OBJETIVO. O objetivo deste estudo foi verificar a variação entre observadores, com diferentes graus de treinamento em RM das mamas, na aplicação dos critérios morfológicos e cinéticos propostos pelo BI-RADS® para descrever os realces na RM. Também, buscou-se avaliar a importância desta variação sobre a categorização final e a conduta sugerida, antes e após o conhecimento dos dados clínicos e dos demais exames de imagem pertinentes a cada caso. MÉTODOS. 109 realces, sendo 36 malignos, em 96 mulheres, foram interpretados por quatro radiologistas, divididos em duas duplas de acordo com a experiência em RM das mamas. Cada realce foi descrito seguindo os critérios de interpretação propostos pelo BI-RADS® para RM, sendo posteriormente informada a categoria final e a recomendação sugerida para cada caso. Tanto a categoria final quanto a conduta sugerida foram informadas duas vezes por cada observador, uma vez antes do conhecimento dos dados clínicos e dos demais exames de imagem e outra vez após o conhecimento dos mesmos. A concordância entre os membros de cada uma das duplas quanto à aplicação dos critérios de descrição morfológicos e dinâmicos utilizados na caracterização dos realces foi medida, seguida pela mensuração da concordância quanto à classificação final e a conduta recomendada, tanto antes quanto após o conhecimento dos dados clínicos. O teste kappa foi usado para estimar a concordância entre os observadores além daquela esperada pelo acaso. Visando determinar se as taxas de concordância de uma dupla de observadores eram superiores a da outra dupla, tanto para os critérios de descrição quanto para as categorias finais e condutas sugeridas, o teste de Wilcoxon foi utilizado. RESULTADOS. A concordância entre observadores experientes foi substancial (0,64) para categoria final após o conhecimento dos dados clínicos, moderada para forma dos nódulos (0,44), realce interno dos nódulos (0,41) e recomendação sugerida após o conhecimento dos dados clínicos (0,52). Concordância razoável foi obtida para todos os critérios entre os observadores não experientes, assim como para os demais critérios para os observadores experientes. Os observadores com maior experiência apresentaram maiores taxas de concordância entre si na aplicação dos critérios de descrição morfológicos e dinâmicos propostos pelo BI-RADS®, assim como para categoria final e conduta sugerida. CONCLUSÃO. Experiência prévia em RM das mamas aumenta a concordância entre observadores na aplicação dos critérios propostos pelo BI-RADS® para RM. Conhecimento dos dados clínicos e dos demais exames de imagem também aumenta a concordância para a categoria final e recomendação sugerida, especialmente entre os observadores experientes. / OBJECTIVE. The purpose of this study was to assess the variability among observers with different degree of breast MR expertise in the use of the Breast Imaging Reporting and Data System (BI-RADS®) standardized MR lexicon and to evaluate if the variability in lesion description has any implication over lesion final category and management recommendation before and after the knowledge of clinical and other imaging modalities information. MATERIALS AND METHODS. In 96 women, 109 enhancements, including 36 malignant, were interpreted independently by four radiologists divided in pairs according to their experience in breast MR. Each lesion was described using morphologic and dynamic features from the MR BI-RADS® lexicon. A final category and an overall impression were suggested in two occasions, one before and the other after the information about other breast imaging modalities and clinical examination. The agreement between the two members of each pair was measured concerning the description of the enhancement and both final category and recommendation. Kappa statistics were calculated as measures of agreement beyond chance. In order to determine if the rates of agreement in a group were superior then in the other group, the Wilcoxon statistics were used. RESULTS. The experienced interobserver agreement was substantial (0.64) for BI-RADS® final category after the knowledge of clinical information, moderate for mass shape (0.44), mass enhancement (0.41) and management recommendation after clinical knowledge (0.52). Fair agreement was observed for all descriptors among the observer with less experience and for the other descriptors among the experienced ones. The observers with more experience agreed more between themselves for image descriptors and final assessment and recommendation than did the observers with less experience in breast MR. CONCLUSION. Prior experience in breast MRI decreases variability between observers in the application of the criteria proposed by the BI-RADS for MR. Knowledge of relevant information about clinical and other imaging modalities also increased agreement for final category and management recommendation, especially among the experienced radiologists.

