The purpose of this project was to evaluate dif1ubenzuron ovicidal effects on adult female alfalfa weevils Hypera postica in the laboratory. There was little relationship of weevil mortality to dosage or length of exposure of the adult to the chemical. An indirect result of dif1ubenzuron was an increase in muscardine fungus (Beauveria Sp.). Other effects of the chemical on the adults were yellow deposits and tissue extending from the tip of the abdomen. The main effect of di1fubenzuron when fed to female alfalfa weevils was on the eggs. The effects were dosage related, especially on eggs viability. The viability was dropped from 99% in the control to 38.9% on the treated insects in ten days using the highest dosage. Another effect of diflubenzuron on alfalfa weevil eggs was on the shape of the eggs. The treated insects laid longer and lighter color eggs.

The purpose of this project was to evaluate diflubenzuron ovicidal effects on adult female alfalfa weevils " Hypera postica in the laboratory. There was little relationship of weevil mortality to dosage or length of exposure of the adult to the chemical. An indirect result of diflubenzuron was an increase in muscardine fungus (Beauveria Sp.). Other effects of the chemical on the adults were yellow deposits and tissue extending from the tip of the abdomen. The main effect of dilfubenzuron when fed to female alfalfa weevils was on the eggs. The effects were dosage related, especially on eggs viability. The viability was dropped from 99% in the control to 38.9% on the treated insects in ten days using the highest dosage. Another effect of diflubenzuron on alfalfa weevil eggs was on the shape of the eggs. The treated insects laid longer and lighter color eggs.

The effects of the insecticide diflubenzuron (DFB) on the growth characteristics of two gram negative soil bacterial isolates were examined. The bacterial isolates were grown in the presences of varying amounts of DFB and showed no apparent change in cell numbers, over time, when compared to control cultures. However, one of the two isolates tested showed a delayed response in chitinase production, over the same time period, as determined by radioisotopic methodology. Chitinase fractions obtained from cell free culture supernatants, concentrated by ultrafiltration and purified by affinity chromatography, were examined for activity in the presence of DFB. High performance liquid chromatography (HPLC) techniques were utilized in the identification and quantification of products from control and experimental samples. Due to the loss of overall chitinase activity in the supernatants, this technique proved ineffective in determining chitinase response to DFB. / Department of Biology

Made available in DSpace on 2015-11-11T12:13:55Z (GMT). No. of bitstreams: 2 thiago_belinato_ioc_dout_2012.pdf: 3612135 bytes, checksum: 690556f02680b7036308993d110f343d (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015-05-21 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Ainda hoje o uso de inseticidas é um componente importante das estratégias de controle de vetores. O organofosforado temephos, por exemplo, é utilizado para controle de populações de Aedes aegypti no Brasil desde 1967. Um dos problemas relacionados ao uso intenso de inseticidas por um longo período de tempo é a seleção de indivíduos resistentes. A resistência a inseticidas está, em grande parte, relacionada com o aumento da expansão de A. aegypti ao longo das últimas décadas e é desafio atual dos programas de controle do vetor. Outros compostos, com diferentes mecanismos de ação, têm sido empregados nos locais onde as populações encontram-se resistentes aos inseticidas tradicionais. Uma vez que poucos produtos estão disponíveis para controle de A. aegypti, entender os mecanismos de resistência relacionados aos principais inseticidas atualmente empregados pode ser fundamental para compreender a evolução da resistência em campo. No presente trabalho, foi avaliada, usando a linhagem Rockefeller e populações de campo de A. aegypti, a atividade de enzimas detoxificantes, em resposta a doses parcialmente letais de representantes das principais classes de inseticidas empregados no país: os larvicidas temephos e o inibidor de síntese de quitina (ISQ) diflubenzuron, além do piretróide permetrina Também foi realizada seleção com diflubenzuron em duas populações de campo, com