Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-08-30Bitstream added on 2014-06-13T20:38:42Z : No. of bitstreams: 1 greco_gm_me_botfmvz.pdf: 331685 bytes, checksum: bac255ec173bb2d49b176126de38b2a6 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Os agentes indutores de ovulação são rotineiramente utilizados na reprodução eqüina, em especial quando da aplicação de biotecnologias. A fim de reduzir custos e otimizar seus resultados, esta dissertação teve como objetivos avaliar o efeito de novos protocolos sobre a indução e sincronização de ovulação, grau de edema endometrial, bem como taxa de desenvolvimento e diâmetro folicular. Foram utilizadas 145 éguas da raça Campolina, entre três e 14 anos, em dois Haras de Conselheiro Lafaiete – MG, Brasil. Na presença de um folículo ≥30mm e de edema endometrial, no mínimo, grau 2 (0-5), as éguas foram randomicamente separadas em grupos e tratadas no dia seguinte (Hora 0) com: 1,0mg de deslorelina (I.M.) (G1; n=20); 0,5mg de deslorelina (I.M.) (G2; n=20); 2.000UI de hCG (I.V.) (G3; n=20); 750UI de hCG (I.V.) (G4; n=20); 1,0mg de deslorelina (I.M.) e 2.000UI de hCG (I.V.) (G5; n=15); 0,5mg de deslorelina (I.M.) e 750UI de hCG (I.V.) (G6; n=10); 10,0mg de ECP (I.M.) (G7; n=10) e, por fim, 1,0mg de deslorelina (I.M.), após pré-tratamento com 10,0mg de ECP (I.M.) no dia anterior (G8; n=10). Vinte éguas não foram tratadas, utilizadas como controle (GC; n=20). As avaliações ultra-sonográficas diárias foram conduzidas até a ovulação (D0) ou Hora 120, o que ocorresse primeiro. A análise estatística valeu-se do Statistical Analysis System (SAS). A taxa de ovulação entre 24 e 48 horas da indução nos grupos G1 ao G6 foi similar estatisticamente, maior ou igual a 75%. No G7, esta foi de 20%, inferior (P<0,01) à obtida no G1 ao G6. Verificou-se taxa de 40% no G8, menor (P<0,01) que a do G5 e G6 (de 100%) e similar aos demais. O ECP não foi capaz de induzir ou sincronizar as ovulações. Não houve benefício do pré-tratamento com ECP em éguas induzidas com deslorelina. O edema endometrial foi maior na Hora 0 em comparação ao momento em que a ovulação... / Ovulation inductors are routinely used in the equine species, especially when modern reproductive technologies are applied. In order to reduce costs and optimize their results, the present study aimed to evaluate the effect of new treatment protocols on ovulation induction and synchronization, endometrial edema as well as follicular diameter and development rate. One hundred and forty-five Campolina breed mares, aging three to 14 years, from two Studs in Conselheiro Lafaiete – MG, Brazil, were used. Prostaglandin-induced estrous mares showing one follicle ≥30mm and at least grade 2 (0-5) endometrial edema were randomly assigned to different groups and treated, at the following day (Hour 0), with either: 1.0mg of deslorelin (I.M.) (G1; n=20); 0.5mg of deslorelin (I.M.) (G2; n=20); 2.000UI of hCG (I.V.) (G3; n=20); 750UI of hCG (I.V.) (G4; n=20); 1.0mg of deslorelin (I.M.) and 2.000UI of hCG (I.V.) (G5; n=15); 0.5mg of deslorelin (I.M.) and 750UI of hCG (I.V.) (G6; n=10); 10.0mg of ECP (I.M.) (G7; n=10) and 1.0mg of deslorelin (I.M.), 24 hours post-injection with 10.0mg of ECP (I.M.) (G8; n=10). Twenty mares served as control (GC; n=20). Ultra-sonography was daily performed until ovulation (D0) or Hour 120, whichever occurred first. Data was evaluated through the Statistical Analysis System (SAS). Ovulation rate between 24 and 48 hours post-induction in groups G1 to G6 was ≥75% and statistically similar (P>0.05). Ovulation rate in G7 was 20%, lower (P<0.01) than in G1 to G6. G8 showed a 40% rate, which was lower (P<0.01) than G5 and G6 and similar to the remaining groups. ECP treatment was unable to induce or synchronize ovulations. Deslorelin-induced mares did not benefit from pre-treatment with ECP. Higher endometrial edema scores were identified at Hour 0 compared to the moment an ovulation was detected, when G1 to G6 showed higher (P<0.01) edema scores than control. Used ... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Marco Antonio Alvarenga / Banca: Luciano Andrade Silva / Banca: Frederico Ozanam Papa / Resumo: Os agentes indutores de ovulação são rotineiramente utilizados na reprodução eqüina, em especial quando da aplicação de biotecnologias. A fim de reduzir custos e otimizar seus resultados, esta dissertação teve como objetivos avaliar o efeito de novos protocolos sobre a indução e sincronização de ovulação, grau de edema endometrial, bem como taxa de desenvolvimento e diâmetro folicular. Foram utilizadas 145 éguas da raça Campolina, entre três e 14 anos, em dois Haras de Conselheiro Lafaiete - MG, Brasil. Na presença de um folículo ≥30mm e de edema endometrial, no mínimo, grau 2 (0-5), as éguas foram randomicamente separadas em grupos e tratadas no dia seguinte (Hora 0) com: 1,0mg de deslorelina (I.M.) (G1; n=20); 0,5mg de deslorelina (I.M.) (G2; n=20); 2.000UI de hCG (I.V.) (G3; n=20); 750UI