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Interação entre componentes biológicos de triatomíneos não infectados e soros de pacientes chagásicos crônicos / Interaction between biological components of insects and uninfected sera of chronic Chagas patients

Levy, Antonio Marcos de Apparecida 09 May 2003 (has links)
Investigou-se a existência de relação entre células normais de triatomíneos, formas evolutivas do T.cruzi e hospedeiros mamíferos. Hemócitos do vetor de espécies hematófagas não infectadas (Triatoma infestans, T. palidipennis, Dipetalogaster maximus, Rhodnius prolixus e Panstrongylus megistus) foram reconhecidos por soros de pacientes e camundongos infectados com Trypanosoma cruzi, por meio da técnica de imunofluorescência, enquanto que os hemócitos de um inseto fitófago, Diactor billineatus (ninfas e adultos) não foram reconhecidos pelos mesmos soros. Uma parcial reação cruzada foi observada entre hemócitos de T. infestans e soros de portadores de leishmaniose , o que não ocorreu com as amostras de portadores de doenças autoimunes, infecção com HIV e indivíduos normais. O tratamento de hemócitos com metaperiodato de sódio aboliu a fluorescência, mostrando que antígenos carboidratos estão envolvidos. O uso de lectinas marcadas revelou que N acetil-d-glicosamina, manose, glicose e βgal fazem parte da estrutura celular. O immunoblotting com extrato de hemócitos foi realizado com soros de pacientes chagásicos crônicos antes e depois do tratamento específico. Estes soros de ambos casos foram absorvidos com tripomastigotas e epimastigotas. Um número considerável de bandas desapareceu nos soros tratados com tripomastigotas, mas não com epimastigotas. Proteínas de 61-70, 41-50, 31-40 e 21-30 kDa foram as envolvidas no processo de absorção. Após a quimioterapia, as bandas de 121-130, 91-100, 81-90 e 61-60 kDa desapareceram nos soros não absorvidos. Um grupo de camundongos fêmeas A/Sn foi imunizado com hemolinfa livre de hemócitos (HL) e outro grupo com hemócitos (Hc) e desafiados com 5x102 tripomastigotas sangüícolas.(cepa Y). Picos de parasitemia dos camundongos HL e Hc foram observados um ou dois dias após o grupo controle. Apesar da parasitemia de ambos os grupos ter sido baixa, o grupo HL apresentou 43% de mortalidade, enquanto que o grupo Hc mostrou apenas 14 % de mortalidade. As citocinas IFNγ e TNFα estão envolvidas no processo de proteção,\' assim como óxido nítrico e anticorpos líticos. Os hemócitos induziram uma redução de IL-10, inibindo a resposta Th2. Desde que os hemócitos e tripomastigotas compartilham epítopos comuns, epítopos de hemócitos devem ser melhor estudados em virtude de seu potencial uso no imunodiagnóstico, imunoproteção e avaliação terapêutica. / Immunological relationship between normal triatomine cells, developmental life-cycle stages of T. cruzi and infected mammal hosts was investigated. Hemocytes from uninfected hematophagous vector species of triatomines (Triatoma infestans, T. palidipennis, Dipetalogaster maximus, Rhodnius prolixus and Panstrongylus megistus) were recognized by sera from patients and mice infected with Trypanosoma cruzi, by means of immunofluorescence assay (IFA), whereas hemocytes from a phytophagous bug, Diactor billineatus (nymphs and adults) were not recognized by the same sera. Hemocytes from T. infestans were partially recognized by leishmaniasis sera, but, not by samples from patients with autoimmune diseases, HIV positive sera. The treatment of hemocytes with sodium metaperiodate practically abolished the fluorescence staining, indicating the presence of carbohydrate antigens. These antigens were revealed be comprised of N acetyl-D-glucosamine, mannose and glucose and βgal, by means of fluorescent labelled lectins. Sera from chronic chagasic patients before and after the chemotherapy were reactive with hemocytes of P. megistus on immunoblotting, and the same sera previously absorbed with formaldehyde fixed cultured epimastigotes as well trypomastigotes. On immunoblotting a substantial number of bands diminished with sera absortion with trypomastigotes, but not with epimastigotes. Proteins of 61-70, 41-50, 31-40 and 21-30 kDa were the major proteins involved in the process of serum absorptions. After chemotherapy, protein bands of 121-130, 91-100, 81-90 and 51-60 kDa disappeared in unabsorbed sera. A group of female A/Sn mice were immunized with hemolymph free of hemocytes (MHL) and other group with hemocytes (MHC). Animais were challenged with 5x102 bloodstream trypomastigotes (Y strain). Parasitemia peaks of MHL and MHC groups were observed one or two days after the control group. In spite of the parasitemia for both groups was about 63% lower than the control group, the mortality for the MHL was 43%, differing from the MHC, which was 14% only. The Cytokines, IFNγ and TNFα, were shown to be involved in the protection of immunized mice, and also the nitric oxide and complement dependent lytic antibodies. Hemocytes showed to play a role in the reduction of the IL-10 production, inhibiting Th2 response. Thus, hemocytes and trypomastigotes share common epitopes, and these epitopes are potentially useful for immunodiagnosis, immunopratection, and evaluation of chemotherapic efficiency in Chagas\' disease control.