Made available in DSpace on 2015-05-14T12:14:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 607405 bytes, checksum: 901b07535dd697c3ac45d2bdfef30f70 (MD5) Previous issue date: 2014-08-08 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / In this thesis, we study the generalized harmonic oscillator with frequency dependent mass and time and subjected to a friction force whose speed depends on the time, of classical and quantum points of view. Obtained the solutions of the classical equation of motion of this system for some special cases, we derive an equation of motion that describes three systems. Then, with the help of quadratic invariant operators the light of the method of dynamical invariants we find the exact solutions of the Schrodinger equation for this system. We derive the geometric, dynamic and Berry for this system non-stationary phases and we evaluate this phases for three special cases. After this, we construct coherent states for this quantized system and employ them to investigate some properties quantum properties such as quantum uctuations of the coordinate and momentum as well as the product of the uncertainties. We then use a linear invariant operator light of the method of dynamical invariants in the intention of finding exact Schrodinger equation for the damped harmonic oscillator for forced time-dependent solutions. As described in our contribution we built solutions in the form of Gaussian wave packets as well as calculate the quantum uctuations of the coordinates and time, as well as the correlations between them. Finally, we show that the width of the uctuations and correlations of the Gaussian packet does not depend on the external force / Na presente tese, estudamos o oscilador harmônico generalizado com massa e frequência dependentes do tempo e submetido a uma força de fricção linear na velocidade cujo coeficiente de fricção depende do tempo, do ponto de vista clássico e quântico. Obtivemos as soluções da equação de movimento clássica deste sistema para alguns casos particulares e derivamos uma equação de movimento que descreve simultaneamente três sistemas diferentes. Em seguida, com a ajuda dos operadores invariantes quadráticos e à luz do método de invariantes dinâmicos encontramos as soluções exatas da equação de Schrodinger para este sistema. Também derivamos as fases geométrica, dinâmica e de Berry para este sistema não-estacionário e as avaliamos para três casos especiais. Ainda construímos estados coerentes para este sistema quantizado e os empregamos para investigar algumas propriedades quânticas tais como utuações quânticas da coordenada e momento bem como do produto das incertezas. Em seguida, utilizamos um operador invariante linear e usamos o método de invariantes dinâmicos para encontrar soluções exatas da equação de Schrodinger para um oscilador harmônico amortecido e forçado dependente do tempo. Com as soluções desta equação, construímos soluções na forma de pacotes de onda Gaussianos assim como calculamos as utuações quânticas das coordenadas e momentos, bem como as correlações entre ambos. Finalmente, mostramos que a largura das utuações e correlações do pacote Gaussiano não dependem da força externa.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Nesta dissertaÃÃo foi estudado o problema de processar consultas kNN em redes de rodovias considerando o histÃrico das condiÃÃes de trÃfego, em particular o caso onde a velocidade dos objetos mÃveis depende do tempo. Dado que um usuÃrio està em uma dada localizaÃÃo e em um determinado instante de tempo, a consulta retorna os k pontos de interesse (por exemplo, postos de gasolina) que podem ser alcanÃados em uma quantidade de tempo mÃnima considerando condiÃÃes histÃricas de trÃfego. SoluÃÃes anteriores para consultas kNN e outras consultas comuns em redes de rodovia estÃticas nÃo funcionam quando o custo das arestas (tempo de viagem) à dependente do tempo. A construÃÃo de estratÃgias e algoritmos eficientes e corretos, e mÃtodos de armazenamento e acesso para o processamento destas consultas à um desafio desde que algumas das propriedades de grafos comumente supostas em estratÃgias para redes estÃticas nÃo se mantÃm para redes dependentes do tempo. O mÃtodo proposto aplica uma busca A∗ à medida que vai, de maneira incremental, explorando a rede. O objetivo do mÃtodo à reduzir o percentual da rede avaliado na busca. Para dar suporte à execuÃÃo do algoritmo, foi tambÃm proposto um mÃtodo para armazenamento e acesso para redes dependentes do tempo. A construÃÃo e a corretude do algoritmo sÃo discutidas e sÃo apresentados resultados experimentais com dados reais e sintÃticos que mostram a eficiÃncia da soluÃÃo. / In this dissertation we study the problem of processing k-nearest neighbours (kNN)queries in road networks