As células derivadas de fígado embrionário tanto de animais quanto de humanos tem sido cada vez mais estudas devido ao seu potencial antiinflamatório, imunomodulador e regenerativo, demonstrado as mesmas bipotencial de diferenciação em hepatócitos e colangiocitos. Na presente pesquisa utilizou-se células derivadas de fígados embrionários de ratos com 14,5 dias de gestação. As células apresentaram marcadores de células progenitoras hepáticas, bem como marcadores de células hepáticas e biliares diferenciadas confirmando, seu bipotencial. A terapia celular utilizando as células supracitadas, reduziu significativamente a progressão da fibrose hepática, diminuindo a inflamação e ainda estimulando a regeneração hepática de ratos submetidos à cirrose por ligadura do ducto biliar. As análises realizadas mediante avaliação quantitativa pela técnica de morfometria, demonstraram redução da deposição de fibras de colágeno, bem como menor proliferação de ductos biliares nos animais tratados. Os resultados foram ainda complementados por analise semiquantitativa, a qual avaliou a intensidade da necroinflamação dos tecidos hepáticos analisados, apontando menor escore de inflamação dos animais tratados. As células poderão ter efeito benéfico para o tratamento de doenças hepáticas crônicas, que estimulam a formação de fibrose. A cirrose é o estágio final comum à doenças hepáticas crônicas por causadas por fatores de diversas etiologias. Esta ocupa a decima quarta causa mundial de mortalidade em humanos, sendo que o único tratamento definitivo atualmente é transplante do órgão. Entretanto o número de transplantes está longe de suprir a demanda atual, visto que há um déficit de doadores do órgão. Terapias que possam oferecer uma alternativa de tratamento confiável, segura e acessível são bastante oportunas. Nossos resultados sugerem que as células utilizadas neste trabalho podem modular a fibrogênese, e consequentemente retardar o estabelecimento da cirrose em doenças hepáticas crônicas. / Studies on human and animal embryonic liver stem cells have been growing due to its anti-inflammatory, immunomodulatory and regenerative potential. These cells show also a bipotential do differentiate into hepatocytes and cholangiocytes. In the present study, it was used rodent embryonic liver with 14.5 of gestation. The cells presented hepatic progenitor, as well adult hepatic and biliary cells markers, confirming their bipotential. Previous studies with these cells in therapy decreased hepatic fibrosis progression in rat models submitted to cirrhosis by biliary duct ligation. Quantitative analysis was performed by morphometry showed decreased collagen fibers deposition and lower proliferation of biliary ducts in treated animals. Results were complemented with semiquantitative analysis with evaluation of necroinflammation of the analyzed hepatic tissues, in which a decreased inflammation score was observed. Cirrhosis is a common final stage for chronic hepatic diseases caused by different factors in several etiologies. It occupies the 14th world cause of mortality in human. However, the number of liver transplants is insufficient for current demand, caused by deficit in organs donors. Therapies that could offer an alternative for a reliable, safe and accessible treatment is opportune. Our results suggest that cells used in this study can modulate fibrogenesis and consequently delay the establishment of cirrhosis in chronic liver diseases.