de hCG (I.V.) (G4; n=20); 1,0mg de deslorelina (I.M.) e 2.000UI de hCG (I.V.) (G5; n=15); 0,5mg de deslorelina (I.M.) e 750UI de hCG (I.V.) (G6; n=10); 10,0mg de ECP (I.M.) (G7; n=10) e, por fim, 1,0mg de deslorelina (I.M.), após pré-tratamento com 10,0mg de ECP (I.M.) no dia anterior (G8; n=10). Vinte éguas não foram tratadas, utilizadas como controle (GC; n=20). As avaliações ultra-sonográficas diárias foram conduzidas até a ovulação (D0) ou Hora 120, o que ocorresse primeiro. A análise estatística valeu-se do Statistical Analysis System (SAS). A taxa de ovulação entre 24 e 48 horas da indução nos grupos G1 ao G6 foi similar estatisticamente, maior ou igual a 75%. No G7, esta foi de 20%, inferior (P<0,01) à obtida no G1 ao G6. Verificou-se taxa de 40% no G8, menor (P<0,01) que a do G5 e G6 (de 100%) e similar aos demais. O ECP não foi capaz de induzir ou sincronizar as ovulações. Não houve benefício do pré-tratamento com ECP em éguas induzidas com deslorelina. O edema endometrial foi maior na Hora 0 em comparação ao momento em que a ovulação ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Ovulation inductors are routinely used in the equine species, especially when modern reproductive technologies are applied. In order to reduce costs and optimize their results, the present study aimed to evaluate the effect of new treatment protocols on ovulation induction and synchronization, endometrial edema as well as follicular diameter and development rate. One hundred and forty-five Campolina breed mares, aging three to 14 years, from two Studs in Conselheiro Lafaiete - MG, Brazil, were used. Prostaglandin-induced estrous mares showing one follicle ≥30mm and at least grade 2 (0-5) endometrial edema were randomly assigned to different groups and treated, at the following day (Hour 0), with either: 1.0mg of deslorelin (I.M.) (G1; n=20); 0.5mg of deslorelin (I.M.) (G2; n=20); 2.000UI of hCG (I.V.) (G3; n=20); 750UI of hCG (I.V.) (G4; n=20); 1.0mg of deslorelin (I.M.) and 2.000UI of hCG (I.V.) (G5; n=15); 0.5mg of deslorelin (I.M.) and 750UI of hCG (I.V.) (G6; n=10); 10.0mg of ECP (I.M.) (G7; n=10) and 1.0mg of deslorelin (I.M.), 24 hours post-injection with 10.0mg of ECP (I.M.) (G8; n=10). Twenty mares served as control (GC; n=20). Ultra-sonography was daily performed until ovulation (D0) or Hour 120, whichever occurred first. Data was evaluated through the Statistical Analysis System (SAS). Ovulation rate between 24 and 48 hours post-induction in groups G1 to G6 was ≥75% and statistically similar (P>0.05). Ovulation rate in G7 was 20%, lower (P<0.01) than in G1 to G6. G8 showed a 40% rate, which was lower (P<0.01) than G5 and G6 and similar to the remaining groups. ECP treatment was unable to induce or synchronize ovulations. Deslorelin-induced mares did not benefit from pre-treatment with ECP. Higher endometrial edema scores were identified at Hour 0 compared to the moment an ovulation was detected, when G1 to G6 showed higher (P<0.01) edema scores than control. Used ... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Eunice Oba / Resumo: O presente estudo teve por objetivo a utilização do hormônio agonista de GnRH, Deslorelina, para controle da população folicular, com intuito de homogeneizar a onda folicular ao início do tratamento de múltiplas ovulações e transferência de embriões (MOET), reduzindo os efeitos deletérios do folículo dominante no tratamento superovulatório com hormônio folículo estimulante, foltropina de pituitária suína. Foram utilizadas 24 ovelhas deslanadas mestiças da raça santa inês, com idades entre 2 e 4 anos, divididas em dois grupos, Controle (Contr), e Deslorelina (Des). Os experimentos foram conduzidos na propriedade rural denominada ‘’Sítio Panorama’’, no município de Porangaba-SP, situado na latitude -23.15050993 e longitude -48.09904348, estando a uma altitude de 583m. As ovelhas foram monitoradas ultrassonograficamente por um período de sete dias quanto ao dinâmica de crescimento folicular e presença de corpo lúteo. Após determinação da ciclicidade ovariana todas as ovelhas receberam dispositivo intravaginal com 60mg de medroxiprogesterona no dia 0, que foi substituído por um novo dispositivo no dia 7 e que foi mantido até o dia 14, as fêmeas receberam única dose de 125 µg de clopostenol no dia 7. O tratamento superovulatório foi realizado com aplicação de Hormônio Folículo Estimulante Suíno- pFSH, na dose total de 200mg (10 mL), divididas em oito aplicações decrescentes com intervalo de 12h iniciando no decimo segundo dia (40 e 40; 30 e 30; 20 e 20; 10 e 10 mg, respectivamente... