Orientador: Doralice Maria Cella / Banca: Carlos Ribeiro Vilela / Banca: Claudio Juan Bidau / Banca: Francisco de Assis Ganeo de Mello / Banca: Luciana Bolsoni Lourenço / Resumo: Dentre todas as ordens de aracnideos conhecidas taxonomicamente, Araneae e a segunda mais diversa, com numero de especies menor somente em relacao a Acari. Atualmente, 39.725 especies ja foram descritas, sendo que centenas de novas descricoes sao feitas a cada ano em diversas familias de aranhas. O conhecimento citogenetico sobre a ordem restringe-se a analise de 638 especies (ca 2%) do total descrito do ponto de vista taxonomico. Este trabalho tem como objetivos fornecer uma compilacao dos dados citogeneticos existentes para a ordem na literatura ate a presente data, bem como caracterizar e estabelecer as estrategias de diferenciacao cromossomica em 13 especies de aranhas pertencentes ao grupo das haploginas, clado que corresponde a somente 3.257 especies (ca 8%) do total da ordem e a apenas 41 especies (ca 6%) do total cariotipado ate os dias atuais. Aliado a baixa representatividade dos dados cariologicos, outros pontos que fazem das haploginas um grupo interessante para estudos sao a predominancia de cromossomos meta/submetacentricos e de sistemas cromossomicos de determinacao sexual simples e multiplos, muitas vezes incluindo um cromossomo Y, ambas caracteristicas raras entre os outros clados de Araneae. As especies analisadas pertencem a tres familias de haploginas, Pholcidae (Mesabolivar luteus e Micropholcus fauroti), Sicariidae (Loxosceles amazonica, Loxosceles gaucho, Loxosceles hirsuta, Loxosceles intermedia, Loxosceles laeta, Loxosceles puortoi, Loxosceles similis e Sicarius tropicus) e Scytodidae (Scytodes fusca, Scytodes globula e Scytodes itapevi). Em Pholcidae, os resultados ineditos para os dois generos mostraram ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Mesabolivar luteus (Keyserling 1891) and Micropholcus fauroti (Simon 1887) specimens were collected in Ubatuba and Rio Claro, both in the state of São Paulo, Brazil. Mesabolivar luteus showed 2n(.) = 15 = 14 + X and 2n(.) = 16 = 14 + XX in mitotic metaphases and 7II + X in diplotenic cells. During late prophase I, all bivalents presented a ring shape, evidencing two chiasmata per bivalent. In this species, some diplotenic cells appear in pairs, maybe due to specific characteristics of the intercellular bridges. The metaphases II showed n = 7 or n = 8 = 7 + X chromosomes. Micropholcus fauroti evidenced 2n(.) = 17 = 16 + X in spermatogonial metaphases and 8II+X in diplotenic cells, with only one chiasma per bivalent, contrasting with M. luteus. In both species, all chromosomes were metacentrics. The X sexual chromosome was the largest element and appeared as a univalent during meiosis I. These are the first cytogenetical data for the genera Mesabolivar and Micropholcus. Additionally, M. luteus is the first chromosomally analyzed species of the New World clade and the observed diploid number for M. fauroti had not yet been recorded in Pholcidae. / Doutor

Orientador: Ana Maria Costa Leonardo / Banca: Fabiana Elaine Casarin dos Santos / Banca: Alexandre Vasconcellos / Resumo: Heterotermes tenuis é uma espécie de cupim nativa da região Neotropical, conhecida como praga agrícola e urbana. Essa espécie causa sérios danos econômicos em culturas de cana-de-açúcar e ataca madeiras e derivados celulósicos em cidades. H. tenuis apresenta hábitos subterrâneos e indivíduos de pequeno porte, com soldados dimórficos. A diferenciação de castas nos cupins é um processo complexo ainda não totalmente esclarecido. Em vista disso, o objetivo do presente estudo foi entender a diferenciação de soldados no cupim H. tenuis a partir de agrupamentos de operários. Para isso, no Capítulo I, foram apresentados os resultados dos bioensaios desenvolvidos para observar a influência de fatores extrínsecos e intrínsecos, entre eles, número de operários agrupados, temperatura, fontes alimentares e ingestão de diferentes concentrações de piriproxifen, um análogo de hormônio juvenil. Agrupamentos com 50, 100, 200 e 300 operários formaram