Made available in DSpace on 2016-04-01T17:54:51Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-07-31. Added 1 bitstream(s) on 2016-04-01T18:00:34Z : No. of bitstreams: 1 000860768.pdf: 1686526 bytes, checksum: 979e2944f4a6b89a46fd9bb6b0302204 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O objetivo deste estudo foi avaliar a função da via de sinalização Wnt/β- catenina através dos receptores LRP6 e Frizzled6 na diferenciação de células-tronco de polpa dental de dentes permanentes (DPSC) em células endoteliais. DPSC foram transduzidas com marcadores eGFP e vetores lentivirais shRNA (LRP6, Frizzled6 ou vetor vazio - controle) para os experimentos. Os testes in vitro avaliaram a expressão de GSK3-β e β- catenina por western blot na presença de rhWnt1 e rhVEGF165 e de VEGF e CXCL-8 (IL-8) por ELISA. A expressão de marcadores endoteliais (western blot e PCR) e formação de túbulos capilares foram analisados após a diferenciação endotelial das DPSCs. In vivo, fatias dentárias/matrizes condutivas semeadas com DPSCs-shRNA foram implantadas em subcutâneo de dorso de camundongos imunodeprimidos por 28 dias e o número de vasos sanguíneos foi determinado por imunohistoquímica para eGFP e coloração por HE. β-catenina ativa foi mais expressa em shRNA-LRP6 e shRNA-Frizzled6 que nas células controle, e sua expressão aumentou com a suplementação com rhVEGF165 e rhWnt1. A expressão de GSK3-β fosforilado foi menor, porém também aumenta ou permanece estável com rhVEGF165 ou rhWnt1. Quanto à expressão de VEGF, em shRNA-Frizzled6 foi maior que nas células controle e em shRNA-LRP6 (p<0,05), enquanto que a expressão de IL8 foi menor em shRNA-LRP6, diferindo estatisticamente das outras células. A expressão dos marcadores endoteliais CD31 e VEGFR2 diminuiu nas células shRNA-LRP6, enquanto que em shRNAFrizzled6 a expressão de VEGFR2 foi aumentada. A formação de túbulos capilares de shRNA-Frizzled6 e shRNA-LRP6 foi menor quando comparado ao controle, porém shRNA-Frizzled6 obteve uma tendência de aumento na proliferação de capilares em 144h. In vivo, DPSC-shRNALRP6 apresentou menor número de capilares formados quando comparados com as outras duas... / The aim of this study was to evaluate the function of Wnt/β-catenin signaling through LRP-6 and Frizzled-6 receptors in the differentiation of dental pulp stem cells from permanent teeth (DPSC) into endothelial cells. DPSC were transduced with EGFP-tagged lentiviral shRNA vectors (LRP6, Frizzled6 or empty vector - control) for experiments. In vitro assay evaluated GSK3-β and β-catenin expression by western blot in rhWnt1 and rhVEGF165 presence, and VEGF and CXCL-8 (IL-8) expression by ELISA. Endothelial markers expression (western blot and PCR) and tube formation were analyzed after endothelial differentiation of DPSCs. In vivo, tooth slices/scaffolds seeded with transduced DPSCs were implanted subcutaneously in back of immunodefficient mice and blood vessels were counted per immunohistochemistry for eGFP and HE staining. Active β- catenin was more expressed in shRNA-LRP6 and shRNA-Frizzled6 than in control cells, and increased with rhVEGF165 and rhWnt1 supplementation. Phosphorylated GSK3-β expression was lower, however also increased or maintained with rhVEGF165 or rhWnt1. VEGF expression was higher in shRNA-Frizzled6 than in control and shRNA-LRP6 (p<0,05), IL8 expression was lower in shRNA-LRP6, with statistically difference of the others cells. Endothelial markers CD31 and VEGFR2 expression decreased in shRNA-LRP6, but VEGFR2 expression increased in shRNAFrizzled6. shRNA-Frizzled6 and shRNA-LRP6 tube formation was lower when compared to control, however shRNA-Frizzled6 had tendency to increase proliferation in 144h. In vivo, shRNA-LRP6 showed fewer blood vessels formed than other cells (p<0,05). Collectively, the results of this study suggest that Wnt/β-catenin signaling regulates endothelial differentiation of DPSC through LRP6

