Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, Programa de Pós-Graduação em Fitopatologia, 2018. / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq). / O gênero Colletotrichum reúne vários dos principais patógenos do morangueiro. Devido à sua agressividade elevada e a capacidade de infectar vários tecidos da planta, ocasionando antracnose, podridão da coroa e flor preta, o gênero é responsável por prejuízos econômicos constantes nas regiões produtoras. Várias espécies de Colletotrichum são associadas às doenças em diferentes partes da planta e sua identificação precisa é fundamental para a recomendação de estratégias de controle eficientes. No Brasil, apenas a espécie C. siamense já foi identificada utilizando uma abordagem molecular, não havendo informação sobre as espécies que ocorrem nas demais regiões produtoras, incluindo o Distrito Federal, onde o cultivo do morangueiro é uma atividade agrícola de considerável importância econômica. Assim, os objetivos desse trabalho foram: (i) determinar espécies de Colletotrichum que ocorrem no morangueiro com ênfase no Distrito Federal, Brasil; (ii) estabelecer as relações filogenéticas entre as espécies de Colletotrichum associadas aos diferentes tecidos da planta. Foram realizadas coletas de frutos, flores e coroas de morangueiro apresentando sintomas típicos da infecção por Colletotrichum em propriedades de Brazlândia e Recanto das Emas no Distrito Federal; Atibaia em São Paulo; São Francisco de Paula no Rio Grande do Sul; Castelo e Domingos Martins, no Espírito Santo; Goianápolis e Padre Bernardo, no Goiás. Foram obtidos 52 isolados de Colletotrichum spp. dos quais o DNA total foi extraído. A amplificação e sequenciamento da região gênica GAPDH foi realizado para todos isolados para identificação prévia. As regiões gênicas ITS e β-tubulina de nove isolados representativos foram amplificadas e sequenciadas para identificação e análise filogenética. Foram identificadas as espécies C. nymphaeae e C. tamarilloi, sendo este o primeiro relato de C. nymphaeae causando antracnose e flor preta em morangueiro no Brasil e o primeiro relato de C. tamarilloi associado ao morangueiro no mundo. Quatro isolados pertencentes ao complexo C. acutatum não puderam ser inequivocamente identificados ao nível de espécie. / The genus Colletotrichum gathers several of the main strawberry pathogens due to the genus high aggressiveness and the ability to infect several plant tissues, causing anthracnose, crown rot and flower blight, and is responsible for constant economic losses in the growing regions worldwide. Several species of Colletotrichum are associated with strawberry diseases in different parts of the plant, and thus, the precise identification of Colletotrichum is essential for the recommendation of efficient control strategies and reduction of residues of agrochemicals in the commercialized fruits. Therefore, the objectives of this project are (i) to determine the species of Colletotrichum occurring in the strawberry plants in Brazil, with emphasis in the Distrito Federal; (ii) to establish the phylogenetic and pathogenicity relationships among Colletotrichum genotypes associated with different plant tissues. Fruit, flowers and strawberry crowns showing typical symptoms of Colletotrichum infection were collected in growing properties in the administrative regions Brazlândia and Recanto das Emas in Distrito Federal; in the municipalities of Atibaia in São Paulo; São Franciso de Paula in Rio Grande do Sul; Castelo and Domingos Martins, in Espírito Santo; and Goianápolis and Padre Bernardo, in Goiás. In total, 50 isolates were obtained and had genomic DNA extracted. The amplification and sequencing of the GAPDH gene region of all the isolates was performed in order to carry out the preliminar identification. The ITS and β-tubulin gene regions of nine representative isolates were amplified and sequenced for more detailed identification and phylogenetic analysis. The species C. nymphaeae and C. tamarilloi were identified and associated with strawberry symptoms in the evaluated regions, representing the first report of C. nymphaeae causing anthracnose and flower blight in strawberry in Brazil and the first worldwide report of C. tamarilloi associated with strawberry to science. It was not possible to accurately identify four isolates of C. acutatum complex, which may belong to the species C. paranaense, C. costaricense or C. limetticola.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:37Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2003-01Bitstream added on 2014-06-13T18:58:01Z : No. of bitstreams: 1 jesus_am_me_botfca.pdf: 159085 bytes, checksum: 57bda2a2bf183d269a42b6e9b4c596cd (MD5) / A banana (Musa spp.) é uma das frutas mais consumidas no mundo, e cultivada na maioria dos países tropicais. No Brasil, a produtividade média é baixa devido a vários fatores, dentre eles a incidência de pragas e doenças. Entre os problemas fitossanitários encontrados na cultura da bananeira os nematóides se destacam, sendo as espécies de maior importância: Radopholus similis, Meloidogyne spp., Helicotylenchus multicinctus, Pratylenchus coffeae e Rotylenchulus reniformis. O presente trabalho estudou a reação de diferentes genótipos de bananeira a Meloidogyne incognita raça 2, M. javanica e Pratylenchus coffeae. Para