A Pasta Guedes-Pinto (GUEDES-PINTO; PAIVA; BOZZOLA, 1981), denominada neste estudo de PGP original, é utilizada há vários anos com bons resultados no tratamento endodôntico de dentes decíduos. Entretanto, a manipulação prévia e seu armazenamento para utilização posterior não tem sido viável, em virtude da deficiente estabilidade física apresentada quando os componentes são associados. Por esse motivo, os objetivos deste estudo foram: (1) Avaliar a possibilidade de preparar e armazenar a PGP; (2) Avaliar a estabilidade física de formulações selecionadas para a PGP com excipientes diferentes, armazenadas em ambiente e geladeira por até 150 dias; (3) Comparar a estabilidade física das formulações propostas para a PGP com excipientes diferentes em relação a PGP original e a Pasta de Guedes (F&A) de procedência da Farmácia Fórmula e Ação. A estabilidade física foi avaliada visualmente com o auxílio de escores, segundo os quesitos consistência, coloração e uniformidade. O estudo da estabilidade iniciou-se com a realização de pré-formulações, avaliadas por 15 dias, armazenadas em ambiente e geladeira, para o conhecimento das características físicas e prováveis dificuldades que a formulação em desenvolvimento poderia apresentar. Para seleção dos excipientes que seriam utilizados nas formulações foram realizadas diversas pré-formulações. Foram constituídas dez opções de formulações para a PGP com excipientes diferentes (denominadas A, B, C, E, F, H, I, J, L, M) tendo, como características, consistência pastosa, cor amarelo ouro e uniformidade. A estabilidade física destas foi avaliada por 150 dias, armazenadas em ambiente e geladeira. As quatro melhores formulações (B, C, H e M) foram propostas como PGP com excipientes diferentes, por obterem aos 150 dias, tanto em ambiente como em geladeira, somatória de escores 1, 1, 2 e 2, respectivamente. As PGP com excipientes diferentes foram comparadas à PGP original (em ambiente e geladeira) e a Pasta de Guedes (F&A) (em geladeira) por 150 dias. No decorrer dos 150 dias, a PGP original obteve a somatória dos escores de 7 (ambiente) e 6 (geladeira), sendo que as características físicas alteraram, principalmente, em relação à modificação da coloração e à separação de fases. A Pasta de Guedes (F&A), de maneira geral, foi à formulação que apresentou a maior somatória de escores (11) no decorrer dos 150 dias sendo, portanto, a que se comportou pior ao longo do tempo, devido à alteração da coloração e na uniformidade a partir do sétimo dia, sendo intensificadas no decorrer do tempo. Portanto, foram propostas quatro formulações da PGP com excipientes diferentes (B, C, H e M), sendo que estas apresentaram atributos mais adequados quanto aos aspectos físicos avaliados, comparativamente a PGP original e a Pasta de Guedes (F&A). / Physical stability evaluation of Guedes-Pinto paste formulations developed with different excipients

A eficiência dos lasers associado ou não a fluoretos no aumento da resistência ácida e na redução da solubilidade do esmalte dentário tem sido confirmada em diversos estudos. Diversos comprimentos de onda têm sido utilizados com esta finalidade, apresentando bons resultados e representando uma abordagem preventiva simples e não invasiva. Apesar do emprego do laser Nd:YAG ter sua ação preventiva bem conhecida, são escassos os estudos em dentes decíduos, principalmente estudos que estabeleçam parâmetros seguros e eficientes, seja associado ao flúor ou isoladamente. Desta forma, o objetivo do presente estudo foi avaliar a resistência ácida e a permeabilidade do esmalte decíduo. Para tanto, foram selecionados 69 molares decíduos humanos, resultando em 132 corpos-de-prova. As variáveis de resposta quantitativa foram a microdureza longitudinal, profundidade da desmineralização e permeabilidade do esmalte, e as variáveis de resposta qualitativa foram morfologia da superfície, presença de íons flúor e análise dos componentes químicos do esmalte. Foram utilizados 60 fragmentos vestibular/lingual para a análise de resistência ácida e midrodureza (n=10), e após preparados e tratados, estes espécimes foram submetidos ao ciclo de desremineralização para formação de lesão de cárie artificial. Para análise da permeabilidade (48 fragmentos n=8), para a análise de MEV e EDX (18 fragmentos n=3) e para DRX (6 dentes n=1) foi realizado apenas o tratamento da superfície em 6 níveis: C- Controle: sem tratamento; FA: aplicação de gel flúor fosfato acidulado 1,23%; FAL: aplicação de gel flúor fosfato acidulado + Laser Nd:YAG 0,5W/10Hz no modo contato; VF: aplicação de verniz fluoretado 5%; VFL: aplicação de verniz fluoretado 5% + Laser Nd:YAG; L: aplicação do Laser Nd:YAG. Os dados de microdureza (%VM) foram avaliados pelo teste de Kruskal-Wallis e os dados de profundidade da desmineralização (PD) e Permeabilidade (P) foram avaliados pelos testes ANOVA e Fisher′s LSD (α=5% para todos os testes). Observou-se que os grupos FAL e FA apresentaram a menor variação de dureza em relação aos outros grupos; menor extensão de desmineralização foi observada nos grupos FA, FAL, VF, VFL e L e menor permeabilidade foi verificada nos grupos FA, FAL, VF, VFL e L em relação ao grupo controle (C). Na MEV observouse ausência de fissuras, crateras ou qualquer alteração indesejável na superfície. Na EDX observou-se incorporação de flúor em todos os grupos experimentais (FA, FAL, VF, VFL), exceto no grupo laser (L). Nenhum composto novo foi encontrado na análise de DRX após a associação do flúor com o laser. O laser utilizado isoladamente ou associado ao flúor levou a alterações ultra-estruturais na superfície do esmalte, o que pode ter sido responsável pelo aumento da resistência ácida e redução da permeabilidade, indicando que o laser isoladamente ou associado ao flúor, nas condições desta pesquisa, foi capaz de inibir a desmineralização do esmalte dental decíduo. / The efficiency of lasers associated or not with fluorides, in increasing the acid resistance and decrease of enamel solubility of dental