diferentes níveis de resistência ao OP temephos. Foram investigados, nessas populações, diversos parâmetros do fitness, antes e depois da seleção com o ISQ. Verificamos que todas as populações estudadas apresentaram altos níveis de resistência aos inseticidas químicos tradicionais, mas não ao diflubenzuron. Quando aplicado em larvas, temephos provocou diminuição progressiva da atividade de acetilcolinesterase e de esterases, confirmando reação, com OP, dos substratos utilizados nas avaliações do monitoramento dos mecanismos de resistência. Diflubenzuron provocou mudanças no perfil da atividade de GST e MFO em Rockefeller e em uma população de campo. Além disso, populações selecionadas com o ISQ apresentaram aumento da atividade destas duas classes de enzimas. Esses dados apontam para a potencial participação de GST e MFO na metabolização de diflubenzuron. Também verificamos que a resistência a temephos está associada a comprometimento de diversos parâmetros da biologia dos mosquitos. Reversão da resistência em populações mantidas na ausência do inseticida, aliada à recuperação de diversos aspectos do fitness, reforça essa hipótese. Do mesmo modo que temephos, a resistência a diflubenzuron também acarreta problemas no fitness. De modo geral, houve redução na taxa de aceitação do repasto sanguíneo, quantidade de sangue ingerido, número de ovos e quantidade de fêmeas inseminadas. Esperamos que os resultados aqui apresentados possam contribuir para a melhor compreensão dos mecanismos de resistência a inseticidas em populações de campo de A. aegypti e para promover o desenho de estratégias de controle diferenciadas e racionais do vetor / Insecticides still play an important role in vector control strateg ies. For instance, i n Brazil , the organophosphate (OP) temephos has been employed since 1967 against A edes aegypti . One ma jor consequence related to the intense use of insecticides for long period s is selection of resistance . Insecticide resistance is associated to A. aegypti expansion over the past decades and is a current challenge for vector control programs . Compounds with different mechanisms of action are presently being employed in localities whe re vector populations are resistant to traditional insecticides . Since there are few products available for A. aegypti control, knowledge of the mechanisms of resistance to insecticides currently in use could be essential to understanding the evolution of resistance in the field . In this study, the activity of detoxifying enzymes of A. aegypti Rockefeller strain and field populations was evaluated after expos ure to partially lethal doses of th ree insecticides , representative of the main classes employed in the country: t he OP temephos, the chitin synthesis inhibitor (CSI) diflubenzuron and the pyrethroid (PI) permethrin . S election with diflubenzuron of two field populations, with distinct temephos resistance levels w as also performed. Several fitness paramet ers were i nvestigate d in these populations, before and after selection with the ISQ . We previously identified, in both populations , high resistance levels to the conventional chemical insecticides, but not to diflubenzuron . When applied to larvae, temephos caused progressive decrease in the activity of a cetylcholinesterase and e sterases, confirming that substrates used in routine monitoring of resistance mechanisms indeed reacts with OP. Diflubenzuron caused changes in the activity profile of MFO and GST in both Rockefeller strain and in a field population . In addition, populations selected with the ISQ showed increased activity of these two enzyme classes . These data point to the potential participation of MFO and GST in diflubenzuron metabolism . We also fo und that temephos resistance is associated with the impairment of several parameters of mosquitoes ’ biology . Reversion of resistan ce in populations maintained in absence of insecticides, coupled with the recovery of various fitness aspects, support s this h ypothesis . As with temephos, diflubenzuron resistance causes fitness problems. Overall, there was a reduction in b lood meal acceptance, amount of ingested blood, number of eggs and frequency of inseminated females . Our results may contribute to a better kn owledge of insecticide resistance mechanisms in A. aegypti field populations and to the developm ent of novel and rational control strategies.