considering the history of traffic conditions, in particular the case where the speed of moving objects is time-dependent. For instance, given that the user is at a given location at a certain time, the query returns the k points of interest (e.g., gas stations) that can be reached in the minimum amount of time. Previous solutions to answer kNN queries and others common queries in road networks do not work when the moving speed in each road is not constant. Building efficient and correct approaches and algorithms and storage and access schemes for processing these queries is a challenge because graph properties considered in static networks do not hold in the time dependent case. Our approach uses the well-known A∗ search algorithm by applying incremental network expansion and pruning unpromising vertices. The goal is reduce the percentage of network assessed in the search. To support the algorithm execution, we propose a storage and access method for time-dependent networks. We discuss the design and correctness of our algorithm and present experimental results that show the efficiency and effectiveness of our solution.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / Neste trabalho apresentamos soluÃÃes clÃssicas e quÃnticas de osciladores harmÃnicos acoplados dependentes do tempo. Nesses sistemas as massas, frequÃncias e o parÃmetro de acoplamento sÃo funÃÃes do tempo. Quatro sistemas sÃo investigados. Para obter as soluÃÃes clÃssicas usamos uma transformaÃÃo de coordenada e momento juntamente com uma transformaÃÃo canÃnica para escrever o Hamiltoniano original como a soma de dois Hamiltonianos de osciladores harmÃnicos desacoplados dependentes do tempo com frequÃncias modificadas dependentes do tempo e massas unitÃrias. Encontramos soluÃÃes analÃticas para a posiÃÃo e a velocidade para cada oscilador de todos os sistemas. Para obter as soluÃÃes quÃnticas exatas usamos uma transformaÃÃo unitÃria e o mÃtodo invariante de Lewis e Riesenfeld. As funÃÃes de onda sÃo escritas em termos de uma quantidade escalar a qual à soluÃÃo da equaÃÃo de Milne-Pinney. Para cada sistema resolvemos a respectiva equaÃÃo de Milne-Pinney e discutimos como as flutuaÃÃes quÃnticas e o produto de incerteza evoluem no tempo. / In this work we present the classical and quantum solutions of time-dependent coupled harmonic oscillators. In these systems the masses, frequencies and coupling parameter (k) are functions of time. Four systems are investigated. To obtain the classical solutions we use a coordinate and momentum transformations along with a canonical transformation to write the original Hamiltonian as the sum of two Hamiltonians of uncoupled harmonic oscillators with modified time-dependent frequencies and unitary masses. We find the analytical expression for position and velocity of each oscillator of the systems. To obtain the exact quantum solutions we use a unitary transformation and the Lewis and Riesenfeld invariant method. The wave functions obtained are written in terms of a c-number quantity () which is solution of the Milne-Pinney equation. For each system we solve the respective Milne-Pinney equation and discuss how the quantum fluctuations and the uncertainty product evolve with time.

A peçonha de anêmonas do mar é uma fonte conhecida de compostos bioativos, incluindo peptídeos, que atuam em canais voltagem-dependentes. Foram descritos 4 tipos de neurotoxinas de anêmonas do mar, que atuam em canais NaV e 4 tipos que atuam em canais KV. Essas toxinas têm permitido discriminar subtipos de canais voltagem-dependentes, estreitamente relacionados, e constituem poderosas ferramentas para estudar o funcionamento e estrutura desses canais. Neste estudo, foram isolados e caracterizados três peptídeos da fração neurotóxica da anêmona do mar Anthopleura cascaia. Esses peptídeos foram nomeados como AcaIII1425, AcaIII2970 e AcaIII3090, onde Aca faz referência a espécie e os números seguem os resultados obtidos nas etapas de purificação. A peçonha foi extraída por meio de estímulos elétricos e purificada por gel-filtração (Sephadex G-50) e fase reversa por HPLC (C-18). As massas moleculares foram obtidas por meio de MALDI-TOF, apresentando 3337,4 Da para a AcaIII1425, 4881,7 Da para a AcaIII2970 e 4880,5 Da para AcaIII3090. Através da técnica de voltage-clamp, esses peptídeos foram testados em diferentes subtipos de canais NaV e KV expressados em ovócito de Xenopus. As toxinas AcaIII2970 e AcaIII3090 retardam, de maneira seletiva, a inativação rápida dos subtipos rNaV1.3, mNaV1.6 e hNaV1.5, enquanto que as outras isoformas testadas permaneceram inalteradas. É importantemente salientar que, a AcaIII2970 e AcaIII3090 também foram examinadas no canal de inseto DmNaV1, revelando uma clara \"filo-seletividade\" na eficácia da atividade