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Interação entre componentes biológicos de triatomíneos não infectados e soros de pacientes chagásicos crônicos / Interaction between biological components of insects and uninfected sera of chronic Chagas patients

Antonio Marcos de Apparecida Levy 09 May 2003 (has links)
Investigou-se a existência de relação entre células normais de triatomíneos, formas evolutivas do T.cruzi e hospedeiros mamíferos. Hemócitos do vetor de espécies hematófagas não infectadas (Triatoma infestans, T. palidipennis, Dipetalogaster maximus, Rhodnius prolixus e Panstrongylus megistus) foram reconhecidos por soros de pacientes e camundongos infectados com Trypanosoma cruzi, por meio da técnica de imunofluorescência, enquanto que os hemócitos de um inseto fitófago, Diactor billineatus (ninfas e adultos) não foram reconhecidos pelos mesmos soros. Uma parcial reação cruzada foi observada entre hemócitos de T. infestans e soros de portadores de leishmaniose , o que não ocorreu com as amostras de portadores de doenças autoimunes, infecção com HIV e indivíduos normais. O tratamento de hemócitos com metaperiodato de sódio aboliu a fluorescência, mostrando que antígenos carboidratos estão envolvidos. O uso de lectinas marcadas revelou que N acetil-d-glicosamina, manose, glicose e βgal fazem parte da estrutura celular. O immunoblotting com extrato de hemócitos foi realizado com soros de pacientes chagásicos crônicos antes e depois do tratamento específico. Estes soros de ambos casos foram absorvidos com tripomastigotas e epimastigotas. Um número considerável de bandas desapareceu nos soros tratados com tripomastigotas, mas não com epimastigotas. Proteínas de 61-70, 41-50, 31-40 e 21-30 kDa foram as envolvidas no processo de absorção. Após a quimioterapia, as bandas de 121-130, 91-100, 81-90 e 61-60 kDa desapareceram nos soros não absorvidos. Um grupo de camundongos fêmeas A/Sn foi imunizado com hemolinfa livre de hemócitos (HL) e outro grupo com hemócitos (Hc) e desafiados com 5x102 tripomastigotas sangüícolas.(cepa Y). Picos de parasitemia dos camundongos HL e Hc foram observados um ou dois dias após o grupo controle. Apesar da parasitemia de ambos os grupos ter sido baixa, o grupo HL apresentou 43% de mortalidade, enquanto que o grupo Hc mostrou apenas 14 % de mortalidade. As citocinas IFNγ e TNFα estão envolvidas no processo de proteção,\' assim como óxido nítrico e anticorpos líticos. Os hemócitos induziram uma redução de IL-10, inibindo a resposta Th2. Desde que os hemócitos e tripomastigotas compartilham epítopos comuns, epítopos de hemócitos devem ser melhor estudados em virtude de seu potencial uso no imunodiagnóstico, imunoproteção e avaliação terapêutica. / Immunological relationship between normal triatomine cells, developmental life-cycle stages of T. cruzi and infected mammal hosts was investigated. Hemocytes from uninfected hematophagous vector species of triatomines (Triatoma infestans, T. palidipennis, Dipetalogaster maximus, Rhodnius prolixus and Panstrongylus megistus) were recognized by sera from patients and mice infected with Trypanosoma cruzi, by means of immunofluorescence assay (IFA), whereas hemocytes from a phytophagous bug, Diactor billineatus (nymphs and adults) were not recognized by the same sera. Hemocytes from T. infestans were partially recognized by leishmaniasis sera, but, not by samples from patients with autoimmune diseases, HIV positive sera. The treatment of hemocytes with sodium metaperiodate practically abolished the fluorescence staining, indicating the presence of carbohydrate antigens. These antigens were revealed be comprised of N acetyl-D-glucosamine, mannose and glucose and βgal, by means of fluorescent labelled lectins. Sera from