Made available in DSpace on 2016-06-07T17:12:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-06-24. Added 1 bitstream(s) on 2016-06-07T17:16:52Z : No. of bitstreams: 1 000860334.pdf: 6389809 bytes, checksum: 30c9e72299bc6974c576c11090b390a0 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Tendo em vista o desafio do tratamento de injúrias traqueais e o progresso na produção desse órgão por técnicas de engenharia de tecidos, faz com que o interesse nessa área cresça de forma considerável, já que ainda não há um tratamento padrão descrito na literatura acerca das lesões traqueais que acometem 50% do comprimento total do órgão de um adulto ou 30% da traqueia de uma criança. Assim, este estudo tem como objetivo a construção de modelo de traqueia para enxerto utilizando técnicas de engenharia de tecidos. Para tanto, foram realizados cinco e 10 ciclos de descelularização nas traqueias de coelhos doadores seguindo etapas: congelamento/descongelamento sem adição de nenhum crioprotetor, banho ultrassônico no aparelho Ultrasonic cleaner (Unique model USC 1400®) na frequência de 40 Khz durante 10 minutos, irradiação utilizando diodo de emissão de luz (LED) azul com comprimento de onda de 450nm ± 20nm na dose de 90 J/cm2 totalizando 60 minutos de exposição, adição do detergente deoxicolato de sódio a 4% sob agitação a 180 rpm no C24 Incubator shaker (New Brunswick Scientific) durante 48 horas. Paralelamente, foram realizadas expansão e caracterização das células-tronco mesenquimais dos coelhos receptores com posterior diferenciação dessas células em condrócitos e células de músculo liso. Finalmente, foi realizada a recelularização das traqueias com aplicação das células-tronco mesenquimais, dos condrócitos e das células de músculo liso dos coelhos receptores nas superfícies externas dos arcabouços produzidos para os transplantes traqueais. Após cinco ciclos repetidos do protocolo de descelularização utilizado, ainda é possível observar células epiteliais respiratórias e condrócitos remanescentes nas traqueias dos coelhos doadores. Porém, a repetição de 10 ciclos do mesmo protocolo de descelularização remove completamente as células epiteliais respiratórias e reduz a... / There is no standard treatment yet described in the literature for tracheal lesions whose length is more than 50% in adults and a third of the trachea in small children. Given the challenge of tracheal injuries treatment and the organ generation progress by tissue engineering techniques the interest in this area is growing considerably. Thereby this study aims to produce tracheal model for graft using tissue engineering techniques. Were performed five and 10 cycles of decellularization on donor rabbit‟s tracheae following the steps: freezing/defreezing without addition of any cryoprotectant; sonication in Ultrasonic cleaner (Unique model USC 1400®) with 40 Khz for 10 minutes; blue light-emitting diode (LED) irradiation with wavelength of 450nm ± 20nm along a dose of 90 J/cm2 at a total exposure of 60 minutes; addition of sodium deoxicholate detergent 4% during 48 hours under 180 rpm agitation in the C24 Incubator Shaker (New Brunswick Scientific). Meanwhile, expansion and characterization of mesenchymal stem cells of rabbits' receptors were performed with subsequent differentiation of these cells into chondrocytes and smooth muscle cells. Finally, it was realized the tracheal recellularization by the application of the mesenchymal stem cells, chondrocytes and smooth muscle cells from receptors rabbits in the outer face of the produced scaffolds for tracheal transplantation. After five repeated cycles of decellularization protocol used, it is still possible to observe respiratory epithelial cells and chondrocytes remaining in the tracheae of the donor rabbits. However, after 10 cycles of the same decellularization protocol the respiratory epithelial cells are completely removed and the tracheal cartilage chondrocytes are reduced. Animals that have been transplanted with five cycles decellularized tracheae had died after 10-12 days due to rejection by the presence of donor rabbit‟s epithelial cells. Animals that have been ... / FAPESP: 2010/50155-2