das toxinas. A AcaIII2970 e AcaIII3090 inibem fortemente a inativação do canal NaV de inseto, resultando em um aumento na amplitude do pico da corrente e removendo completamente a inativação rápida. Para quantificarmos essa \"filo-seletividade\", foram construídas curvas da dependência da concentração no retardo da inativação induzida pelas toxinas AcaIII2970 e AcaIII3090 nos canais em que apresentaram maior eficácia. Os IC50 foram obtidos após a plotagem dos dados em uma curva sigmoidal. Para a AcaIII2970, os seguintes valores de IC50 foram obtidos: DmNaV1 = 162,19 ± 11,22 nM, mNaV1.6 = 645,92 ± 18,52 nM, rNaV1.3 = 572,56 ± 44,96 nM. Para a AcaIII3090, os seguintes valores de IC50 foram obtidos: DmNaV1 = 99,03 ± 9,25 nM, mNaV1.6 = 158,30 ± 33,86 nM, rNaV1.3 = 371,60 ± 6,48 nM. A AcaIII1425 atua, bloqueando, de modo seletivo os subtipos rKV1.1, rKV1.6 e rKV4.3, enquanto que as outras isoformas testadas permaneceram inalteradas. Devido à maior especificidade da toxina AcaIII1425 pelos subtipos rKV1.1 e rKV1.6, foram realizados ensaios de bloqueio da corrente do canal em função da concentração da toxina (curva dose-resposta). Os valores de IC50 para os subtipos rKV1.1 e rKV1.6 são de 7642,98 ±1601,65 nM e 241,65 ±4,27 nM, respectivamente. Desta forma, a AcaIII1425 é cerca de 32 vezes mais potente em canais do subtipo rKV1.6 do que em relação aos canais do subtipo rKV1.1. A estrutura primária das toxinas foram determinadas por degradação de Edman. A sequência parcial da AcaIII2970 e AcaIII3090 revelou que estas são similares a toxinas de canal de sódio do tipo1 de anêmonas do mar. A sequência completa da AcaIII1425 não apresenta similaridade com toxinas de anêmonas do mar, mas é similar a toxinas de Conus e aranha que possuem um motivo estrutural conhecido como ICK. Dessa forma, propomos que a AcaIII1425 seja um novo grupo de toxinas de anêmonas do mar que bloqueiam KV. Dado o ineditismo da toxina AcaIII1425, foram feitos experimentos in silico para obtermos um maior refinamento do mecanismo de interação entre a toxina e o canal rKV1.6. Estes experimentos indicaram que diferentes regiões dos canais KV são importantes para a seletividade e potência da toxina, corroborando com as propostas que vem sendo descritas / The venom of sea anemones is a known source of bioactive compounds, including peptides that act on voltage-gated ion channels. Four types of neurotoxins from sea anemones, acting on NaV channels, and four types acting on KV channels, have been reported. These toxins have developed the ability to discriminate closely related subtypes of voltage-gated channels, making them powerful tools to studying the function and structure of these channels. In this study, we isolated and characterized three peptides of the neurotoxic fraction from the venom of the sea anemone Anthopleura cascaia. These peptides were named as AcaIII1425, and AcaIII2970 AcaIII3090, where Aca refers to the species and the following numbers refer to results obtained in the purification steps. The venom was milked by electric shock and purified by molecular exclusion (Sephadex G-50) and reverse phase HPLC (C-18). Their molecular weights are 3337.4 Da to AcaIII1425, 4881.7 Da to AcaIII2970 and 4880.5 Da to AcaIII3090, obtained through a MALDI-TOF. Using the voltage-clamp technique, we have assayed the effects of these peptides on different subtypes of NaV and KV channels expressed in Xenopus oocytes. AcaIII2970 and AcaIII3090 toxins selectively slow down the fast inactivation of rNaV1.3, mNaV1.6 and hNaV1.5 subtypes, while the other mammalian isoforms remained unaffected. Importantly, AcaIII2970 and AcaIII3090 were also examined in insect DmNaV1 channel, revealing a clear phyla-selectivity with regards to the efficacy of the toxin. AcaIII2970 and AcaIII3090 strongly inhibit the inactivation of the insect NaV channel, resulting in an increase in the amplitude of the peak current, and complete removal of the fast and steady-state inactivation. In order to quantify this \"phyla-selectivity\", curves of the concentration dependence of the delayed inactivation induced by AcaIII2970 and AcaIII3090 toxins channels with higher efficacy, were built. After plotting the data on a sigmoidal curve the IC50 values were obtained. For AcaIII2970, the following IC50 values were obtained: DmNaV1 = 162.19 ± 11.22 nM, mNaV1.6 = 645.92 ± 18.52 nM and rNaV1.3 = 572.56 ± 44.96 nM. For AcaIII3090, the following IC50 values were obtained: DmNaV1 = 99.03 ± 9.25 nM, mNaV1.6 = 158.30 ± 33.86 nM and rNaV1.3 = 371.60 ± 6.48 nM. AcaIII1425 acts, selectively, blocking rKV1.1, rKV1.6 and rKV4.3 subtypes, while the others isoforms tested remained unaltered. Due the higher specificity of AcaIII1425 to rKV1.1 and rKV1.6 subtypes, assays were performed to evaluate the blocking channel