características sociodemográficas foram coletadas no baseline e características clínicas como índice ceod/CPOD, índice de placa visível (IPV) e índice de sangramento gengival (ISG) foram coletados em todos os períodos de acompanhamento. Em todos os momentos experimentais foram avaliados os aspectos clínicos das restaurações por um examinador cego e calibrado através do índice FDI adaptado. Para determinar as taxas de sucesso das restaurações de resina composta foram geradas curvas de sobrevida com o estimador Kaplan-Meyer para cada grupo avaliado, assim como as taxas de falha anual das restaurações. O modelo de regressão de Cox com falhas compartilhadas foi realizado para avaliar diferenças nas taxas de sobrevida das restaurações de acordo com o tratamento, instituição e características clínicas e demográficas da amostra. Resultados: Cento e seis crianças (51 meninos e 55 meninas) colaboraram com 278 dentes submetidos a restaurações adesivas, 137 após RTTC e 141 após RSTC. Oito exposições pulpares ocorreram no grupo da RTTC e quatro no grupo da RSTC. A taxa global de sucesso das restaurações foi 87,1% (85,4% para RTTC e 88,7% para RSTC) e o tempo médio de sobrevida foi de 30 meses. A taxa anual de falha foi de 7% após 24 meses de acompanhamento. Não houve diferença no risco de falha (TR) de acordo com o grupo de tratamento (TR 0,75; IC 95%: 0,38-1,46) e instituição (USP TR 0,44; IC 95%: 0,94-2,09; PERU TR 0,92; IC 95%: 0,26-3,19 EQUADOR TR 1,39; IC 95%: 0,45-4,28). Foram encontradas observações análogas em relação a todas as variáveis clínicas e demográficas. Conclusões: As restaurações adesivas realizadas em dentes decíduos com lesões cavitadas profundas em dentina apresentam sobrevida satisfatória após 33 meses de acompanhamento, independentemente da técnica realizada para remoção de tecido cariado. / The selective caries removal technique (SCR) for active deep carious lesions in deciduous and permanent teeth is already a consensus in the literature and is supported by studies that demonstrate excellent clinical, radiographic and microbiological results. However, the longevity of restorations performed after the SCR, mainly in primary dentition, has generated some doubts and concerns about its performance, deserving clarification. This multicenter study aimed to compare the success rate of adhesive restorations performed on posterior deciduous teeth after total or selective caries removal over 30 months Methods: Children between 4 - 8 years old with at least two active cavitated lesions in deep dentin (inner half of the dentin in the evaluation of the interproximal RX and with at least 1mm of dentin separating the carious lesion of the pulp) and that met the inclusion and exclusion criteria participated in the study. For each child, teeth were randomized and submitted to one of the treatment groups: total caries removal (TCR - control group) or SCR (test group). Children could have more than 2 teeth included. In cases of pulp exposure, data were analyzed and the tooth was excluded from the sample. Four institutions participated in the study (Federal University of Rio Grande do Sul, Peruvian University Cayetano Heredia and International Universidad of Ecuador), resulting in four pediatric dentists who performed the caries removal procedures and subsequent restorations in composite resin. Clinical evaluation was performed at baseline, 6, 12, 18, 24 and 30 months. All procedures were performed under local anesthesia and rubber dam use. Sociodemographic characteristics were collected at the baseline and clinical characteristics as dmft and visible plaque and gingival bleeding index were collected in all follow-up periods. Radiographs were taken only at baseline and restorations were clinically assessed at baseline, 6, 12, 18, 24 and 33 months by a blinded, trained and calibrated operator in each institution. The characteristics of the restorations were recorded according to an adaptation of the FDI criteria. Survival estimates for restoration longevity were evaluated using the Kaplan-Meier method. We also estimated the annual failure rate of the restorations. Cox regression model with shared frailty was performed to assess differences in survival rates of the restoration according to the intervention treatment, institution and clinical and demographic characteristics of the sample. Results: one hundred and six children (51 boys and 55 girls) collaborated with 278 teeth submitted to adhesive restorations (137 after TCR and 141 after SCR). Pulp exposure occurred in eight teeth (2.8%) allocated to TCR, and in four (1.4%) allocated to SCR group. The overall success rate of restorations was 87.1% (85.4% for TCR and 88.7% for SCR) and mean survival time was 30.3 months. The annual failure rate was 7% after 24 months of follow-up. There were no differences in the risk of failure according to the treatment group (HR 0.75;95%CI:0.38-1.46) and institution (USP HR 0.44;95%CI:0.94-2.09; PERU HR 0.92;95%CI:0.26-3.19; ECUADOR HR 1.39;95%CI:0.45-4.28). Analogous observations were found regarding all the clinical and demographic variables. Conclusions: Composite restorations of active deep carious lesions performed in posterior primary teeth show satisfactory survival of 87.1% after 33 months of follow-up, regardless of the technique performed for carious tissue removal.