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The present study main objective was to use the GnRH agonist hormone deslorelin to control ovarian follicular population, achieving this way a more homogenous follicular wave at the beginning of multiple ovulations and embryo transfer (MOET) program, reducing deleterious effects from dominant follicles over the superovulatory protocol with porcine Follicle Stimulating Hormone (pFSH). Twenty four Santa Inês breed sheep were used, aging from 2 to 4 years, and divided into two groups: control (Contr), and Deslorelin (DES). The experiment was conducted in a private property, located in Brazil, São Paulo, City of Porangaba, latitude -23.15050993 and longitude -48.09904348. All sheep were monitored ultrassonographicaly for seven days, until the presence of a corpus luteum was detected. All sheep received intravaginal sponges containing 60mg of medroxiprogesteron on day 0, and new sponges on day 7 maintained until day 14, among side a single cloprostenol 125 µg dose. Superovulatory treatment was achieved using porcine Follicular Stimulating Hormone -FSH, with the total dose of 200mg (10ml), spread in eight decreasing administrations with 12 hours’ interval between them, starting on the twelve day. On day 14, 300 UI of equine chorionic gonadotrophin – eCG was administrated. On the treated group, in addition to the treatment described above, 3 doses of 100µg of GnRH agonist Deslorelin were administrated with 72 hours’ intervals, starting at day 4 after sponge insertion (day 3, day 6 a... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

O líquido folicular é o microambiente do oócito durante sua maturação in vivo que é, em parte constituído por exsudato do soro sanguíneo e por substâncias produzidas localmente, que estão relacionados com a atividade metabólica das células ovarianas. Tais substâncias podem ser essenciais para a proliferação e diferenciação das células somáticas bem como na maturação e posterior fertilização de um oócito competente. A busca por biomarcadores capazes de predizer a saúde de um folículo ou a capacidade do oócito em se tornar um embrião saudável é objeto de estudo na medicina reprodutiva humana e veterinária. Para tanto é essencial o conhecimento a nível molecular dos constituintes do liquido folicular e suas funções. O objetivo do presente estudo foi avaliar o perfil proteico do líquido folicular de éguas submetidas à indução de ovulação, com dois diferentes protocolos usuais na prática clínica, utilizando eletroforese bidimensional em gel de poliacrilamida. Para tanto 19 amostras de liquido folicular de éguas que tiveram sua ovulação induzida por dois diferentes protocolos (1000UI hCG IV, Grupo H, ou 1000UI hCG IV + 1,5mg de acetato de deslorelina IM, Grupo H + G) foram submetidos a eletroforese 2D e posterior análise dos géis no PDQuest. Os valores de proteína total foram significativamente diferente nos Grupo H e Grupo H+G, 63,97 ± 6,97 e 73,07 ± 6,42, respectivamente. O número máximo de spots em um mesmo gel foi de 157 e o mínimo de 34, com média de 90 spots para o Grupo H e 83 spots para o Grupo H+G. Os 19 géis foram avaliados e a porcentagem máxima de spots relacionados foi de 52% e a mínima de 0%. Com média de 37,8% de similaridade entre spots para o Grupo H e 22% para o Grupo H+G. Estes resultados são de grande importância devido à escassez de trabalhos com proteômica de liquido folicular de éguas induzidas a ovulação e demonstram que a associação entre hCG e acetato de deslorelina aumenta a concentração de proteínas no líquido folicular em folículos pré-ovulatórios (>35 mm). / Follicular fluid is the oocyte microenvironment during its in vivo maturation. It is partly composed by blood serum exudate, and also by locally produced substances, related to ovarian cells metabolic activity. These substances may be essential for somatic cells proliferation and differentiation, as well as on the oocyte maturation and fertilization. The search for biomarkers able to predict oocyte ability to grow into a healthy embryo are targets on human and veterinary reproductive medicine. It is essential to know the components of follicular fluid and their functions. The aim of the present study was to evaluate protein profile of the follicular fluid in mares with inducted ovulation, in two different protocols, using 2D electrophoresis in polyacrylamide gel. 19 follicular fluid samples from mares in which ovulation induction was performed with two different protocols (1000UI hCG IV or 1000UI hCG IV + 1,5mg deslorelin acetate IM), submitted to 2D electrophoresis, and gel analysis on PDQuest. Total protein values were significantly different in Group H and Group H+G, 63,97 ± 6,97 and 73,07 ± 6,42, respectively. The highest number of spots on a same gel was 157 and the minimum was 34, with a mean of 90 spots to Group H and 83 spots for Group H+G. All of the19 gels were evaluated according to MasterGel and the highest percent of related spots was 52% and the lowest, 0%, with mean similarity between spots 37,8% to Group H and 22% to Group H+G. These results are of great importance, due to lack of works on follicular fluid proteomics using fluid from mares with induced ovulation, and demonstrate that the association hCG + deslorelin acetate increase proteins concentration on pre-ovulatory follicles fluid.