current versus toxin concentration (dose-response curve). IC50 values for the subtypes rKV1.6 and rKV1.1 are 7642.98 ± 1601.65 nM and 241.65 ± 4.27 nM, respectively. Thus, AcaIII1425 is about 32 times more potent in the rKV1.6 than in the rKV1.1 channel. The primary structure of the toxins was determined by the Edman degradation. The partial sequence of AcaIII2970 and AcaIII3090 revealed that these toxins are similar to the type 1 sodium channel sea anemones neurotoxins. The complete sequence of AcaIII1425 has no similarity with other sea anemone toxins, but is similar to the Conus and spider neurotoxins which have a structural motif known as ICK. Thus, we propose that AcaIII1425 comprises a new group of sea anemones toxins that block KV channels. Given the unprecedented nature of the toxin AcaIII1425, in silico assays were carried out in order to further refining the proposed mechanism underlying the interaction between the toxin and the rKV1.6 channel. The results indicate that, in agreement to what has been proposed elsewhere, different regions of the KV channels are important for the toxin selectivity and potency

Áreas como política, economia e marketing sofrem grandes influências no que diz respeito à difusão de informação. Por este motivo, diversos ramos da ciência tem estudado tais fenômenos a fim de simulá-los e compreendê-los por meio de modelos matemáticos e/ou estocásticos. Em virtude disto, este trabalho de doutorado tem como objetivo generalizar modelos de difusão de inovação já existentes na literatura. O primeiro modelo utiliza o mecanismo de social reinforcement para difusão de inovação e o qual foi construído para o grafo completo. Neste caso, consideramos uma população finita, fechada, totalmente misturada e subdividida em quatro classes de indivíduos denominados ignorantes, conscientes, adotadores e abandonadores da inovação. Assim, será apresentado uma Lei Fraca dos Grandes Números e um Teorema Central do Limite para a proporção final da população que nunca escutou sobre a inovação e aqueles que já conhecem sobre ela mas ainda não adotaram. Ademais, também será apresentado um resultado de convergência para o máximo de adotadores em um intervalo estocástico, assim como o instante de tempo em que o processo atinge esse estado. Para esse estudo, foram utilizados resultados da teoria de cadeias de Markov dependentes da densidade. Ademais, formulamos um modelo estocástico com estrutura de estágios para descrever o fenômeno da difusão de inovação em uma população estruturada. Mais precisamente, propomos uma cadeia de Markov a tempo contínuo definida na rede hipercúbica d-dimensional. Cada indivíduo da população deve estar em algum dos M+1 estados pertencentes ao conjunto {0;1;2; ::;M}. Nesse sentido, 0 representa um ignorante, i para i ∈ {1; :::;M - 1} um consciente no estágio i e M um adotador. Dessa forma, são estudados argumentos que permitem encontrar condições suficientes nas quais a inovação se espalha ou não com probabilidade positiva. / Areas such as politics, economics and marketing are heavily influential in terms of information diffusion. For this reason, several branches of science have studied such phenomena in order to simulate and understand them by mathematical and/or stochastic models. In this context, this phd project aims to generalize innovation diffusion models that there is in the literature. The first model uses the social reinforcement mechanism for diffusion of innovation and which was built for the complete graph. In this case, we consider a finite population, closed, totally mixed and subdivided into four classes of individuals called ignorants, aware, adopters and abandoner of innovation. We prove a Law of Large Numbers and a Central Limit Theorem for the proportion of the population who have never heard about the innovation and those who know about ir but they have not adopted it yet. In addition, we also obtain result for the convergence of the maximum of adopter in a stochastic interval, as well as the instant of time that the process reaches that state. For this study, we used results of the theory of density dependent Markov chains. Furthermore, we formulated a stochastic model with structure stages to describe the phenomenon of innovation diffusion in a structured population. More precisely, we proposed a continuous time Markov chain defined in a population represented by the d-dimensional integer lattice. Each individual of the population must be in some of the M +1 states belonging to the set {0;1;2; :::;M}. In this sense, 0 stands for ignorant, i for i ∈ {1; :::;M - 1} for aware in stage i and M for adopter. The arguments, that allow to obtain sufficient conditions under which the innovation either becomes extinct or survives with positive probability, are studied.

