Neste trabalho foram estudados os produtos gerados pela eletrooxidação do 2,6-bis(dietanolamina)-4,8-dipiperidinapirimida-[5,4-d] pirimidina, Dipiridamol. Atualmente o Dipiridamol é um dos fármacos que induzem vasodilatação coronariana mais utilizados em Cardiologia Nuclear em diferentes técnicas aplicadas na aquisição e processamento de imagens (cintilografia miocárdica de perfusão, cintilografia de necrose miorcárdica, ressonância magnética do coração, ventriculografia e angiocardiografia radio-isotópica). Na prática clínica, o emprego do dipiridamol baseia-se na diminuição da agregação plaquetária, elevação dos níveis de adenosina e na potencialização dos efeitos da Aspirina®. A eletrooxidação do Dipiridamol em acetonitrila é caracterizada por dois processos consecutivos envolvendo a perda de um elétron em cada etapa de oxidação. Diferentemente do meio aprótico, a eletrooxidação do Dipiridamol em meio aquoso ácido, apresenta apenas uma única etapa de oxidação que corresponde à perda de dois elétrons. A eletrooxidação foi realizada em condições de potencial controlado para a retirada de um ou de dois elétrons. Espectros de Absorção Ótica e de Fluorescência foram obtidos após as eletrooxidações para o acompanhamento da estabilização e caracterização parcial dos produtos de oxidação eletroquímica nos diferentes meios. Após a estabilização dos produtos utilizou-se a técnica de Extração em Fase Sólida para a retirada do sal eletrolítico, obtendo-se dois tipos de frações, uma aquosa e outra metanólica, na eletrooxidação em acetonitrila. Essas frações foram estudadas por meio de Espectrometria de Massas acoplada à Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (LC-MS). Não foi utilizada Extração em Fase Sólida para os compostos obtidos pela eletrólise em meio aquoso ácido, os quais, foram analisados diretamente por LC-MS. Os produtos obtidos das eletrooxidações do Dipiridamol foram parcialmente caracterizados. Todas as eletrólises levaram à formação de isômeros com m/z de 472 [M+H]+, 269 [M+H]+, 519 [M+H]+ e 505 [M+H]+. A elucidação estrutural completa destes produtos não foi possível devido à instabilidade e à baixa concentração dos mesmos o que impossibilitou a realização de estudos mais detalhados de caracterização estrutural. / In this work the products obtained in the eletrooxidation reactions of 2,6- bis(diethanolamino)-4,8-dipiperidinopyrimido-[5,4-d] pyrimidine (Dipyridamole) were studied. Dipyridamole is a drug that induce the coronary vasodilatation mostly used in Nuclear Cardiology in different techniques based on acquisition and image processing ( perfusion heart cintilography, heart necrosis cintilography, heart magnetic resonance, ventriclegraphy and radio-isotopic coronary angioplasty). In clinical medicine, Dipyridamole is used for decreasing platelet aggregation, increasing the adenosine levels and co-activating Aspirine® effects. The eletrooxidation of the Dipyridamole in acetonitrile is characterized by two consecutives processes involving the release of one electron in each stage of oxidation. Differently from aprotic medium, the electrooxidation of Dipyridamole in acid aqueous media shows a single oxidation stage corresponding to the release of two electrons. Electrooxidation was performed in Controlled Potential Conditions using a potential necessary to remove one or two electrons. Optical Absorption and Fluorescence Emission Spectra were obtained after the electrooxidation to monitor the electrochemical oxidation products stabilization in different media. After allowing the products stabilization Solid Phase Extraction tecnique was used to remove the electrolytical salt, and, two different fractions were obtained, an aqueous one and a methanolic one upon the electrooxidation in acetonitrile. These fractions were studied by Mass Spectrometry combined with High Performance Liquid Chromatography. (LC-MS). Solid Phase Extraction was not used for the products obtained in acid aqueous medium eletrolysis, and they were directly analyzed by LCMS. The products obtained from Dipiridamol eletrooxidations were partially characterized. Every electrooxidation formed isomers with m/z de 472 [M+H]+, 269 [M+H]+, 519 [M+H]+ and 505 [M+H]+. The complete structural elucidation of these products was not possible due to their instability and the low concentration obtained in the purification, which was insufficient for futher detailed studies such as nuclear magnetic resonance analysis.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:49:53Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo2026_1.pdf: 2604919 bytes, checksum: 0a3f60a863a95316f14fc22a7e94f119 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2008 / Introdução: Na última década, vem aumentando o interesse na busca de um método diagnóstico não invasivo, para detectar doença arterial coronariana (DAC) em mulheres. Apesar dos avanços no diagnóstico e tratamento, esta patologia permanece como principal causa de mortalidade em mulheres, nos países desenvolvidos. O diagnóstico precoce, assim como a estratificação de risco, são fundamentais, pois mulheres têm pior prognóstico após infarto agudo do miocárdio (IAM) e procedimentos de revascularização (cirúrgica ou percutânea). Objetivo: Avaliar a importância da ecocardiografia sob estresse com dipiridamol (EEDI) na investigação de isquemia miocárdica em mulheres e sua capacidade de predizer eventos cardíacos combinados (morte de causa cardiovascular, infarto agudo do miocárdio (IAM), angina instável, necessidade de procedimentos de revascularização miocárdica cirúrgica ou percutânea) em um seguimento médio de 16 meses. Métodos: Estudo prospectivo, observacional, de base ambulatorial. Pacientes com suspeita de isquemia miocárdica foram submetidas ao seguinte protocolo de exame: infusão intravenosa de dipiridamol de 0,56mg/kg em 4 min, seguido de 4 min de observação. Caso não surgisse critérios de positividade, uma segunda infusão de 0,28mg/kg em dois minutos, seguido de até 1 mg de atropina era realizada se o exame permanecesse negativo, seguido por 2 min de observação. O