Made available in DSpace on 2016-03-18T02:04:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000477768-Texto+Completo-0.pdf: 5976123 bytes, checksum: 9c877744ccee252f8823d2473ec77be8 (MD5) Previous issue date: 2015 / Peripheral nerve injuries are a common clinical problem and the development of new approaches to assist in its repair has been shown to be a growth area. The use of microstructured channels has been investigated, in order to promote cell growth guided by assisting in the damaged tissue recovery. Biocompatible and biodegradable materials can be applied for the construction of these devices by eliminating the need for a second procedure to remove the implant. This work proposes the preparation of microstructured film along channels aligned with polydimethylsiloxane (PDMS) and blends of polycaprolactone (PCL) and poly (lacticco- glycolic acid) (PLGA) for potential application in peripheral nerve regeneration. PDMS films were prepared by the method of mixing the solution with oligomers based curing agent. Blends of PCL (Mn = 80. 00) and PLGA (85:15) with different ratios of PCL / PLGA (100/0, 90/10, 80/20 and 70/30) were prepared by the solvent evaporation method. The mold used to produce the films consisted of channels with different widths (5, 10, 15 and 20 μm) and constant height (25 μm). The materials were characterized by Scanning Electron Microscopy (SEM), Infrared Spectroscopy Fourier Transform (ATR / FT-IR), thermal gravimetric analysis (TGA), Atomic Force Microscopy (AFM). To evaluate the degradation time of the films was carried out in vitro degradation test of PCL blends and PCL / PLGA observing weight loss 0. 4 to 9. 9% until 90 days testing. It was found that the addition of the PLGA PCL is an effective way to control the degradation rate of the blend and there is no significant difference in the degradation of flat and microstructured films. / Lesões no nervo periférico são um problema clínico comum e a construção de novos dispositivos para auxiliar no seu reparo tem se mostrado uma área em crescimento. A utilização de condutos microestruturados vem sendo investigada, com o objetivo de promover um crescimento celular guiado, auxiliando na recuperação do tecido lesado. Materiais biocompatíveis e biodegradáveis podem ser aplicados para a construção destes dispositivos eliminando a necessidade de um segundo procedimento para remoção do implante. Este trabalho propõe a preparação de filmes microestruturados com canais longitudinalmente alinhados de polidimetilsiloxano (PDMS) e blendas de policaprolactona (PCL) e poli(ácido lácticoco- glicólico) (PLGA) para potencial aplicação em regeneração de nervo periférico. Filmes de PDMS foram preparados pelo método de mistura da solução base de oligômeros com agente de cura. Blendas de PCL (Mn = 80,00) e PLGA (85:15) com diferentes razões de PCL/PLGA (100/0, 90/10, 80/20 e 70/30) foram preparadas pelo método de evaporação do solvente. O molde utilizado para produzir os filmes era constituído de canais com diferentes larguras (5, 10, 15 e 20 μm) e altura constante (25 μm). Os materiais foram caracterizados por Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV), Espectroscopia no Infravermelho por Transformada de Fourier (ATR/FT-IR), Análise termogravimétrica (TGA), Microscopia de Força Atômica (AFM). Para verificar o tempo de degradação dos filmes foi realizado ensaio de degradação in vitro das blendas de PCL e PCL/PLGA, observando-se perda de massa de 0,4-9,9 % até o período de 90 dias de ensaio. Constatou-se que a adição de PLGA ao PCL é uma forma efetiva de controlar a taxa de degradação das blendas e que não há diferença significativa entre a degradação dos filmes lisos e microestruturados.