Pelo fato da maioria das mortes e morbidades associadas à gravidez ocorrerem em torno do parto, a qualidade do cuidado nesse período é crucial para as mães e seus bebês. Para acompanhar as mulheres nessa etapa, o partograma tem sido a ferramenta mais utilizada nas últimas décadas e, devido à sua simplicidade, é frequentemente usado em países com baixa e média renda. No entanto, sua utilização é altamente questionada devido à ausência de evidências que justifiquem uma contribuição ao parto. Para melhorar a qualidade do parto nessas circunstâncias, o projeto BOLD tem sido desenvolvido com o intuito de reduzir a ocorrência de problemas indesejados e com a finalidade desenvolver uma ferramenta moderna, chamada de SELMA, que projetase como uma alternativa ao partograma. Com a finalidade de associar características fixas e dinâmicas avaliadas no parto e identificar quais elementos intra parto podem ser utilizados como gatilhos para realização de uma intervenção e, assim, prevenir um desfecho indesejado, propomos nesta tese a utilização de modelos de sobrevivência com covariáveis dependentes do tempo. Inicialmente, consideramos a modelagem de dados longitudinais e de sobrevivência utilizando funções de risco paramétricas flexíveis. Nesse caso, propomos a utilização de cinco generalizações da distribuição Weibull, da distribuição Nagakami e utilizamos um procedimento geral de seleção de modelos paramétricos usuais via distribuição Gamma generalizada, inédito na modelagem conjunta. Realizamos um extenso estudo de simulação para avaliar as estimativas de máxima verossimilhança e os critérios de discriminação. Além disso, a própria natureza do parto nos leva a um contexto de eventos múltiplos, nos remetendo à utilização dos modelos multiestados. Eles são definidos como modelos para um processo estocástico que a qualquer momento ocupa um conjunto discreto de estados. De uma forma geral, são os modelos mais comuns para descrever o desenvolvimento de dados de tempo de falha longitudinais e são frequentemente utilizados em aplicações médicas. Considerando o contexto de eventos múltiplos, propomos a inclusão de uma covariável dependente do tempo no modelo multiestados a partir de uma modificação dos dados, o que nos trouxe resultados satisfatórios e similares ao esperado na prática clínica. / As most pregnancy-related deaths and morbidities are clustered around the time of child birth, the quality of care during this period is crucial for mothers and their babies. To monitor the women at this stage, the partograph has been the central tool used in recent decades and, motivated by its simplicity, is frequently used in low-and middle-income countries. However, its use is highly questioned due to lack of evidence to justify a contribution to labor. To improve the quality of labor in these circumstances, the BOLD project has been developed in order to reduce the occurrence of pregnancy-related problems and in order to develop a modern tool, called SELMA, which is projected as an alternative to partograph. Aiming to associate fixed and dynamic characteristics evaluated in the delivery and to identify which elements can be used as triggers for performing an intervention, and thus preventing a bad outcome, this thesis proposes the use of survival models with time dependent covariates. Initially, we consider the joint modeling of survival and longitudinal data using flexible parametric hazard functions. In this sense, we propose the use of five generalizations of Weibull distribution, the Nagakami model and an inedited framework to discriminate usual parametric models via the generalized Gamma distribution, performing an extensive simulation study to evaluate the maximum likelihood estimations and the proposed discrimination criteria. Indeed, by its own nature, the birth leads us to a context of multiple events, referring to the use of multi-state models. These are models for a stochastic process which at any time occupies one of a few possible states. In general, they are the most common models to describe the development of longitudinal failure time data and are often used in medical applications. Considering this context, we proposed the inclusion of a time dependent covariate in the multi-state model using a modified version of the input data, which gave us satisfactory results similar to those expected in clinical practice.