teste era encerrado com a infusão de até 240 mg de aminofilina. Resultados: Foram avaliadas 147 mulheres. O EEDI foi positivo para isquemia em 14 pacientes (9,5%); foi negativa em 128 pacientes (87,1%); e foi inconclusiva em cinco pacientes (3,4%).Eventos cardíacos ocorreram em oito pacientes, sete dos quais tinham o EEDI positivo para isquemia miocárdica. Os outros 138 não tiveram eventos; desses, 128 apresentavam o EEDI negativo. A sensibilidade, especificidade, acurácia, valor preditivo positivo e negativo do teste frente aos eventos foram: 87%, 95%, 94%, 50% e 99%, respectivamente. Sobrevida livre de eventos para pacientes com EEDI negativo foi 99,2%, comparada com 50% nos que tiveram o EEDI positivo (p<0,001). A análise univariada identificou resultado do EEDI, eletrocardiograma (ECG) basal, fração de ejeção do VE, dislipidemia, índice de movimentação parietal do VE de repouso e no pico do estressse, antecedentes de IAM, de intervenção coronariana percutânea, de cirurgia de revascularização miocárdica como fatores prognósticos associados com os desfechos. Somente as variáveis resultado do EEDI e ECG basal permaneceram com uma associação significativa com o desfecho através da análise multivariada (p<0,001). Conclusão: O ECG basal e o EEDI positivo foram fatores preditivos independentes para a ocorrência de desfechos clínicos combinados. O EEDI é um método seguro, factível e eficaz na estratificação de risco de mulheres com suspeita clínica de isquemia miocárdica. O teste apresentou excelente valor preditivo negativo, confirmando a sua utilização na avaliação prognostica neste grupo de pacientes

Neste trabalho foram estudados os produtos gerados pela eletrooxidação do 2,6-bis(dietanolamina)-4,8-dipiperidinapirimida-[5,4-d] pirimidina, Dipiridamol. Atualmente o Dipiridamol é um dos fármacos que induzem vasodilatação coronariana mais utilizados em Cardiologia Nuclear em diferentes técnicas aplicadas na aquisição e processamento de imagens (cintilografia miocárdica de perfusão, cintilografia de necrose miorcárdica, ressonância magnética do coração, ventriculografia e angiocardiografia radio-isotópica). Na prática clínica, o emprego do dipiridamol baseia-se na diminuição da agregação plaquetária, elevação dos níveis de adenosina e na potencialização dos efeitos da Aspirina®. A eletrooxidação do Dipiridamol em acetonitrila é caracterizada por dois processos consecutivos envolvendo a perda de um elétron em cada etapa de oxidação. Diferentemente do meio aprótico, a eletrooxidação do Dipiridamol em meio aquoso ácido, apresenta apenas uma única etapa de oxidação que corresponde à perda de dois elétrons. A eletrooxidação foi realizada em condições de potencial controlado para a retirada de um ou de dois elétrons. Espectros de Absorção Ótica e de Fluorescência foram obtidos após as eletrooxidações para o acompanhamento da estabilização e caracterização parcial dos produtos de oxidação eletroquímica nos diferentes meios. Após a estabilização dos produtos utilizou-se a técnica de Extração em Fase Sólida para a retirada do sal eletrolítico, obtendo-se dois tipos de frações, uma aquosa e outra metanólica, na eletrooxidação em acetonitrila. Essas frações foram estudadas por meio de Espectrometria de Massas acoplada à Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (LC-MS). Não foi utilizada Extração em Fase Sólida para os compostos obtidos pela eletrólise em meio aquoso ácido, os quais, foram analisados diretamente por LC-MS. Os produtos obtidos das eletrooxidações do Dipiridamol foram parcialmente caracterizados. Todas as eletrólises levaram à formação de isômeros com m/z de 472 [M+H]+, 269 [M+H]+, 519 [M+H]+ e 505 [M+H]+. A elucidação estrutural completa destes produtos não foi possível devido à instabilidade e à baixa concentração dos mesmos o que impossibilitou a realização de estudos mais detalhados de caracterização estrutural. / In this work the products obtained in the eletrooxidation reactions of 2,6- bis(diethanolamino)-4,8-dipiperidinopyrimido-[5,4-d] pyrimidine (Dipyridamole) were studied. Dipyridamole is a drug that induce the coronary vasodilatation mostly used in Nuclear Cardiology in different techniques based on acquisition and image processing ( perfusion heart cintilography, heart necrosis cintilography, heart magnetic resonance, ventriclegraphy and radio-isotopic coronary angioplasty). In clinical medicine, Dipyridamole is used for decreasing platelet aggregation, increasing the adenosine levels and co-activating Aspirine® effects. The eletrooxidation of the Dipyridamole in acetonitrile is characterized by two consecutives processes involving the release of one electron in each stage of oxidation. Differently from aprotic medium, the electrooxidation of Dipyridamole in acid aqueous media shows a single oxidation stage corresponding to the release of two electrons. Electrooxidation was performed in Controlled Potential Conditions using a potential necessary to remove one or two electrons. Optical Absorption and Fluorescence Emission Spectra were obtained after the electrooxidation to monitor the electrochemical oxidation products stabilization in different media. After allowing the products stabilization Solid Phase Extraction tecnique was used to remove the electrolytical salt, and, two different fractions were obtained, an aqueous one and a methanolic one upon the electrooxidation in acetonitrile. These fractions were studied by Mass Spectrometry combined with High Performance Liquid Chromatography. (LC-MS). Solid Phase Extraction was not used for the products obtained in acid aqueous medium eletrolysis, and they were directly analyzed by LCMS. The products obtained from Dipiridamol eletrooxidations were partially characterized. Every electrooxidation formed isomers with m/z de 472 [M+H]+, 269 [M+H]+, 519 [M+H]+ and 505 [M+H]+. The complete structural elucidation of these products was not possible due to their instability and the low concentration obtained in the purification, which was insufficient for futher detailed studies such as nuclear magnetic resonance analysis.