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Submitted by GABRIEL MAKSOUD GRECO null (gabrielmaksoud@gmail.com) on 2016-08-01T16:57:15Z No. of bitstreams: 1 Gabriel Maksoud Greco - Tese de Doutorado.pdf: 942153 bytes, checksum: 3897e01a5d02d842516f84f5662d1905 (MD5) / Rejected by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo a orientação abaixo: O arquivo submetido está sem a ficha catalográfica. A versão submetida por você é considerada a versão final da dissertação/tese, portanto não poderá ocorrer qualquer alteração em seu conteúdo após a aprovação. Corrija esta informação e realize uma nova submissão contendo o arquivo correto. Agradecemos a compreensão. on 2016-08-02T19:54:49Z (GMT) / Submitted by GABRIEL MAKSOUD GRECO null (gabrielmaksoud@gmail.com) on 2016-08-05T20:05:46Z No. of bitstreams: 1 Gabriel Maksoud Greco - Tese de Doutorado com Ficha Catalográfica.pdf: 1246379 bytes, checksum: abd353a17deff1c72be3554b66dfb1c3 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-08-09T16:43:54Z (GMT) No. of bitstreams: 1 greco_gm_dr_bot.pdf: 1246379 bytes, checksum: abd353a17deff1c72be3554b66dfb1c3 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-09T16:43:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 greco_gm_dr_bot.pdf: 1246379 bytes, checksum: abd353a17deff1c72be3554b66dfb1c3 (MD5) Previous issue date: 2016-05-31 / A manipulação farmacológica do ciclo estral é rotineiramente utilizada na égua, pelo fato desta apresentar grande variação na duração do estro e no intervalo entre o seu início e a ovulação. Como maiores taxas de concepção decorrem da deposição do sêmen no trato reprodutivo feminino próximo à ovulação, diversos agentes foram empregados objetivando sua indução e sincronização, em especial a gonadotrofina coriônica humana (hCG) e o acetato de deslorelina. O mecanismo de ação destes fármacos envolve o hormônio luteinizante (LH), sendo que o hCG mimetiza suas ações e o acetato de deslorelina estimula sua liberação pela adenohipófise. Incremento semelhante às concentrações circulantes de LH tem sido observado em vacas com o uso de cipionato de estradiol (ECP), o qual é usualmente empregado na indução e sincronização de ovulações na espécie pelo seu baixo custo. A fim de auxiliar na escolha do protocolo ideal para a indução de ovulação em éguas, o presente estudo objetivou avaliar o efeito do tratamento com o hCG e/ou com o acetato de deslorelina, nas doses preconizadas ou em subdoses, sobre as concentrações plasmáticas de LH, a indução e a sincronização de ovulação, o grau de edema endometrial, o diâmetro folicular e a sua taxa de desenvolvimento. Ainda, buscou-se verificar o resultado da aplicação de ECP sobre a indução e sincronização da ovulação e as concentrações plasmáticas de LH, bem como a existência de uma correlação entre a taxa de crescimento, o diâmetro folicular e o edema endometrial sobre a fertilidade pós-indução com a dose preconizada de hCG. Os resultados obtidos através do presente trabalho nos permitiram concluir que: a) os protocolos propostos com o hCG e/ou o DES induziram e sincronizaram a ovulação de forma eficaz, estimulando sua ocorrência de folículos pré-ovulatórios menores; b) o DES estimulou maior liberação de LH que o hCG após 24 horas; c) a adição do hCG ao tratamento com DES não promoveu um incremento nas concentrações circulantes de LH, seja nas doses preconizadas ou em subdoses; d) o tratamento com ECP não resultou em aumento nas concentrações circulantes de LH, tendo inibido sua liberação em alguns animais, pré-dispondo ao surgimento de folículos anovulatórios e atresia folicular; e) o uso de subdoses de hCG e/ou DES levaram a um maior incremento nas concentrações circulantes de LH após 48 horas, por um provável mecanismo de “down-regulation” que ocorre após o uso das doses recomendadas destes hormônios; f) os tratamentos com o hCG e/ou o DES não impediram o desenvolvimento folicular ou reduziram o diâmetro folicular após 24 horas; g) a indução de ovulação levou a uma redução no grau de edema endometrial após 24 horas; o qual persistiu à ovulação; h) o grau máximo de edema endometrial, bem como seu escore à detecção da ovulação não influenciaram a fertilidade pós-indução com 2.000 UI de hCG; i) o tamanho e a taxa de desenvolvimento folicular pós-indução com 2.000 UI de hCG tenderam a uma correlação positiva com a taxa de fertilidade pós-inseminação artificial. / Pharmacological manipulation of the equine estrous cycle is routinely applied, due to the fact that mares