Doctor of Philosophy / Biochemistry and Molecular Biophysics Interdepartmental Program / Subbaratnam Muthukrishnan / In this study, I have used dsRNA-mediated down-regulation of transcripts/proteins of several potential targets in the model beetle, Tribolium castaneum to identify a molecular target of the “chitin inhibitor”, diflubenzuron (DFB). The elytron of the red flour beetle, T. castaneum, was chosen as the model tissue for studying the mode of action of DFB and its molecular target(s). We have standardized the protocol for topical administration of DFB on precisely aged prepupae to achieve the desired level of mortality (90-95%) on day 5 of the pharate adult stage. Exposure of prepupae to DFB at 1000 ppm results in a near complete loss of chitin in the newly forming adult procuticle of the elytron and the body wall. Global analysis of transcripts by RNA Seq was carried out to look for differential expression of several critical genes of cuticle assembly in these insects compared to mock-treated controls. Interestingly, genes directly involved in the biosynthetic pathway of chitin were not among those affected by DFB. However, immunolocalization studies have shown that several proteins of chitin metabolism including chitin synthase A, which is involved in the synthesis of cuticular chitin, are present in near normal amounts but are mislocalized in DFB-treated insects. Assays for chitin synthase using elytral extracts have indicated that the enzyme preparations from DFB-treated insects are catalytically inactive. By using RNA interference and competition studies with fluorescently-tagged glibenclamide (a sulfonylurea compound) or DFB, we have identified a long-sought molecular receptor of DFB as an ABCC class transporter. DFB-treatment and RNAi of a specific ABCC-type transporter gene lead to identical phenotypes including loss of chitin, loss of laminar architecture of the cuticle, and mislocalization of CHS from its normal plasma membrane location to intracellular locations presumably by affecting vesicular transport. Further, using an in vitro chitin synthesizing system consisting of microsomes prepared from elytral tissue, which exhibits all of the hallmarks of cuticular chitin-synthesizing epidermal cells including sensitivity to DFB, further insights into the mechanistic details of how this class of insecticides inhibits chitin synthesis have been obtained.

Orientador: Flávio Ruas de Moraes / Banca: Adjair Antonio do Nascimento / Banca: Gilson Pereira de Oliveira / Banca: Laura Satiko Okada Nakaghi / Banca: Oelinton Ferreira Barbosa / Resumo: Avaliou-se no presente trabalho, a eficácia anti-parasitária do praziquantel, levamisol e diflubenzuron administrados via oral, adicionados à ração e administrados a pacus (Piaractus mesopotamicus) infectados por Anacanthorus penilabiatus e Dolops carvalhoi. Foram utilizadas 19 caixas d’água de 300 litros de capacidade, comportando 28 peixes em cada uma. O alimento dos peixes foi feito misturando as drogas na ração. O experimento foi conduzido em quatro colheitas realizadas, um dia antes e três, sete e 15 dias após a aplicação dos medicamentos. A alimentação dos peixes com ração contendo diflubenzuron, levamisol e praziquantel isolado ou associados em diferentes concentrações foi feita durante sete dias. Os resultados da eficácia terapêutica sugerem que simples ou associado com levamisol e praziquantel, o diflubenzuron é eficiente contra o crustáceo D. carvalhoi, demonstrando que a eficácia dos tratamentos nos dias três, sete e 15 foi de 96,2 a 100%. Contra os monogenóides as drogas não apresentaram eficácia satisfatória. Os resultados sugerem o uso do diflubenzuron para o controle de D. cavalhoi em peixes de cativeiro nas condições deste ensaio. / Abstract: This assay evaluated the control efficacy of diflubenzuron, praziquantel and levamisole added to the diet of pacu (Piaractus mesoptamicus) infected with Anacanthorus penilabiatus and Dolops carvalhoi. Nineteen water tanks of 300 liters capacity were utilized with 28 fish in each one. The treatments were made by mixing the active principles in the diet. The experiment was evaluated in four harvests done one day before and three, seven and 15 days after the treatment. The medicated feeding was applied for seven days. The results of efficacy suggest that the diflubenzuron alone or associated with levamisole and praziquantel was efficient against the crustacean D. carvalhoi and the efficacy in the three, seven and 15 days evaluations ranged from 96,2 to 100%. Against the monogenean the drugs did not present efficacy. The results suggest the use of diflubenzuron for the control of D. carvalhoi in captive fishes in the conditions of this trial. / Doutor