chronic chagasic patients before and after the chemotherapy were reactive with hemocytes of P. megistus on immunoblotting, and the same sera previously absorbed with formaldehyde fixed cultured epimastigotes as well trypomastigotes. On immunoblotting a substantial number of bands diminished with sera absortion with trypomastigotes, but not with epimastigotes. Proteins of 61-70, 41-50, 31-40 and 21-30 kDa were the major proteins involved in the process of serum absorptions. After chemotherapy, protein bands of 121-130, 91-100, 81-90 and 51-60 kDa disappeared in unabsorbed sera. A group of female A/Sn mice were immunized with hemolymph free of hemocytes (MHL) and other group with hemocytes (MHC). Animais were challenged with 5x102 bloodstream trypomastigotes (Y strain). Parasitemia peaks of MHL and MHC groups were observed one or two days after the control group. In spite of the parasitemia for both groups was about 63% lower than the control group, the mortality for the MHL was 43%, differing from the MHC, which was 14% only. The Cytokines, IFNγ and TNFα, were shown to be involved in the protection of immunized mice, and also the nitric oxide and complement dependent lytic antibodies. Hemocytes showed to play a role in the reduction of the IL-10 production, inhibiting Th2 response. Thus, hemocytes and trypomastigotes share common epitopes, and these epitopes are potentially useful for immunodiagnosis, immunopratection, and evaluation of chemotherapic efficiency in Chagas\' disease control.
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Neurocisticercose humana: pesquisa de antígenos em amostras de líquido cefalorraquiano / Neurocysticercosis human antigens research in cerebrospinal fluid samples

Pardini, Alessandra Xavier 23 June 2004 (has links)
A detecção de antígenos em amostras de líquido cefalorraquiano (LCR) de pacientes com neurocisticercose (NC) foi realizada empregando-se o teste ELISA com soros policlonais de coelhos imunizados com os antígenos total de Taenia solium (T-Tso), líquido vesicular de Taenia crassiceps (LV-Tcra) e peptídeos <30kDa de LV-Tcra. Os soros policlonais foram fracionados para a obtenção da fração IgG - IgG anti-Tso, IgG antiTcra e IgG anti-Tcra<30kDa. Também foi empregado o anticorpo monoclonal específico para o antígeno de excreção e secreção de Taenia crassiceps (ES-Tcra). A seleção dos clones foi realizada por ELISA empregando-se os antígenos T-Tso e LV-Tcra. Foram analisados diferentes grupos de amostras divididos em: grupo de pacientes com NC (grupo NC), incluindo pacientes em diferentes fases evolutivas da doença, grupo de pacientes \"suspeito\" de NC (grupo \"suspeito\" NC), grupo controle (grupo C) e grupo de outros patologias (grupo OP). No teste ELISA empregando-se as frações IgG anti-Tso, IgG anti-Tcra e IgG anti-Tcra<30kDa, a sensibilidade obtida foi de 70%, 82,5% e 95,8% e a especificidade de 82,5%, 98% e 100%, respectivamente nas amostras do grupo NC e grupo C. Nas amostras do grupo diferentes fases evolutivas da doença, não houve diferença significativa de reatividade entre as amostras com as frações empregadas. Para as 21 amostras do grupo NC - fase ativa da doença, com a fração IgG anti-Tcra e o anticorpo monoclonal anti-ES-Tcra, respectivamente, 13 e 16 amostras foram positivas para a pesquisa de antígenos. As amostras de LCR do grupo C não apresentaram reatividade com os anticorpos empregados nos ensaios. Também foram ensaiadas 68 amostras de LCR de pacientes com \"suspeita\" de NC. De acordo com as características citoprotéicas além da reatividade para a pesquisa de anticorpos anti-T solium, as amostras de LCR apresentaram, neste grupo, padrão de reatividade para a pesquisa de antígenos que variou também de acordo com a presença de