O objetivo deste estudo foi avaliar a resistência de união (RU) do esmalte e da dentina decídua após desafio erosivo utilizando sistemas adesivos convencionais e autocondicionantes. Noventa e seis molares decíduos foram seccionados mesio-distalmente para obtenção de blocos de esmalte, foram embebidos em resina epóxi e polidos com lixas de carbeto de silício (600, 1200, 2400 e 4000). As amostras foram randomizadas e divididas entre os 4 sistemas adesivos utilizados: SB (Adper Single Bond 2), SBU (Single Bond Universal), OBFL (Optibond FL) e BF (Bond Force). Metade das amostras (grupo teste, n=48) foram submetidas a desafio erosivo/abrasivo (50 mL de Coca-Cola®, pH 2,6, 1 min, 4x ao dia, 5 dias, seguido de escovação por 1 min com dentifrício fluoretado, NaF 1450 ppm e saliva artificial). A outra metade dos blocos (grupo controle) foi mantida imersa em saliva artificial. Em seguida foram realizadas restaurações de resina flow (Tetric Flow) utilizando matrizes de polivinil siloxano com diâmetro de 0,9mm e 1mm de altura. As amostras foram colocadas na máquina de ensaio universal e foi aplicada força de cisalhamento com velocidade de 1,0mm/min até que a fratura ocorresse. Os mesmos blocos tiveram suas superfícies de dentina expostas, em seguida, as mesmas etapas foram realizadas (restaurações e RU). Foram utilizados os testes ANOVA de duas vias e Tukey (p=0,05). No esmalte, os grupos teste e controle não apresentaram diferença estatística, independentemente dos sistemas adesivos utilizados. Na dentina, o BF apresentou melhores valores de no grupo teste (p=0,04). O fator adesivo foi significativo na análise fatorial (p<0,001) assim como a interação entre desafio erosivo/abrasivo e os sistema adesivo utilizado (p=0,046). Somente o substrato dentinário teve influência significativa na RU (p=0,395). Conclui-se que a RU ao esmalte decíduo não foi afetada pelo desafio erosivo/abrasivo para todos os sistemas adesivos utilizados, enquanto a RU na dentina decídua somente foi afetada pelo sistema adesivo autocondicionante contendo flúor. / The aim of this in vitro study was to evaluate the microshear bond strength of four adhesive systems on eroded or sound primary teeth. Methods: Ninety-six primary molars were cut mesio-distally, embedded, ground and polished with SiC papers (600, 1200, 2400 and 4000). Specimens were randomly divided according to 4 adhesive systems: SB (Adper Single Bond2®), SBU (Universal Single Bond®), OBFL (OptibondFL®) and BF (BondForce®). Half of the specimens were exposed to erosive/abrasive challenge, and the other half (control group; n=48) remained immersed in artificial saliva. Erosive challenge consisted of specimen immersion in Coca-Cola® (pH 2.6, 50ml, 1min, 4x, 5 days). Once a day, the specimens were brushed using an electric toothbrush with a slurry (artificial saliva and NaF toothpaste, 1450 ppm) for 1 minute. Polyvinyl siloxane molds with a perforation 0.9 mm in diameter and 1 mm in height were placed over the specimens in order to build restorations with flowable resin composite. The molds were cut with surgical blades and removed to allow for microshear bond strength testing. Bonded specimens were attached to an universal testing machine and a shear load was applied with a steel wire at a crosshead speed of 1.0 mm/min until failure occurred. After the tests in enamel, dentin was exposed and polished to perform the same tests in this substrate. Two-way ANOVA and Tukey tests were performed (p=0.05). Results: No statistically significant difference was found between the eroded and sound enamel for any of the adhesives. BF was statistically significant better in eroded dentin than sound dentin (p=0.04). A factorial analysis indicated that the factor adhesive was significant (p<0.001) as was the interaction between adhesive and erosive tooth wear (p=0.046). Only the dentin substrate had a significant influence on microshear bond strength (p=0.395). Conclusion: Bond strength to primary enamel was not affected by erosive/abrasive challenge for all the adhesives systems, while in primary dentin the bond strength was affected only after the use of self-etch adhesive containing fluoride.