cada espécie de Meloidogyne foram estudadas dez genótipos de bananeira. No estudo com M. incognita foram estudados os genótipos Calypso, Buccaneer, Grande Naine, PV 0344, FHIA 2, FHIA 17, Nanicão Magário, SH 3640, Pacovan e Prata Anã. Para M. javanica os genótipos estudados foram Calypso, Buccaneer, Grande Naine, PV 0344, FHIA 2, Nanicão Magário, SH 3640, Pacovan, Prata Anã e Maçã. No experimento com P. coffeae foi desenvolvido utilizando nove genótipos PV 0344, SH 3640, Maçã, Thap Maeo, Caipira, Grande Naine, FHIA 1, FHIA 18 e Prata Anã. O delineamento em todos os experimentos foi inteiramente casualisado com quatro repetições para P. coffeae e seis repetições nos estudos com M. incognita e M. javanica. Cada parcela foi constituída de uma muda de bananeira proveniente de cultura de tecido. Estas mudas foram plantadas em recipientes plásticos de 2 litros de capacidade, contendo substrato composto de solo, areia e matéria orgânica na proporção 1:1:1, previamente autoclavado. Após uma semana do transplantio efetuou-se a... . / Banana plant (Musa spp.) is one of the more consumed fruit in the world and cultivated in many tropical countries. In Brazil, the productivity is low due to several factors, among them the incidence of pest and diseases. Among the problems found in the culture of the banana, the nematodes are stand out, being the species of larger importance Radopholus similis, Meloidogyne spp., Helicotylenchus multicinctus, Pratylenchus coffeae and Rotylenchulus reniformis. This research studied the reaction of different genotypes of banana to Meloidogyne incognita race 2, M. javanica and Pratylenchus coffeae. Ten banana genotypes were studied in Meloidogyne spp. experiments. The genotypes studied in M. incognita experiment were: Calypso, Buccaneer, Grande Naine, PV 0344, FHIA 2, FHIA 17, Nanicão Magário, SH 3640, Pacovan and Prata Anã. In M. javanica experiment the genotypes studied were: Calypso, Buccaneer, Grande Naine, PV 0344, FHIA 2, Nanicão Magário, SH 3640, Pacovan, Prata Anã and Maçã. P. coffeae experiment was developed with nine genotypes, PV 0344, SH 3640, Maçã, Thap Maeo, Caipira, Grande Naine, FHIA 1, FHIA 18 and Prata Anã. Experiments design were completely randomized with four replication for P. coffeae. and six replication in the studies with M. incognita and M. javanica. Each plot was constituted of a plant of banana produced in vitro, planted in pot with 2 liters of capacity, with substratum composed of soil, sand and organic matter in 1:1:1 proportion, previously autoclaved. After a week of the banana plants transplant, the inoculation was made with 5.000 eggs/plant for M. javanica or for M. incognita and 1.000 specimens/plant for P. coffeae. Tomato plants ‘Rutgers’ were used as control of the viability of the nematodes. The evaluation of the experiments with Meloidogyne was accomplished 120 days after the inoculation. The analyzed parameters were: gall number, of the... (Complete abstract, click electronic address below).

Dissertação (mestrado) Universidade Federal de Viçosa, Curso de Fitopatologia, 1990 / Made available in DSpace on 2012-10-16T02:51:31Z (GMT). No. of bitstreams: 0

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, 2008. / Submitted by Ângela Christina (angelchris@bce.unb.br) on 2009-05-11T18:35:42Z No. of bitstreams: 1 2008_LeonardoFerreiraLopes.pdf: 793670 bytes, checksum: a6c71ecd3e126726b164e3af881fef34 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2009-05-12T13:18:49Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_LeonardoFerreiraLopes.pdf: 793670 bytes, checksum: a6c71ecd3e126726b164e3af881fef34 (MD5) / Made available in DSpace on 2009-05-12T13:18:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_LeonardoFerreiraLopes.pdf: 793670 bytes, checksum: a6c71ecd3e126726b164e3af881fef34 (MD5) Previous issue date: 2008-12 / Este trabalho teve como principal objetivo avaliar o efeito do uso de fosfitos, ácido acetilsalisílico e 1-metilciclopropeno (1-MCP) no controle da antracnose. O patógeno (isolado MM) foi obtido a partir de frutos com sintomas típicos da doença oriundos do CEASA-DF, de onde também foram obtidos os frutos para a realização dos experimentos. O isolamento e multiplicação do patógeno foram feitas em BDA 50%. Em todos os experimentos, os frutos (selecionados no estágio de 0 a 2 de maturação) foram descontaminados em álcool 10% por 1 minuto, hipoclorito de sódio 0,1% por 1 minuto, seguindo-se a lavagem em água destilada e esterilizada por 1 minuto. Os frutos foram submetidos a perfurações de 2mm em cinco pontos diferentes de sua superfície e, em seguida, inoculados aplicando-se 50l da suspensão de esporos (106 conídios/ml) e mantidos em câmara úmida por um período de 24h. Após a aplicação dos tratamentos os frutos foram mantidos em incubadores (iluminação diária 12h a 13°C) durante 10 dias, avaliando-se diariamente o diâmetro das lesões. Ao final deste período, realizou-se análise físico-química dos frutos. Foram realizados cinco diferentes ensaios em frutos com fosfitos. No primeiro experimento, in vitro, os fosfitos de Mg - 40% P2O5 + 6% Mg (‘Fitofós-Mg’), Zn - 40% P2O5 + 10% Zn (‘Phytogard Zn’) – 2,50 mL/L, Ca - 30% P2O5 + 7% Ca (‘Phytogard Ca’) e K - 30% P2O5 + 20% K2O (‘Phytogard K’) – 2,50 mL/L, foram testados em três doses (50, 100 e 200% da dose recomendada