show great disparity on estrous duration and in the interval between its onset and ovulation. Since higher pregnancy rates are obtained when semen is deposited in the female reproductive tract at a time close to ovulation, several ovulation inducting agents have been used, specially human chorionic gonadotropin (hCG) and deslorelin acetate (DES). The mechanism of action of these drugs involves the luteinizing hormone (LH), for hCG mimics its actions and DES stimulates endogenous adenohypophyseal secretion. Similar increment in circulating LH concentrations has been observed in cows treated with estradiol cypionate (ECP), which is usually administrated as an interesting and cheaper alternative to induce and synchronize ovulations in the bovine species. In order to aid recognition of the ideal ovulation induction and synchronization protocol in the mare, the present study evaluated the effect of treatment with hCG and/or DES, using the recommended or a subdose, on ovulation induction and synchronization, plasmatic LH concentrations, grade of endometrial edema, follicular growth and diameter. Thus, this experiment intended to verify the effect of ECP administration on ovulation induction, synchronization and plasmatic LH concentrations, as well as the existence of a correlation between follicular growth, pre-ovulatory diameter and endometrial edema with fertility of mares induced using the recommended hCG dose. The obtained results led to the following conclusions: a) protocols using hCG and/or DES successfully induced and synchronized ovulations, stimulating smaller pre-ovulatory follicles to ovulate; b) DES stimulated a higher LH secretion than hCG 24 hours post-injection; c) combining hCG to DES treatment did not favor LH secretion; d) estradiol cypionate treatment did not induce ovulation or favor plasmatic LH concentrations, but, instead, lead to a substantial anovulation and follicular atresia rate, possibly due to its decrease in some animals; e) subdoses of hCG and DES stimulated a higher LH increase after 48 hours, possibly due to a down-regulation mechanism upon administration of the recommended dose; f) treatment with hCG and/or DES did not impair follicular development after 24 hours; g) ovulation induction decreased endometrial edema after 24 hours, which persisted at ovulation; h) fertility of mares treated with 2,000 IU of hCG was not influenced by the maximum endometrial edema score observed during estrous or the grade of edema the day an ovulation was detected; i) follicle size and growth rate post-induction with 2,000 IU of hCG tend to bear a positive correlation with fertility.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:14Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011Bitstream added on 2014-06-13T20:59:28Z : No. of bitstreams: 1 nagao_jf_me_botfmvz.pdf: 177144 bytes, checksum: a738c7652ea5de1e5d56171a8a953d99 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O presente estudo objetivou verificar a utilização do acetato de deslorelina indução de dupla ovulação em éguas. No experimento 1 as foram utilizados 16 ciclos de 8 éguas, que foram tratadas com 100 μg de acetato de deslorelina (IM) a cada 12 horas ou solução salina, partir do D8 do ciclo estral até no mínimo dois folículos atingirem 33 mm quando foi induzida a ovulação com 2500 UI de hCG. A inseminação artificial foi realizada 24 horas após a indução com 1x109 de espermatozóides viáveis e a colheita dos embriões foi realizada no oitavo dia após a primeira ovulação detectada. No experimento 2 foram utilizados 112 ciclos de 56 éguas, neste experimento o protocolo com o acetato de deslorelina foi iniciado somente quando foi detectado um folículo com diâmetro de 25 mm e pelo menos um segundo folículo com diâmetro ≥ 21 ±1 mm nesse momento foi efetuada a aplicação de 100 μg de acetato de deslorelina (IM) a cada 12 horas ou solução salina e os demais procedimentos foram semelhantes aos descritos no protocolo do experimento 1. Para as análises estatísticas das variáveis estudadas foram utilizados os testes “t de Student” e teste Exato de Fisher. No experimento 1 apenas duas éguas do grupo tratado com acetato de deslorelina responderam com dupla ovulação. Já no experimento 2 a porcentagem de animais que responderam com dupla ovulação foi de 82% e a recuperação embrionária por ciclo foi de 1,12 x 0,57 no grupo tratado com acetato de deslorelina e no grupo controle, respectivamente (p<0,05). O acetato de deslorelina é eficiente na indução de duplas ovulações