uma baixa proporção de soldados. O uso de piriproxifen originou pré-soldados e também intercastas, sendo que a formação de pré-soldados foi maior na concentração de 10 ppm. Já no Capítulo II, o foco do estudo foram as mudanças morfológicas externas e internas ocorridas durante o processo de diferenciação de soldados. Para isso, operários, pré-soldados, soldados e intercastas foram submetidos à análise biométrica e histológica. Além disso, foi realizada a identificação do sexo dos soldados e a determinação da duração do ínstar de pré-soldado. Este ínstar durou cerca de 15 dias em temperatura ambiente e os pré-soldados diferiram biometricamente dos soldados, principalmente, pelo comprimento da cápsula cefálica e do tórax. As intercastas obtidas foram do tipo operário-soldado. Soldados menores de H. tenuis foram todos machos enquanto os soldados maiores apresentaram uma proporção de aproximadamente... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Heterotermes tenuis is a native species of termite, known as an agricultural and urban pest. This species causes serious economic damages on crops of sugar cane and attacks wood and cellulosic derivatives in cities. H. tenuis has subterranean habits and small individuals, with dimorphic soldiers. Differentiation of castes in termites is a complex process not yet fully understood. In this study we aimed to understand the differentiation of H. tenuis soldiers, originated from groups of workers. In Chapter I, we presented the results of bioassays developed to observe the influence of extrinsic and intrinsic factors, including, number of grouped workers, temperature, food sources and ingestion by the workers of different concentrations of pyriproxyfen, a juvenile hormone analog. Groups of 50, 100, 200 and 300 workers originated a low proportion of soldiers. The use of pyriproxyfen induced presoldiers and also intercastes. Presoldiers were produced in a large number in a concentration of 10 ppm. In Chapter II, the focus of the study was the external and internal morphological changes occurred during the process of differentiation of soldiers. For that, workers, presoldiers, soldiers and intercastas were histologically and morphometrically analyzed. In addition, we performed the sex identification of the soldiers and determined the duration of the presoldier instar. This instar lasted about 15 days at a variable temperature and the presoldiers biometrically differed from soldiers mainly by the length of head capsule and thorax. The intercastes obtained were from the worker-soldier type. Minor soldiers of H. tenuis were all males while the major soldiers had a ratio of approximately 1:1 between males and females. The exocrine glands of the individuals studied were compared and the histology showed that workers had greater development of the salivary, mandibular and sternal glands... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Joaquim Mansano Garcia / Banca: Lígia Veiga Pereira / Banca: Irina Kerkis / Resumo: O estudo dos processos de diferenciação em células tronco embrionárias (CTE) representa uma importante ferramenta para o entendimento das vias moleculares que os regem, apresentando grande aplicação tanto na ciência básica quanto na engenharia de tecidos e medicina regenerativa. Pouco é conhecido sobre as marcas epigenéticas existentes na cromatina destas células, e de que forma a regulação da expressão gênica ocorre no momento da diferenciação. O presente trabalho teve como objetivo o estudo dos efeitos da hiperacetilação das histonas causada pela droga tricostatina A (TSA), uma inibidora das enzimas histona desacetilases, sobre a diferenciação destas células em estádios iniciais e avançados. Para tanto, a hiperacetilação induzida pela droga foi estimada por reações de imunocitoquímica para AcLys9H3. Os efeitos anti-proliferativos da TSA foram mensurados pelo teste de TUNEL e contagem de células. Ainda, foram conduzidos experimentos de diferenciação in vitro de CTE e análise da expressão de proteínas características de linhagens celulares diferenciadas por reações de imunocitoquímica (Oct3/4, nestina, âIII