anticorpos, além das alterações de proteína e/ou células, que as amostras apresentavam ou não. Frações de 14 e 18kDa foram identificadas pelo teste imunoblot somente nas amostras de LCR de pacientes com NC utilizando as frações IgG anti-Tso, IgG anti-Tcra e anticorpo monoclonal anti-ES-Tcra. O anticorpo monoclonal anti-ES-Tcra mostrou-se eficiente para a pesquisa de antígenos no teste de competição por ELISA nas amostras de LCR de pacientes com NC e o antígeno ES-Tcra. / Antigen detection in cerebrospinal fluid (CSF) samples of patients with neurocysticercosis (NC) was performed through ELISA test using rabbits polyclonal sera immune with total antigens of Taenia solium (T-Tso) cysticercus, vesicular liquid of Taenia crassiceps (VL-Tcra) and vesicular liquid peptides (VLP-Tcra<30kDa) cysticercus. The polyclonal sera were separated obtaining IgG-lgG anti-Tso, IgG anti-Tcra and IgG anti-Tcra<30kDa fractions. A specific monoclonal antibody was also applied for reaching the excretion and secretion antigen of the T. crassiceps (ES-Tcra) larvae culture. Clones selection was performed through Elisa test applying the T-Tso and VL-Tcra antigens. When IgG anti-Tso, IgG anti-Tcra and IgG anti-Tcra<30kDa fractions were applied in the ELISA test, the accuracy obtained was 70%, 82,5% and 95,8% and the specificity of 82,5%, 98% and 100%, respectively, in samples of both NC and C groups. In the samples of the group in different stages of the disease there was no significant difference on reactivity between the samples when the fractions were applied. For the 21 samples of the NC group - active stage of the disease with IgG anti-Tcra fraction and the anti-ES-Tcra monoclonal antibody respectively, 13 and 16 samples were positive for antigen analyses. The CSF samples of the C group did not present reactivity with the antibodies applied in the tests. Tests for 68 CSF samples of \"suspected\" NC group, were also conducted. According to the cytoproteic characteristics besides the reactivity for the anti-T. solium antibody study, the CSF samples of this group showed standard reactivity for antigen detection ranging also in accordance with the presence of antibodies and of the protein and/or cell alterations that the samples would or not present. Fractions of 14 and 18kDa were identified by immunoblot test only in the CSF samples of patients with NC using the IgG anti-Tso IgG anti-Tcra fractions and the anti-ES-Tcra monoclonal antibody. The anti-ES-Tcra monoclonal antibody has shown to be efficient for analyzing antigens by a comparing method of the ELISA test in CSF samples of patients with NC and the ES-Tcra antigen.
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Neurocisticercose humana: pesquisa de antígenos em amostras de líquido cefalorraquiano / Neurocysticercosis human antigens research in cerebrospinal fluid samples

Alessandra Xavier Pardini 23 June 2004 (has links)
A detecção de antígenos em amostras de líquido cefalorraquiano (LCR) de pacientes com neurocisticercose (NC) foi realizada empregando-se o teste ELISA com soros policlonais de coelhos imunizados com os antígenos total de Taenia solium (T-Tso), líquido vesicular de Taenia crassiceps (LV-Tcra) e peptídeos <30kDa de LV-Tcra. Os soros policlonais foram fracionados para a obtenção da fração IgG - IgG anti-Tso, IgG antiTcra e IgG anti-Tcra<30kDa. Também foi empregado o anticorpo monoclonal específico para o antígeno de excreção e secreção de Taenia crassiceps (ES-Tcra). A seleção dos clones foi realizada por ELISA empregando-se os antígenos T-Tso e LV-Tcra. Foram analisados diferentes grupos de amostras divididos em: grupo de pacientes com NC (grupo NC), incluindo pacientes em diferentes fases evolutivas da doença, grupo de pacientes \"suspeito\" de