enamel has been confirmed by several studies. Several wavelengths have been used for such purpose, providing good results and representing a simple and non-invasive preventive approach. Although the preventive action of Nd:YAG laser is well known, studies on primary teeth are scarce, especially those that establish safe and efficient parameters, when the laser is either associated with fluoride or used alone. Therefore, the aim of this study was to evaluate the acid resistance and permeability of primary tooth enamel. Sixty-nine human primary molars were used, providing 132 specimens. The quantitative response variables were enamel longitudinal microhardness, demineralization depth and permeability, while the qualitative response variables were surface morphology, presence of fluoride ions and analysis of the chemical components of enamel. Sixty buccal/lingual fragments were used for analysis of acid resistance and microhardness (n=10). After being prepared and treated, thee specimens were subjected to a des-remineralization cycle for artificial caries lesion formation. For analysis of permeability (48 fragments, n=8), SEM and EDX (18 fragments, n=3) and DRX (6 teeth, n=1), only surface treatment was performed in 6 levels: C- Control: no treatment; APF: application of 1.23% acidulated phosphate fluoride gel; APFL: application of 1.23% acidulated phosphate fluoride gel + Nd:YAG laser 0.5W/10Hz in mode contact; FV: application of 5% fluoride varnish; FVL: application of 5%fluoride varnish + Nd:YAG laser; L: application of Nd:YAG laser. Microhardness data (%VM) were analyzed by the Kruskal-Wallis test and demineralization depth (DD) and permeability (P) were analyzed by ANOVA and Fisher′s LSD test (α=5% for all tests). APFL and APF presented the lowest microhardness variation of all groups; lower extension of demineralization was observed in groups APF, APFL, FV, FVL and L, and lower permeability was observed in groups APF, APFL, FV, FVL and L compared to group C. The SEM analysis revealed absence of fissures, craters or any other undesirable surface alteration. The EDX analysis revealed fluoride incorporation in all experimental groups (APF, APFL, FV, FVL), except for the group L. No new compound was found in the DRX analysis when fluoride was associated with the laser. Laser alone or associated with fluoride produced ultrastructural alterations on enamel surface, which might have caused the increase of acid resistance and decrease of permeability, thus indicating that, under the conditions of this study, the Nd:YAG laser used alone or associated with fluoride was capable of inhibiting the demineralization of primary tooth enamel.

A proposta deste trabalho foi avaliar in vitro a alteração da temperatura durante o preparo cavitário em esmalte de dentes decíduos utilizando-se diferentes energias e freqüências do laser Er:YAG. Foram selecionados 40 molares decíduos humanos hígidos, cujas raízes, quando presentes, foram removidas. As porções coronárias foram seccionadas no sentido mésio-distal e a partir das superfícies vestibular e lingual de cada dente, foram obtidos 80 fragmentos (3,5 mm largura, 3,5 mm de altura e 2,0 mm espessura). Na porção dentinária de cada fragmento foram confeccionados dois orifícios (profundidade média de 0,1 mm) para acomodar os termo-sensores. Após estes procedimentos, os espécimes foram fixados com cera termoplástica para escultura em orifícios confeccionados em placas de acrílico. Os conjuntos dente/placa foram divididos aleatoriamente em grupos, de acordo com a energia e freqüência utilizadas (n=10): G1 - 250 mJ/ 3 Hz, G2 - 250 mJ/ 4 Hz, G3 - 250 mJ/ 6 Hz, G4 - 250 mJ/10 Hz, G5 - 250 mJ/ 15 Hz, G6 - 300 mJ/ 3 Hz, G7 - 300 mJ/ 4 Hz e G8 - 300 mJ/ 6 Hz. Na superfície de esmalte previamente delimitada com fita isolante (4 mm2) foram confeccionadas cavidades com (1,0 mm de profundidade, 2,0 mm de altura e 2,0 mm de comprimento) utilizando-se laser Er:YAG, focado a uma distância de 12 mm, sob refrigeração 1,5 mL/min. A temperatura aferida foi registrada por meio de um microtermopar do tipo K interligado a uma placa de aquisição e a um computador configurado com Software programado para fazer a leitura de temperatura a cada 3 segundos, do início da irradiação ao final do preparo. Os dados experimentais foram analisados estatisticamente por ANOVA e teste de Mann-Whitney para averiguar a influência da frequência e energia. O teste de Tukey (P≤0,05) foi utilizado para múltiplas comparações. Os grupos com as energias de 250 e 300 mJ e frequência de 3 e 4 Hz foram semelhantes entre si e apresentaram os menores valores médios de alteração de temperatura. A frequência de 250 mJ com 10 e 15 Hz, apresentaram os maiores valores médios de temperatura acima do valor crítico aceitável (5,5 °C). Com as energias de 250 e 300 mJ e 6 Hz os valores foram intermediários e menores que o valor crítico aceitável. Assim, pode-se concluir que para o preparo cavitário em esmalte de dentes decíduos pode-se indicar os parâmetros de 250 e 300 mJ com 6 Hz de frequência. Além disso, houve uma relação direta entre o aumento da temperatura e o aumento da frequêcia. / This study aimed to assess in vitro thermal alterations occurred during the Er:YAG laser cavity preparation of primary teeth enamel at different energies and pulse repetition rates. Forty sound human primary molars were selected and roots, when present, were sectioned. Crowns were bisected longitudinally in a mesio-distal direction, thus providing 80 fragments with standard dimensions of 3.5mm long x 3.5mm wide and 2mm thick. Two small orifices (0.1mm mean depth) were made at the dentin surface, where thermocouples were attached. Afterwards, the fragments were individually fixed with wax in a cylindrical Plexiglas® abutment. The specimens were randomly assigned to eight groups, according to the Er:YAG laser energies and pulse rates performed for cavity preparation (n=10): G1 - 250 mJ/ 3 Hz, G2 - 250 mJ/ 4 Hz, G3 - 250 mJ/ 6 Hz, G4 - 250 mJ/10 Hz, G5 - 250 