A angiotomografia de múltiplos detectores (TC) é um exame útil no diagnóstico de doença arterial coronariana (DAC). Recentemente, a TC foi associada à perfusão miocárdica com estresse (PTC) para detectar DAC. O objetivo é comparar a perfusão miocárdica da TC, após estresse com dipiridamol, com a cintilografia miocárdica (SPECT) na detecção de estenose coronariana significativa (>70%), usando o cateterismo (CATE) como método de referência. Trinta e seis pacientes (62±8,0 anos, 20 homens) com suspeita de DAC e com SPECT positivo em menos de 2 meses foram submetidos a um protocolo de TC para avaliação da PTC e angiografia pela tomografia computadorizada (ATC). TC foi realizada em um equipamento de 64 detectores (Aquillion 64, Toshiba), com uma primeira aquisição com os seguintes parâmetros:100mA,120Kv, 32x1mm colimação e 60ml de contraste a 3ml/s, após estresse com dipiridamol (0,56mg/Kg/4min), seguida de uma aquisição de repouso/ATC após aminofilina e metoprolol (270-400mA, 120Kv,64x0,5mm e 80 ml de contraste a 5ml/s). Observadores cegos e independentes, sem conhecimento prévio dos dados clínicos ou dos exames, realizaram análise visual e quantitativa da perfusão e angiotomografia, além de análise angiográfica quantitativa (QCA) para avaliação do CATE. Todos os pacientes completaram o protocolo sem efeitos adversos com dose de radiação média de 14,7 ± 3,0 mSv e exames interpretáveis. PTC foi positiva em 27 de 36 pacientes (75%). Dos nove casos (25%) com discordâncias (PTC negativa e SPECT positivo), 6 pacientes tinham ATC ou CATE normal e 2 tinham estenose coronariana menor que 50%. Um apresentava stent pérvio e o outro um ramo diagonal com redução luminal de 50%.O terceiro paciente apresentava uma oclusão do ramo ventricular posterior da artéria coronária direita com circulação colateral detectado pela ATC e confirmado pelo CATE. A comparação entre a PTC e o SPECT em uma análise por paciente mostrou boa concordância (Kappa =0,53;p<0,001). Em 26 pacientes com CATE, como referência, os valores diagnósticos foram sensibilidade, especificidade, valor preditivo positivo, valor preditivo negativo e acurácia para a PTC 88,0; 79,3; 66,7; 93,3; 82,1% e para o SPECT 68,8; 76,1; 66,7; 77,8 e 73,1%, respectivamente. A perfusão miocárdica de repouso e estresse após dipiridamol na avaliação de doença aterosclerótica coronariana, associada à angiografia pela tomografia é factível e os resultados foram similares ao do SPECT. A combinação da informação anatômica e perfusional permite identificar os casos positivos do SPECT, sem estenose coronariana significativa. / Multidetector computed tomography is a useful method for the diagnosis of coronary artery disease. Recently, myocardial stress CT perfusion (CTP) was shown to detect myocardial ischemia. Our main objective was to evaluate the feasibility of dipyridamole stress CTP and compare to SPECT perfusion to detect significant coronary stenosis using conventional angiography (CCA) (stenosis >70%) as reference method. Thirty-six patients (62.0±8.0 years old, 20 males) with suspected CAD and < 2 months prior positive SPECT underwent a customized multidetector-row computed tomography (MDCT) protocol with rest/stress myocardial perfusion evaluation and CTA. MDCT was performed in a 64 scanner (Aquillion 64, Toshiba) with stress perfusion after 0.56mg/kg/4min of dipyridamole (100mA, 120 kV, collimation-32 x 1 mm and 60 ml of iodinated contrast) followed by aminophyline and metoprolol infusion prior to a second rest perfusion/CTA acquisition (270-400mA, 120 kV, collimation-64 x 0,5 mm and 80 ml of iodinated contrast). Independent blinded observers with no knowledge of clinical data or other exams performed visual and quantitative analysis of CTP, CTA, SPECT and quantitative coronary angiography (QCA) analysis, that was performed on CCA. All 36 patients completed the CT protocol with no adverse events, mean radiation dose of 14.7 ± 3.0 mSv and with interpretable scans. CTP was positive in 27 of 36 patients (75%). From the 9 (25%) disagreements with normal CTP and positive SPECT, 6 patients had normal CCA or CTA and 2 had no coronary stenosis > 70 %. One had patent stents and the other had a diagonal branch with mild luminal reduction at CCA. The remaining patient had an occluded right posterior lateral branch with collateral flow detect by CTA and confirmed by CCA. Good agreement was demonstrated between CTP and SPECT on a per-patient analysis (kappa 0.53). In 26 patients using CCA as reference, sensitivity, specificity, positive predictive value, negative predictive values and accuracy for CTP were 88.0, 79.3, 66.7, 93.3%, 82,1% and for SPECT 68.8, 76.1, 66.7, 77.8% and 73,1% respectively. Rest and dipyridamole-stress computed tomography myocardial perfusion is feasible and results are similar to SPECT scintigraphy. The combined anatomical information provided by computed tomography coronary angiography may allow identification of false-positives on perfusion scans.