As perdas ósseas representam um desafio à cirurgia reparadora, onde a utilização de diferentes fontes de enxertos ósseos com limitações físicas, químicas e biológicas é frequente. Atualmente, a bioengenharia alia os conhecimentos de diferentes áreas para o estudo de novas formas de produção de tecidos, inclusive para uso em cirurgias reparadoras. O objetivo deste estudo foi associar a nanotecnologia e as células-tronco, para estudar a neoformação óssea na região de defeitos ósseos criados em calota craniana de ratos. Dois estudos foram conduzidos. No primeiro, confeccionaram-se matrizes de nanofibras (scaffolds) a partir do ácido poli (lático-co-glicólico) (PLGA) pela técnica de electrospinning, as quais apresentaram propriedades morfológicas adequadas para seu emprego no estudo. Após, cinco amostras de Stem Cell from Deciduos Tooth (SCDT) de humanos, em processo de rizólise, foram obtidas e cultivadas até atingirem entre 5ª e 7ª passagem, momento no qual foram empregadas no estudo. As SCDT foram semeadas em placas de cultura (grupo controle) e nos scaffolds (grupo teste) para os ensaios de adesão, viabilidade e proliferação celular. Observou-se que a capacidade das SCDT em realizar adesão no grupo teste foi semelhante à sua capacidade de adesão no grupo controle, sem diferença estatística entre os grupos. Verificou-se que as células mantiveram-se viáveis durante todos os dias do experimento (21 dias) nos grupos teste e controle, não apresentando diferença estatística entre os grupos. Em ambos os grupos ocorreu o aumento gradativo da viabilidade celular a partir do inicio do experimento até o 14º dia de cultura, seguido pela sua diminuição quando analisada no 21º dia. O segundo trabalho objetivou avaliar a capacidade da associação scaffolds/SCDT em promover neoformação óssea em ratos. Para isso utilizou-se 15 ratos Wistar, nos quais foram confeccionados defeitos críticos de 8,0 mm de diâmetro nas calotas cranianas. Os animais foram divididos em três grupos experimentais com 5 animais cada: grupo 1 – implante no defeito ósseo de scaffolds; grupo 2 – implante no defeito ósseo de scaffolds semeados com SCDT; grupo 3 – implante no defeito ósseo de scaffolds semeados com SCDT que foram mantidas durante 13 dias em meio de diferenciação osteogênica prévio a sua implantação. Decorrido 60 dias pós operatório, foi realizada a análise 10 histométrica, a qual avaliou a quantidade de tecido ósseo formado no interior do defeito produzido Observou-se que a associação scaffold/SCDT mantida em meio osteogênico previamente à implantação apresentou uma maior neoformação óssea em relação aos demais grupos, sendo esta diferença estatisticamente significante. Em vista dos resultados obtidos, conclui-se que, obedecidos os parâmetros utilizados, os scaffolds de PLGA apresentam resultados favoráveis em relação à interação com as SCDT. Ainda, a utilização de meio de diferenciação osteogênico associado ao scafolld/SCDT, prévio a implantação, mostrou que essa associação possui a capacidade de promover neoformação óssea, sendo a sua utilização adequada para o uso na bioengenharia. / Bone loss is a challenge to reconstructive surgery, where the use of different sources of bone grafts with physical, chemical and biological limitations is common. Currently, bioengineering combines knowledge from different fields to study new forms of tissue production, including for use in reconstructive surgery. The aim of this study was to associate nanotechnology and stem cells in relation to the study of bone formation in the area of bone defects created in rat calvaria. Two studies were conducted. Firstly, nanofiber matrices (scaffolds) were made from acid poly (lactic-co-glycolic acid) (PLGA) by the electrospinning technique, which showed morphological