Submitted by isabela.moljf@hotmail.com (isabela.moljf@hotmail.com) on 2017-05-12T13:37:04Z No. of bitstreams: 1 pedroluizrodriguesguedes.pdf: 3448334 bytes, checksum: 3bac263ee478fd60c02c5d6036a0e81e (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2017-05-12T15:44:09Z (GMT) No. of bitstreams: 1 pedroluizrodriguesguedes.pdf: 3448334 bytes, checksum: 3bac263ee478fd60c02c5d6036a0e81e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-12T15:44:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 pedroluizrodriguesguedes.pdf: 3448334 bytes, checksum: 3bac263ee478fd60c02c5d6036a0e81e (MD5) Previous issue date: 2013-07-30 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Condroitim sulfato (CS) é um glicosaminoglicano (GAG), presente na matriz extracelular (MEC) de vários tecidos de mamíferos, utilizado para o tratamento da osteoartrite e, recentemente, tem despertado grande interesse devido ao seu potencial anti-inflamatório. Vários modelos experimentais in vivo de inflamação são empregados para o estudo da atividade anti-inflamatória, entre eles o modelo de fibrose induzida por colestase extra-hepática. A colestase produz lesão hepatocelular com edema do trato portal, infiltrado leucocitário, proliferação de células epiteliais biliares e fibrose do trato portal. O objetivo deste trabalho foi analisar os efeitos do CS no modelo de colestase extra-hepática emperimental induzido por laqueadura do ducto biliar (BDL) em ratos Wistar. Para isso foram utilizados animais (n = 82) de 6 a 8 semanas de idade eutanasiados 2, 7 ou 14 dias após o procedimento cirúrgico divididos nos grupos: BDL, BDL tratado com CS, Sham e Sham tratado com CS. Foram avaliados peso corporal e do fígado dos animais, concentrações séricas de bilirrubina direta (BD), globulinas, atividades de gama glutamil transpeptidase (Gama GT), fosfatase alcalina (FA), alanina transaminase (ALT) e aspartato transaminase (AST), alterações morfológicas no tecido, atividade de mieloperoxidase (MPO), atividade de metaloproteases (MMP-9, MMP-2 e pró MMP-2) e conteúdo de GAGs no fígado dos animais, além da análise histopatológica do tecido hepático. O CS obtido para a realização do trabalho apresentou teores superiores a 92%, com peso molecular de aproximadamente 40 kDa e um conteúdo dissacarídico com predominância de Δdi4S (65%). BDL gerou vários sintomas relacionados à lesão celular e ao processo inflamatório como aumento dos níveis séricos de BD e globulinas, aumento das atividades de Gama GT, FA, ALT e AST, infiltrado inflamatório e modificação morfométrica, com proliferação ductular, e na MEC do fígado dos animais induzidos. CS levou a redução do aumento inicial das transaminases indicando proteção dos tecidos lesados no procedimento cirúrgico. O tratamento levou à redução do infiltrado inflamatório no tecido, expresso pela diminuição significativa da atividade de MPO no homogenato. A remodelação tecidual também foi reduzida, havendo diminuição da atividade de MMP-9, pró MMP-2 e MMP-2 e ainda dos níveis dos GAGs dermatam sulfato e heparam sulfato presentes, produzidos por células estreladas em resposta ao dano no tecido. Estes resultados mostram que o CS reduziu os efeitos da lesão hepática do modelo e foi capaz de retardar a fibrogênese hepática. / Chondroitin sulfate (CS) is a glycosaminoglycan (GAG) present in the extracellular matrix (ECM) of many mammalian tissue, used for osteoarthritis treatment and, recently, has aroused great interest due to its anti-inflammatory potential. Several in vivo inflammation experimental models are employed to study anti-inflammatory activity, including extra-hepatic cholestasis induced fibrosis. Cholestasis produces hepatocellular injury with portal tract edema, leukocyte infiltration, biliary epithelial cells proliferation and portal tract fibrosis. The aim of this work was to analyze CS effects on an extra-hepatic cholestasis experimental model induced by bile duct ligation (BDL) on Wistar rats. For this purpose 6 to 8 weeks old animals (n = 82) were euthanized 2, 7 or 14 days after surgical procedure, previously divided into groups: BDL, CS treated BDL, Sham, CS treated Sham. To analyze disease evolution body and liver weight, serum concentrations of direct bilirubin (BD), globulins, activities of gamma glutamyl transferase (Gama GT), alkaline phosphatase (FA), alanine and aspartate aminotransferases (ALT and AST), morphological changes on tissue, mieloperoxidase (MPO) activity, matrix metalloproteinases (MMP-9, pró MMP-2 and MMP-2) activities and liver GAGs content, besides histopathological analysis of the tissue. CS acquired presented over 92% tenor, molecular weight of approximately 40 kDa and disaccharide content of Δdi4S predominantly (65%).BDL caused many symptoms related to cellular damage and inflammatory process such as increasing BD and globulins, elevation of Gama GT, FA, ALT and AST activities, inflammatory infiltrate and changes on liver morphometry, with ductular proliferation, and on the ECM. CS reduced initial burst on aminotransferases, indicating protection of tissues injured on surgery procedure. Treatment led to reduction of inflammatory infiltrate, showed by significant decreasing on MPO activity. Tissue remodeling was also reduced, with decrease of MMP-9, pro MMP-2 and MMP-2 activities and also of GAGs dermatam sulfate and heparam sulfate levels, produced by hepatic stellate cells in response of tissue damage. These results show that CS reduced cholestasis hepatic injury effects, being capable to slow down liver fibrogenesis.