NC (grupo \"suspeito\" NC), grupo controle (grupo C) e grupo de outros patologias (grupo OP). No teste ELISA empregando-se as frações IgG anti-Tso, IgG anti-Tcra e IgG anti-Tcra<30kDa, a sensibilidade obtida foi de 70%, 82,5% e 95,8% e a especificidade de 82,5%, 98% e 100%, respectivamente nas amostras do grupo NC e grupo C. Nas amostras do grupo diferentes fases evolutivas da doença, não houve diferença significativa de reatividade entre as amostras com as frações empregadas. Para as 21 amostras do grupo NC - fase ativa da doença, com a fração IgG anti-Tcra e o anticorpo monoclonal anti-ES-Tcra, respectivamente, 13 e 16 amostras foram positivas para a pesquisa de antígenos. As amostras de LCR do grupo C não apresentaram reatividade com os anticorpos empregados nos ensaios. Também foram ensaiadas 68 amostras de LCR de pacientes com \"suspeita\" de NC. De acordo com as características citoprotéicas além da reatividade para a pesquisa de anticorpos anti-T solium, as amostras de LCR apresentaram, neste grupo, padrão de reatividade para a pesquisa de antígenos que variou também de acordo com a presença de anticorpos, além das alterações de proteína e/ou células, que as amostras apresentavam ou não. Frações de 14 e 18kDa foram identificadas pelo teste imunoblot somente nas amostras de LCR de pacientes com NC utilizando as frações IgG anti-Tso, IgG anti-Tcra e anticorpo monoclonal anti-ES-Tcra. O anticorpo monoclonal anti-ES-Tcra mostrou-se eficiente para a pesquisa de antígenos no teste de competição por ELISA nas amostras de LCR de pacientes com NC e o antígeno ES-Tcra. / Antigen detection in cerebrospinal fluid (CSF) samples of patients with neurocysticercosis (NC) was performed through ELISA test using rabbits polyclonal sera immune with total antigens of Taenia solium (T-Tso) cysticercus, vesicular liquid of Taenia crassiceps (VL-Tcra) and vesicular liquid peptides (VLP-Tcra<30kDa) cysticercus. The polyclonal sera were separated obtaining IgG-lgG anti-Tso, IgG anti-Tcra and IgG anti-Tcra<30kDa fractions. A specific monoclonal antibody was also applied for reaching the excretion and secretion antigen of the T. crassiceps (ES-Tcra) larvae culture. Clones selection was performed through Elisa test applying the T-Tso and VL-Tcra antigens. When IgG anti-Tso, IgG anti-Tcra and IgG anti-Tcra<30kDa fractions were applied in the ELISA test, the accuracy obtained was 70%, 82,5% and 95,8% and the specificity of 82,5%, 98% and 100%, respectively, in samples of both NC and C groups. In the samples of the group in different stages of the disease there was no significant difference on reactivity between the samples when the fractions were applied. For the 21 samples of the NC group - active stage of the disease with IgG anti-Tcra fraction and the anti-ES-Tcra monoclonal antibody respectively, 13 and 16 samples were positive for antigen analyses. The CSF samples of the C group did not present reactivity with the antibodies applied in the tests. Tests for 68 CSF samples of \"suspected\" NC group, were also conducted. According to the cytoproteic characteristics besides the reactivity for the anti-T. solium antibody study, the CSF samples of this group showed standard reactivity for antigen detection ranging also in accordance with the presence of antibodies and of the protein and/or cell alterations that the samples would or not present. Fractions of 14 and 18kDa were identified by immunoblot test only in the CSF samples of patients with NC using the IgG anti-Tso IgG anti-Tcra fractions and the anti-ES-Tcra monoclonal antibody. The anti-ES-Tcra monoclonal antibody has shown to be efficient for analyzing antigens by a comparing method of the ELISA test in CSF samples of patients with NC and the ES-Tcra antigen.