O dipiridamol (DIP), 2,6-bis(dietanolamina)-4,8-dipiperidinapirimida-[5,4-d] pirimidina), é conhecido por seu efeito vasodilatador coronariano e antiagregante plaquetário, exibindo também um potente efeito antioxidante fortemente inibidor da peroxidação lipídica. Além disso, tem efeito importante na proteção das células contra radicais livres e espécies reativas de oxigênio (ERO), incluindo oxigênio molecular singlete O2(1&Delta;g). Tem sido sugerido que DIP é um eficiente antioxidante comparável à vitamina E. No presente trabalho, a supressão de O2(1&Delta;g), pelo DIP e derivados foi analisada em acetonitrila (ACN) e em meio aquoso ácido. A excitação do azul de metileno (AM) através da técnica de laser flash fotólise foi feita em 532 nm e a emissão de luz monomolecular do O2(1&Delta;g) foi monitorada em 1270 nm. As constantes bimoleculares de supressão obtidas em ACN são consistentes com uma eficiente supressão física, apresentando valores próximos do limite difusional (kt = 3,4-6,8x108 M-1s-1). O processo de supressão ocorre via o mecanismo reversível de transferência de cargas com a formação do exciplex. Cálculos de &Delta;Get associado à supressão de O2(1&Delta;g) corroboram com uma transferência de elétrons incompleta. Em soluções aquosas ácidas (pH=3,0) os valores de kt obtidos para o DIP e derivados são 20 vezes maiores quando comparados com os valores em ACN. Os dados de supressão de O2(1&Delta;g) são consistentes com os dados eletroquímicos. As propriedades eletroquímicas do DIP em ACN são caracterizadas por dois processos consecutivos de um elétron cada, com potenciais de meia onda de 0.30V e 0.67V vs SCE. No entanto, em meio aquoso ácido uma única onda de oxidação é observada envolvendo um processo com à perda de dois elétrons (0.80 V vs SCE). A eletrooxidação do DIP leva a formação de produtos não-fluorescentes e uma considerável mudança no espectro de absorção. Os produtos da eletrooxidação foram parcialmente caracterizados por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência acoplada a espectrometria de Massas (HPLC/MS). Os espectros de massas dos produtos da eletrooxidação apresentaram picos com m/z de 472, 269 e 519. O mecanismo responsável pelo efeito antioxidante de muitos compostos é geralmente estudado por laser flash fotólise (LFP), EPR, eletroquímica e experimentos de fotoquímica. A fotoquímica do DIP não é conhecida em detalhes. Neste trabalho, a fotólise do DIP em ACN e meio aquoso ácido em pH=3.0 foi estudada. Em meio aquoso ácido DIP foi oxidado pela fotosensibilização com AM e pela reação com uma fonte química de O2(1&Delta;g), N,N\'-di(2,3-dihidroxipropil)-1,4 naftalenodipropanamida (DHPNO2). A fotooxidação ocorre predominantemente pelo mecansimo do tipo II, onde o DIP é oxidado pelo O2(1&Delta;g), mas alguns produtos com baixa intensidade e m/z de 472 foram observados em meio ácido, o que está de acordo com a eletrooxidação. Por outro lado, em ACN, DIP é fotodegradado pelo mecansimo do tipo I, via geração de radicais ou por espécies excitadas no estado triplete, como observado através de EPR. Contudo, a oxidação produz a mesma espécie nos dois solventes. O produto obtido na reação de fotooxidação foi analisado por HPLC/MS. O dioxetano é formado como um intermediário da reação de fotooxidação. O produto formado com m/z de 269 corresponde a metade da molécula do DIP ligado a um átomo de oxigênio. A conclusão é que o DIP é fotooxidado envolvendo O2(1&Delta;g) em soluções aquosas ou oxigênio molecular em ACN. A caracterização completa dos fotoprodutos ajudará a entender melhor a química e as propriedades antioxidantes deste composto. Outro trabalho envolvendo a hemoglobina extracelular gigante de Glossoscolex paulistus (HbGp) foi desenvolvido. Análises de MALDI-TOF-MS foram realizadas para obter informações sobre a massa molecular das diferentes subunidades da HbGp na forma oxi. Os experimentos foram realizados para a proteína na forma íntegra em pH 7,0, para a proteína parcialmente dissociada em pH 9.0, e para o monômero d na forma pura. Além disso, experimentos foram realizados para a proteína íntegra tratada com 2-mercaptoetanol para monitorar o efeito da redução das ligações disulfetos, responsáveis em manter a estabilidade do trímero (abc) na molécula nativa. Os resultados são comparados com a hemoglobina homóloga de Lumbricus terrestris (HbLt) e algumas tentativas de atribuição de massas são feitas para algumas subunidades. Para o monômero d duas isoformas majoritárias de idênticas proporções com massas de 16,355+-25 e 16,428+-24 Da foram observadas. A redução das pontes disulfeto produz a dissociação do trímero e novos picos correspondentes aos monômeros a, b e c são observados, apresentando massas moleculares de 18,258+-30 Da, 16,492+-24 Da e 17,363+-17 Da, respectivamente. Duas cadeias linkers para HbGp foram também observadas em 25,817+-50 e 26,761+-16 Da. Finalmente, os trímeros (abc) foram observados em 51-52 kDa. Esta caracterização parcial representa um passo importante na caracterização das subunidades desta hemoglobina gigante. O efeito dos surfactantes aniônico dodecilsulfato de sódio (SDS) e catiônico cloreto de cetiltrimetilamonio (CTAC) na estrutura oligomérica de HbGp foi estudado por MALDI-TOF-MS. Uma efetiva interação do surfactante catiônico CTAC com as duas isoformas de monômero d, d1 e d2, na proteína íntegra bem como no monômero puro d foi observada. Até 10 moléculas de CTAC são ligadas a cada isoforma do monômero. Diferentemente, o espectro de massas obtido para o sistema SDS-HbGp mostrou que a interação SDS-HbGp é significativamente menos efetiva quando comparada ao sistema CTAC-HbGp. / Dipyridamole (DIP), 2,6-bis(dietanolamina)-4,8-dipiperidinapirimida-[5,4-d] pirimidina) is known for its vasodilating and antiplatelet aggregation activity, exhibiting also a potent antioxidant effect, strongly inhibiting lipid peroxidation. In the present work, the quenching of singlet molecular oxygen, O2(1&Delta;g), by dipyridamole, RA47 and RA25 was analyzed in acetonitrile and aqueous acid solutions. Bimolecular quenching constants in acetonitrile (ACN) are consistent with an efficient physical quenching, presenting values slightly lower than the diffusion limit (kt = 3,4-6,8x108 M-1s-1). The quenching process occurs probably, via reversible charge transfer with the formation of an exciplex. Calculation of &Delta;Get associated to O2(1&Delta;g) quenching corroborates with uncomplete electron