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2017-10-25T16:53:43Z No. of bitstreams: 1 vanessacristinaestevambittencourt.pdf: 4643233 bytes, checksum: f4c1b1d214125b1ed5e1cc2be806cd22 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2017-11-09T13:53:22Z (GMT) No. of bitstreams: 1 vanessacristinaestevambittencourt.pdf: 4643233 bytes, checksum: f4c1b1d214125b1ed5e1cc2be806cd22 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-11-09T13:53:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 vanessacristinaestevambittencourt.pdf: 4643233 bytes, checksum: f4c1b1d214125b1ed5e1cc2be806cd22 (MD5) Previous issue date: 2016-09-29 / Neste trabalho foram preparados, caracterizados e avaliadas as atividades larvicida e citotóxica dos compostos de inclusão formados entre as benzoilfeniluréias (novaluron - NOV e diflubenzuron - DIF) e avermectina (abamectina - ABA) com β-ciclodextrina (βCD). A presença de alterações nos espectros na região do infravermelho e nos perfis térmicos dos compostos de inclusão em relação aos seus precursores e misturas mecânicas sugeriram a ocorrência de interação entre esses compostos e a βCD. Os dados termodinâmicos obtidos por titulação calorimétrica isotérmica permitiram verificar a formação de compostos de inclusão com estequiometria 1:1, sendo os processos espontâneos e com valores bem distintos para as constantes de formação. As análises dos espectros de ressonância magnética nuclear das amostras sugerem que a inclusão ocorre através do grupo 1,1,2-trifluoro-2-trifluoro-metóxietóxi, do grupo fenila ou do anel benzofurânico para compostos de inclusão com NOV, DIF e ABA, respectivamente. Dados de espalhamento de luz dinâmico e potencial zeta demonstram que em todos os compostos de inclusão ocorrem alterações no tamanho das partículas em suspensão em relação aos precursores. Além disso, foi possível verificar através do perfil dos gráficos de solubilização que os compostos de inclusão, com exceção do NOV, apresentam maior solubilização quando comparados com as substâncias puras. Com base nas informações da caracterização em suspensão, o sólido caracteriza-se como um nanoprecipitado hidrofóbico instável com possibilidade de agregação. Com relação aos ensaios biológicos foi observado que em todas as análises os valores de dose letal a 50% das larvas de Aedes aegypti (DL50) ou porcentagem de inibição de emergência em 50% de sua população (% IE50) foram menores que 1 ppm, demonstrando a elevada ação inseticida desses compostos. A avaliação da atividade larvicida nos estádios L4 para a benzoilfenilureias e seus compostos de inclusão demonstrou-se pouco efetiva, porém sugeriu a possibilidade de maior atividade larvicida do composto de inclusão com NOV em relação ao seu precursor. Além disso, o teste de inibição de emergência para as benzoilfenilureias possibilitou confirmar o mecanismo de ação desses compostos durante o ciclo de vida do mosquito, verificar a relação direta entre dose e mortalidade, observar atraso no desenvolvimento das fases do mosquito nas amostras tratadas em relação ao controle e constatar a redução do valor de %EI50 para os compostos de inclusão. Nos experimentos nos estádios L1 e L4 para ABA e seu composto de inclusão foi verificada maior fragilidade do estádio L1 em relação ao L4 e a redução da DL50 para o composto de inclusão em todos os experimentos. Esses dados demonstram a maior atividade larvicida dos compostos de inclusão em relação às substâncias livres. Na avaliação de toxicidade através do ensaio do MTT em células de fibroblastos WI26UA4, foi confirmada que NOV e DIF e seus compostos de inclusão apresentaram baixa toxicidade, enquanto que a ABA e seu composto de inclusão apresentaram moderada toxicidade. Também foi verificado que os valores nos quais se observam elevada citotoxicidade em humanos são bem superiores aos necessários para causar a mortalidade das larvas, demonstrando a seletividade e segurança dessas nanocomposições. Desta forma, a estratégia de preparar os compostos de inclusão resultou em um aumento da atividade larvicida em todas as situações testadas, demonstrando que esta pode ser uma alternativa promissora no controle do mosquito Aedes aegypti. / In this work the inclusion compounds formed between benzoylphenylureas (novaluron - NOV and diflubenzuron - DIF) and avermectin (abamectin - ABA) with β-cyclodextrin (βCD) were prepared, characterized and evaluated their larvicide and cytotoxic activities. Changes in the infrared spectra and thermal profiles of the inclusion compounds in relation to mechanical mixtures and precursors