em éguas desde que o protocolo seja iniciado com no mínimo dois folículos entre 20 e 25 mm de diâmetro nos ovários e permite uma recuperação embrionária de um embrião por lavado uterino em média / This study aimed to verify whether deslorelin acetate could induce double ovulation in equine mares. In Experiment 1, we studied 16 estrous cycles in eight mares treated with 100 μg of deslorelin acetate or saline intramuscularly (IM) every 12 hours from D8 of the estrous cycle until at least two follicles reached 33 mm. At this time, ovulation was induced with 2500 IU of hCG. Artificial insemination was performed using 1 x 109 viable sperm 24 hours after induction, and embryos were collected on the eighth day after ovulation was first detected. In Experiment 2, we studied 112 cycles in 56 mares. In this experiment, the deslorelin acetate protocol was initiated only after a follicle with a diameter of 25 mm and at least one second follicle with a diameter ≥ 21 ± 1 mm was detected, at which time 100 mg deslorelin acetate or saline was administered IM every 12 hours. The other procedures were similar to those described in Experiment 1. The variables studied were analyzed using Student’s t-test and Fisher's exact test. In the first experiment, only two mares in the group treated with deslorelin acetate responded with double ovulation. In the second experiment, 82% of animals per cycle responded with double ovulation, and the embryo recovery per cycle was 1.12 and 0.57 in the group treated with deslorelin acetate and the control group, respectively (p < 0.05). Deslorelin acetate is effective in inducing double ovulation in mares when the protocol is initiated when at least two follicles are between 20 and 25 mm in diameter. On average, it allows for the recovery of one embryo by uterine lavage

Orientador: José Antônio Dell'Aqua Júnior / Banca: / Resumo: O presente estudo objetivou verificar a utilização do acetato de deslorelina indução de dupla ovulação em éguas. No experimento 1 as foram utilizados 16 ciclos de 8 éguas, que foram tratadas com 100 μg de acetato de deslorelina (IM) a cada 12 horas ou solução salina, partir do D8 do ciclo estral até no mínimo dois folículos atingirem 33 mm quando foi induzida a ovulação com 2500 UI de hCG. A inseminação artificial foi realizada 24 horas após a indução com 1x109 de espermatozóides viáveis e a colheita dos embriões foi realizada no oitavo dia após a primeira ovulação detectada. No experimento 2 foram utilizados 112 ciclos de 56 éguas, neste experimento o protocolo com o acetato de deslorelina foi iniciado somente quando foi detectado um folículo com diâmetro de 25 mm e pelo menos um segundo folículo com diâmetro ≥ 21 ±1 mm nesse momento foi efetuada a aplicação de 100 μg de acetato de deslorelina (IM) a cada 12 horas ou solução salina e os demais procedimentos foram semelhantes aos descritos no protocolo do experimento 1. Para as análises estatísticas das variáveis estudadas foram utilizados os testes "t de Student" e teste Exato de Fisher. No experimento 1 apenas duas éguas do grupo tratado com acetato de deslorelina responderam com dupla ovulação. Já no experimento 2 a porcentagem de animais que responderam com dupla ovulação foi de 82% e a recuperação embrionária por ciclo foi de 1,12 x 0,57 no grupo tratado com acetato de deslorelina e no grupo controle, respectivamente (p<0,05). O acetato de deslorelina é eficiente na indução de duplas ovulações em éguas desde que o protocolo seja iniciado com no mínimo dois folículos entre 20 e 25 mm de diâmetro nos ovários e permite uma recuperação embrionária de um embrião por lavado uterino em média / Abstract: This study aimed to verify whether deslorelin acetate could induce double ovulation in equine mares. In Experiment 1, we studied 16 estrous cycles in eight mares treated with 100 μg of deslorelin acetate or saline intramuscularly (IM) every 12 hours from D8 of the estrous cycle until at least two follicles reached 33 mm. At this time, ovulation was induced with 2500 IU of hCG. Artificial insemination was performed using 1 x 109 viable sperm 24 hours after induction, and embryos were collected on the eighth day after ovulation was first detected. In Experiment 2, we studied 112 cycles in 56 mares. In this experiment, the deslorelin acetate protocol was initiated only after a follicle with a diameter of 25 mm and at least one second follicle with a diameter ≥ 21 ± 1 mm was detected, at which time 100 mg deslorelin acetate or saline was administered