transfer. In aqueous acid solutions (pH=3,0) the kt values for DIP and derivatives are 20-fold smaller as compared to ACN. The electrochemical properties of DIP in ACN are characterized by two consecutive one-electron processes with halfwave oxidation potentials of 0,30V and 0,67V vs SCE. However, in aqueous acid medium a single oxidation wave is observed involving a two-electron process (0,80 V vs SCE). Therefore, O2(1&Delta;g) quenching is consistent with electrochemical data. The eletrooxidation of DIP leads to nonfluorescent products and a considerable change in the absorption spectra occurs. The mass spectrum of eletrooxidation products of DIP showed peaks with m/z 472, 269 and 519. In this work the photolysis of DIP in acetronitrile (ACN) and aqueous solutions at pH 3,0 was examined. In aqueous acid solutions DIP was oxidized by photosensitization with methylene blue and by a reaction with a clean chemical source of O2(1&Delta;g), N,N\'-di(2,3-dihydroxypropyl)-1,4 naphtalenedipropanamide (DHPNO2). Photooxidation occurs predominantly by type II mechanism, where DIP is oxidized by O2(1&Delta;g). Some products with low intensity and m/z of 472 were observed, in agreement with eletrooxidation. On the other hand, in ACN, DIP is photooxidated by type I mechanism via radicals generation or by excited triplet state species, as observed by EPR. However, the oxidation produces the same species in both solvents. A dioxetane can be formed as an intermediate of the reaction of the photo-oxidation. The observed product, with m/z 269, can correspond to half of the DIP molecule with an attached oxygen atom or the DIP molecule with two oxygen atom with two protons. The conclusion at this stage is that DIP is photooxidated involving either O2(1&Delta;g) in aqueous solution or molecular oxygen in ACN. Another work involving the giant extracelular hemoglobin of Glossoscolex paulistus (HbGp) was performed. MALDI-TOF-MS analysis of the different subunits from the HbGp in the oxy- form was made. The results are compared to those reported for the homologous hemoglobin of Lumbricus terrestris (HbLt) and some tentative assignments are made for the observed polypeptides. The monomer d is found to exist in, at least, two major forms of identical proportions with masses of 16.355+-25 and 16.428+-24 Da, respectively. Two minor forms were also observed around 16 kDa for the monomers. Upon disulfide bonds reduction the peak associated to the trimer is absent in the mass spectrum, and new peaks assigned tentatively to the monomers a, b and c are observed. Their molecular masses were 18.258+-30 Da, 16.492+-24 Da and 17.363+-17 Da, respectively. Two Linker chains for HbGp were also observed at 25.817+-50 and 26.761+-16 Da. Finally, trimers (abc) were observed at 51-52 kDa. This partial characterization, performed for the first time, is an important step in the characterization of subunits of this giant hemoglobin. The effects of anionic sodium dodecyl sulfate (SDS) and cationic cethyltrimethylammonium chloride (CTAC) on the oligomeric structure of HbGp were also studied by MALDI-TOFMS. The data obtained with this technique show an effective interaction of cationic surfactant CTAC with the two isoforms of monomer d, d1 and d2, both in the whole protein as well as in the pure isolated monomer. The results show that up to 10 molecules of CTAC are bound to each isoform of the monomer. Differently, the mass spectra obtained for SDS-HbGp system showed that the interaction is, probably, significantly less effective as compared to CTAC-HbGp one. The acid pI of the protein around 5,5 is, probably, responsible for this behavior.

A angiotomografia de múltiplos detectores (TC) é um exame útil no diagnóstico de doença arterial coronariana (DAC). Recentemente, a TC foi associada à perfusão miocárdica com estresse (PTC) para detectar DAC. O objetivo é comparar a perfusão miocárdica da TC, após estresse com dipiridamol, com a cintilografia miocárdica (SPECT) na detecção de estenose coronariana significativa (>70%), usando o cateterismo (CATE) como método de referência. Trinta e seis pacientes (62±8,0 anos, 20 homens) com suspeita de DAC e com SPECT positivo em menos de 2 meses foram submetidos a um protocolo de TC para avaliação da PTC e angiografia pela tomografia computadorizada (ATC). TC foi realizada em um equipamento de 64 detectores (Aquillion 64, Toshiba), com uma primeira aquisição com os seguintes parâmetros:100mA,120Kv, 32x1mm colimação e 60ml de contraste a 3ml/s, após estresse com dipiridamol (0,56mg/Kg/4min), seguida de uma aquisição de repouso/ATC após aminofilina e metoprolol (270-400mA, 120Kv,64x0,5mm e 80 ml de contraste a 5ml/s). Observadores cegos e independentes, sem conhecimento prévio dos dados clínicos ou dos exames, realizaram análise visual e quantitativa da perfusão e angiotomografia, além de análise angiográfica quantitativa (QCA) para avaliação do CATE. Todos os pacientes completaram o protocolo sem efeitos adversos com dose de radiação média de 14,7 ± 3,0 mSv e exames interpretáveis. PTC foi positiva em 27 de 36 pacientes (75%). Dos nove casos (25%) com discordâncias (PTC negativa e SPECT positivo), 6 pacientes tinham ATC ou CATE normal e 2 tinham estenose coronariana menor que 50%. Um apresentava stent pérvio e o outro um ramo diagonal com redução luminal de 50%.O terceiro paciente apresentava uma oclusão do ramo ventricular posterior da artéria coronária direita com circulação colateral detectado pela ATC e confirmado pelo CATE. A comparação entre a PTC e o SPECT em uma análise por paciente mostrou boa concordância (Kappa =0,53;p<0,001). Em 26 pacientes com CATE, como referência, os valores diagnósticos foram sensibilidade, especificidade, valor preditivo positivo, valor preditivo negativo e acurácia para a PTC 88,0; 79,3; 66,7; 93,3; 82,1% e para o SPECT 68,8; 76,1; 66,7; 77,8 e 73,1%, respectivamente. A perfusão miocárdica de repouso e estresse após dipiridamol na avaliação de doença aterosclerótica coronariana, associada à angiografia pela tomografia é factível e os resultados foram similares ao do SPECT. A combinação da informação anatômica e perfusional permite identificar os casos positivos do SPECT, sem estenose coronariana significativa. / Multidetector computed tomography is a useful method for the diagnosis of coronary artery disease. Recently, myocardial stress CT perfusion (CTP) was shown to detect myocardial ischemia. Our main objective was to evaluate