Orientador: Cláudia Valéria Seullner Brandão / Coorientador: Lígia Souza Lima Silveira da Mota / Banca: Juliany Gomes Quitzan / Banca: Bruno Watanabe Minto / Resumo: As indicações para a cirurgia reparadora da bexiga abrangem traumas graves com perda tecidual extensa, neoplasias, cistites intersticiais, disfunções neurológicas e anormalidades congênitas. Devido a inúmeras complicações associadas às técnicas de cistoplastia com o emprego de segmentos gastrointestinais, o presente estudo teve como objetivo analisar comparativamente a reparação anatômica da bexiga de cães utilizandose a submucosa intestinal suína (SIS) acelular e semeada com células musculares lisas homólogas (CMLH), bem como avaliar as possíveis complicações e efeitos colaterais inerentes a cada um dos tipos de enxerto empregados. Para tal foram utilizados 10 cães adultos, fêmeas, subdivididos em dois grupos, sendo: Grupo Controle (GC), constituído por cinco animais submetidos à cistoplastia com SIS; e Grupo Tratado (GT), constituído por cinco animais submetidos à cistoplastia com SIS semeada com CMLH. As células foram obtidas a partir de fragmentos de espessura completa, provenientes de bexigas de cães que vieram a óbito por motivos não infecciosos ou neoplásicos, cultivadas e expandidas in vitro. Em todos os grupos foi criado um defeito de 3 cm x 2 cm, preservando-se a região do trígono vesical, o qual foi reparado pelos respectivos implantes. Os cães de ambos os grupos foram submetidos à biópsia cirúrgica com 60 dias de pós-operatório, sendo essas obtidas da área central do tecido neoformado e da adjacência entre o mesmo e a bexiga original. Após a implantação dos enxertos, os animais foram avaliados por meio de exames clínico, ultrassonográfico abdominal e laboratoriais. Todas as amostras foram destinadas à avaliação histológica pelas colorações de H/E e Tricromio de Masson, analisadas com um fotomicroscópio Nikon conectado ao sistema de análise de imagem ImageJ. Não foram... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Not available / Mestre

Orientador: Daniela Cristina Cataneo / Coorientador: Eleneice Deffune / Banca: Francisco Guerreiro Cardoso / Banca: Flávia Cilene Maciel da Cruz Alves / Banca: Luiz Felippe Júdice / Banca: Érica Nishida Hasimoto / Resumo: Tendo em vista o desafio do tratamento de injúrias traqueais e o progresso na produção desse órgão por técnicas de engenharia de tecidos, faz com que o interesse nessa área cresça de forma considerável, já que ainda não há um tratamento padrão descrito na literatura acerca das lesões traqueais que acometem 50% do comprimento total do órgão de um adulto ou 30% da traqueia de uma criança. Assim, este estudo tem como objetivo a construção de modelo de traqueia para enxerto utilizando técnicas de engenharia de tecidos. Para tanto, foram realizados cinco e 10 ciclos de descelularização nas traqueias de coelhos doadores seguindo etapas: congelamento/descongelamento sem adição de nenhum crioprotetor, banho ultrassônico no aparelho Ultrasonic cleaner (Unique model USC 1400®) na frequência de 40 Khz durante 10 minutos, irradiação utilizando diodo de emissão de luz (LED) azul com comprimento de onda de 450nm ± 20nm na dose de 90 J/cm2 totalizando 60 minutos de exposição, adição do detergente deoxicolato de sódio a 4% sob agitação a 180 rpm no C24 Incubator shaker (New Brunswick Scientific) durante 48 horas. Paralelamente, foram realizadas expansão e caracterização das células-tronco mesenquimais dos coelhos receptores com posterior diferenciação dessas células em condrócitos e células de músculo liso. Finalmente, foi realizada a recelularização das traqueias com aplicação das células-tronco mesenquimais, dos condrócitos