IM every 12 hours. The other procedures were similar to those described in Experiment 1. The variables studied were analyzed using Student's t-test and Fisher's exact test. In the first experiment, only two mares in the group treated with deslorelin acetate responded with double ovulation. In the second experiment, 82% of animals per cycle responded with double ovulation, and the embryo recovery per cycle was 1.12 and 0.57 in the group treated with deslorelin acetate and the control group, respectively (p < 0.05). Deslorelin acetate is effective in inducing double ovulation in mares when the protocol is initiated when at least two follicles are between 20 and 25 mm in diameter. On average, it allows for the recovery of one embryo by uterine lavage / Mestre

O líquido folicular é o microambiente do oócito durante sua maturação in vivo que é, em parte constituído por exsudato do soro sanguíneo e por substâncias produzidas localmente, que estão relacionados com a atividade metabólica das células ovarianas. Tais substâncias podem ser essenciais para a proliferação e diferenciação das células somáticas bem como na maturação e posterior fertilização de um oócito competente. A busca por biomarcadores capazes de predizer a saúde de um folículo ou a capacidade do oócito em se tornar um embrião saudável é objeto de estudo na medicina reprodutiva humana e veterinária. Para tanto é essencial o conhecimento a nível molecular dos constituintes do liquido folicular e suas funções. O objetivo do presente estudo foi avaliar o perfil proteico do líquido folicular de éguas submetidas à indução de ovulação, com dois diferentes protocolos usuais na prática clínica, utilizando eletroforese bidimensional em gel de poliacrilamida. Para tanto 19 amostras de liquido folicular de éguas que tiveram sua ovulação induzida por dois diferentes protocolos (1000UI hCG IV, Grupo H, ou 1000UI hCG IV + 1,5mg de acetato de deslorelina IM, Grupo H + G) foram submetidos a eletroforese 2D e posterior análise dos géis no PDQuest. Os valores de proteína total foram significativamente diferente nos Grupo H e Grupo H+G, 63,97 ± 6,97 e 73,07 ± 6,42, respectivamente. O número máximo de spots em um mesmo gel foi de 157 e o mínimo de 34, com média de 90 spots para o Grupo H e 83 spots para o Grupo H+G. Os 19 géis foram avaliados e a porcentagem máxima de spots relacionados foi de 52% e a mínima de 0%. Com média de 37,8% de similaridade entre spots para o Grupo H e 22% para o Grupo H+G. Estes resultados são de grande importância devido à escassez de trabalhos com proteômica de liquido folicular de éguas induzidas a ovulação e demonstram que a associação entre hCG e acetato de deslorelina aumenta a concentração de proteínas no líquido folicular em folículos pré-ovulatórios (>35 mm). / Follicular fluid is the oocyte microenvironment during its in vivo maturation. It is partly composed by blood serum exudate, and also by locally produced substances, related to ovarian cells metabolic activity. These substances may be essential for somatic cells proliferation and differentiation, as well as on the oocyte maturation and fertilization. The search for biomarkers able to predict oocyte ability to grow into a healthy embryo are targets on human and veterinary reproductive medicine. It is essential to know the components of follicular fluid and their functions. The aim of the present study was to evaluate protein profile of the follicular fluid in mares with inducted ovulation, in two different protocols, using 2D electrophoresis in polyacrylamide gel. 19 follicular fluid samples from mares in which ovulation induction was performed with two different protocols (1000UI hCG IV or 1000UI hCG IV + 1,5mg deslorelin acetate IM), submitted to 2D electrophoresis, and gel analysis on PDQuest. Total protein values were significantly different in Group H and Group H+G, 63,97 ± 6,97 and 73,07 ± 6,42, respectively. The highest number of spots on a same gel was 157 and the minimum was 34, with a mean of 90 spots to Group H and 83 spots for Group H+G. All of the19 gels were evaluated according to MasterGel and the highest percent of related spots was 52% and the lowest, 0%, with mean similarity between spots 37,8% to Group H and 22% to Group H+G. These results are of great importance, due to lack of works on follicular fluid proteomics using fluid from mares with induced ovulation, and demonstrate that the association hCG + deslorelin acetate increase proteins concentration on pre-ovulatory follicles fluid.