suggested the occurrence of interaction between those compounds and the βCD. Thermodynamic data obtained by isothermal titration calorimetry allowed verifying the formation of inclusion compounds with stoichiometry 1: 1, and the spontaneous processes and distinct values for the formation constant. The analysis of the nuclear magnetic resonance spectra of the samples suggests that inclusion via 1,1,2-trifluoro-2-trifluoromethoxy- ethoxy group, the phenyl group, or benzofuran ring for inclusion compounds with NOV, DIF and ABA, respectively. The dynamic light scattering and zeta potential data from inclusion compounds demonstrated changes in the size of the particles in suspension in relation to precursors. Moreover, it was possible to verify by solubilization curves that inclusion compounds have greater solubility compared with the pure substances, except of NOV. Based on suspension data, the solid is characterized as an unstable hydrophobic nanoprecipitated with possibility of aggregation. In relation to biological assays, the lethal dose values to 50% of the larvae of Aedes aegypti (LD50) or emergency inhibition percentage at 50% of its population (% IE50) were less than 1 ppm for all compounds, demonstrating the high insecticidal activity of them. The evaluation of larvicidal activity in the L4 stage to benzoylphenylureas and their inclusion compounds proved to be ineffective, suggesting a probable increase in the larvicidal activity of the inclusion compound with NOV compared to its precursor. Furthermore, the emergence inhibition assay for benzoylphenylureas allowed to confirm the mechanism of action of these compounds during the mosquito’s life cycle, to verify direct relationship between dose and mortality; to observe the delay in the development stage of mosquitoes in the samples treated compared to control, and, to verify the reduction in % EI50 values for inclusion compounds. In the experiments realized in L1 and L4 stadia for ABA and its inclusion compound, it was verified a more fragility L1 stadium with respect to L4 and a reduction of LD50 values for the inclusion compounds in all experiments. These data demonstrate the highest larvicidal activity of inclusion compounds in relation to the free substances. In the evaluation of toxicity using the MTT assay WI26UA4 fibroblast cells it was confirmed that NOV and DIF and their inclusion compounds showed low toxicity, while the ABA and its inclusion compound showed moderate toxicity. It was also observed that the values to generate cytotoxicity in humans are much higher than those required to cause larval mortality, demonstrating the selectivity and safety of nano composition. Thus, the strategy for preparing the inclusion compound resulted in an increase in larvicidal activity in all situations tested, demonstrating that this may be a promising alternative for the control of Aedes aegypti.

Orientador: Hiroshi Aoyama / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-22T18:38:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dantzger_DarleneDenise_M.pdf: 2112371 bytes, checksum: 028650c262ae910dc42abf89039ad4e4 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: O uso de produtos agrícolas vem sendo a principal forma de combater parasitas na aquicultura, sendo que o Diflubenzuron, (DFB) é o mais utilizado. Este composto inibe a síntese de quitina, componente do exoesqueleto dos parasitas, e apresenta baixa toxicidade aos peixes. Porém, no ambiente aquático, o DFB pode ser tóxico às espécies não-alvo e, quando degradado, gera p-cloroanilina, (PCA), metabólito potencialmente cancerígeno e mutagênico para o ser humano. Tendo em vista a necessidade de se obter mais informações sobre a toxicidade destes compostos nos organismos aquáticos não-alvo, a proposta deste trabalho foi analisar a atividade enzimática de fosfatases ácida (FAT) e alcalina (Falc), catalase (CAT) e superóxido dismutase (SOD) de microalga Pseudokirchneriella subcapitata, microcrustáceo Daphnia similis e o peixe Oreochromis niloticus com base na concentração efetiva 50% (CE50) para os testes in vivo, e na concentração de inibição 50% (CI50) para os testes in vitro, do DFB e de seu metabólito PCA. Como resultado do teste de toxicidade aguda a CE50 do DFB foi 0,00096 mg.L-1, 0,009 mg.L-1 e >100 mg.L-1 para algas, daphnias e peixes respectivamente. A CE50 do PCA para as daphnias e os peixes foi de 0,27 mg.L-1 e 24 mg.L-1 , respectivamente. Por sua vez, as algas não sofreram alteração no seu crescimento durante a exposição ao PCA. Nos testes bioquímicos in vivo o DFB e o PCA provocou alterações na atividade das enzimas fosfatases ácida, alcalina, catalase