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Reatividade específica e cruzada de antígenos de Echinococcus granulosus e Taenia crassiceps utilizando amostras de pacientes com hidatidose e neurocisticercose / Specific and cross reactivity of Echinococcus Granulosus and Taenia Crassiceps antigens using samples from patients with hydatidosis and neurocysticercosis

Silva, Fabiana Érica Vilanova da 12 December 2007 (has links)
Os estudos de reatividade dos antígenos de líquido hidático de Echinococcus granulosus (Ag LH-Eg) e de líquido vesicular de Taenia crassiceps (Ag LV-Tcra) foram feitos com anticorpos monoclonais (AcMos) anti-E. granulosus e anti-T. crassiceps e amostras humanas por eletroforese em gel de poliacrilamida contendo dodecil sulfato de sódio (SDS-PAGE), Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) e immunoblot. O SDS-PAGE mostrou um padrão complexo de proteínas entre 97- e 8-kDa do LH-Eg e 97- e 14-kDa do LV-Tcra. A caracterização dos antígenos com os AcMos por ELISA mostrou que todos os AcMoss anti-E . granulosus reagiram com o antígeno LH-Eg e um deles cruzada mente com o antígeno LV-Tcra. Um dos dois AcMo anti-T . crassiceps reagiu também com o LH-¬Eg. A reatividade do LH-Eg com amostras humanas apresentaram melhores resultados com o cut off média mais dois devios-padrão (M+2DP) e na diluição 1:250. As amostras de hidatidose (Hi) mostraram reatividade máxima (100%) nessa diluição. As amostras neurocisticercose (NC) ensaiadas por ELlSA-LH-Eg, apresentaram reatividade cruzada de 66,5%, teníase (T) 46%, controle negativo (CN) 4% e outras parasitoses (OP) 84,5%. O ELlSA-LV-Tcra mostrou 100% de reatividade com as amostras NC na diluição 1 :50 pelo cut off TgRoc. Com as amostras hidatidose, teníase, outras parasitoses e controle negativo a reatividade foi de 73,5; 61,5; 69 e 2%, respectivamente. Todos os AcMos anti-LH-Eg reconheceram as frações 79-,67- e 8-kDa do Ag LH-Eg e as de 24- e 16-kDa pelo AcMo anti¬-antígeno rAgB. No immunoblot, as amostras humanas reconheceram as frações 79-, 67-, 57-, 43-, 38-kDa e também as específicas (24-, 16-e 8-kDa) para o diagnóstico da hidatidose. As frações responsáveis pela reatividade cruzada foram 79-, 67-e 57¬kDa. Nossos estudos mostraram que é necessária uma melhor abordagem incluindo em estudos futuros a obtenção de antígenos recombinantes, específicos de cada um dos parasitos. / Studies to evaluate the reactivity of the hydatic liquid antigens of Echinococcus granulosus (Ag LH-Eg) and of the vesicular liquid antigens of Taenia crassiceps (Ag LV-Tcra) were conducted using anti-E. granulosus and anti-T . crassiceps monoclonal antibodies (MoAbs), and human sample, through SDS-PAGE, ELISA and immunoblot tests. The SDS-PAGE showed a complex standard of proteins from 97¬to 8-kDa of the LH-Eg and from 97-to 14-kDa of the LV-Tcra. The characterization of antigens with the MoAbs through ELISA showed that ali the anti-E . granulosus MoAbs reacted with the LH-Eg antigen and one of them cross-reacted with the LV¬-Tcra antigen. One of the two anti-T. crassiceps MoAb also reacted with the LH-Eg antigen. The reactivity of the LH-Eg with human samples presented better results with the cut off value representing the mean value plus two standard deviations (M+2DP) and with a dilution of 1:250. The hydatidosis samples (Hi) showed maximum reactivity (100%) with this dilution. When evaluated by the ELlSA-LH-Eg, the neurocysticercosis samples (NC) showed cross-reactivity of 66,5%, the taeniasis (T) showed 46%, the negative control (CN) of 4% and 84,5% for other parasitoses (OP). The NC samples, diluted at 1:50, showed 100% of reactivity in ELlSA-LV-Tcra test with the TgRoc cut off value. Concerning the samples of hydatidosis, taeniasis, other parasitoses and the negative control, reactivity was 73,5; 61,5; 69 and 2%, respectively. Ali the anti-LH-Eg MoAbs recognized the fractions 79- and 67-kDa of the Ag LH-Eg and the 24-and 16-kDa through the rAgB anti-antigen MoAb. By immunoblot, the human samples recognized the fractions 79-, 67-, 57-, 43-, 38-kDa and also the specific ones (24-, 16-and 8-kDa) for diagnosing hydatidosis. The fractions, responsible for the cross-reactivity, were 79-, 67-and 57-kDa. Our study showed that further approaches are needed and should include the obtaining of recombinant antigens, specific for each parasite.
