Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2017-05-10T11:56:06Z No. of bitstreams: 1 adrianaferreirafaria.pdf: 20849316 bytes, checksum: 511836cab839ebb39105bd682c987241 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2017-05-17T15:04:21Z (GMT) No. of bitstreams: 1 adrianaferreirafaria.pdf: 20849316 bytes, checksum: 511836cab839ebb39105bd682c987241 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-17T15:04:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 adrianaferreirafaria.pdf: 20849316 bytes, checksum: 511836cab839ebb39105bd682c987241 (MD5) Previous issue date: 2010-08-13 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O objetivo principal da tese em questão foi o desenvolvimento, otimização e validação de metodologias analíticas para análise de formulações farmacêuticas utilizadas no tratamento da tuberculose, as quais contêm como princípio ativo etambutol (ETB), isoniazida (ISO), rifampicina (RIF) e pirazinamida (PIR), isolados ou em associação. Inicialmente, duas metodologias analíticas para análise de ETB em comprimidos foram desenvolvidas: a primeira permitiu a análise simultânea de ETB e da impureza 2-amino-1-butanol por eletroforese capilar de zona (CZE) utilizando um eletrólito de corrida contendo 60,0 mmol L-1 de tampão ácido acético/acetato de sódio e 5,0 mmol L-1 de Cu2+, polaridade normal (+25 kV) e detecção UV em 262 nm. A segunda foi realizada por espectrofotometria com diluição dos padrões e amostras em 5,0 mmol L-1 de tampão ácido acético/acetato de sódio e 0,5 mmol L-1 de Cu2+ e detecção UV em 262 nm. A formação do complexo CuETB foi necessária em ambas as metodologias desenvolvidas, uma vez que ETB apresenta baixa absortividade molar. Algumas figuras de mérito, tais como, linearidade, repetitividade, exatidão, limite de detecção e limite de quantificação foram avaliadas para as duas metodologias. Os dois métodos foram comparados e não apresentaram diferenças significativas no intervalo de 95% usando o teste t não pareado com variância agrupada. Em um segundo momento, um novo método para análise simultânea de dose fixa combinada (DFC), contendo ETB, ISO, RIF e PIR por CZE com detecção UV foi desenvolvido, otimizado e validado. A condição experimental consistiu em um eletrólito contendo 50,0 mmol L-1 de tampão ácido acético/acetato de sódio e 12,5 mmol L-1 de Cu2+ e polaridade normal (+22 kV). Essa metodologia foi aplicada com sucesso na análise de 2-DFC (ISO e PIR) em comprimidos e 4-DFC (ETB, ISO, RIF e PIR) em sache. Finalmente, uma metodologia por CZE utilizando detecção UV para a análise simultânea de ISO, suas impurezas e produtos de degradação, como o ácido isonicotínico, isonicotinato de etila, 4-cianopiridina e isonicotinamida foi otimizada. A condição experimental consistiu em um eletrólito contendo 50,0 mmol L-1 de tampão ácido acético/acetato de sódio e 12,5 mmol L-1 de Cu2+, polaridade normal (+20 kV) e detecção UV em 270 nm. É importante ressaltar que planejamentos de experimentos, tais como, planejamento fatorial completo 32 e Box-Behnken 33 foram utilizados como ferramenta auxiliar no desenvolvimento e otimização das metodologias analíticas (CZE e espectofotométrica) e na avaliação da robustez para a análise de 4-DFC. / The main focus of this thesis was the development, optimization and validation of analytical methodologies for analysis of pharmaceutical preparations used for tuberculosis treatment, which contain as active ingredients, ethambutol (ETB), isoniazid (ISO), rifampicin (RIF) and pyrazinamide (PYR) isolated or in association. Two analytical methodologies for ETB analysis in tablets were developed initially: the first one took into account the capillary zone electrophoresis (CZE) approach for simultaneous analysis of ETB and its impurity 2-amino-1-butanol using an electrolyte consisting of 60.0 mmol L-1 of acetic acid/acetate buffer, 5.0 mmol L-1 of Cu2+, under normal polarity (+25 kV) and UV detection at 262 nm. The second one was performed by spectrophotometry using 5.0 mmol L-1 of acetic acid/acetate buffer and 0.5 mmol L-1 of Cu2+ for standards and sample dilutions under UV detection at 262 nm. The CuETB complex was necessary for the two methodologies, since ETB presents low molar absorptivity. Some merit figures such as linearity, repeatability, accuracy, limit of detection and limit of quantification were evaluated for both methodologies. These methodologies were compared and they did not present significant differences at the 95% confidence level using the parametric independent sample t test. In a second phase a novel method for the simultaneous analysis of fixed dose combination (FDC) containing ETB, ISO, RIF and PYR by CZE under UV detection was developed, optimized and validated. The experimental condition optimized consisted of an electrolyte containing 50.0 mmol L-1 of acetic acid/acetate buffer and 12.5 mmol L-1 of Cu2+ under normal polarity (+22 kV). This methodology was successfully applied to the analysis of 2-FDC (ISO and PYR) in tablet samples and 4-FDC (ETB, ISO, RIF and PYR) in a sachet sample. Finally, a CZE methodology using UV detection for simultaneous analysis of ISO, its impurities and degradation products such as isonicotinic acid, ethyl isonicotinate, 4-cyanopyridine and isonicotinamide was ptimized. The optimized experimental condition consisted of an electrolyte containing 50.0 mmol L-1 of acetic acid/acetate buffer and 12.5 mmol L-1 of Cu2+ under normal polarity (+20 kV) and UV detection at 270 nm. It is important to stress that design of experiment such as 32 full factorial design and 33 Box-Behnken design were used as auxiliary tools in the development and optimization of the analytical methodologies (CZE and spectrophotemetric) and robustness evaluation for 4-FDC analysis.