e superóxido dismutase dos organismos-teste. Assim, as enzimas estudadas mostraram-se sensíveis à exposição aos compostos nos estudos in vivo podendo ser utilizadas como indicadoras de poluição dos recursos hídricos por DFB e PCA. Nos ensaios in vitro onde as enzimas foram incubadas com os compostos DFB e PCA em diferentes concentrações, apenas as FAT e CAT do fígado dos peixes sofreram diminuição da sua atividade mediante a exposição a diferentes concentrações de PCA, e foram, portanto, utilizadas para a determinação das constantes cinéticas: Michaelis-Mentem (Km), inibição (Ki), e da velocidade máxima (Vmax), e concentração de inibição média (CI50). A FAT sofreu uma inibição do tipo competitiva (Ki 8,2 mM - Km 0,21 mM - Vmax 0,01211 e CI50 3,2 mM), já a CAT apresentou uma inibição não competitiva (Ki 0,030 mM - Km 56,3 mM - Vmax 0,001198 e CI50 0,20 mM) conforme foi aumentando a concentração de PCA. O teste in vitro foi importante, pois permitiu elucidar o mecanismo de ação do PCA sobre as enzimas FAT e CAT dos peixes. Os resultados desta pesquisa mostraram que ambos os compostos foram tóxicos aos organismos-teste e causaram alterações significativas nos biomarcadores avaliados. Portanto, a utilização do DFB deve ser realizada de forma criteriosa / Abstract: The use of agricultural products has been the main way to combat parasites in aquaculture, and the diflubenzuron (DFB) is the most used for that. This compound inhibits the chitin synthesis of the parasites exoskeleton, and has low toxicity to fishes. However, in the aquatic environment, the DFB can be toxic to non-target species and, when degraded, generate p-chloroaniline (PCA), a metabolite potentially carcinogenic and mutagenic to humans. According to requirement for more information about the toxicity of these compounds on aquatic organisms, the purpose of this study was to analyze the enzymatic activity of acid and alkaline phosphatases, catalase and superoxide dismutase for microalgae Pseudokirchneriella subcapitata, microcrustacean Daphnia similis and fish Oreochromis niloticus based on 50% effective concentration (EC50) for in vivo tests, and 50% inhibiting concentration (IC50) for in vitro tests, for the DFB and its metabolite PCA. The DFB EC50 was 0.00096 mg.L-1, 0.009 mg.L-1 and > 100 mg L-1 for algae, daphnia and fish in acute test. The PCA EC50 for daphnia and fish was 0.27 mg.L-1 and 24 mg.L-1, respectively. In turn, the algae had no change in their growth during exposure to PCA. In biochemical in vivo assays the DFB and PCA caused alterations in the activities of acid and alkaline phosphatases, catalase and superoxide dismutase for test organisms. Thus, the enzymes studied were sensitive to the exposure of these compounds in vivo studies and may be used as biomarkers of water pollution resources by DFB and PCA. On the in vitro test, the enzymes were incubated with the compounds DFB and PCA at different concentrations, only the FAT and CAT of fish liver had decreased activity with exposure to different concentrations of PCA, therefore, were used for determination of kinetic constants Km, Ki and Vmax, and IC50. The FAT had a competitive inhibition (Ki 8,2 mM - Km 0,21 mM - Vmax 0.01211 and IC50 3.2 mM), the CAT had a non-competitive inhibition (Ki 0,030 mM - Km 56,3 - Vmax 0.001198 and IC50 0.20 mM) when the concentration of PCA was increased. The in vitro test was important because has clarified the mechanism of action of PCA on FAT and CAT fish enzymes. The results of this study showed that both compounds were toxic to test organisms and caused significant changes in biomarkers evaluated. Therefore, the use of DFB must be done carefully / Mestrado / Bioquimica / Mestra em Biologia Funcional e Molecular

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:47:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 4560667 bytes, checksum: 9fecee90fdef5d721ef34d59cfffd7ee (MD5) Previous issue date: 2012-09-26 / The mishandling of pesticides leads to aquatic environment contamination causing lesions in fish. Biochemical, physiological and morphological are biomarkers that show good results in the evaluation of the lesions of environmental contamination on these animals. The Dimilin ®, purpose of this study, is used to control ectoparasites of fish and due to lack of data from their injuries in neotropical fish, the objective is to determine the effects of LC50 of Dimilin ® on sexually mature males from mato grosso (Hyphessobrycon eques) as well as their effect on testicular morphology in toxicity testing in exposure times of 96 hours and 17 days in static system. The calculation of CL50 was conducted in the program