mJ/ 15 Hz, G6 - 300 mJ/ 3 Hz, G7 - 300 mJ/ 4 Hz and G8 - 300 mJ/ 6 Hz. To demarcate the ablation sit (4 mm2), a piece of insulating tape was attached to the enamel surface. Then, cavities were done (2-mm long/ 2-mm wide/1-mm thick) by an Er:YAG laser device, in non-contact (12mm) and focused mode, with a fine water mist at 1.5mL/min. Temperature values were registered by thermocouples type K connected to a portable USB-based data acquisition module and to a computer configured to read the temperature rise every 3 seconds, from starting laser irradiation until the end of the cavity preparation. Data were analyzed by two-way ANOVA and Mann-Whitney test using a factorial design with energy and pulse rate as independent factors. Multiple comparisons among groups were done by Tukey test (P≤0,05). The groups irradiated with 250 and 300mJ/ 3 and 4 Hz were statistically similar and showed the lower temperature rise means. The set 250mJ/10 and 15 Hz yielded the highest values of temperature, above the critical value acceptable (5.5°C). The setting 250 and 300mJ and 6 Hz provide temperature with mean values below the critical value acceptable, suggesting these parameters to ablate the primary teeth enamel. Moreover, the temperature rise was directly related to the increase of the pulse repetition rates employed.

Este estudo teve como objetivo avaliar in vitro a alteração da temperatura durante a remoção de dentina hígida e desmineralizada de dentes decíduos humanos com o laser Er:YAG. Foram selecionados 30 molares decíduos hígidos, cujas raízes, quando presentes, foram removidas, e as coroas seccionadas no sentido mésio-distal, obtendose 60 fragmentos. Os fragmentos foram fixados em matriz cilíndrica de Teflon®, levados à politriz para desgaste do esmalte e planificação da dentina, obtendo-se fragmentos com espessura de 2,0 mm. Os espécimes foram então divididos aleatoriamente em 2 grupos (n=30): A-dentina hígida e B-dentina desmineralizada. Cada grupo foi dividido em 3 subgrupos (n=10), de acordo com as freqüências utilizadas: I-4 Hz; II-6 Hz e III-10 Hz. Os espécimes no grupo B foram submetidos pelo método de ciclagem de pH, durante 21 dias consecutivos até a obtenção de lesões com aproximadamente 1,0 mm de profundidade. Os parâmetros de irradiação dos espécimes foram de 250 mJ de energia no modo não contato, focado, a uma distância de 12 mm, sob refrigeração 1,5 mL/min e tempo de irradiação de 30 segundos. A temperatura aferida foi registrada por um microtermopar do tipo K adaptado na dentina correspondente à câmara pulpar, por meio do orifício da lâmina de pexiglass, e interligado a uma placa de aquisição, calibrado com 0,2ºC de precisão e tempo de resposta de 0,6 segundos. Os dados foram submetidos ao teste não-paramétrico Kruskal-Wallis e avaliação qualitativa foi realizada em Microscopia Eletrônica de Varredura. A análise dos dados demonstrou que no grupo A houve diferença estatisticamente significante entre todos os subgrupos. E no grupo B, não houve diferença na temperatura entre os subgrupos I e II. A avaliação morfológica da superfície revelou irregularidades superficiais, túbulos dentinários abertos, ausência de smear layer, protrusão da dentina peritubular, independente do substrato, sendo que na frequência de 6Hz e 10 Hz a dentina desmineralizada adquiriu um padrão morfológico semelhante ao da dentina hígida, sugerindo que provavelmente houve remoção da dentina desmineralizada. Concluiu-se que o aumento da temperatura está diretamente relacionado com o aumento da frequência. As alterações superficiais observadas na dentina irradiada em MEV demonstraram ser cada vez mais acentuadas com o aumento da frequência. / The purpose of this study was to assess in vitro the thermal alteration occurred during the removal of sound and demineralized dentin in human primary teeth by the Er:YAG laser. Thirty sound primary molars were selected and roots, when present, were removed and the crowns sectioned in mesiodistal direction, resulting in 60 fragments. The fragments were fixed in a cylinder matrix of Teflon®. The surfaces were ground on a polishing machine at low-speed to remove the overlying enamel and expose flat dentin surfaces, resulting in fragments of 2.0 mm thickness. Then, the fragments were randomly assigned to 2 groups (n=30): A-sound dentin (control) and B-demineralized dentin. Each group was divided into 3 subgroups (n=10) according to the frequencies used: I-4 Hz; II-6 Hz and III-10Hz. Specimens in group B were submitted to a pH-cycling regimen during 21 consecutive days until perform a 1 mm thick depth demineralized dentin. The irradiation was performed with a 250 mJ pulse energy in non-contact and focused mode, with a fine water mist at 1,5 mL/min for 30 seconds at a constant working distance from the target site (12 mm). The measured temperature was recorded by thermocouples type K adapted to the pulp chamber corresponding dentin connected to a potable USB based data acquisition module, calibrated with 0.2ºC of accuracy and response time of 0.6 seconds. The data were submitted to the non-parametric Kruskal-Wallis test and a qualitative analysis by Scanning Electron Microscopy. Data analysis demonstrated that in the group A there was statistically significant difference among all subgroups. And in the group B, there was no difference in temperature between subgroup I and II. The morphological evaluation of the surface showed superficial irregularities, open dentinal tubules, absence of smear layer, dentin peritubular protusion, independent of the substrate. A the frequency of 6 and 10 Hz the irradiated demineralized dentin was similar to sound dentin, showing that probably the removal of demineralized dentin occurred. In conclusion, the increase in the temperature is directly related to the frequency´s increment, in both demineralized and sound dentin. The superficial dentin alterations observed in SEM increased pulse repetition rates yield greater alterations morphological of the irradiated dentin.