pelo fabricante) e o fungicida carbendazim (‘Derosal’) na dose de 1 mL/L. Os outros quatro ensaios foram realizados em frutos, sendo os dois primeiros realizados com frutos do grupo ‘Solo’ (cv. Sunrise Solo) e os dois últimos com frutos do grupo ‘Solo’ (cv. Golden): (1) utilizou-se nove fosfitos diferentes nas doses recomendadas pelos fabricantes para aplicação destes produtos como fertilizante foliar em fruteiras tropicais: fosfito de Mg - 40% P2O5 + 6% Mg (‘Fitofós-Mg’) – 1,50mL/L,30% P2O5 + 4% Mg (‘Phytogard Magnésio’) – 3,00 mL/L, K - 30% P2O5 + 20% K2O (‘Fitofós-K Plus’) – 1,50 mL/L, 30% P2O5 + 20% K2O (‘Nutrex Premium’ 0-30-20) – 1,75 mL/L, 20% P2O5 + 20% K2O (‘Nutrex Premium’ 0-20-20) – 2,00 mL/L, 20% P2O5 + 20% K2O (‘Hortifós PK’) – 3,00 mL/L, Ca - 10% P2O5 + 6% Ca (‘Fitofós-Ca’) – 1,50 mL/L, 30% P2O5 + 7% Ca (‘Phytogard Cálcio’) – 3,00 mL/L e Zn - 40% P2O5 + 10% Zn (‘Phytogard Zinco’) – 2,50 mL/L, imergindo-se os frutos em soluções com esses produtos por 20 minutos. Frutos utilizados como testemunha receberam água destilada esterilizada por igual período; (2) os fosfitos de K - 30% P2O5 + 20% K2O (‘Fitofós-K Plus’) e Ca - 30% P2O5 + 7% Ca (‘Phytogard Cálcio’), em quatro diferentes doses (25, 50, 100 e 200% da dose recomendada pelo fabricante); (3) utilizou-se estes mesmos fosfitos nas doses recomendadas pelo fabricante e em combinação com o Cloreto de cálcio a 2% na mesma dose; (4) utilizouse dez fosfitos diferentes nas doses recomendadas pelos fabricantes para aplicação destes produtos como fertilizante foliar em frutíferas tropicais: fosfito de Cu - 20% P2O5 + 4% Cu (‘Fitofós Cu’) – 2,50mL/L, Mg - 40% P2O5 + 6% Mg (‘Fitofós-Mg’) – 1,50mL/L, 30% P2O5 + 4% Mg (‘Phytogard Magnésio’) – 3,00 mL/L, K - 30% P2O5 + 20% K2O (‘Fitofós-K Plus’) – 1,50 mL/L, 30% P2O5 + 20% K2O (‘Nutrex Premium’ 0-30-20) – 1,75 mL/L, 20% P2O5 + 20% K2O (‘Nutrex Premium’ 0-20-20) – 2,00 mL/L, 30% P2O5 + 20% K2O (‘Phytogard K’) – 2,50 mL/L, Ca - 10% P2O5 + 6% Ca (‘Fitofós-Ca’) – 1,50 mL/L, 30% P2O5 + 7% Ca (‘Phytogard Cálcio’) – 3,00 mL/L e Zn - 40% P2O5 + 10% Zn (‘Phytogard Zinco’) – 2,50 mL/L. Nos tratamentos com ácido acetilsalicílico os frutos foram submetidos a diferentes doses do produto (10, 20 e 30mM) por três períodos de tempo (10, 20 e 30 min) em aplicações anteriores e posteriores a inoculação. Com o 1-MCP foram utilizadas diferentes doses (0, 50, 100, 200 e 300 ppb) do gás por dois períodos de exposição (12 e 24h). Ao fim obteve-se os seguintes resultados: in vitro, todos os fosfitos mostraram-se eficientes na redução do crescimento micelial e na produção de conídios de C. gloeosporiodes nas doses testadas. O uso associado de fosfitos e do fungicida Derosal (p.a. Carbendazim) não se mostrou eficiente na redução da severidade da doença. Nos experimentos realizados com diferentes doses dos fosfitos ‘Fitofós-K Plus’ e ‘Phytogard Cálcio’ a aplicação do último na dose de 200% da dose recomendada pelo fabricante reduziu significativamente o diâmetro da lesão em relação à testemunha. A imersão de frutos em soluções de CaCl2 (2%) reduziu significativamente a severidade da doença, o fosfito ‘Phytogard Cálcio’ associado ao CaCl2 apresentarou redução no diâmetro médio da lesão em relação a testemunha. O uso isolado de fosfitos incitou uma resposta variada sobre a doença. O ácido acetilsalicílico nas doses de 10, 20 e 30 mM / 10 min e de 20 mM / 20 min reduziram significativamente a doença quando aplicado 24h antes da inoculação. Quando aplicado 24h após a inoculação reduziu significativamente o diâmetro das lesões na concentração de 20 mM por um período de 10 minutos. Frutos expostos ao 1-MCP por um período de 12h apresentaram lesões menores em relação às testemunhas em qualquer das doses avaliadas. Ao final destes experimentos, foram realizadas combinações onde aplicou-se inicialmente o tratamento hidrotérmico (49°C/ 20 min) e em seguida imergindo-se os frutos em soluções com ácido acetilsalicílico em concentração de 20 e 30mM por 10 minutos, Phytogard Magnésio,Fitofós K Plus e cloreto de cálcio (2%) por 20 minutos. Em todos os experimentos os tratamentos apresentaram redução significativa da doença em relação à testemunha. Tratamentos envolvendo a combinação do tratamento hidrotérmico com o cloreto de cálcio e com o AAS apresentaram lesões de diâmetro médio inferior aos frutos que foram submetidos apenas ao tratamento hidrotérmico. Quanto às análises físico-químicas, frutos submetidos ao tratamento com 1-MCP apresentaram firmeza significativamente maior em relação à testemunha, além de um atraso no processo de maturação. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / This work had as its main objective to assess the effect of phosphites, acetylsalicylic acid and 1-methylcyclopropene (1-MCP) in the control of the anthracnose. The pathogen (isolate MM) was obtained from fruit with typical symptoms of the disease from CEASA-DF, where the fruits were also obtained for the conduct of experiments. The isolation and multiplication of the pathogen were done in BDA 50%. In all experiments, the fruits (selected in the stage of maturation of 0 to 2) were decontaminated in 10% alcohol by 1 minute, sodium hypochlorite by 1 minute, followed by washing with distilled water and sterilized by 1 minute. The fruits were submitted to perforations of 2mm in five different points of its surface and inoculated applying 50l of the suspension of spores (106 conidia/ml) and kept in a wet chamber for a period of 24 hours. After application of the treatments they were kept in incubators (lighting daily 12h at 13 °C) for 10 days evaluating daily the diameter of injuries. At the end of this period. It was carried out physical-chemical analysis of fruits. It was conducted five different tests on fruits with phosphites. In the first experiment, in vitro, the phosphites Mg - 40% P2O5 + 6% Mg (‘Fitofós-Mg’), Zn - 40% P2O5 + 10% Zn (‘Phytogard Zn’) – 2,50 mL/L, Ca - 30% P2O5 + 7% Ca (‘Phytogard Ca’) and K - 30% P2O5 + 20% K2O (‘Phytogard K’) – 2,50 mL/L were tested at three doses (50, 100 and 200% of the dose recommended by the manufacturer) and fungicide carbendazim ('Derosal') at a dose of 1mL/L. The other four essays have been conducted on fruit, being the two firsts conducted with fruits from group 'Solo' (cv. Sunrise Solo) and the two lasts with fruits from group 'Solo' (cv. Golden): (1) it was used nine different phosphates in doses recommended by manufacturers in applying for such products as a foliar fertilizer in tropical fruit: fosfito de Mg - 40% P2O5 + 6% Mg (‘Fitofós-Mg’) – 1,50mL/L,30% P2O5 + 4% Mg (‘Phytogard Magnésio’) – 3,00 mL/L, K - 30% P2O5 + 20% K2O (‘Fitofós-K Plus’) – 1,50 mL/L, 30% P2O5 + 20% K2O (‘Nutrex Premium’ 0-30-20) – 1,75 mL/L, 20% P2O5 + 20% K2O (‘Nutrex Premium’ 0-20-20) – 2,00 mL/L, 20% P2O5 + 20% K2O (‘Hortifós PK’) – 3,00 mL/L, Ca - 10% P2O5 + 6% Ca (‘Fitofós-Ca’) – 1,50 mL/L, 30% P2O5 + 7% Ca (‘Phytogard Cálcio’) – 3,00 mL/L e Zn - 40% P2O5 + 10% Zn (‘Phytogard Zinco’) – 2,50 mL/L, immersing the fruits in solutions with these products for 20 minutes. Fruit used as control received sterile distilled water for an equal period; (2) the phosphites K - 30% P2O5 + 20% K2O (‘Fitofós-K Plus’) e Ca - 30% P2O5 + 7% Ca (‘Phytogard Cálcio’), in four different doses (25, 50, 100 and 200% of the dose recommended by the manufacturer), (3) it was used these same phosphites in doses recommended by the manufacturer and in combination with calcium chloride to 2% in the same dose, (4) it was used ten different phosphites at the recommended doses by manufacturers to apply these products as foliar fertilizer in tropical fruits :phosphate of Cu - 20% P2O5 + 4% Cu (‘Fitofós Cu’) – 2,50mL/L, Mg - 40% P2O5 + 6% Mg (‘Fitofós-Mg’) – 1,50mL/L, 30% P2O5 + 4% Mg (‘Phytogard Magnésio’) – 3,00 mL/L, K - 30% P2O5 + 20% K2O (‘Fitofós-K Plus’) – 1,50 mL/L, 30% P2O5 + 20% K2O (‘Nutrex Premium’ 0-30-20) – 1,75 mL/L, 20% P2O5 + 20% K2O (‘Nutrex Premium’ 0-20-20) – 2,00 mL/L, 30% P2O5 + 20% K2O (‘Phytogard K’) – 2,50 mL/L, Ca - 10% P2O5 + 6% Ca (‘Fitofós-Ca’) – 1,50 mL/L, 30% P2O5 + 7% Ca (‘Phytogard Cálcio’) – 3,00 mL/L e Zn - 40% P2O5 + 10% Zn (‘Phytogard Zinco’) – 2,50 mL/L. In the treatments with acetylsalicylic acid, fruits were submitted to different doses (10, 20 and 30mm) for three time periods (10, 20 and 30 min) in applications before and after the inoculation. With 1-MCP was used different doses (0, 50, 100, 200 and 300 ppb) of gas through two periods of exposure (12 and 24). To the end it was obtained the following results: In vitro, all phosphites showed effective in reducing the mycelial growth and the production of conidia of C. gloeosporiodes at all doses tested. The combined use of phosphites and the fungicide Derosal (pa. carbendazim) was not effective in reducing the severity of the disease. In experiments performed with different doses of phosphate ‘Fitofós-K Plus’ and 'Phytogard Cálcio', the application of the last at 200% of the dose recommended by the manufacturer reduced significantly the diameter of the lesion in relation to the control. The immersion of fruits in solutions of CaCl2 (2%) reduced significantly the severity of the disease. The phosphite ‘Phytogard Cálcio’ associated with CaCl2 provided a decrease in the average diameter of the lesion in relation to the control. The use isolated of phosphates instigated a varied response on the disease. The acetylsalicylic acid in doses of 10, 20 and 30 mM/10 min and 20 mM/20 min reduced significantly the disease when applied 24 hours before the inoculation. When applied 24 hours after inoculation reduced significantly the diameter of injuries at a concentration of 20 mM for a period of 10 minutes. Fruits exposed to 1-MCP for a period of 12h showed smaller injuries in relation to the control in any of the evaluated doses. At the end of these experiments, it was carry out combinations where initially was applied the hydrothermal treatment (49 °C/20 min) and then the fruits were immersed in solutions with acetyl salicylic acid in the concentrations of 20 to 30mm by 10 minutes, Phytogard Magnesium, Fitofos K Plus and calcium chloride (2%) for 20 minutes. In all experiments the treatments provided significant reduction of the disease in relation to the control. Treatments involving the combination of hydrothermal treatment with calcium chloride and the ASA showed injuries with an average diameter less than the fruits that were just submitted to the hydrothermal treatment. About the physical and chemical analysis, fruit submitted to treatment with 1-MCP showed firmness significantly greater in relation to the control, besides a delay in the process of maturation.