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / This paper describes the development of methodology for capillary electrophoresis with UV detection for the determination of 14 polyphenolic antioxidants in extracts of Connarus perrottetii var. angustifolius Radlk, a native plant of the Amazon forest. The method using capillary zone electrophoresis (CZE) allows simultaneous determination of 3-acetyilcoumarine, resveratrol, 6-hydroxycoumarin, catechin, rutin, ferulic acid, quercitrin, kaempferol, fisetin, myricetin, quercetin, caffeic acid, gallic acid and 4 hydroxicinnamic acid in the optimized conditions: borate buffer 20 mmol L-1 (pH 9.2) as work electrolyte containing 15% methanol (v /v), -20 kV potential separation, temperature 25 °C; hydrodynamic injection gravity 20 cm for 60 s. The method was validated on parameters of linearity, limit of detection, quantification limit, precision and accuracy, and was used in the analysis of aqueous infusion and ethanol, butanol and ethyl acetate plant fractions. The method was capable of identifying the antioxidants present in samples with high selectivity and sensitivity. In infusion and in ethanol and butanol fractions was found the presence of catechin and rutin as major compounds, which makes up about 0.5% of the total mass of medicinal plant. The obtained dry extracts (ethanol and butanol) allowed the concentration of rutin and catechin around 20 times compared to the dry plant. In addition, tests were performed to measure the antioxidant activity of the extracts against DPPH radical, superoxide anion radical, hydroxyl and peroxyl. A sample of aqueous infusion of 10% showed the highest activity against most free radicals. It corroborates the results of characterization by capillary electrophoresis, where catechin and rutin were determined in relatively high concentrations in the aqueous infusion. But all treatments of the samples showed good antiradicalar behavior with the methodologies applied. Against DPPH, for example, the ethyl acetate fraction showed a potential of 94,43%. Against superoxide and hydroxyl radicals, the butanol fraction showed the best performance: 64,23% and 74,97%, respectively. / Este trabalho descreve o desenvolvimento de metodologia em eletroforese capilar com detecção UV para a determinação de 14 antioxidantes polifenólicos em extratos de Connarus perrottetii var. angustifolius Radlk, planta nativa da Amazônia brasileira. O método empregando eletroforese capilar de zona (CZE) permite a determinação simultânea de 3-acetilcumarina, resveratrol, 6-hidroxicumarina, catequina, rutina, ácido ferúlico, quercitrina, canferol, fisetina, miricetina, quercetina, ácido cafeico, ácido gálico e ácido 4-hidroxicinâmco nas condições otimizadas: eletrólito de trabalho tampão borato 20 mmol L-1 (pH 9,2) contendo metanol 15% (v/v), potencial de separação -20 Kv, temperatura 25 °C; injeção hidrodinâmica por gravidade em 20 cm durante 60 s. O método foi validado nos parâmetros de linearidade, limite de detecção, limite de quantificação, precisão e exatidão e foi aplicado na análise da infusão aquosa e frações etanólica, butanólica e acetato de etila da planta. O método foi capaz de identificar os antioxidantes presentes nas amostras com alta seletividade e sensibilidade. Na infusão e nas frações etanólica e butanólica foi encontrada a presença de catequina e rutina como compostos majoritários, os quais compõe cerca de 0,5% da massa total de planta medicinal. Os extratos secos obtidos (etanólico e butanólico) possibilitaram a concentração de rutina e catequina em torno de 20 vezes em relação à planta seca. Além disso, foram realizados testes para mensurar a atividade antioxidante dos extratos frente aos radicais DPPH, ânion radical superóxido, hidroxila e peroxila. A amostra de infusão aquosa a 10% foi a que apresentou maior atividade frente à maioria dos radicais livres. Esse resultado corrobora os resultados de caracterização por eletroforese capilar, onde catequina e rutina foram determinadas em concentrações relativamente altas na infusão aquosa. Porém, todos os tratamentos das amostras apresentaram bom comportamento anti-radicalar com as metodologias aplicadas. Frente ao radical DPPH, por exemplo, a fração acetato de etila demonstrou um potencial de 94,43%. Frente aos radicais superóxido e hidroxila, a fração butanólica apresentou o melhor desempenho: 64,23% e 74,97%, respectivamente.