tubulina, desmina e troponina I), em cultivos tratados com TSA em diferentes concentrações e em diferentes momentos. Desta forma, foi estimada a população de tipos celulares oriundos dos folhetos embrionários ectodérmico e mesodérmico, como neurônios, e células musculares, quando foi promovida a hiperacetilação das histonas nas CTE, em diferentes momentos da diferenciação celular in vitro. A TSA induziu apoptose em níveis superiores aos do grupo controle, e retardou/inibiu a divisão celular. Promoveu hiperacetilação dose-dependente nos períodos estudados, e estimulou a diferenciação de precursores mesodérmicos (50nM d5) e ectodérmicos (15nMd0-5 e 50nMd5), cardiomiócitos (50nMd5 e 100nMd13) e neurônios (15nMd0-5, 50nMd5, 100nMd5, 100nMd13). / Abstract: Studies on embryonic stem cells (ESC) differentiation represents an important tool leading to understanding of its molecular pathways, with many applications both on basic research and tissue engineering / regenerative medicine. Little is known about epigenetic marks on ESC chromatin, and how gene expression occurs at differentiation time. The aim of this work was to study effects of histone hiperacetylation, induced by cell treatment with trichostatin A (TSA), an histone deacetylase inhibitor, on both initial and late differentiation. For that, drug-induced hyperacetylation was studied by AcLys9H3 immunocitochemistry. TSA anti-proliferative effects were analysed by TUNEL test and cell counts. Experiments on ESC in vitro differentiation and immunocitochemistry for specific cell types proteins (Oct3/4, nestin, âIII tubulin, desmin and troponin I) were performed, in treated and control groups, at different moments. This analysis showed specific cell types populations derived from embryonic ectodermal and mesodermal, such as neurons and cardiomyocytes, when histone hyperacetylation were induced, on both initial and late diferentiation. Our results showed that TSA induces apoptosis and inhibits cellular proliferation. Also, TSA promoted dose-dependent histone hyperacetylation at studied moments, and stimulated mesodermal (50nM d5) and ectodermal (15nMd0-5 e 50nMd5) precursors, cardiomyocytes (50nMd5 e 100nMd13) and neurons (15nMd0-5, 50nMd5, 100nMd5, 100nMd13) differentiation. / Mestre

Orientador: Sulene Noriko Shima / Banca: Sidnei Mateus / Banca: Fernando Barbosa Noll / Resumo: A família Vespidae é um grupo chave para o entendimento da origem do comportamento social nos Hymenoptera, pois inclui desde espécies solitárias que não apresentam qualquer grau de socialidade até espécies que são altamente sociais como os Epiponini (Hymenoptera:Vespidae). A separação em castas é uma das pedras fundamentais da evolução dos insetos sociais, pois a presença de uma grande diferenciação entre as castas indica um maior grau de socialidade. Neste contexto, as vespas neotropicais pertencentes à tribo Epiponini despertam grande interesse em estudos de evolução de castas, pois além de apresentarem colônias poligínicas pode se observar um grande espectro de variação ocorrendo desde espécies com castas morfologicamente incipientes até distintas. Além disso, para uma dada espécie, o perfil de diferenciação morfológica entre as castas pode variar ao longo do ciclo colonial, evidenciando uma grande flexibilidade adaptativa frente às diferentes situações enfrentadas pela colônia ao longo de seu desenvolvimento. Diferenças morfofisiológicas entre as castas de 6 colônias em diferentes fases do desenvolvimento colonial de Polybia (Trychothorax) ignobilis foram analisadas. Para determinar as diferenças morfológicas entre as castas, foram medidas 13 varíaveis corporais externas provenientes da cabeça, mesossoma, metassoma e asa. Os ovários foram fotografados e esquematizados, a inseminação, idade relativa, a quantidade de tecido gorduroso e a condição morfológica da glândula de Richards foram analisadas. As fêmeas apresentaram uma seqüência gradual no padrão de desenvolvimento ovariano, desde ovaríolos... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The Vespidae family is a key group in evolutionary studies of sociality in Hymenoptera due to the occurrence of every step of social organization including species whose do not present any degree of sociality until those which are highly social, such as the Epiponini (Hymenopter: Vespidae). The separation into castes is one of the most important features of social insects and the presence of a higher level of caste differentiation indicates a well defined reproductive division of labor and consequently a higher degree of sociality. Morphological studies of caste differentiation in Neotropical social wasps concentrate mainly in the Epiponini tribe, once it's ecologically abundant in Neotropics and presents a wide spectrum of variability of caste systems ranging from species with a slightly caste differentiation to those with conspicuous body differences. Besides, patterns of caste differentiation may vary according the colony cycle mainly in response to environmental changes which may affect the colony dynamics. Morphological and physiological differences between castes of 6 colonies of Polybia (Trychothorax) ignobilis were analyzed. Measurements were taken from 13 morphometric variables regarding the head, metasoma, mesosoma and wing... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Dimas Tadeu Covas / Banca: José Orlando Bordin / Banca: Carmino Antônio de Souza / Banca: Orlando Castro e Silva Júnior / Banca: Aparecida Maria Fontes / Resumo: Alguns trabalhos realizados recentemente relatam que as células-tronco mesenquimais (CTM) podem ser induzidas à aquisição de marcadores hepatocíticos pelo transplante em modelos animais de dano hepático, ou pelo cultivo in vitro com fatores de crescimento e citocinas. O presente trabalho teve por objetivo avaliar o comportamento das CTM frente à indução da diferenciação hepatocítica. As CTM foram isoladas da medula óssea de quatro doadores saudáveis, caracterizadas e submetidas ao protocolo de indução à diferenciação hepatocítica in vitro e in vivo. As células induzidas in vitro apresentaram mudanças na sua morfologia, mostrando a morfologia semelhante à do hepatócito, porém, o perfil imunofenotípico não foi modificado. As células induzidas também não apresentaram o aumento dos transcritos de albumina, citoqueratina 18 e citoqueratina 19 quando analisadas por RT-PCR em tempo real, e não alteraram a expressão de albumina, citoqueratina 18 e alfafetoproteína como demonstrado por imunofluorescência. Quando analisadas in vivo, as CTM demonstraram o potencial migratório para o tecido hepático danificado de camundongos imunodeficientes. Em conjunto, os resultados sugerem que as CTM da medula óssea não são capazes de se diferenciar em hepatócitos quando estimuladas in vitro pela metodologia utilizado neste trabalho, mas são capazes de migrar para o tecido hepático danificado in vivo, o que sugere o seu papel no reparo do fígado. A contribuição para o reparo pode estar associada com o efeito parácrino dessas células. / Abstract: Some recently works have been reported that mesenchymal stem cells (MSC) can be induced to the acquisition of hepatocytic markers for the transplant in animal models of liver damage, or for the in vitro culture with growth factors and cytokines. The present work aim is to evaluate the behavior of the MSC in front of the induction of the hepatocytic differentiation. The MSC was isolated from the bone morrow of 4 normal donators, characterized and submitted to the protocol of in vitro and in vivo induction of hepatocytic differentiation. The in vitro induced cells showed morphology changes acquiring hepatocytes-like morphology. However, the immunophenotypic profile of those cells was not modified. The induced cells did not present increase of the albumin, cytokeratin 18 and cytokeratin 19 transcripts, when analyzed by real time RTPCR. The expression of albumin, cytokeratin 18 and alpha foetoprotein was also not modified as demonstrated by immunofluorescence. In vivo, the MSC have demonstrated the migratory potential for the damaged liver of immunodeficient mice. Together, the results suggest that the bone morrow MSC are not capable of in vitro hepatocytic differentiating according to the approach in this work, but are capable to homming into damaged hepatic tissue in vivo. This migration capacity suggests their role in the repair mechanisms. / Doutor