Dissertação (mestrado) Universidade Federal de Viçosa, Curso de Fitopatologia, 1990 / Made available in DSpace on 2016-01-08T16:40:36Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 1990

Orientadora : Profª. Drª. Chirlei Glienke / Coorientador : Prof. Dr. Fabricio Packer Gonçalves / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Genética. Defesa: Curitiba, 28/03/2014 / Inclui referências : f. 42-44;61-63;67-71 / Resumo: A Mancha Preta dos Citros (MPC) é uma doença que ameaça a Citricultura brasileira, causando lesões em frutos e sua queda prematura em estágios mais severos, levando a prejuízos de produção e rejeição no mercado consumidor. É causada pelo fungo Phyllosticta citricarpa, presente em folhas caídas em decomposição na forma sexuada (ascósporos) e nas lesões dos frutos, em folhas aderidas à planta e ramos secos na forma assexuada (picnidiósporos). O uso de fungicidas sistêmicos ainda é a principal alternativa de controle, mas se depara com os principais problemas do seu uso excessivo como toxicidade ambiental, acúmulo de resíduos nos frutos e seleção de patógenos resistentes. A busca por um controle alternativo pode envolver microrganismos endofíticos de plantas medicinais, uma vez que é conhecido seu potencial biotecnológico e poder protetor da planta hospedeira, mas depende do conhecimento do ciclo infeccioso do patógeno sob vários aspectos. Sabe-se da importância do manejo de ramos secos no controle da doença mas pouco se conhece sobre a participação dos ramos na epidemiologia da MPC. Técnicas tradicionais de isolamento em meio de cultura juntamente com ensaios moleculares têm agilizado o diagnóstico de doenças, oferecendo dados importantes sobre vários patosistemas. Adicionalmente, o uso de microrganismos transformados geneticamente para expressão de uma proteína repórter, como a green fluorescente protein (gfp), trazem uma nova ferramenta para o monitoramento desses microrganismos e entendimento do seu ciclo infeccioso. No presente estudo foram avaliados 128 ramos de área de alta incidência da MPC, pertencentes a quatro estados fenológicos: novo, jovem, velho e seco. O isolamento destes tecidos revelou 1,6% de amostras positivas para P. citricarpa, apenas em tecidos de estado fenológico velho, enquanto a extração de DNA direto dos tecidos seguido de PCR espécie específico não revelou a presença do patógeno. Foi avaliada a sobrevivência do fungo patogênico em ramos de citros destacados, pela inoculação de suspensão conidial da linhagem transformante LGMF06-T2 (gfp) de P. citricarpa. Foi possível recuperar o fungo inoculado dos tecidos após 45 dias da sua inoculação, não sendo recuperado após 90 e 135 dias. A espécie inoculada foi confirmada por microscopia de fluorescência, e este resultado sugere a sobrevivência do patógeno nos ramos por pelo menos 45 dias. Adicionalmente, foi avaliado o efeito do extrato metabólico do fungo endofítico Diaporthe terebinthifolii sobre a formação de picnídios de P. citricarpa em ramos autoclavados. Fragmentos de 1 cm de ramos autoclavados foram depositados sobre meio ágar-agua e em suas laterais foram inoculados fragmentos miceliais do patógeno. Comparou-se o crescimento micelial e formação de picnídios nos ramos tratados com o extrato do fungo endofítico com relação aos ramos não tratados e ramos tratados com fungicida comercial. Observou-se que o extrato reduz a formação de picnídios comparativamente ao controle negativo, apresentando efeito similar ao promovido pelo fungicida. Tais resultados confirmam o potencial do extrato do fungo D. terebinthifolii no controle do patógeno P. citricarpa. Palavras-chave: Mancha Preta dos Citros, Phyllosticta citricarpa, endófitos, controle alternativo / Abstract: The Citrus Black Spot (CBS) is a threat to the Brazilian Citrus, causing fruit lesions and premature fruit drop in more severe cases, leading to yield losses and fruit rejection in the consumer market. CBS is caused by the fungus Phyllosticta citricarpa, which ascospores are the sexual stage, found in decomposing fallen leaves, and picnidiospores are the asexual stage, present in fruit lesions, attached leaves and dried branches. Systemic fungicides are the main control alternative, but its overuse causes problems like the environmental toxicity, residues accumulation in fruits and also the selection of resistant pathogens. The search of an alternative disease control method may involve endophytic microorganisms of medicinal plants, due to their biotechnological potential and protective power of the host plant, but it is important to know about the infectious cycle of the pathogen. We know the importance of handling dry branches for CBS control but there is a lack of information about this pathosystem, mainly about the influence of branches in the disease epidemiology. The use of traditional isolation techniques coupled with molecular techniques have enhanced the diagnosis of diseases, providing important data on the interaction between the plant and the pathogen. Additionally, the use of genetically transformed microorganisms for the expression of a reporter protein, such as green fluorescent protein (GFP) brings a new tool to understand the pathogen infectious cycle. In the present study, we evaluated 128 branches in area of high incidence of CBS, belonging to four growth stages: new, young, old and dried. The isolation of these tissues showed 1.6% of samples with the presence of P. citricarpa, only in branches in old growth stages, while the method used for DNA extraction and PCR directly from the branches tissue did not reveal the pathogen. We also evaluated the fungus survival in detached citrus branches by inoculating a conidial solution of the LGMF06-T2 transformed strain expressing the green fluorescent protein (GFP). The pathogen was reisolated from the branches after 45 days of inoculation, with the gfp strain confirmed by fluorescence microscopy. These findings suggests that the pathogen can survive in branches for at least 45 days. Additionally, we evaluated the control effect of metabolic extract of the endophytic fungus Diaporthe terebinthifolii over micelial growth and pycnidia formation of P. citricarpa in autoclaved branches. Branches fragments (1 cm) were placed on water agar media and mycelium fragments of the pathogen were inoculated on its sides. It was evaluated the micelial growth and pycnidia formation on the branches treated with the the endophytic fungus extract, compared with non-treated branches and branches treated with commercial fungicide. The extract treatment reduced the formation of pycnidia compared to the non-treated branches, and its inhibition was similar to the fungicide treatment. These findings confirm the potential of D. terebinthifolii extract in the control of P. citricarpa. Keywords: Citrus Black Spot, Phyllosticta citricarpa, epidemiology, disease control, endophytes, alternative control