properties suitable for use in the study. Following this, five samples from Deciduous Tooth Stem Cells (SCDT) from human, in the process of rhizolysis, were obtained and grown until they reached between the 5th and 7th passage, at which point they were used in the study. The SCDT were seeded onto culture plates (control group) and scaffolds (test group) for adhesion assays, cell viability and proliferation. It was observed that the ability of SCDT to adhere in the test group was similar to their ability to adhere in the control group. There was no statistical difference between the groups. It was found that the cells remained viable for every day of the experiment (21 days) in the test and control groups. There was no statistical difference between the groups. In both groups there was a gradual increase in cell viability from the start of the experiment until the 14th day of culture, followed by their decrease when analyzed on day 21. The second study evaluated the ability of the association scaffolds / SCDT to promote new bone formation in rats. For this, 15 Wistar rats were used, in which were induced critical defects of 8.0 mm diameter in the skulls. The animals were divided into three groups of five: group 1 - bone defect of the implant scaffolds, group 2 - implant in the bone defect of scaffolds seeded with SCDT, group 3 - implant in the bone defect of scaffolds that were seeded with SCDT and kept for 13 days in osteogenic differentiation medium prior to implantation. After 60 days postoperatively, histometric analysis was performed, which assessed the amount of bone formed within the imposed defect. It was observed that the scaffold association/SCDT maintained in osteogenic medium prior to implantation showed greater bone formation than the other groups. This 12 difference was statistically significant. In the light of these results, it can be concluded that, in compliance with the parameters used, the PLGA scaffolds have favorable results in relation to the interaction with the SCDT. Furthermore the use of osteogenic differentiation associated with scafolld / SCDT, prior to implantation showed that this association has the ability to promote bone formation and its use is therefore appropriate for use in bioengineering.

As células-tronco mesenquimais (CTMs) tornaram-se um grande interesse para a ciência por serem capazes de estimular a regeneração tecidual, apresentarem habilidade de se expandir e diferenciar em cultura e, consequentemente, apresentarem diversas possibilidades terapêuticas, bem como para a engenharia de tecidos. Muitos dos tecidos dentários também apresentam nichos de CTMs. O fácil acesso à polpa dos dentes decíduos, em virtude da esfoliação dental, a torna uma fonte muito atraente para a terapêutica e a engenharia de tecidos. Todos os avanços advindos das terapias baseadas em células-tronco tornam a preservação das fontes celulares, por longos períodos de tempo, um assunto de suma importância. Para que isso possa ocorrer, métodos de armazenamento devem ser adotados, tanto para as culturas celulares já estabelecidas, quanto para os tecidos inteiros. Uma das formas mais comuns de manutenção de culturas e de tecidos é a criopreservação em nitrogênio líquido. Contudo, existem poucas evidências no sentido de estabelecer um protocolo eficaz para o congelamento do dente decíduo intacto. Dessa forma, esse trabalho objetivou isolar, cultivar e caracterizar, para parâmetros apresentados para CTMs, as células pulpares após a criopreservação de dentes decíduos intactos por 7 dias. Para isso, vinte e seis dentes decíduos foram alocados em 2 grupos experimentais, sendo: grupo 1, células pulpares de dentes decíduos criopreservados intactos (grupo Crio) e grupo 2, células pulpares de dentes