As perdas ósseas representam um desafio à cirurgia reparadora, onde a utilização de diferentes fontes de enxertos ósseos com limitações físicas, químicas e biológicas é frequente. Atualmente, a bioengenharia alia os conhecimentos de diferentes áreas para o estudo de novas formas de produção de tecidos, inclusive para uso em cirurgias reparadoras. O objetivo deste estudo foi associar a nanotecnologia e as células-tronco, para estudar a neoformação óssea na região de defeitos ósseos criados em calota craniana de ratos. Dois estudos foram conduzidos. No primeiro, confeccionaram-se matrizes de nanofibras (scaffolds) a partir do ácido poli (lático-co-glicólico) (PLGA) pela técnica de electrospinning, as quais apresentaram propriedades morfológicas adequadas para seu emprego no estudo. Após, cinco amostras de Stem Cell from Deciduos Tooth (SCDT) de humanos, em processo de rizólise, foram obtidas e cultivadas até atingirem entre 5ª e 7ª passagem, momento no qual foram empregadas no estudo. As SCDT foram semeadas em placas de cultura (grupo controle) e nos scaffolds (grupo teste) para os ensaios de adesão, viabilidade e proliferação celular. Observou-se que a capacidade das SCDT em realizar adesão no grupo teste foi semelhante à sua capacidade de adesão no grupo controle, sem diferença estatística entre os grupos. Verificou-se que as células mantiveram-se viáveis durante todos os dias do experimento (21 dias) nos grupos teste e controle, não apresentando diferença estatística entre os grupos. Em ambos os grupos ocorreu o aumento gradativo da viabilidade celular a partir do inicio do experimento até o 14º dia de cultura, seguido pela sua diminuição quando analisada no 21º dia. O segundo trabalho objetivou avaliar a capacidade da associação scaffolds/SCDT em promover neoformação óssea em ratos. Para isso utilizou-se 15 ratos Wistar, nos quais foram confeccionados defeitos críticos de 8,0 mm de diâmetro nas calotas cranianas. Os animais foram divididos em três grupos experimentais com 5 animais cada: grupo 1 – implante no defeito ósseo de scaffolds; grupo 2 – implante no defeito ósseo de scaffolds semeados com SCDT; grupo 3 – implante no defeito ósseo de scaffolds semeados com SCDT que foram mantidas durante 13 dias em meio de diferenciação osteogênica prévio a sua implantação. Decorrido 60 dias pós operatório, foi realizada a análise 10 histométrica, a qual avaliou a quantidade de tecido ósseo formado no interior do defeito produzido Observou-se que a associação scaffold/SCDT mantida em meio osteogênico previamente à implantação apresentou uma maior neoformação óssea em relação aos demais grupos, sendo esta diferença estatisticamente significante. Em vista dos resultados obtidos, conclui-se que, obedecidos os parâmetros utilizados, os scaffolds de PLGA apresentam resultados favoráveis em relação à interação com as SCDT. Ainda, a utilização de meio de diferenciação osteogênico associado ao scafolld/SCDT, prévio a implantação, mostrou que essa associação possui a capacidade de promover neoformação óssea, sendo a sua utilização adequada para o uso na bioengenharia. / Bone loss is a challenge to reconstructive surgery, where the use of different sources of bone grafts with physical, chemical and biological limitations is common. Currently, bioengineering combines knowledge from different fields to study new forms of tissue production, including for use in reconstructive surgery. The aim of this study was to associate nanotechnology and stem cells in relation to the study of bone formation in the area of bone defects created in rat calvaria. Two studies were conducted. Firstly, nanofiber matrices (scaffolds) were made from acid poly (lactic-co-glycolic acid) (PLGA) by the electrospinning technique, which showed morphological properties suitable for use in the study. Following this, five samples from Deciduous Tooth Stem Cells (SCDT) from human, in the process of rhizolysis, were obtained and grown until they reached between the 5th and 7th passage, at which point they were used in the study. The SCDT were seeded onto culture plates (control group) and scaffolds (test group) for adhesion assays, cell viability and proliferation. It was observed that the ability of SCDT to adhere in the test group was similar to their ability to adhere in the control group. There was no statistical difference between the groups. It was found that the cells remained viable for every day of the experiment (21 days) in the test and control groups. There was no statistical difference between the groups. In both groups there was a gradual increase in cell viability from the start of the experiment until the 14th day of culture, followed by their decrease when analyzed on day 21. The second study evaluated the ability of the association scaffolds / SCDT to promote new bone formation in rats. For this, 15 Wistar rats were used, in which were induced critical defects of 8.0 mm diameter in the skulls. The animals were divided into three groups of five: group 1 - bone defect of the implant scaffolds, group 2 - implant in the bone defect of scaffolds seeded with SCDT, group 3 - implant in the bone defect of scaffolds that were seeded with SCDT and kept for 13 days in osteogenic differentiation medium prior to implantation. After 60 days postoperatively, histometric analysis was performed, which assessed the amount of bone formed within the imposed defect. It was observed that the scaffold association/SCDT maintained in osteogenic medium prior to implantation showed greater bone formation than the other groups. This 12 difference was statistically significant. In the light of these results, it can be concluded that, in compliance with the parameters used, the PLGA scaffolds have favorable results in relation to the interaction with the SCDT. Furthermore the use of osteogenic differentiation associated with scafolld / SCDT, prior to implantation showed that this association has the ability to promote bone formation and its use is therefore appropriate for use in bioengineering.