the feasibility of dipyridamole stress CTP and compare to SPECT perfusion to detect significant coronary stenosis using conventional angiography (CCA) (stenosis >70%) as reference method. Thirty-six patients (62.0±8.0 years old, 20 males) with suspected CAD and < 2 months prior positive SPECT underwent a customized multidetector-row computed tomography (MDCT) protocol with rest/stress myocardial perfusion evaluation and CTA. MDCT was performed in a 64 scanner (Aquillion 64, Toshiba) with stress perfusion after 0.56mg/kg/4min of dipyridamole (100mA, 120 kV, collimation-32 x 1 mm and 60 ml of iodinated contrast) followed by aminophyline and metoprolol infusion prior to a second rest perfusion/CTA acquisition (270-400mA, 120 kV, collimation-64 x 0,5 mm and 80 ml of iodinated contrast). Independent blinded observers with no knowledge of clinical data or other exams performed visual and quantitative analysis of CTP, CTA, SPECT and quantitative coronary angiography (QCA) analysis, that was performed on CCA. All 36 patients completed the CT protocol with no adverse events, mean radiation dose of 14.7 ± 3.0 mSv and with interpretable scans. CTP was positive in 27 of 36 patients (75%). From the 9 (25%) disagreements with normal CTP and positive SPECT, 6 patients had normal CCA or CTA and 2 had no coronary stenosis > 70 %. One had patent stents and the other had a diagonal branch with mild luminal reduction at CCA. The remaining patient had an occluded right posterior lateral branch with collateral flow detect by CTA and confirmed by CCA. Good agreement was demonstrated between CTP and SPECT on a per-patient analysis (kappa 0.53). In 26 patients using CCA as reference, sensitivity, specificity, positive predictive value, negative predictive values and accuracy for CTP were 88.0, 79.3, 66.7, 93.3%, 82,1% and for SPECT 68.8, 76.1, 66.7, 77.8% and 73,1% respectively. Rest and dipyridamole-stress computed tomography myocardial perfusion is feasible and results are similar to SPECT scintigraphy. The combined anatomical information provided by computed tomography coronary angiography may allow identification of false-positives on perfusion scans.

Dipyridamole, 2,6 - bis(diethanolamine) - 4,8- dipiperidinedinapyrimide - [5,4-d] pyrimidine (DIP) is a clinically approved drug for use in cardiology, belonging to the class of heterocyclics with interesting antioxidant properties. In this work we studied the relative stability and properties of six conformational structures of DIP and also aimed to understand the effect of the different conformations on some molecular properties such as the ionization potential. In this study, we used semiempirical methods such as AM1, PM3, PM6 and RM1, all available in the MOPAC2009 program. The solvent effect on the relative stabilities of conformations as well as on the properties of the drug was evaluated using the continuum medium approximation and a sequential Monte Carlo procedure and quantum mechanics (MC/QM). The MC procedure has been used in order to yield liquid configurations, allowing the calculation of average values of solution properties which indicated the possibility of hydrogen bonding involving DIP nitrogen atoms. All calculations performed both in vacuum and in implicit solvent suggest the occurrence of a mixture of possible conformations since the energy difference between them is low. The preferential protonation occurs in nitrogens atoms of the heteroaromatic ring but this preference changes with conformation. In general the greater stabilizations occur when the protons bind to N2 and N7 atoms, in agreement with the calculation considering the solvent. The spectroscopic analysis in water has shown that all three DIP bands exhibit a slight solvatochromism and that only the first solvent layer contributes to those shifts. The charge distribution and the ionization potential under the water effect as solvent were carried out for the 125 structures derived from the MC procedure using PM3 and AM1 methods. It has been found that the distribution of Mulliken charges in PM3 points out that the electron leaves the nitrogen atom more effectively, independently of in aromatic or aliphatic position, while the distribution according to AM1 suggests that the electron preferentially leaves the N2 and N7 atoms, according to the HOMO molecular orbital. / O dipiridamol, 2,6-bis(dietanolamina)-4,8-dipiperidinadinapirimida-[5,4-d] pirimidina (DIP), é utilizado como fármaco clinicamente aprovado para utilização na cardiologia, pertencendo a classe de heterocíclicos que apresentam atividades interessantes tais como antioxidante. Neste trabalho, estudou-se estabilidade relativa entre seis estruturas conformacionais do DIP e buscou-se entender como afetam algumas de suas propriedades, como por exemplo, potencial de ionização. Neste estudo utilizamos os métodos semiempíricos AM1, PM3, PM6 e RM1 disponíveis no programa MOPAC2009, procurou-se, também, verificar o efeito do solvente sobre a estabilidade relativa e as propriedades do DIP, para isso usou-se a aproximação do meio contínuo e um procedimento seqüencial de Monte Carlo e mecânica quântica (MC/QM) que gerou as configurações do líquido e propriedades médias em solução foram calculadas e ainda foi verificada a possibilidade de ligações de hidrogênio intermoleculares nos nitrogênios do DIP. Todos os cálculos, sejam no vácuo ou em solvente, sugerem que há uma mistura de conformações, uma vez que a diferença de energia entre elas é pequena. A protonação é preferencial nos nitrogênios do anel aromático, a preferência muda com a conformação, porém a estabilização é, em geral, maior quando o próton liga-se aos N2 e N7. O cálculo com o solvente, também, sugerem que normalmente os N2 e N7 são os nitrogênios mais disponíveis para ligação de hidrogênio. A análise espectroscópica, em água, mostrou que as três bandas do DIP apresentam um pequeno solvatocromismo e que apenas a primeira camada do solvente contribui para os deslocamentos solvatocrômicos. A distribuição de cargas e o calculo do potencial de ionização do DIP, sob efeito do solvente água, foram feitos para as 125 estruturas derivadas do MC usando o PM3 e o AM1, sendo que a distribuição de cargas de Mulliken no PM3 aponta para uma saída mais efetiva do elétron nos nitrogênios quer seja aromático ou não, enquanto que a distribuição AM1 sugerem que o elétron sai preferencialmente dos N2 e N7, conforme o orbital molecular do HOMO.