decíduos isoladas imediatamente após a exodontia (grupo fresco - controle). As células pulpares de ambos os grupos foram isoladas, cultivadas, analisadas por citometria de fluxo (CD14, CD29, CD34, CD45, CD73, CD90 e HLA-DR), submetidas aos protocolos de diferenciação osteogênica, adipogênica e condrogênica, e aos ensaios de proliferação celular (WST-8). A morfologia celular de ambos os grupos foi avaliada por microscopia confocal. Os resultados demonstraram uma taxa de cultivo de 30% para o grupo Crio e 61% para o grupo Fresco. Não houve diferença estatística entre os grupos para os marcadores de superfície analisados. As células de ambos os grupos foram capazes de se diferenciar em células das 3 linhagens testadas. Para o ensaio de proliferação, não houve diferença estatística entre os grupos ao longo dos tempos testados (p>0,05), embora a média de dias entre o isolamento e a quinta passagem foi menor para o grupo controle (p=0,035). As células do grupo Crio mostraram morfologia alterada. Assim, conclui-se ser possível obter células-tronco da polpa de dentes decíduos congelados pelo protocolo sugerido, sem alterações imunofenotípicas. No entanto, esse protocolo demonstrou baixas taxas de sucesso de isolamento, menor capacidade de diferenciação e de proliferação, além de alteração da morfologia celular. / Mesenchymal stem cells (MSC) became of great value for science for being capable of stimulating tissue regeneration and showing ability to proliferate and differentiate when cultured properly. Dental tissues also present MSC niches as well. Mesenchymal stem cells from the pulp of deciduous teeth are considered an easy access source during a specific period of time in the patients life, when teeth are undergoing exfoliation; therefore, very attractive for cell based therapeutics and tissue engineering. All advances seen in cell based therapies for the last years depend on cell or tissue preservation for long periods of time. Thus, storage methods must be adopted for cultures of cells and whole tissues. The most common technique to preserve cell cultures and tissues is cryopreservation with liquid nitrogen. However, fragile evidence concerns the cryopreservation of intact deciduous teeth. This research aimed to isolate, cultivate and characterize the dental pulp cells of intact cryopreserved deciduous teeth and compare to the dental pulp cells of non-cryopreserved deciduous teeth. Thirteen pairs of deciduous teeth were donated from patients in orthodontic treatment and were randomly allocated in two different groups. The first group was made of cryopreserved intact deciduous teeth (Cryo group), and in second group pulp cells were isolated from fresh teeth (Fresh group). The cells of both groups were isolated, cultivated and characterized for mesenchymal stem cell parameters, and then compared for isolation and proliferation rates, surface markers expression (CD14, CD29, CD34, CD45, CD73, CD90 and HLA-DR), differentiation ability and morphology. The culture rate was 30% for the cryopreserved group and 61% for the fresh. There were no statistical differences between the groups for the surface markers tested. Cells in both groups were capable of differentiating in the 3 mesenchymal lineages. For the proliferation assay, there was no statistical difference between groups throughout the time tested although the mean time between isolation and the fifth passage was lower for the control group (p=0,035). Cells from Cryo group showed altered morphology. The present study showed that Dental Pulp Stem Cells can be obtained from cryopreserved intact deciduous teeth without changes in the immunophenotypical profile, however low success rates for isolation, differentiation ability and morphological alterations were observed.