As células-tronco mesenquimais (CTMs) tornaram-se um grande interesse para a ciência por serem capazes de estimular a regeneração tecidual, apresentarem habilidade de se expandir e diferenciar em cultura e, consequentemente, apresentarem diversas possibilidades terapêuticas, bem como para a engenharia de tecidos. Muitos dos tecidos dentários também apresentam nichos de CTMs. O fácil acesso à polpa dos dentes decíduos, em virtude da esfoliação dental, a torna uma fonte muito atraente para a terapêutica e a engenharia de tecidos. Todos os avanços advindos das terapias baseadas em células-tronco tornam a preservação das fontes celulares, por longos períodos de tempo, um assunto de suma importância. Para que isso possa ocorrer, métodos de armazenamento devem ser adotados, tanto para as culturas celulares já estabelecidas, quanto para os tecidos inteiros. Uma das formas mais comuns de manutenção de culturas e de tecidos é a criopreservação em nitrogênio líquido. Contudo, existem poucas evidências no sentido de estabelecer um protocolo eficaz para o congelamento do dente decíduo intacto. Dessa forma, esse trabalho objetivou isolar, cultivar e caracterizar, para parâmetros apresentados para CTMs, as células pulpares após a criopreservação de dentes decíduos intactos por 7 dias. Para isso, vinte e seis dentes decíduos foram alocados em 2 grupos experimentais, sendo: grupo 1, células pulpares de dentes decíduos criopreservados intactos (grupo Crio) e grupo 2, células pulpares de dentes decíduos isoladas imediatamente após a exodontia (grupo fresco - controle). As células pulpares de ambos os grupos foram isoladas, cultivadas, analisadas por citometria de fluxo (CD14, CD29, CD34, CD45, CD73, CD90 e HLA-DR), submetidas aos protocolos de diferenciação osteogênica, adipogênica e condrogênica, e aos ensaios de proliferação celular (WST-8). A morfologia celular de ambos os grupos foi avaliada por microscopia confocal. Os resultados demonstraram uma taxa de cultivo de 30% para o grupo Crio e 61% para o grupo Fresco. Não houve diferença estatística entre os grupos para os marcadores de superfície analisados. As células de ambos os grupos foram capazes de se diferenciar em células das 3 linhagens testadas. Para o ensaio de proliferação, não houve diferença estatística entre os grupos ao longo dos tempos testados (p>0,05), embora a média de dias entre o isolamento e a quinta passagem foi menor para o grupo controle (p=0,035). As células do grupo Crio mostraram morfologia alterada. Assim, conclui-se ser possível obter células-tronco da polpa de dentes decíduos congelados pelo protocolo sugerido, sem alterações imunofenotípicas. No entanto, esse protocolo demonstrou baixas taxas de sucesso de isolamento, menor capacidade de diferenciação e de proliferação, além de alteração da morfologia celular. / Mesenchymal stem cells (MSC) became of great value for science for being capable of stimulating tissue regeneration and showing ability to proliferate and differentiate when cultured properly. Dental tissues also present MSC niches as well. Mesenchymal stem cells from the pulp of deciduous teeth are considered an easy access source during a specific period of time in the patients life, when teeth are undergoing exfoliation; therefore, very attractive for cell based therapeutics and tissue engineering. All advances seen in cell based therapies for the last years depend on cell or tissue preservation for long periods of time. Thus, storage methods must be adopted for cultures of cells and whole tissues. The most common technique to preserve cell cultures and tissues is cryopreservation with liquid nitrogen. However, fragile evidence concerns the cryopreservation of intact deciduous teeth. This research aimed to isolate, cultivate and characterize the dental pulp cells of intact cryopreserved deciduous teeth and compare to the dental pulp cells of non-cryopreserved deciduous teeth. Thirteen pairs of deciduous teeth were donated from patients in orthodontic treatment and were randomly allocated in two different groups. The first group was made of cryopreserved intact deciduous teeth (Cryo group), and in second group pulp cells were isolated from fresh teeth (Fresh group). The cells of both groups were isolated, cultivated and characterized for mesenchymal stem cell parameters, and then compared for isolation and proliferation rates, surface markers expression (CD14, CD29, CD34, CD45, CD73, CD90 and HLA-DR), differentiation ability and morphology. The culture rate was 30% for the cryopreserved group and 61% for the fresh. There were no statistical differences between the groups for the surface markers tested. Cells in both groups were capable of differentiating in the 3 mesenchymal lineages. For the proliferation assay, there was no statistical difference between groups throughout the time tested although the mean time between isolation and the fifth passage was lower for the control group (p=0,035). Cells from Cryo group showed altered morphology. The present study showed that Dental Pulp Stem Cells can be obtained from cryopreserved intact deciduous teeth without changes in the immunophenotypical profile, however low success rates for isolation, differentiation ability and morphological alterations were observed.