Resumo: A Mancha Foliar de Glomerella (MFG) é causada por espécies de Colletotrichum e é a principal doença de verão da cultura da macieira, ocasionando sintomas em folhas e frutos e prejudicando a produção do ano subsequente à sua ocorrência devido à intensa desfolha que provoca nas plantas. Os objetivos deste trabalho foram (I) verificar as fontes de inóculo primário existentes em um pomar com alta pressão de inóculo, (II) monitorar a densidade de conídios de Colletotrichum spp. disseminados pelo ar e pela água em diferentes alturas da planta, em áreas sem e com tratamento químico, e verificar se ocorre a dispersão dos conídios por insetos-praga da cultura e (III) verificar a época de início da epidemia, o progresso da doença e a relação entre a severidade da MFG com a desfolha das plantas, de acordo com a localização das folhas no dossel. Para avaliação da sobrevivência do patógeno no outono e no inverno, coletas mensais de ramos e gemas dormentes, folhas caídas e de solo foram realizadas entre os meses de abril e agosto, e para avaliação da sobrevivência do patógeno de forma epifítica, coletas mensais de folhas assintomáticas foram realizadas entre setembro e março, durante dois anos. A patogenicidade dos isolados foi verificada em frutos com e sem ferimento e em folhas. A densidade de conídios de Colletotrichum spp. ao longo do tempo foi determinada pela coleta destes com armadilhas caça-esporos instaladas a 0,3, 1,0 e 2,5 m de altura em relação ao solo e com a coleta do escorrimento interno de água na planta a 0,3 e 1,0 m de altura em relação ao solo. Insetos-praga da cultura (Grapholita molesta e Bonagota cranaodes) foram coletados quinzenalmente para verificação da presença do patógeno externamente a estes. A incidência, severidade e desfolha ocasionada pela MFG foram quantificadas em 10 folhas por ramo, posicionados a 0,3, 1,0 e 1,8 m de altura em relação ao solo. Detectou-se a presença de inóculo do patógeno no outono/inverno em ramos e gemas dormentes e em folhas caídas no solo, sendo que o número de isolados e sua patogenicidade variou de acordo com o órgão vegetal de origem e o ano de obtenção. Em nenhum momento foi observada a presença de Colletotrichum spp. no solo durante o período de outono/inverno, e em folhas assintomáticas durante o período vegetativo. A disseminação de conídios de Colletotrichum spp. foi observada a partir dos meses de outubro e novembro em áreas sem tratamento e a partir dos meses de novembro e janeiro em áreas com tratamento, cessando em meados do mês de abril. A maior densidade de conídios foi observada nos meses de janeiro e fevereiro, independentemente do manejo fitossanitário. Em ano com maior pressão de inóculo a aplicação de fungicidas não foi capaz de reduzir a área abaixo da curva calculada a partir da quantidade de conídios ao longo do tempo. A maior captura de conídios ocorreu próximo ao solo e a presença destes foi constatada tanto no ar quanto no escorrimento de água no interior da planta. Não foram observados conídios de Colletotrichum spp. em G. molesta e B. cranaodes. A quantidade de sintomas de MFG foi altamente dependente das condições ambientais observadas, principalmente a quantidade de precipitação e a umidade relativa do ar, havendo correlação positiva entre a severidade imediatamente anterior a queda e o tempo de permanência da folha na planta para todas as alturas avaliadas. A desfolha mostrou-se mais acentuada nas partes altas do dossel das plantas.

Orientadora : Profª Drª Vanessa Kava / Coorientadora : Profª Drª Chirlei Glienke / Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Genética. Defesa: Curitiba, 28/11/2014 / Inclui referências : f.65-69;85-90;113-115;118-122 / Área de concentração : Genética / Resumo: A Mancha Preta dos Citros (MPC) é uma doença que causa lesões nas principais variedades de frutos cítricos e, em casos mais severos, causa sua queda prematura, levando a prejuízos de produção e perdas no mercado consumidor. É causada pelo fungo Phyllosticta citricarpa, cujos esporos são encontrados em folhas aderidas à planta e em lesões nos frutos na forma assexuada (picnidiósporos), e na forma sexuada (ascósporos) em folhas em decomposição no solo. Neste trabalho foram investigados os mecanismos que desencadeiam o ciclo sexual em diferentes isolados de Phyllosticta citricarpa, obtidos de diferentes regiões geográficas e de diferentes hospedeiros, buscando reconhecer sistemas de compatibilidade existentes. Testes de compatibilidade em variadas condições descritas na literatura e em outras condições propostas neste estudo foram realizados com 165 isolados de Phyllosticta. Algumas condições ensaiadas, previamente descritas na literatura, mostraram-se inadequadas para ensaios de compatibilidade entre diferentes isolados de P. citricarpa. Estruturas semelhantes a corpos de frutificação imaturos foram observadas na zona de encontro entre os isolados LGMF 76 e 114, porém não foram obtidos ascósporos. Na produção de ascósporos estão envolvidos os genes mating type (MAT) que regulam o desenvolvimento da reação sexual. Estes genes foram identificados após o desenho de primers específicos para esta espécie, com o objetivo de caracterizar este importante fitopatógeno quanto à dinâmica de recombinação possível em campo. Dos 148 isolados investigados, 21,62% apresentaram o gene MAT 1-1-1, 78,38% o gene MAT1-2-1. Considerando que os ascósporos, desempenham um papel importante no ciclo da Mancha Preta dos Citros, condições de produção e liberação destes esporos foram recriadas em laboratório com o desenvolvimento de caixas com temperatura, ventilação e umidade controlada, onde plantas axênicas desenvolvidas a partir do embrião de sementes de citros e livres de microrganismos foram utilizadas. Ainda, aspectos da colonização dos frutos pelo fitopatógeno foram investigados, avaliando-se a relação entre o crescimento, colonização de folhas e produção de picnídios frente aos principais terpenos produzidos na casca dos frutos cítricos e que comprovadamente exercem um papel no processo de atração de pragas e patógenos. Em todos os testes realizados foi possível detectar que os terpenos influenciam de diferentes formas o crescimento e a produção de picnídios de