e das células de músculo liso dos coelhos receptores nas superfícies externas dos arcabouços produzidos para os transplantes traqueais. Após cinco ciclos repetidos do protocolo de descelularização utilizado, ainda é possível observar células epiteliais respiratórias e condrócitos remanescentes nas traqueias dos coelhos doadores. Porém, a repetição de 10 ciclos do mesmo protocolo de descelularização remove completamente as células epiteliais respiratórias e reduz a... / Abstract: There is no standard treatment yet described in the literature for tracheal lesions whose length is more than 50% in adults and a third of the trachea in small children. Given the challenge of tracheal injuries treatment and the organ generation progress by tissue engineering techniques the interest in this area is growing considerably. Thereby this study aims to produce tracheal model for graft using tissue engineering techniques. Were performed five and 10 cycles of decellularization on donor rabbit‟s tracheae following the steps: freezing/defreezing without addition of any cryoprotectant; sonication in Ultrasonic cleaner (Unique model USC 1400®) with 40 Khz for 10 minutes; blue light-emitting diode (LED) irradiation with wavelength of 450nm ± 20nm along a dose of 90 J/cm2 at a total exposure of 60 minutes; addition of sodium deoxicholate detergent 4% during 48 hours under 180 rpm agitation in the C24 Incubator Shaker (New Brunswick Scientific). Meanwhile, expansion and characterization of mesenchymal stem cells of rabbits' receptors were performed with subsequent differentiation of these cells into chondrocytes and smooth muscle cells. Finally, it was realized the tracheal recellularization by the application of the mesenchymal stem cells, chondrocytes and smooth muscle cells from receptors rabbits in the outer face of the produced scaffolds for tracheal transplantation. After five repeated cycles of decellularization protocol used, it is still possible to observe respiratory epithelial cells and chondrocytes remaining in the tracheae of the donor rabbits. However, after 10 cycles of the same decellularization protocol the respiratory epithelial cells are completely removed and the tracheal cartilage chondrocytes are reduced. Animals that have been transplanted with five cycles decellularized tracheae had died after 10-12 days due to rejection by the presence of donor rabbit‟s epithelial cells. Animals that have been ... / Doutor

Made available in DSpace on 2011-12-27T14:14:35Z (GMT). No. of bitstreams: 2 000413419-0.pdf: 7548238 bytes, checksum: fb7df37e9d8df24acf3390709418323f (MD5) license.txt: 581 bytes, checksum: 44ea52f0b7567232681c6e3d72285adc (MD5) / Tissue engineering has been showing a promising approach on the treatment of patients with trauma or facial deformities that need extensive areas of bone grafts. It involves the association of an appropriate kind of cell and a biocompatible and biodegradable scaffold that imitates functionally and structurally a specific kind of tissue. Calcium Phosphate Cement (CFC) appears as an interesting alternative of biomaterial to be used as a scaffold due to its characteristics as biocompatibility, bioactivity and osteoconductivity. Thus, the aim of the present study was to evaluate the ability of macroporous tridimensional CFC scaffolds, made with brazilian rawmaterial, to allow the adhesion, proliferation and differentiation of mesenchymal stem cells, derived from human bone marrow in cells osteogenic lineage. For that, cells obtained from iliac crest of an adult human donor were routinely processed until experimental conditions and, after that, cultured over CFC discs, macroporous that had as poror generation