Uma variedade de biomateriais são estudados para aplicação na engenharia de tecidos, entre os quais os scaffolds de ácido poli (láctico-co-glicólico) (PLGA), produzidos pela técnica de electrospinning. Por meio dessa técnica é possível adicionar diferentes moléculas bioativas durante o processo de produção do biomaterial, tais como a dexametasona (DEX). A DEX é caracterizada por o seu potencial anti-inflamatório e imunossupressor e pela sua capacidade de promover a diferenciação de células-tronco mesenquimais (MSCs) em linhagem osteogênica. Este estudo teve o objetivo de produzir e caracterizar scaffolds de PLGA com diferentes quantidades de DEX (100% puro) e verificar suas propriedades mecânicas, bem como a sua influência sobre MSCs de polpa de dentes decíduos. Sete grupos de scaffolds foram produzidos nas seguintes proporções: 1 parte de DEX para 20 partes de PLGA, identificado como 1:20. Seguindo este, 1:10, 1: 4, 1: 2, 3: 4 e 1: 1, partes de DEX:PLGA foram usadas. Assim, os seguintes grupos foram estudados: A: scaffolds de PLGA sem DEX (grupo controle); B: 1:20; C: 1:10; D: 1:4; E: 1:2; F: 3:4 e G: 1:1. A presença de DEX nos scaffolds e a sua taxa de libertação foi avaliada no decorrer de 21 dias por análise de luz UV (λ = 254 nm). Todos os scaffolds foram avaliados quanto às suas características físico-químicas por microscopia eletrônica de varredura (MEV) e por análise mecânica dinâmica (DMA). A interação dos scaffolds com as MSCs foi avaliada durante 21 dias por meio do ensaio de WST-8 e lactato desidrogenase (LDH). O potencial osteogênico dos scaffolds com DEX foi avaliada pela expressão de fosfatase alcalina, coloração com Alizarin Red e análise por RT-PCR. A análise por luz UV mostrou que após 21 dias de cultura, todos os grupos liberaram entre 73 a 79 % da DEX total presente nos scaffolds presente no início do experimento. As fotomicrografias de MEV mostraram fibras distribuídas de maneira aleatória em todos os grupos, com um grande número de poros interconectados. A análise de DMA mostrou que com o aumento da incorporação de DEX, o diâmetro das fibras e a espessura dos scaffolds também aumentou, enquanto o módulo de elasticidade não se alterou. O ensaio de WST-8 e LDH mostraram que ao longo de 21 dias a viabilidade celular aumentou nos grupos A, B, C e D, enquanto que diminuiu nos grupos E, F e G. Com base nos ensaios de avaliação osteogénica, pode-se observar que scaffolds com DEX não apresentaram tal potencial. A partir dos dados do presente estudo, pode ser concluído que os scaffolds com DEX surgem como uma ferramenta promissora para aplicação em engenharia de tecidos, no entanto, esta associação não apresentou potencial de promover a diferenciação osteogénica de MSCs. / A variety of biomaterials are undergoing studies for application in tissue engineering, among which are poly (lactic-co-glycolic) acid (PLGA) scaffolds, produced by the electrospinning technique. Through this technique, it is possible to add different bioactive molecules during the biomaterial production process, such as dexamethasone (DEX). DEX is characterized by its anti-inflammatory and immunosuppressive potential and by its ability to promote the differentiation of mesenchymal stem cells (MSCs) to osteogenic lineages. This study has aimed to produce and characterize PLGA scaffolds with different quantities of DEX (100% pure) and verifies the mechanical properties of the scaffolds, as well as the role of the scaffolds on the outcome of the MSCs from deciduous teeth. Seven groups of scaffolds were produced in the following proportions: 1 part DEX to 20 parts PLGA, identified as 1:20. Following this, 1:10, 1:4, 1:2, 3:4 and 1:1, DEX:PLGA parts were used. The following groups were studied: A: PLGA scaffold without DEX (control group); B: 1:20; C: 1:10; D: 1:4; E: 1:2; F: 3:4 and G: 1:1. The DEX presence in the scaffolds and its release rate from the scaffolds over 21 days were determined by UV light analysis (λ = 254 nm). All the scaffolds were evaluated for their physicochemical characteristics by scanning electron microscope (SEM) and by dynamic mechanical analysis (DMA). The interaction of the scaffolds with MSCs was assessed over 21 days by WST-8 and lactate dehydrogenase (LDH) assay. The osteogenic potential of the scaffold with DEX was assessed by alkaline phosphatase assay, Alizarin red staining and RT-PCR analysis. The UV light analysis showed that after 21 days of culture all the groups released between 73 to 79% of the total DEX present in the scaffolds at the beginning of the experiment. The SEM micrographs showed fibers distributed in a random manner in all groups, with a large number of interconnected pores. DMA analysis showed that with the increase of DEX incorporation, the fiber diameter and scaffolds thickness also increased while their elastic modulus did not change. The WST-8 and LDH assay showed that, over 21 days of culture, the cell viability increased in groups A, B, C and D, while decreased in groups E, F and G. Based on the osteogenic assays, it could be observed that the scaffolds with DEX did not have the osteogenic potential. From the data of this study, it can be concluded that the scaffolds with DEX appear to be a promising tool for application in tissue engineering, however, this association did not show the potential for promote the osteogenic differentiation.