Neste trabalho mostramos que o método de purificação empregando a coluna ANX Sepharose FF, alternando eluições com CaCl2 (pseudoafinidade) e NaCl, permite obter concentrados do complexo protrombínico e do fator VIII em uma etapa cromatográfica. Testamos as colunas ANX e Q Sepharose FF, monolito QA e membrana Sartobind Q e os tampões citrato, MES e Bis-Tris. Empregando a ANX Sepharose FF e o tampão citrato as proteínas do complexo protrombínico eluiram com CaCl2 25 mM e o FVIII com NaCl 500mM. A recuperação da atividade de FVIII foi de cerca de 60% e o fator de purificação de 220 vezes. Na fração contendo as proteínas do complexo protrombínico foram identificadas por espectrometria de massas a presença de fibrinogênio, proteína C4 do complemento e C4b Binding Protein. A análise das frações mostra que a presença destas proteínas não é devido à variação da concentração de CaCl2, possivelmente se deve à difusão lenta destas através da resina. Mais de 99% das proteínas do plasma não são adsorvidas na coluna e podem ser purificadas em etapas posteriores. / In this study we showed that the purification method employing the anion exchange column ANX Sepharose FF, and alternating CaCl2 (pseudoaffinity) and NaCl elutions, allows us to obtain concentrates of prothrombin complex proteins and factor VIII in a single chromatographic step. We tested the ANX, Q Sepharose FF and QA monolithic column and Sartobind Q membrane and the citrate, MES and Bis-Tris buffers. Using ANX Sepharose FF and the citrate buffer the prothrombin complex proteins eluted with 25 mM CaCl2 and FVIII with 500 mM NaCl. FVIII activity recovery was approximately 60% with a purification factor of 220. In the fraction containing the prothrombin complex proteins presence of fibrinogen, complement C4 and C4bBinding Protein were identified by mass spectrometry. Analysis of the fractions showed that their presence is not due to the variation of concentration of CaCl2, but possibly due to their slow diffusion through the resin. More than 99% of the plasma proteins are not adsorbed in the column and can be purified in following chromatographic steps.

A produção e liberação de substâncias vasodilatadoras pelas células endoteliais requer uma elevação sustentada na concentração intracelular de cálcio; essa elevação é consequente a um influxo de cálcio. Porém, a identidade do (s) canal (is) envolvido (s) nesse influxo ainda não foi (ram) determinada (s) conclusivamente. Existem evidências de que o gene TRPV4 (que codifica uma proteína permeável a cátions, inclusive ao cálcio) é expresso em células endoteliais. Porém, a falta de agentes que modulem especificamente a função dessa proteína não permitiu que o papel do TRPV4 no controle da função endotelial pudesse ser elucidado. Recentemente foram descritos dois novos compostos, o GSK1016790A (GSK) e o HC-067047 (HC), com ação ativadora e bloqueadora seletiva desse canal, respectivamente. Consequentemente, nesta dissertação descrevemos e interpretamos os resultados obtidos em experimentos concebidos para caracterizar o efeito do GSK1016790A (e com fins comparativos o efeito do 4PDD) em artérias isoladas de várias espécies. Para isso, empregamos anéis de artérias suspensos em cubas para órgão isolado para registro da tensão desenvolvida por esses anéis durante a contração isométrica provocada pela adição de fenilefrina; todos os experimentos foram realizados com solução de Krebs contendo diclofenaco (10 M). Inicialmente verificamos mediante imunohistoquímica a presença de imunorreatividade para o TRPV4 no endotélio da aorta torácica de rato. A adição de concentrações isoladas ou cumulativas de GSK produziu relaxamentos dependentes da concentração na aorta torácica de rato (CE50=0,5 nM; IC95%=0,35-0,72 nM; n=7); o 4PDD (1-10 µM), em concentrações isoladas, também produziu relaxamentos na aorta torácica de rato. Resultados semelhantes foram observados para o GSK na aorta torácica de coelho (CE50= 4,3 nM; IC95%=3,58-5,14 nM; n=5), de camundongo (CE50=1,4 nM; IC95%=0,85-2,24 nM; n=3) e de cobaia (CE50=0,2 nM; IC95%=0,12-0,22 nM; n=4). GSK relaxou também a aorta abdominal (CE50=6,5 nM; IC95%=3,71-11,3 nM; n=3) e a artéria femoral de coelho (CE50=17 nM; IC95%=16,8-18,7 nM; n=4); Os relaxamentos produzidos por ambas as drogas apareceram 1-2 min após a adição e atingiram o máximo em 5-8 min, foram reversíveis e não apresentaram taquifilaxia. Em todas as artérias os relaxamentos foram estritamente dependentes de endotélio e da presença de cálcio no meio extracelular. Na aorta torácica de rato, a pré-incubação com HC (5 minutos) aboliu o efeito do GSK sem afetar os relaxamentos produzidos pela acetilcolina. Em todas as artérias testadas os efeitos do GSK e do 4PDD foram revertidos completamente pelo HC (1-3 µM) ou pelo vermelho de rutênio (aorta torácica de rato e artérias de coelho, 1µM, VR). Esses resultados demonstram que os canais TRPV4 estão presentes na célula endotelial e que a sua ativação leva à