Orientador: Jeffrey Frederico Lui / Banca: Humberto Tonhati / Banca: Selma de Fátima Grossi / Resumo: A ocorrência de híbridos entre javalis e suínos, tanto na natureza como em cativeiro, é bastante comum. Assim, tem-se detectado polimorfismo em javalis, variando o número de cromossomos de 36 a 38. Nesse sentido, objetivou-se, com este trabalho, caracterizar geneticamente javalis (Sus scrofa scrofa) puros e híbridos criados no Brasil, por meio de loci de microssatélites (STRs) do suíno doméstico (Sus scrofa domestica). Para efeito de classificação, os animais foram agrupados, segundo análise de pedigree e número diplóide (2n), em 5 grupos genéticos: grupo I, constituído de 59 suínos domésticos; grupo II, formado por 46 javalis puros de origem; grupo III, constituído de 3 híbridos, com 2n=36, provenientes de acasalamentos entre híbridos e retrocruzamentos; grupo IV, representando 30 híbridos com suíno doméstico de ploidia igual a 37 cromossomos; e grupo V, constituídos de 10 híbridos também com o doméstico, porém com 2n=38, conhecidos popularmente como Javaporcos, devido à similaridade cariotípica e fenotípica com o suíno doméstico. O DNA genômico foi extraído e, posteriormente, amplificou-se, pela técnica de PCR, os fragmentos desses microssatélites - IGF1, ACTG2, TNFB -, os quais foram desenvolvidos para a subespécie Sus scrofa domestica. As condições de amplificação foram padronizadas para as amostras de javali realizadas em um termociclador, com as temperaturas de anelamento variando para cada primer. Ao final das amplificações, os produtos dos microssatélites foram colocados em um seqüenciador capilar modelo ABI 3100 Avant (Applied Biosystems). A partir dos resultados obtidos no presente trabalho, concluiu-se que os microssatélites IGF1, ACTG2 e TNFB, usados em suínos, são eficiente na amplificação heteróloga e podem ser aplicados em javali. Os javalis puros se diferenciam geneticamente dos suínos e dos híbridos...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The occurrence of crossbred animals between wild boar and pigs, both in nature and in captivity, is quite common. Thus, polymorphism has been detected among wild boar, varying chromosomes from 36 to 38. Considering this, the objective of the present work was to perform a genetic characterization of wild boar and crossbred boars raised in Brazil, through. the microsatellites loci (STRs) of the domestic pig (Sus scrofa domestica). For classification purposes, the animals were grouped according to pedigree analysis and diploid number (2n) into 5 genetic groups: group I, composed of 59 domestic pigs with 2n = 38; group II, composed of 46 wild boar with 2n = 36 imported from France in 1997; group III, composed of 3 crossbred animals with 2n = 36 from the crossing between crossbred and backcrossing animals; group IV, composed of 30 crossbred animals with domestic pig with ploidy equal to 37 chromosomes and group V, composed of 10 crossbred animals also with domestic pig, but with 2n = 38, popularly known as "Boarpigs" due to their karyotypic and phenotypic similarity with the domestic pig. The genomic DNA was extracted and, after that, the fragments of these microsatellites - IGF1, ACTG2, TNFB - were amplified through the PCR technique, which were developed for the Sus scrofa domestica species. The amplification conditions were standardized for wild boar samples and performed in a thermocycler with the annealing temperatures varying for each primer. At the end of amplifications, the products of microsatellites were placed in a genetic analyzer model ABI 3100 Avant (Applied Biosystems). Considering the results of this research, the microsatellites IGF1, ACTG2 and TNFB used for pigs, were considered to be efficient on the heterologous amplifications and can also be applied on wild boar. The wild boar differs genetically from pigs and crossbreds... (Complete abstract, click electronic access below) / Mestre