As evidências, até então disponíveis, revelam o sucesso de tipos diferentes de abordagem conservadora de lesões de cárie profundas e as reações do complexo dentino-pulpar, entre elas a formação de dentina reacional. O objetivo do presente estudo foi avaliar histologicamente o tecido pulpar de dentes decíduos humanos submetidos a diferentes abordagens conservadora. A amostra foi composta por 25 molares decíduos, divididos em 5 grupos, sendo os primeiros tratados com remoção total de tecido cariado sem exposição pulpar (RTTC), remoção parcial de tecido cariado em sessão única (RPTC) e tratamento expectante (TE), além dos controles positivo (molares hígidos) e negativo (molares com lesão de cárie ativa profunda em dentina sem tratamento restaurador). Foi realizada a quantificação de dentina reacional, da presença ou não de inflamação e reabsorção pulpar e uma análise descritiva da morfologia pulpar através da observação de cada lâmina ao microscópio. Não foi encontrada diferença estatisticamente significativa entre os grupos, entretanto houve maior formação de dentina reacional no grupo de RPTC, nos levando a entender que o tratamento menos invasivo pode ser uma alternativa terapêutica definitiva para o tratamento das lesões profundas de cárie em dentina de dentes decíduos. / The evidence available so far shows the success of the conservative approach of deep carious lesions and the reactions of the pulp-dentin complex, including the formation of reactionary dentin. The aim of this study was to evaluate histologically the pulp tissue of human deciduous teeth undergoing different conservative treatments. The sample was composed of 25 primary molars, divided into 5 groups, the first being treated with total caries removal without pulp exposure (TCR), partial caries removal in one session (PCR) and stepwise excavation (SW), and positive controls (sound molars) and negative (molars with active deep caries lesion without restorative treatment). Quantification of reactive dentin was performed, the presence or absence of resorption and inflammation and pulp descriptive analysis of the morphology of pulp through observation of each slide under a microscope. There was no statistically significant difference between the groups, but there was more reactionary dentin formation in PCR group, leading us to understand that the less invasive treatment may be an alternative therapy for the definitive treatment of deep caries lesions in dentin of deciduous teeth.

O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito in vitro de três medicamentos líquidos orais pediátricos de uso prolongado no esmalte de dentes decíduos. Sessenta incisivos superiores decíduos hígidos, recentemente esfoliados, foram seccionados de forma a expor a superfície vestibular e foram fixados em bases acrílicas. As superfícies foram polidas e os conjuntos dente/base acrílica foram impermeabilizados com duas camadas de esmalte cosmético para unhas, deixando exposta uma área de 2 mm² na superfície vestibular, na qual as medidas de Microdureza Superficial Knoop foram realizadas (25 gf, 30 s e 3 penetrações). Os espécimes foram divididos aleatoriamente em 4 grupos (n=15) de acordo com os medicamentos empregados (Guaifenesina- Xarope Vick®-Mel; Sulfato Ferroso- Sulferrol®; Sulfato de Salbutamol) e o grupo controle (Saliva Artificial). Os ciclos de imersão foram realizados durante um período de 28 dias, sob leve agitação por 1 min, 3 vezes ao dia, com 6 horas de intervalo, quando espécimes eram mantidos em saliva artificial. As medidas de microdureza superficial foram realizadas após 7, 14, 21 e 28 dias e os dados obtidos foram estatisticamente analisados. A Microscopia Eletrônica de Varredura foi realizada em 20 espécimes, após o período de 28 dias de exposição em cada solução. A ANOVA, seguida pela decomposição da soma dos quadrados e o teste de Tukey mostraram diferenças estatisticamente significantes na microdureza superficial entre os 3 medicamentos: Sulfato Ferroso (236,7 KHN); Sulfato de Salbutamol (118,5 KHN); Guaifenesina (231,6 KNH); quando comparados ao grupo controle (305,7 KNH). Não houve diferença significante entre os grupos de Sulfato Ferroso e Guaifenesina. Todos os medicamentos avaliados reduziram os valores de microdureza do esmalte e o menor valor de microdureza foi encontrado no grupo do Sulfato de Salbutamol. Concluiu-se que todos os medicamentos relatados no estudo apresentaram efeito erosivo à superfície do esmalte de dentes decíduos. / The aim of this study was evaluate in vitro the erosive effect of 3 pediatric long-term relief syrups on enamel of primary teeth. Sixty sound exfoliated deciduous superior incisors were sectioned in order to expose the buccal surface and fixed in acrylic bases. The surfaces were flat and ground and the ensembles thooth/acrylic base were rendered waterproof by coating them with cosmetic nail varnish, leaving exposed a 2-mm² area on the buccal surface, in which superficial Knoop microhardness measurements were performed (25 gf, 30 sec and 3 indentations). The specimens were randomly assigned to 4 groups (n=15) according to the medications employed (Guaifenesin - Vick®-Mel Syrup; Ferrous Sulfate - Sulferrol®-; Salbutamol Sulfate) and the control group (Artificial Saliva). The immersion cycles were performed during a 28-day period, under low agitation for 1 min, 3 times a day, with 6 hours interval, when specimens were kept in artificial saliva. The superficial microhardness measurements were performed after 7, 14, 21 and 28 days and the data were statistically analyzed. Scanning electron microscopy was performed after the 28-day of exposition in each solution. The two-way ANOVA, followed by sum of squares decomposition and Tukeys test showed significant differences in superficial microhardness between the 3 medicaments: Ferrous Sulfate (236.7 KHN); Salbutamol Sulfate (118.5 KHN); Guaifenesin (231.6 KNH); compared with control group (305.7 KNH). There was no significant difference between the groups of Ferrous Sulfate and Guaifenesin. All the syrups evaluated reduced the final enamel microhardness and the lowest microhardness value was Salbutamol Sulfate. It may be concluded that the syrups of the reported study presented erosive effect on the enamel surface of primary teeth.