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Reatividade específica e cruzada de antígenos de Echinococcus granulosus e Taenia crassiceps utilizando amostras de pacientes com hidatidose e neurocisticercose / Specific and cross reactivity of Echinococcus Granulosus and Taenia Crassiceps antigens using samples from patients with hydatidosis and neurocysticercosis

Fabiana Érica Vilanova da Silva 12 December 2007 (has links)
Os estudos de reatividade dos antígenos de líquido hidático de Echinococcus granulosus (Ag LH-Eg) e de líquido vesicular de Taenia crassiceps (Ag LV-Tcra) foram feitos com anticorpos monoclonais (AcMos) anti-E. granulosus e anti-T. crassiceps e amostras humanas por eletroforese em gel de poliacrilamida contendo dodecil sulfato de sódio (SDS-PAGE), Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) e immunoblot. O SDS-PAGE mostrou um padrão complexo de proteínas entre 97- e 8-kDa do LH-Eg e 97- e 14-kDa do LV-Tcra. A caracterização dos antígenos com os AcMos por ELISA mostrou que todos os AcMoss anti-E . granulosus reagiram com o antígeno LH-Eg e um deles cruzada mente com o antígeno LV-Tcra. Um dos dois AcMo anti-T . crassiceps reagiu também com o LH-¬Eg. A reatividade do LH-Eg com amostras humanas apresentaram melhores resultados com o cut off média mais dois devios-padrão (M+2DP) e na diluição 1:250. As amostras de hidatidose (Hi) mostraram reatividade máxima (100%) nessa diluição. As amostras neurocisticercose (NC) ensaiadas por ELlSA-LH-Eg, apresentaram reatividade cruzada de 66,5%, teníase (T) 46%, controle negativo (CN) 4% e outras parasitoses (OP) 84,5%. O ELlSA-LV-Tcra mostrou 100% de reatividade com as amostras NC na diluição 1 :50 pelo cut off TgRoc. Com as amostras hidatidose, teníase, outras parasitoses e controle negativo a reatividade foi de 73,5; 61,5; 69 e 2%, respectivamente. Todos os AcMos anti-LH-Eg reconheceram as frações 79-,67- e 8-kDa do Ag LH-Eg e as de 24- e 16-kDa pelo AcMo anti¬-antígeno rAgB. No immunoblot, as amostras humanas reconheceram as frações 79-, 67-, 57-, 43-, 38-kDa e também as específicas (24-, 16-e 8-kDa) para o diagnóstico da hidatidose. As frações responsáveis pela reatividade cruzada foram 79-, 67-e 57¬kDa. Nossos estudos mostraram que é necessária uma melhor abordagem incluindo em estudos futuros a obtenção de antígenos recombinantes, específicos de cada um dos parasitos. / Studies to evaluate the reactivity of the hydatic liquid antigens of Echinococcus granulosus (Ag LH-Eg) and of the vesicular liquid antigens of Taenia crassiceps (Ag LV-Tcra) were conducted using anti-E. granulosus and anti-T . crassiceps monoclonal antibodies (MoAbs), and human sample, through SDS-PAGE, ELISA and immunoblot tests. The SDS-PAGE showed a complex standard of proteins from 97¬to 8-kDa of the LH-Eg and from 97-to 14-kDa of the LV-Tcra. The characterization of antigens with the MoAbs through ELISA showed that ali the anti-E . granulosus MoAbs reacted with the LH-Eg antigen and one of them cross-reacted with the LV¬-Tcra antigen. One of the two anti-T. crassiceps MoAb also reacted with the LH-Eg antigen. The reactivity of the LH-Eg with human samples presented better results with the cut off value representing the mean value plus two standard deviations (M+2DP) and with a dilution of 1:250. The hydatidosis samples (Hi) showed maximum reactivity (100%) with this dilution. When evaluated by the ELlSA-LH-Eg, the neurocysticercosis samples (NC) showed cross-reactivity of 66,5%, the taeniasis (T) showed 46%, the negative control (CN) of 4% and 84,5% for other parasitoses (OP). The NC samples, diluted at 1:50, showed 100% of reactivity in ELlSA-LV-Tcra test with the TgRoc cut off value. Concerning the samples of hydatidosis, taeniasis, other parasitoses and the negative control, reactivity was 73,5; 61,5; 69 and 2%, respectively. Ali the anti-LH-Eg MoAbs recognized the fractions 79- and 67-kDa of the Ag LH-Eg and the 24-and 16-kDa through the rAgB anti-antigen MoAb. By immunoblot, the human samples recognized the fractions 79-, 67-, 57-, 43-, 38-kDa and also the specific ones (24-, 16-and 8-kDa) for diagnosing hydatidosis. The fractions, responsible for the cross-reactivity, were 79-, 67-and 57-kDa. Our study showed that further approaches are needed and should include the obtaining of recombinant antigens, specific for each parasite.

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