TOXCALC (USEPA, version 1.5) with the calculation to determine the binomial confidence by reducing the interval moving average (P<0.05). The toxicity tests followed the ABNT technical tests in static system. For toxicity tests, it was used a control group and three groups with concentrations of 0,01, 0,1 and 1 mg L-1 of Dimilin ®. For the 96 hours test, it was used a single application at the beginning of the experiment. For the 17 days test, it was used two applications (in the beginning of the experiment and 72 hours after the first application). Water samples were collected for the aquarium physicochemical analyzes. After the experimental periods, the testicles of 10 animals from each group were collected and processed for routine histological study. We observed 10 samples per animal considering morphometric and histopathological aspects. The CL50 calculated in this test was 22.4 mg.L-1, and the confidence interval obtained by the moving average was 13.9 to 34.8 mg l-1 (P<0.05) at a mean temperature of 22.4 º C. Analysis of the water showed that the parameters were within the desirable values for fish farming. Among all testicles parameters observed, there was a reduction of B spermatogonia counting in both experiments, with no differences between experiments. In the 17 days experiment, differences were observed for altered tissue and healthy tissue of the control group compared with the other concentrations (p <0.05), with no differences for the 96 hours experiment or 96 hours and from 17 days. Nuclear pyknosis were observed, tissue disorganization characterized by the presence of spermatids in the testicular parenchyma and presence of spermatocytes in the lumen of the tubule, the presence of red blood cells out of the blood capillaries, the presence of vacuoles in the cytoplasm of spermatogonia and spermatocytes and fibrosis. Thus H. eques can be used as bioindicator and his testicles as biomarkers of aquatic pollution by Dimilin ®. / O manejo incorreto de agrotóxicos e a contaminação do ambiente aquático causam lesões em peixes. Parâmetros bioquímicos, fisiológicos e morfológicos como biomarcadores apresentam bons resultados na avaliação das lesões de contaminação ambiental sobre esses animais. O Dimilin®, proposta deste estudo, é utilizado no controle de ectoparasitos de peixes e, devido à carência de dados dos suas lesões em peixes neotropicais, objetiva-se determinar a CL50 do Dimilin® para machos adultos sexualmente maduros de mato grosso (Hyphessobrycon eques), bem como seu efeito na morfologia testicular em ensaios de toxicidade nos tempos de 96h e 17 dias em sistema estático. O cálculo da CL50 foi realizado no programa TOXCALC (USEPA, versão 1.5), com o cálculo de determinação binomial reduzindo o intervalo de confiança por média móvel (P<0,05). Os testes de toxicidade seguiram as normas técnicas de testes em sistema estático da ABNT. Para os testes de toxicidade, foram utilizados um grupo controle e três grupos com concentrações de 0,01; 0,1 e 1 mg.L-1 de Dimilin®. Para o teste de 96h foi utilizada uma única aplicação no início do experimento; para o teste de 17 dias foram utilizadas duas aplicações (no início e com 72h após a primeira aplicação). Amostras de água dos aquários foram coletadas para análises fisicoquímicas. Após os períodos experimentais, testículos de 10 animais de cada grupo foram coletados e processados para estudo histológico de rotina. Foram observados 10 campos por animal considerando-se aspectos morfométricos e histopatológicos. A CL50 calculada nesse teste foi de 22,4 mg.L-1, e o intervalo de confiança obtido pela média móvel foi de 13,9 a 34,8 mg.L-1 (P<0,05) a uma temperatura média de 22,4ºC. A análise da água mostrou que os parâmetros encontravam-se dentro de valores desejáveis para a criação de peixes. Dentre todos os parâmetros testiculares avaliados, houve redução apenas no número de espermatogônias B nos dois experimentos, não havendo diferenças entre os experimentos. No experimento de 17 dias foram observadas diferenças para tecido alterado e tecido sadio dos grupos controle quando comparados com as demais concentrações (p<0,05), não havendo diferenças para o experimento de 96h, nem entre 17 dias e 96h. Foram observadas picnose nuclear, desorganização tecidual caracterizada pela presença de espermátides no parênquima testicular e presença de espermatócitos na luz do túbulo, presença de hemácias fora dos capilares sanguíneos, presença de vacúolos no citoplasma de espermatogônias e de espermatócitos e fibrose. Assim, H. eques pode ser utilizado como bioindicador e seus testículos como biomarcadores de poluição aquática pelo Dimilin®.