Uma variedade de biomateriais são estudados para aplicação na engenharia de tecidos, entre os quais os scaffolds de ácido poli (láctico-co-glicólico) (PLGA), produzidos pela técnica de electrospinning. Por meio dessa técnica é possível adicionar diferentes moléculas bioativas durante o processo de produção do biomaterial, tais como a dexametasona (DEX). A DEX é caracterizada por o seu potencial anti-inflamatório e imunossupressor e pela sua capacidade de promover a diferenciação de células-tronco mesenquimais (MSCs) em linhagem osteogênica. Este estudo teve o objetivo de produzir e caracterizar scaffolds de PLGA com diferentes quantidades de DEX (100% puro) e verificar suas propriedades mecânicas, bem como a sua influência sobre MSCs de polpa de dentes decíduos. Sete grupos de scaffolds foram produzidos nas seguintes proporções: 1 parte de DEX para 20 partes de PLGA, identificado como 1:20. Seguindo este, 1:10, 1: 4, 1: 2, 3: 4 e 1: 1, partes de DEX:PLGA foram usadas. Assim, os seguintes grupos foram estudados: A: scaffolds de PLGA sem DEX (grupo controle); B: 1:20; C: 1:10; D: 1:4; E: 1:2; F: 3:4 e G: 1:1. A presença de DEX nos scaffolds e a sua taxa de libertação foi avaliada no decorrer de 21 dias por análise de luz UV (λ = 254 nm). Todos os scaffolds foram avaliados quanto às suas características físico-químicas por microscopia eletrônica de varredura (MEV) e por análise mecânica dinâmica (DMA). A interação dos scaffolds com as MSCs foi avaliada durante 21 dias por meio do ensaio de WST-8 e lactato desidrogenase (LDH). O potencial osteogênico dos scaffolds com DEX foi avaliada pela expressão de fosfatase alcalina, coloração com Alizarin Red e análise por RT-PCR. A análise por luz UV mostrou que após 21 dias de cultura, todos os grupos liberaram entre 73 a 79 % da DEX total presente nos scaffolds presente no início do experimento. As fotomicrografias de MEV mostraram fibras distribuídas de maneira aleatória em todos os grupos, com um grande número de poros interconectados. A análise de DMA mostrou que com o aumento da incorporação de DEX, o diâmetro das fibras e a espessura dos scaffolds também aumentou, enquanto o módulo de elasticidade não se alterou. O ensaio de WST-8 e LDH mostraram que ao longo de 21 dias a viabilidade celular aumentou nos grupos A, B, C e D, enquanto que diminuiu nos grupos E, F e G. Com base nos ensaios de avaliação osteogénica, pode-se observar que scaffolds com DEX não apresentaram tal potencial. A partir dos dados do presente estudo, pode ser concluído que os scaffolds com DEX surgem como uma ferramenta promissora para aplicação em engenharia de tecidos, no entanto, esta associação não apresentou potencial de promover a diferenciação osteogénica de MSCs. / A variety of biomaterials are undergoing studies for application in tissue engineering, among which are poly (lactic-co-glycolic) acid (PLGA) scaffolds, produced by the electrospinning technique. Through this technique, it is possible to add different bioactive molecules during the biomaterial production process, such as dexamethasone (DEX). DEX is characterized by its anti-inflammatory and immunosuppressive potential and by its ability to promote the differentiation of mesenchymal stem cells (MSCs) to osteogenic lineages. This study has aimed to produce and characterize PLGA scaffolds with different quantities of DEX (100% pure) and verifies the mechanical properties of the scaffolds, as well as the role of the scaffolds on the outcome of the MSCs from deciduous teeth. Seven groups of scaffolds were produced in the following proportions: 1 part DEX to 20 parts PLGA, identified as 1:20. Following this, 1:10, 1:4, 1:2, 3:4 and 1:1, DEX:PLGA parts were used. The following groups were studied: A: PLGA scaffold without DEX (control group); B: 1:20; C: 1:10; D: 1:4; E: 1:2; F: 3:4 and G: 1:1. The DEX presence in the scaffolds and its release rate from the scaffolds over 21 days were determined by UV light analysis (λ = 254 nm). All the scaffolds were evaluated for their physicochemical characteristics by scanning electron microscope (SEM) and by dynamic mechanical analysis (DMA). The interaction of the scaffolds with MSCs was assessed over 21 days by WST-8 and lactate dehydrogenase (LDH) assay. The osteogenic potential of the scaffold with DEX was assessed by alkaline phosphatase assay, Alizarin red staining and RT-PCR analysis. The UV light analysis showed that after 21 days of culture all the groups released between 73 to 79% of the total DEX present in the scaffolds at the beginning of the experiment. The SEM micrographs showed fibers distributed in a random manner in all groups, with a large number of interconnected pores. DMA analysis showed that with the increase of DEX incorporation, the fiber diameter and scaffolds thickness also increased while their elastic modulus did not change. The WST-8 and LDH assay showed that, over 21 days of culture, the cell viability increased in groups A, B, C and D, while decreased in groups E, F and G. Based on the osteogenic assays, it could be observed that the scaffolds with DEX did not have the osteogenic potential. From the data of this study, it can be concluded that the scaffolds with DEX appear to be a promising tool for application in tissue engineering, however, this association did not show the potential for promote the osteogenic differentiation.