O dipiridamol (DIP), 2,6-bis(dietanolamina)-4,8-dipiperidinapirimida-[5,4-d] pirimidina), é conhecido por seu efeito vasodilatador coronariano e antiagregante plaquetário, exibindo também um potente efeito antioxidante fortemente inibidor da peroxidação lipídica. Além disso, tem efeito importante na proteção das células contra radicais livres e espécies reativas de oxigênio (ERO), incluindo oxigênio molecular singlete O2(1&Delta;g). Tem sido sugerido que DIP é um eficiente antioxidante comparável à vitamina E. No presente trabalho, a supressão de O2(1&Delta;g), pelo DIP e derivados foi analisada em acetonitrila (ACN) e em meio aquoso ácido. A excitação do azul de metileno (AM) através da técnica de laser flash fotólise foi feita em 532 nm e a emissão de luz monomolecular do O2(1&Delta;g) foi monitorada em 1270 nm. As constantes bimoleculares de supressão obtidas em ACN são consistentes com uma eficiente supressão física, apresentando valores próximos do limite difusional (kt = 3,4-6,8x108 M-1s-1). O processo de supressão ocorre via o mecanismo reversível de transferência de cargas com a formação do exciplex. Cálculos de &Delta;Get associado à supressão de O2(1&Delta;g) corroboram com uma transferência de elétrons incompleta. Em soluções aquosas ácidas (pH=3,0) os valores de kt obtidos para o DIP e derivados são 20 vezes maiores quando comparados com os valores em ACN. Os dados de supressão de O2(1&Delta;g) são consistentes com os dados eletroquímicos. As propriedades eletroquímicas do DIP em ACN são caracterizadas por dois processos consecutivos de um elétron cada, com potenciais de meia onda de 0.30V e 0.67V vs SCE. No entanto, em meio aquoso ácido uma única onda de oxidação é observada envolvendo um processo com à perda de dois elétrons (0.80 V vs SCE). A eletrooxidação do DIP leva a formação de produtos não-fluorescentes e uma considerável mudança no espectro de absorção. Os produtos da eletrooxidação foram parcialmente caracterizados por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência acoplada a espectrometria de Massas (HPLC/MS). Os espectros de massas dos produtos da eletrooxidação apresentaram picos com m/z de 472, 269 e 519. O mecanismo responsável pelo efeito antioxidante de muitos compostos é geralmente estudado por laser flash fotólise (LFP), EPR, eletroquímica e experimentos de fotoquímica. A fotoquímica do DIP não é conhecida em detalhes. Neste trabalho, a fotólise do DIP em ACN e meio aquoso ácido em pH=3.0 foi estudada. Em meio aquoso ácido DIP foi oxidado pela fotosensibilização com AM e pela reação com uma fonte química de O2(1&Delta;g), N,N\'-di(2,3-dihidroxipropil)-1,4 naftalenodipropanamida (DHPNO2). A fotooxidação ocorre predominantemente pelo mecansimo do tipo II, onde o DIP é oxidado pelo O2(1&Delta;g), mas alguns produtos com baixa intensidade e m/z de 472 foram observados em meio ácido, o que está de acordo com a eletrooxidação. Por outro lado, em ACN, DIP é fotodegradado pelo mecansimo do tipo I, via geração de radicais ou por espécies excitadas no estado triplete, como observado através de EPR. Contudo, a oxidação produz a mesma espécie nos dois solventes. O produto obtido na reação de fotooxidação foi analisado por HPLC/MS. O dioxetano é formado como um intermediário da reação de fotooxidação. O produto formado com m/z de 269 corresponde a metade da molécula do DIP ligado a um átomo de oxigênio. A conclusão é que o DIP é fotooxidado envolvendo O2(1&Delta;g) em soluções aquosas ou oxigênio molecular em ACN. A caracterização completa dos fotoprodutos ajudará a entender melhor a química e as propriedades antioxidantes deste composto. Outro trabalho envolvendo a hemoglobina extracelular gigante de Glossoscolex paulistus (HbGp) foi desenvolvido. Análises de MALDI-TOF-MS foram realizadas para obter informações sobre a massa molecular das diferentes subunidades da HbGp na forma oxi. Os experimentos foram realizados para a proteína na forma íntegra em pH 7,0, para a proteína parcialmente dissociada em pH 9.0, e para o monômero d na forma pura. Além disso, experimentos foram realizados para a proteína íntegra tratada com 2-mercaptoetanol para monitorar o efeito da redução das ligações disulfetos, responsáveis em manter a estabilidade do trímero (abc) na molécula nativa. Os resultados são comparados com a hemoglobina homóloga de Lumbricus terrestris (HbLt) e algumas tentativas de atribuição de massas são feitas para algumas subunidades. Para o monômero d duas isoformas majoritárias de idênticas proporções com massas de 16,355+-25 e 16,428+-24 Da foram observadas. A redução das pontes disulfeto produz a dissociação do trímero e novos picos correspondentes aos monômeros a, b e c são observados, apresentando massas moleculares de 18,258+-30 Da, 16,492+-24 Da e 17,363+-17 Da, respectivamente. Duas cadeias linkers para HbGp foram também observadas em 25,817+-50 e 26,761+-16 Da. Finalmente, os trímeros (abc) foram observados em 51-52 kDa. Esta caracterização parcial representa um passo importante na caracterização das subunidades desta hemoglobina