P. citricarpa. Este pode ser mais um passo no entendimento do mecanismo de interação entre planta-patógeno, podendo se tornar uma futura forma de controle dessa doença. Palavras - chave: Mancha Preta dos Citros, Phyllosticta citricarpa, mating type, terpenos, interação planta-patógeno / Abstract: The citrus black spot (CBS) is a disease that causes lesions on the main varieties of citrus fruits and, in more severe cases, causes its premature drop, leading to production and consumer market losses. It is caused by the fungus Phyllosticta citricarpa, whose spores are found over leafs attached to the plant and in the lesions of fruits in the asexual form (pycnidiospores), and in the sexual form (ascospores) in decomposing leafs in the soil. The present study investigated the mechanisms that trigger the sexual cycle in different isolates of Phyllosticta citricarpa, obtained from different geographic regions and different hosts, seeking to recognize existing compatibility systems. Compatibility tests on various conditions described in the literature and in other conditions proposed in this study were performed with 165 Phyllosticta isolates. Some conditions tested, previously described in the literature, have proved inadequate for testing compatibility between different isolates of P. citricicarpa. Structures similar to immature fruiting bodies were observed in the area of contact between the isolates LGMF 76 and 114, however ascospores were not obtained. The production of ascospores involves the mating type (MAT) genes which regulate the development of sexual response. These genes were identified after drawing primers specific for this species, with the objective of characterizing this important phytopathogen regarding the dynamics of possible field recombination. Of the 148 isolates investigated, 21.62% presented the MAT 1-1-1 gene and 78.38% the MAT1-2-1 gene. Considering that the ascospores play an important role in the citrus black spot cycle, production conditions and release of these spores were recreated in the laboratory with the development of boxes with controlled temperature, ventilation and humidity, where axenic plants grown from the embryo of citrus seeds and free from microorganisms were utilized. Still, aspects of colonization of the fruit by the phytopathogen were investigated by evaluating the relationship among growth, leaf colonization and production of pycnidia front of the main terpenes produced in the peel of citrus fruits and proven to play a role in the process of attraction of pests and pathogens. In all tests conducted it was possible to detect that the terpenes influence in different ways the growth and production of P. citricarpa pycnidia. This can be another step in the understanding of the mechanism of interaction between plant-pathogen, and may become a future way of controlling this disease. Key - words: citrus black spot, Phyllosticta citricarpa, mating type, terpenes, plant-pathogen interaction

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Pós-Graduação em Fitopatologia, 2011. / Submitted by Elna Araújo (elna@bce.unb.br) on 2012-09-14T01:38:29Z No. of bitstreams: 1 2011_AndressadaCunhaQuintanaMartins.pdf: 17574958 bytes, checksum: b75e56f89a03136d882d1a99cdf2aa6c (MD5) / Approved for entry into archive by Leandro Silva Borges(leandroborges@bce.unb.br) on 2012-09-14T19:41:48Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_AndressadaCunhaQuintanaMartins.pdf: 17574958 bytes, checksum: b75e56f89a03136d882d1a99cdf2aa6c (MD5) / Made available in DSpace on 2012-09-14T19:41:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_AndressadaCunhaQuintanaMartins.pdf: 17574958 bytes, checksum: b75e56f89a03136d882d1a99cdf2aa6c (MD5) / O amendoim cultivado (Arachis hypogaea) é umas das oleaginosas mais importantes no mundo, pelo seu grande valor energético e nutricional. Contudo, o amendoim possui baixa variabilidade genética quando consideradas características de interesse agronômico, o que difere de suas espécies silvestres, as quais são fontes de resistência a doenças e de adaptação a diversos ambientes. Arachis stenosperma é uma espécie silvestre resistente a algumas pragas e doenças, dentre elas, a mancha preta do amendoim, causada pelo fungo Passalora personata. Visando a identificação de genescandidatos associados à resposta de defesa da planta, o transcritoma de plantas de A. stenosperma acesso V10309, desafiadas com o fungo P. personata, e seu controle, foram analisados através de pirossequencimento massal (Roche), resultando em 362.631 genes transcritos, o que gerou 17.912 unigenes, dos quais 7.723 eram constituídos por contigs. Dentre as anotações obtidas por BLASTx, 50 fatores de transcrição, 48 RGAs e vários genes-candidatos envolvidos em processos de defesa da planta foram identificados. Dentre eles, 16 genes-candidatos, cinco deles RGAs, foram avaliados através de RT-qPCR, quanto ao nível de expressão mediante a presença do patógeno, sendo cinco dos 11 primeiros, negativamente regulados, enquanto que todos os RGAs foram positivamente regulados. Esta é a primeira análise massal do transcritoma de espécie silvestre de Arachis inoculado com P. personata. Os dados gerados neste trabalho promoverão o enriquecimento do banco de dados de genes transcritos de A. stenosperma, os quais poderão ser utilizados para descoberta de genes-candidatos à resistência, a outras características de interesse agronômico e novos marcadores moleculares (SNPs e SSRs), que uma vez mapeados, poderão auxiliar na identificação de QTLs no melhoramento da cultura do amendoim, constituindo um importante recurso para a comunidade científica interessada na descoberta de genes relacionados à resposta de defesa ou ao estresse biótico em amendoim e em outras espécies. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Peanut (Arachis hypogaea) is one of the most important oilseeds in the world due to its high energy value and nutrition. However, peanut has a low genetic variability, especially for agronomical traits, which differs from its wild species, which are sources of disease resistance and adaptation to various environments. Arachis stenosperma is a wild species resistant to some pests and diseases, among them, the Late Leaf Spot, caused by the fungus Passalora personata. Aiming to identify candidate genes associated with the plant defense response, the transcriptome of A. stenosperma V10309, challenged with the fungus P. personata and from a non-infected control, was analyzed by large scale pyrosequencing (Roche), resulting in 362,631 expressed genes, which generated 17,912 unigenes, which consisted of 7,723 contigs. Among the annotations obtained by BLASTx, 50 transcription factors, 48 RGAs and several candidate genes involved in plant defense processes were identified. Among them, 16 candidate genes were analyzed through RTqPCR for expression in the presence of the pathogen. Five RGAs were up-regulated, whilst the other 11 were down-regulated. This is the first large scale report on the transcriptome analysis of wild peanut inoculated with P. personata. The data generated in this study promote the enrichment of the database of expressed genes from A. stenosperma, which can be used for discovery of candidate genes resistance, other agronomic traits of interest and new molecular markers (SNPs and SSRs). Once mapped, these can assist in the identification of QTLs in peanut crop improvement. This data is an important resource to the scientific community in the discovery of genes related to defense response or biotic stress in peanuts and other species.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, 2006. / Submitted by wesley oliveira leite (leite.wesley@yahoo.com.br) on 2009-10-28T20:24:04Z No. of bitstreams: 1 Ana Cristina Oliveira Teixeira teste_final.pdf: 1029647 bytes, checksum: 69eb1c97ca79909a9fedec50bdad230f (MD5) / Approved for entry into archive by Gomes Neide(nagomes2005@gmail.com) on 2010-10-06T15:09:03Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Ana Cristina Oliveira Teixeira teste_final.pdf: 1029647 bytes, checksum: 69eb1c97ca79909a9fedec50bdad230f (MD5) / Made available in DSpace on 2010-10-06T15:09:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ana Cristina Oliveira Teixeira teste_final.pdf: 1029647 bytes, checksum: 69eb1c97ca79909a9fedec50bdad230f (MD5) Previous issue date: 2006 / A seca dos ponteiros da goiabeira (Psidium guajava L.) causada por Erwinia psidii (Rodrigues Neto et al., 1987) tem sua ocorrência mundial limitada ao Brasil, tendo sido detectada pela primeira vez no estado de São Paulo em 1982. Atualmente, essa bacteriose encontra-se também no Distrito Federal (DF), em Minas Gerais, Espírito Santo e Paraná. No DF, é considerada uma das doenças mais importantes da goiabeira pois, além de provocar grandes perdas na produção, é também uma doença de difícil controle. Considerando-se a escassez de estudos sobre essa bacteriose e o pouco conhecimento que se tem sobre a diversidade genética das populações de E. psidii nos pomares locais, além da suposição de que essa doença tenha sido introduzida através de mudas contaminadas assintomáticas provenientes de São Paulo, os objetivos desse trabalho foram (1) caracterizar por meio de testes bioquímicos, nutricionais e de patogenicidade, isolados bacterianos coletados em diferentes pomares na região de Brazlândia –DF; (2) caracterizar a diversidade genética entre os isolados de Brazlândia-DF obtidos de diferentes pomares e em diferentes épocas, e compará-los aos isolados de outros estados através de rep-PCR (REP, ERIC e BOX-PCR); (3) testar a especificidade de um antissoro policlonal para E. psidii, e desenvolver uma metodologia que permita sua detecção em mudas assintomáticas através do método de imunodifusão radial dupla. Todos os isoldados do DF, com exceção de UnB11 e UnB13, apresentaram-se como bactérias Gram-negativas, anaeróbicas facultativas, que produzem ácido a partir de manitol, mas não a partir de rafinose, não reduzem nitrato a nitrito, produzem enzima catalase e não apresentaram v reação de hipersensibilidade em folhas de fumo. Todos os resultados foram condizentes com o perfil descrito por Rodrigues Neto, et al. (1987) para a espécie. O teste de patogenicidade permitiu distinguir os isolados em três grupos de agressividade de acordo com o tempo de aparecimento dos sintomas. As comparações entre os perfis de amplificação obtidos por rep-PCR, a partir do DNA purificado de 43 isolados de E. psidii, revelaram alta similaridade entre os isolados do DF coletados em diferentes pomares e em diferentes épocas, e também alta similaridade entre os isolados do DF, e aqueles provenientes de outros estados, incluindo o isolado tipo IBSBF 435. A partir do enriquecimento bacteriano em extrato de folhas de goiabeira esmagadas, e a utilização da técnica de imunodifusão radial dupla com antissoro específico para E. psidii, foi possível detectar o patógeno após 36 horas de incubação das folhas contaminadas artificialmente. Testes realizados em casa de vegetação com mudas sadias inoculadas por aspersão com suspensão bacteriana de E. psidii, permitiram verificar o aparecimento de sintomas em plantas intactas, ou seja sem ferimentos prévios, indicando que a bactéria pode também penetrar por aberturas naturais. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The bacterial blight of guava (Psidium guajava L.) caused by Erwinia psidii is a serious disease affecting orchards in Brazil and it has not been reported in any other country. In Brazil, it was first detected in São Paulo state in 1982. Currently it is present in the Federal District (DF) and three other states (Minas Gerais, Espírito Santo and Paraná). In those production areas it has been considered a major disease, causing significant losses. Control measures are difficult to apply since the pathogen can be easily disseminated. Very little is known about the genetic diversity of E. psidii in Brazil and the objective of this study was to characterize 43 isolates, most of them collected in different orchards in the Federal District. All isolates showed biochemical and nutritional features according to those described for E. psidii. Pathogenicity tests were performed using detached branches and the symptoms were visible from one to nine days after inoculation, depending on the isolate aggressiveness. Genetic diversity among the isolates was evaluated by rep-PCR (REP, ERIC and BOXPCR) which showed high similarity among the Federal District isolates, collected in different orchards and periods. High similarity was also observed between this group of isolates and those from the other three states, including the type strain IBSBF 435. A polyclonal antiserum against the type strain was produced in rabbits and showed high specificity. It was used to optimize a serology-based methodology, using double immunodifusion for early detection of E. psidii in plantlets. Enrichment of the bacterial population directly on guava leaves extracts allowed the detection of the pathogen 36 hours after incubation, even from an initial artificial contamination of 103 ufc/ml.