produção de fatores relaxantes. Como corolário, esses resultados constituem indícios de que os canais TRPV4 podem participar da regulação da função das células endoteliais em situações fisiológicas e/ ou fisiopatológicas. / Production and release of vasodilator substances by endothelial cells require a sustained elevation of intracellular calcium which depends on calcium influx. The identity of the channels involved in this influx remains to be established. There is evidence that the TRPV4 gene (which encodes for a cation permeable channel including calcium) is expressed in endothelial cells; the lack of pharmacologic agents that selectively modulate the activity of TRPV4 channels has hindered the elucidation of its function in endothelial cells. Recently two new compounds, GSK1016790A (GSK) and HC-067047 (HC), which selectively activate or block TRPV4 channels, respectively, were described. This dissertation consists in the description and interpretation of results from experiments conceived to characterize the effect of GSK (and of 4PDD for comparison) in isolated arterial rings from several animal species. To this aim we used arterial rings mounted in isolated organ chambers; we recorded continuously the tension developed by them during isometric contractions elicited by phenylephrine (Phe); all the experiments were conducted using Krebs solution containing diclofenac (10 µM). Initially, we confirmed by immunohistochemistry the presence of anti-TRPV4 immunoreactivity in the endothelium of rat thoracic aorta. In rat thoracic aortic rings pre-constricted with Phe (0.1 µM) the addition of different concentrations of GSK (either single or cumulative concentrations) caused concentration-dependent relaxations (EC50=0.5 nM, 95%CI=0.35-0.72 nM, n=7); 4PDD (in single concentrations) also caused relaxations of rat thoracic aortic rings. Similar results were observed for GSK in thoracic aortic rings from rabbit (EC50=4.3 nM, 95%CI=3.58-5.14 nM, n=5), mouse (EC50=1.4 nM, 95%CI=0.85-2.24 nM, n=3) and guinea-pig (EC50=0.2 nM, 95%CI=0.12-0.22 nM, n=4). GSK also produced relaxations of rings from rabbit abdominal aorta (EC50=6.5 nM, 95%CI=3.71-11.3 nM, n=3) and femoral artery (EC50=17 nM, 95%CI=16.8-18.7 nM, n=4). Relaxations caused by both GSK and 4PDD started 1-2 min after their addition and reached a steady-state in 5-8min; they were reversible after washing-out and did not exhibit tachyphylaxis. In all the studied arteries GSK or 4PDD induced- relaxations were strictly endothelium- and extracellular calcium- dependent. Pre-incubation of rat thoracic aortic rings with HC (1 µM for 5min) abolished the effect of GSK but did not affect relaxations elicited by Ach (1 µM). In all the arterial rings HC (1-3 µM) also completely reverted the relaxations caused by GSK or 4PDD; in rabbit and rat thoracic aortic rings ruthenium red (1 µM) also completely reverted the relaxations caused by GSK or 4PDD. The present findings showing that TRPV4 channels are present in endothelial cells and that their activation results in the production and release of relaxing factors constitute an indication that TRPV4 channels could be involved in the regulation of endothelial cell functions under physiological or patho-physiological conditions.

A disfunção endotelial atua tanto na aterogênese como na precipitação das síndromes coronárias agudas. A redução da biodisponibilidadedo óxido nítrico é expressão de endotélio disfuncional. O mecanismo desta redução não está elucidado. A presença de disfunção endotelialfoi correlacionada com fatores de risco (FR), nitrato sanguíneo e fatores genéticos (polimorfismo da óxido nítrico sintase endotelial, fibrinogênio e PAI-1) em um grupo de 128 pacientes com infarto do miocárdio (IAM) e idade = 40 anos, submetidos a ultra-som de artéria braquial. Os resultados foram comparados com um grupo jovens saudáveis. Verificou-se que pacientes jovens com IAM apresentavam disfunção endotelial em associação com FR, alterações bioquímicas e níveis aumentados de nitrato, porém sem alterações genéticas / The endothelial dysfunction plays an important roll in the atherogenesis and precipitation of acute coronary syndromes. The reduction of bioavailability of the nitric oxide is the expression of endothelial dysfunction. The exact mechanism of this reduction is not yet well explained. In order to evaluate the presence of endothelial dysfunction and correlation with risk factors (FR), nitrate blood levels and genetic factors (endothelial nitric oxide synthease polymorphism, fibrinogen and PAI-1) a 128 myocardial infarction patients group with age = 40 year was studied, and underwent a brachial artery ultra-sound. The results were compared with a group of young health individuals. The study found that the young patients with myocardial infarctions showed endothelial dysfunction with associated risks factors, biochemical changes and higher levels of nitrate, although without any significant genetic changes