gigante. O efeito dos surfactantes aniônico dodecilsulfato de sódio (SDS) e catiônico cloreto de cetiltrimetilamonio (CTAC) na estrutura oligomérica de HbGp foi estudado por MALDI-TOF-MS. Uma efetiva interação do surfactante catiônico CTAC com as duas isoformas de monômero d, d1 e d2, na proteína íntegra bem como no monômero puro d foi observada. Até 10 moléculas de CTAC são ligadas a cada isoforma do monômero. Diferentemente, o espectro de massas obtido para o sistema SDS-HbGp mostrou que a interação SDS-HbGp é significativamente menos efetiva quando comparada ao sistema CTAC-HbGp. / Dipyridamole (DIP), 2,6-bis(dietanolamina)-4,8-dipiperidinapirimida-[5,4-d] pirimidina) is known for its vasodilating and antiplatelet aggregation activity, exhibiting also a potent antioxidant effect, strongly inhibiting lipid peroxidation. In the present work, the quenching of singlet molecular oxygen, O2(1&Delta;g), by dipyridamole, RA47 and RA25 was analyzed in acetonitrile and aqueous acid solutions. Bimolecular quenching constants in acetonitrile (ACN) are consistent with an efficient physical quenching, presenting values slightly lower than the diffusion limit (kt = 3,4-6,8x108 M-1s-1). The quenching process occurs probably, via reversible charge transfer with the formation of an exciplex. Calculation of &Delta;Get associated to O2(1&Delta;g) quenching corroborates with uncomplete electron transfer. In aqueous acid solutions (pH=3,0) the kt values for DIP and derivatives are 20-fold smaller as compared to ACN. The electrochemical properties of DIP in ACN are characterized by two consecutive one-electron processes with halfwave oxidation potentials of 0,30V and 0,67V vs SCE. However, in aqueous acid medium a single oxidation wave is observed involving a two-electron process (0,80 V vs SCE). Therefore, O2(1&Delta;g) quenching is consistent with electrochemical data. The eletrooxidation of DIP leads to nonfluorescent products and a considerable change in the absorption spectra occurs. The mass spectrum of eletrooxidation products of DIP showed peaks with m/z 472, 269 and 519. In this work the photolysis of DIP in acetronitrile (ACN) and aqueous solutions at pH 3,0 was examined. In aqueous acid solutions DIP was oxidized by photosensitization with methylene blue and by a reaction with a clean chemical source of O2(1&Delta;g), N,N\'-di(2,3-dihydroxypropyl)-1,4 naphtalenedipropanamide (DHPNO2). Photooxidation occurs predominantly by type II mechanism, where DIP is oxidized by O2(1&Delta;g). Some products with low intensity and m/z of 472 were observed, in agreement with eletrooxidation. On the other hand, in ACN, DIP is photooxidated by type I mechanism via radicals generation or by excited triplet state species, as observed by EPR. However, the oxidation produces the same species in both solvents. A dioxetane can be formed as an intermediate of the reaction of the photo-oxidation. The observed product, with m/z 269, can correspond to half of the DIP molecule with an attached oxygen atom or the DIP molecule with two oxygen atom with two protons. The conclusion at this stage is that DIP is photooxidated involving either O2(1&Delta;g) in aqueous solution or molecular oxygen in ACN. Another work involving the giant extracelular hemoglobin of Glossoscolex paulistus (HbGp) was performed. MALDI-TOF-MS analysis of the different subunits from the HbGp in the oxy- form was made. The results are compared to those reported for the homologous hemoglobin of Lumbricus terrestris (HbLt) and some tentative assignments are made for the observed polypeptides. The monomer d is found to exist in, at least, two major forms of identical proportions with masses of 16.355+-25 and 16.428+-24 Da, respectively. Two minor forms were also observed around 16 kDa for the monomers. Upon disulfide bonds reduction the peak associated to the trimer is absent in the mass spectrum, and new peaks assigned tentatively to the monomers a, b and c are observed. Their molecular masses were 18.258+-30 Da, 16.492+-24 Da and 17.363+-17 Da, respectively. Two Linker chains for HbGp were also observed at 25.817+-50 and 26.761+-16 Da. Finally, trimers (abc) were observed at 51-52 kDa. This partial characterization, performed for the first time, is an important step in the characterization of subunits of this giant hemoglobin. The effects of anionic sodium dodecyl sulfate (SDS) and cationic cethyltrimethylammonium chloride (CTAC) on the oligomeric structure of HbGp were also studied by MALDI-TOFMS. The data obtained with this technique show an effective interaction of cationic surfactant CTAC with the two isoforms of monomer d, d1 and d2, both in the whole protein as well as in the pure isolated monomer. The results show that up to 10 molecules of CTAC are bound to each isoform of the monomer. Differently, the mass spectra obtained for SDS-HbGp system showed that the interaction is, probably, significantly less effective as compared to CTAC-HbGp one. The acid pI of the protein around 5,5 is, probably, responsible for this behavior.