Made available in DSpace on 2016-06-02T19:32:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 5673.pdf: 7713531 bytes, checksum: dfb51ed9dae115ec975880790cad5d10 (MD5) Previous issue date: 2013-06-28 / Universidade Federal de Sao Carlos / The diflubenzuron (DFB), sold under the name Dimilin® (CHEMTURA), has been extensively used in aquaculture and agricultural applications may occur contamination of the aquatic environment. Prochilodus lineatus was exposed to 0.0, 0.25, 0.5, 1.0 and 2.0 mg L-1 DFB for 14 days and then were determined frequency erythrocytic nuclear abnormalities (ANE), and micronuclei (MN) in the blood, lipid peroxidation (LPO) in the gills and liver, histopathology of gills and liver, total osmolarity and concentration of plasma ions, the activity of the enzymes Na+/k+-ATPase (NKA) and H+-ATPase in the gills and the activity of carbonic anhydrase (AC) in the gills. The most frequent ENA were the kidney-shaped nucleus and micronucleus and increased significantly in the groups exposed to 0.5, 1.0 and 2.0 mg L-1 DFB. The LPO concentration in the gills reduced in animals exposed to 2.0 mg L-1 DFB and in the liver there was an increase in the animals exposed to 0.5 and 2.0 mg L-1. The degree of tissue change (IAH), in the gills was higher in the groups exposed to 1.0 and 2.0 mg L-1 DFB. In the liver, the average change (VMA) and IAH increased in the groups exposed to 1.0 and 2.0 mg L-1 DFB. The total plasma osmolarity increased significantly in the group exposed to 0.5 mg L-1 Dimilin®, for the Cl- ion, there was a significant decrease of its concentration in the group exposed to 2.0 mg L-1. The activity of H+-ATPase showed an increase in group 1.0 mg L-1. The AC decreased significantly in the group exposed to 2.0 mg L-1. The Dimilin® has potential toxic to P. lineatus, causing genotoxic and mutangênica changes as well as changes morphofunctional in gills and liver, and can be monitored through the experimental techniques used in this work. / O diflubenzuron (DFB), comercializado com o nome de Dimilin® (CHEMTURA), tem sido intensivamente utilizado em aquicultura e aplicações agrícolas podendo ocorrer contaminação do ambiente aquático. Prochilodus lineatus foi exposto a 0,0, 0,25, 0,5, 1,0 e 2,0 mg L-1 de DFB durante 14 dias e, em seguida, foram determinadas a frequência de anormalidades nucleares eritrocíticas (ANE) e micronúcleos (MN) no sangue, a peroxidação lipídica (LPO) nas brânquias e fígado, histopatologias das brânquias e fígado, osmolaridade total e concentração dos íons plasmáticos, a atividade das enzimas Na+/K+-ATPase (NKA) e H+-ATPase nas brânquias e a atividade da anidrase carbônica (AC) nas brânquias. As ANE mais frequentes foram o núcleo em formato de rim e micronúcleo e aumentaram significativamente nos grupos expostas a 0,5, 1,0 e 2,0 mg L-1 de DFB. A concentração de LPO nas brânquias diminuiu nos animais expostos a 2,0 mg L-1 de DFB e no fígado ocorreu um aumento nos animais expostos a 0,5 e 2,0 mg L- 1. O índice de alteração histopatológico nas brânquias (IAH) foi maior nos grupos expostos a 1,0 e 2,0 mg L-1 de DFB. No fígado, o valor médio de alteração (VMA) e o IAH aumentaram nos grupos expostos a 1,0 e 2,0 mg L-1 de DFB. A osmolaridade total do plasma aumentou de forma significativa no grupo exposto a 0,5 mg L-1 de Dimilin®, em relação ao íon Cl-, houve uma diminuição significativa de sua concentração no grupo exposto a 2,0 mg L-1. A atividade da H+ - ATPase demonstrou um aumento no grupo 1,0 mg L-1. A AC diminuiu significativamente no grupo exposto a 2,0 mg L-1. O Dimilin® apresenta potencial tóxico para P. lineatus, causando alterações genotóxicas e mutagênicas, assim como alterações morfofuncionais nas brânquias e fígado, e pode ser monitorado através das técnicas experimentais utilizadas no presente trabalho.