Submitted by Verônica Esteves (vevenesteves@gmail.com) on 2018-01-11T14:41:24Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese Orlando Siqueira.pdf: 2924925 bytes, checksum: c32bce21e6c777f33da53c373787cb05 (MD5) / Approved for entry into archive by Verônica Esteves (vevenesteves@gmail.com) on 2018-01-11T14:41:40Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese Orlando Siqueira.pdf: 2924925 bytes, checksum: c32bce21e6c777f33da53c373787cb05 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-01-11T14:41:40Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese Orlando Siqueira.pdf: 2924925 bytes, checksum: c32bce21e6c777f33da53c373787cb05 (MD5) Previous issue date: 2017 / Universidade Federal Fluminense. Hospital Universitário Antônio Pdro / Introdução: A anastomose término-terminal no tratamento da lesão das vias biliares durante a colecistectomia laparoscópica tem sido associada à formação de estenose. O objetivo deste estudo foi investigar experimentalmente o efeito do tratamento oral com tamoxifeno (tmx) sobre a fibrose, o colágeno e o transforming growth factor TGF-β1, - β2 e - β3 na anastomose da via biliar principal de porcos. Métodos: Vinte e seis porcos foram divididos em três grupos [sham (n = 8), controle (n = 9) e tmx (n = 9)]. Os ductos biliares foram seccionados e anastomosados nos grupos controle e tmx. Tmx (40 mg / dia) foi administrado oralmente ao grupo tmx, e os animais foram eutanasiados após 60 dias. A fibrose foi analisada pela coloração com tricromo de Masson. Picrosirius red foi utilizado para quantificar o teor total de colágeno e a proporção de colágeno tipo I / III. A expressão de mRNA do TGF-β1, -β2 e - β3 foi quantificada usando a reação em cadeia da polimerase em tempo real (qRT-PCR). Resultados: Os grupos de controle e estudo apresentaram fibrose maior do que o grupo sham, e o grupo de estudo apresentou fibrose menor do que o grupo controle (p = 0,011). Os grupos controle e tmx apresentaram maior teor total de colágeno do que o grupo sham (p = 0,003) e não houve diferença significativa entre os grupos controle e tmx. A proporção de colágeno tipo I / III foi maior no grupo controle do que nos grupos sham e tmx (p = 0,015) e não houve diferença significativa entre os grupos sham e tmx. Não houve diferenças significativas na expressão de mRNA de TGF-β1, -β2 e -β3 entre os grupos (p> 0,05). Conclusões: Tmx diminuiu a fibrose e impediu a alteração na proporção de colágeno tipo I / III causada pelo procedimento. / Introduction: End-to-end anastomosis in the treatment of bile duct injury during laparoscopic cholecystectomy has been associated with the formation of stenosis. The aim of this study was to experimentally investigate the effect of oral treatment with tamoxifen (tmx) on fibrosis, collagen and transforming growth factor TGF-β1, - β2 and – β3 on anastomosis of the common bile duct in pigs. Methods: Twenty-six pigs were divided into three groups (sham (n = 8), control (n = 9) and tmx (n = 9)). The bile ducts were sectioned and anastomosed in the control and tmx groups. Tmx (40 mg / day) was administered orally to the tmx group, and the animals were euthanized after 60 days. Fibrosis was analyzed by Masson's trichrome staining. Picrosirius red was used to quantify the total collagen content and the proportion of collagen type I / III. Expression of TGF-β1, -β2 and -β3 mRNA was quantified using the real-time polymerase chain reaction (qRT-PCR). Results: The control and study groups presented higher fibrosis than the sham group, and the study group had lower fibrosis than the control group (p = 0.011). The control and tmx groups presented higher total collagen content than the sham group (p = 0.003) and there was no significant difference between the control and tmx groups. The proportion of type I / III collagen was higher in the control group than in the sham and tmx groups (p = 0.015) and there was no significant difference between the sham and tmx groups. There were no significant differences in TGF-β1, -β2 and -β3 mRNA expression between the groups (p> 0.05). Conclusions: Tmx decreased fibrosis and prevented the change in the proportion of collagen type I / III caused by the procedure.