body, paraffin spheres, with size between 100 and 250μm. For the induction of cells in osteogenic lineage, BMP4 was added to the culture. Culture periods were established in five, ten and fifteen days. After these periods cells were evaluated due to their morphology by Scanning Electron Microscopy. The expression levels of genes BGLA and SSP1, that codify the osteocalcine (OC) and osteopontine (OP) proteins, as well as the Alkaline phosphatase activity (ALP), other important osteoblastic marker , were quantified by the PCR technique in real time QT-PCR) using the fluorophore SYBR GREEN® . The QT-PCR detected the expression of the genes BGLA and SSP1 and the alkaline phosphatase activity in the periods of 10 and 15 days of culture, what permitted them to check that had a cell proliferation and the differentiation of it in osteogenic cells.In the period of five days, it was not observed the expression of any observed genes. From theses results we concluded that the macroporous CFC, with pore size between 100 and 250 μm, created through the utilization of the paraffin microspheres, permits the adhesion, proliferation and differentiation of mesenchymal stem cells and can be used as an scaffold to the bone tissue engineering. / A engenharia tecidual tem se mostrado um campo promissor para a reabilitação de pacientes com traumas ou deformidades faciais que necessitem de áreas extensas de enxerto ósseo. Seu princípio básico envolve a associação de um tipo apropriado de célula e de um arcabouço biocompatível e bioabsorvível que mimetize funcional e estruturalmente determinado tipo de tecido. O Cimento de Fosfato de Cálcio (CFC) aparece como uma alternativa viável de biomaterial a ser utilizado com esta finalidade em virtude de suas características como biocompatibilidade, bioatividade e osteocondutividade. Assim, o objetivo da presente pesquisa foi avaliar a capacidade de suportes tridimensionais macroporosos de CFC, confeccionados com matérias-primas brasileiras, de permitir a adesão, proliferação e diferenciação de células-tronco mesenquimais derivadas da medula óssea humana. Para isso, células obtidas da crista ilíaca de um doador humano adulto foram rotineiramente processadas até as condições experimentais e, a seguir, cultivadas sobre suportes de CFC, macroporosos, que tiveram como corpo gerador de poros, microesferas de parafina, com tamanho entre 100 e 250μm. Para indução das células em linhagem osteogênica foi acrescentada Proteína Morfogênica Óssea (BMP4) ao meio de cultura. Os períodos de cultura estabelecidos foram de cinco, dez e 15 dias. Após estes períodos, o comportamento e a morfologia das células junto ao biomaterial foram avaliados por meio de Microscopia Eletrônica de Varredura.Os níveis de expressão dos genes BGLA e SSP1, que codificam as proteínas osteocalcina (OC) e osteopontina (OP) respectivamente, bem como a atividade da Fosfatase Alcalina (ALP), outro marcador osteoblástico importante, foram quantificados pela técnica de PCR em Tempo Real (QT-PCR) utilizando o fluoróforo SYBR Green®. O QT-PCR detectou a expressão dos genes BGLA e SSP1 e a atividade da fosfatase alcalina nos períodos de 10 e 15 dias de cultura, o que nos permitiu constatar que houve proliferação celular e diferenciação destas em células osteogênicas. No período de cinco dias, não foi observada a expressão de nenhum dos genes investigados. A partir destes resultados concluímos que o CFC, macroporoso, com tamanho de poros entre 100 e 250μm, criados por meio da utilização de microesferas de parafina, permite a adesão, proliferação e diferenciação de células-tronco mesenquimais em células osteogênicas, podendo ser utilizado como arcabouço para engenharia de tecido ósseo.