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2016-06-14T16:02:16Z No. of bitstreams: 1 Victor Netto Maia.pdf: 954749 bytes, checksum: c7a0fb4acc16853fce85c1219537a372 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-14T16:02:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Victor Netto Maia.pdf: 954749 bytes, checksum: c7a0fb4acc16853fce85c1219537a372 (MD5) Previous issue date: 2015-03-31 / Much has been made in order to enhance the implementation and improve results of assisted reproductive biotechnologies in mares, however there are still few studies on vascularization of the corpus luteum (CL) and its relation to progesterone and angiogenic factors and their consequences when the ovulation is induced with deslorelin acetate. Mares were used in natural ovulation (GC) condition and induced (GT) with deslorelin (>35 mm follicles). In the experiment 1 ovulation and CL formation were followed by Doppler ultrasound (6.5 MHz), on days 4, 8 and 12 after ovulation (D0). Blood samples were obtained for progesterone assay by enzyme-immunoassay. The CLs were analyzed for vascularization, and images were recorded in video. Image analysis considered the percentage of luteal parenchymal area presenting color signals. The results were presented as mean ± epm. The average vascularization was in GC: 76.25 ± 8.98; 70.00 ± 8.16 and 57.50 ± 13.31 % and in GT: 85.00 ± 5.40, 90.00 ± 0.00 and 58.75 ± 9.24 % respectively for the days 4, 8 and 12 after ovulation. Progesterone concentrations were in GC: 6.21 ± 0.61; 5.82 ± 1.44 and 4.63 ± 0.79 ng/mL and GT: 6.10 ± 1.18; 4.67 ± 1.06 and 4.49 ± 1.37 ng/ml, respectively for the 4, 8 and 12 days after ovulation. The patterns of vascularization were higher in D4 and D8 compared to D12 of GT (P<0.05). However, there were no differences between groups or days in GC. The concentration of progesterone didn’t show significant differences between groups or studied days. In experiment 2, samples of CL were collected through ultrasound guided biopsy at the same time points after ovulation. The mRNA expression of VEGF, BFGF and LHR genes were analyzed by real time PCR. It was observed positive correlation between VEGF and LHR (P < 0.00001, r = 0.78), and it was possible to detect a higher LHR expression in D4 of GT than GC (p < 0.05), moreover this expression was higher in D4 and D8 than D12 of the GT group. bFGF was also expressed in luteal tissue in all days of both groups, however without statistical differences. It was concluded that deslorelin acetate was effective to induce ovulation in mares which did not alter the physiological responses of the corpus luteum in respect of the plasma progesterone concentration, however, affected luteal parenchyma vasculature. Also, LHR and VEGF expression was influenced by induced ovulation, with a lower level at D12, what must be expected in non-pregnant mares. / Muito tem sido feito no intuito de potencializar a aplicação e os resultados das biotécnicas de reprodução assistida na espécie equina, no entanto ainda são escassos os estudos sobre vascularização do corpo lúteo (CL) e sua relação com a progesterona em éguas induzidas com acetato de deslorelina; bem como, sua relação com os fatores angiogênicos e suas consequências quando a ovulação é induzida. Foram utilizadas éguas com ovulação natural (GC) e induzida (GT) com acetato de deslorelina (folículo >35mm). No primeiro experimento, os ovários foram acompanhados por ultrassonografia Doppler (6,5 MHz), nos dias 4, 8 e 12 após a ovulação (D0), quando também foram obtidas amostras de sangue para dosagem de progesterona. Os CLs foram analisados quanto a sua vascularização e as imagens gravadas em vídeo. A análise das imagens considerou o percentual de área do parênquima luteal que estava apresentando sinais coloridos. A concentração de progesterona foi analisada por enzima-imunoensaio. Os resultados foram apresentados em média ± erro padrão da média. As médias de vascularização foram no GC: 76,25 ± 8,98; 70,00 ± 8,16 e 57,50 ± 13,31% e no GT: 85,00 ± 5,40; 90,00 ± 0,00 e 58,75 ± 9,24%, respectivamente para os dias 4, 8 e 12 após a ovulação. As concentrações de progesterona foram no GC: 6,21 ± 0,61; 5,82 ± 1,44 e 4,63 ± 0,79 ng/mL e no GT: 6,10 ± 1,18; 4,67 ± 1,06 e 4,49 ± 1,37 ng/mL respectivamente para os dias 4, 8 e 12 após a ovulação. Os percentuais de vascularização apresentaram valores superiores nos dias 4 e 8 comparados ao D12 do GT (P<0,05), não havendo diferença nos dias do GC, nem entre os grupos a cada momento estudado. As concentrações de progesterona não apresentaram diferenças significativas entre grupos ou momentos estudados. No segundo experimento, foram tomadas amostras do CL através de biópsia guiada por ultrassom (5 MHz), nos mesmos períodos, e os fatores angiogênicos analisados pela expressão do mRNA dos genes VEGF, BFGF e receptor de LH (LHR) utilizando PCR em tempo real. Foi observada correlação positiva entre VEGF e LHR (P < 0,00001, r = 0,78). A expressão do LHR no D4 foi maior no GT do que no GC (p < 0,05). Também observou-se maior expressão nos D-4 e D-8 do que o D-12 do GT. A expressão do VGEF declinou no D12 comparado aos dias D4 e D8 do GT (P = 0,06). O bFGF foi expresso em todos os momentos dos dois grupos, porém sem diferença significativa. Conclui-se que o acetato de deslorelina, foi eficiente para a indução de ovulação em éguas, não alterando as respostas fisiológicas do corpo lúteo no que diz respeito a concentração plasmática de progesterona. No entanto, aumentou a responsividade do CL ao LH através de seus receptores, principalmente no quarto dia após a ovulação. Também a expressão do gene do VGEF foi influenciada pela indução da ovulação, tendo uma queda mais acentuada aos 12 dias após a ovulação, o que deve ser esperado em éguas não prenhes.