A eficiência dos lasers associado ou não a fluoretos no aumento da resistência ácida e na redução da solubilidade do esmalte dentário tem sido confirmada em diversos estudos. Diversos comprimentos de onda têm sido utilizados com esta finalidade, apresentando bons resultados e representando uma abordagem preventiva simples e não invasiva. Apesar do emprego do laser Nd:YAG ter sua ação preventiva bem conhecida, são escassos os estudos em dentes decíduos, principalmente estudos que estabeleçam parâmetros seguros e eficientes, seja associado ao flúor ou isoladamente. Desta forma, o objetivo do presente estudo foi avaliar a resistência ácida e a permeabilidade do esmalte decíduo. Para tanto, foram selecionados 69 molares decíduos humanos, resultando em 132 corpos-de-prova. As variáveis de resposta quantitativa foram a microdureza longitudinal, profundidade da desmineralização e permeabilidade do esmalte, e as variáveis de resposta qualitativa foram morfologia da superfície, presença de íons flúor e análise dos componentes químicos do esmalte. Foram utilizados 60 fragmentos vestibular/lingual para a análise de resistência ácida e midrodureza (n=10), e após preparados e tratados, estes espécimes foram submetidos ao ciclo de desremineralização para formação de lesão de cárie artificial. Para análise da permeabilidade (48 fragmentos n=8), para a análise de MEV e EDX (18 fragmentos n=3) e para DRX (6 dentes n=1) foi realizado apenas o tratamento da superfície em 6 níveis: C- Controle: sem tratamento; FA: aplicação de gel flúor fosfato acidulado 1,23%; FAL: aplicação de gel flúor fosfato acidulado + Laser Nd:YAG 0,5W/10Hz no modo contato; VF: aplicação de verniz fluoretado 5%; VFL: aplicação de verniz fluoretado 5% + Laser Nd:YAG; L: aplicação do Laser Nd:YAG. Os dados de microdureza (%VM) foram avaliados pelo teste de Kruskal-Wallis e os dados de profundidade da desmineralização (PD) e Permeabilidade (P) foram avaliados pelos testes ANOVA e Fisher′s LSD (α=5% para todos os testes). Observou-se que os grupos FAL e FA apresentaram a menor variação de dureza em relação aos outros grupos; menor extensão de desmineralização foi observada nos grupos FA, FAL, VF, VFL e L e menor permeabilidade foi verificada nos grupos FA, FAL, VF, VFL e L em relação ao grupo controle (C). Na MEV observouse ausência de fissuras, crateras ou qualquer alteração indesejável na superfície. Na EDX observou-se incorporação de flúor em todos os grupos experimentais (FA, FAL, VF, VFL), exceto no grupo laser (L). Nenhum composto novo foi encontrado na análise de DRX após a associação do flúor com o laser. O laser utilizado isoladamente ou associado ao flúor levou a alterações ultra-estruturais na superfície do esmalte, o que pode ter sido responsável pelo aumento da resistência ácida e redução da permeabilidade, indicando que o laser isoladamente ou associado ao flúor, nas condições desta pesquisa, foi capaz de inibir a desmineralização do esmalte dental decíduo. / The efficiency of lasers associated or not with fluorides, in increasing the acid resistance and decrease of enamel solubility of dental enamel has been confirmed by several studies. Several wavelengths have been used for such purpose, providing good results and representing a simple and non-invasive preventive approach. Although the preventive action of Nd:YAG laser is well known, studies on primary teeth are scarce, especially those that establish safe and efficient parameters, when the laser is either associated with fluoride or used alone. Therefore, the aim of this study was to evaluate the acid resistance and permeability of primary tooth enamel. Sixty-nine human primary molars were used, providing 132 specimens. The quantitative response variables were enamel longitudinal microhardness, demineralization depth and permeability, while the qualitative response variables were surface morphology, presence of fluoride ions and analysis of the chemical components of enamel. Sixty buccal/lingual fragments were used for analysis of acid resistance and microhardness (n=10). After being prepared and treated, thee specimens were subjected to a des-remineralization cycle for artificial caries lesion formation. For analysis of permeability (48 fragments, n=8), SEM and EDX (18 fragments, n=3) and DRX (6 teeth, n=1), only surface treatment was performed in 6 levels: C- Control: no treatment; APF: application of 1.23% acidulated phosphate fluoride gel; APFL: application of 1.23% acidulated phosphate fluoride gel + Nd:YAG laser 0.5W/10Hz in mode contact; FV: application of 5% fluoride varnish; FVL: application of 5%fluoride varnish + Nd:YAG laser; L: application of Nd:YAG laser. Microhardness data (%VM) were analyzed by the Kruskal-Wallis test and demineralization depth (DD) and permeability (P) were analyzed by ANOVA and Fisher′s LSD test (α=5% for all tests). APFL and APF presented the lowest microhardness variation of all groups; lower extension of demineralization was observed in groups APF, APFL, FV, FVL and L, and lower permeability was observed in groups APF, APFL, FV, FVL and L compared to group C. The SEM analysis revealed absence of fissures, craters or any other undesirable surface alteration. The EDX analysis revealed fluoride incorporation in all experimental groups (APF, APFL, FV, FVL), except for the group L. No new compound was found in the DRX analysis when fluoride was associated with the laser. Laser alone or associated with fluoride produced ultrastructural alterations on enamel surface, which might have caused the increase of acid resistance and decrease of permeability, thus indicating that, under the conditions of this study, the Nd:YAG laser used alone or associated with fluoride was capable of inhibiting the demineralization of primary tooth enamel.