Made available in DSpace on 2013-08-07T18:54:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000413812-Texto+Completo-0.pdf: 2939251 bytes, checksum: 2d3f8accd8d398c256cab783e281fed7 (MD5) Previous issue date: 2009 / The use of synthetic polymers to manufature biomaterials has attracting attention of many researchers, aiming to develop of implants that can improve tissue regeneration by contact with specific cellular types in contact with biodegradable synthetic polymers. Polyurethanes (PU) are considered one of the most versatile biomaterials at present, due to it good mechanical properties and its tissue compatibility. In the present work the synthesis of poliurethanes to by use as biomaterials utilizing hexamethylene diisocyanate (HDI) and poly (ε-caprolactone) (PCL) was evaluated. The synthesized polymer was characterized by Gel Permeation Chromatography (GPC), Fourier Transform Infrared Spectroscopy (FTIR) and Nuclear Magnetic Resonance (1H-NMR). In vitro cytotoxicity was also evaluated by tetrazolium salt reduction assay (MTT) and in vitro cellular adhesion with mouse fibroblast cells. The results obtained in confirmed the cytocompatibility of the PU polymer and that it did interfer with cell adhesion and proliferation. / A utilização de polímeros sintéticos na fabricação de biomateriais tem despertado a atenção de muitos pesquisadores, visando a criação de implantes que possam auxiliar na regeneração tecidual, através do contato de tipos celulares específicos com os polímeros sintéticos biodegradáveis. Os poliuretanos (PU) são considerados como um dos biomateriais mais versáteis atualmente utilizados devido suas ótimas propriedades mecânicas e sua compatibilidade tecidual. No presente trabalho, foi estudada a síntese de poliuretanos para uso como biomateriais utilizando hexametileno diisocianato e poli(e-caprolactona) (PCL). O polímero sintetizado foi caracterizado por Cromatografia de Permeação em Gel (GPC), Espectroscopia de Infravermelho por Transformada de Fourier (FTIR) e Ressonância Magnética Nuclear (1H-RMN). A sua citotoxicidade foi avaliada utilizando o ensaio de redução do sal de tetrazólio (MTT), também foi avaliado a adesão celular in vitro com fibroblastos de camundongos. Os resultados obtidos no presente estudo confirmaram a citocompatibilidade do polímero de PU que não interferiu no processo de adesão e proliferação celular.

Made available in DSpace on 2013-08-07T18:54:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000443125-Texto+Completo-0.pdf: 1527521 bytes, checksum: 2c9a9ef7ac02480e7ed3b2734a8acc04 (MD5) Previous issue date: null / Peripheral nerve injury accident is a common type of lesion that can cause loss of mobility and decrease the quality of life. Despite advances in the biomedical area, there are few cases where there is complete functional recovery of a damaged nerve. The application of biodegradable polymers such as poly(lactide-co-glycolide) (PLGA), shows a viable alternative of treatment in peripheral nerves injuries for presenting mechanical strength, biocompatibility and controlled degradation, being also an excellent material for drug delivery. A PLGA scaffold should be porous with pore sizes on the order of micro-and nanometer, which offers the possibility to insert growth factors, promoting a constant release of these biological structures. The aim of this research is to produce porous scaffolds of PLGA. This was achieved by dissolving the polymer in chloroform, adding a porogenic compound. A titanium rod with 2mm in diameter was deeped in the suspension obtained and dried in a hood, obtaining a layer of PLGA / porogen agent on the surface of the rod. In sequence, the rod was immersed in a solution of PLGA with chloroform. After dried for 2 hours in a hood, the titanium rods were submerged in deionized water for 48 hours, during which the water was changed every 8 hours in order to remove the porogenic agent. After this process, the tubular structures formed were easily removed from the rods. Finally, the prepared tubes were divided into groups and treated with different concentrations of sodium hydroxide, to create pores in the order of nanometers, and subsequently vacuum dried for 48 hours. The structures obtained were characterized by XRD, FTIR, SEM and the in vitro degradation was monitored by GPC. / Danos a nervos periféricos são formas comuns de lesões que podem causar perda de mobilidade e diminuir a qualidade de vida. Apesar dos avanços no campo biomédico, existem poucos casos em que há recuperação funcional completa de um nervo danificado. A aplicação de polímeros biodegradáveis tais como PLGA, apresenta uma alternativa viável no tratamento de lesões de nervos periféricos por possuir resistência mecânica, biocompatibilidade e degradação controlada. Uma matriz de PLGA deve apresentar poros na ordem de micrômetros e nanômetros, oferecendo a possibilidade de inclusão de fatores de crescimento e possivelmente promovendo uma libertação constante destas estruturas biológicas. O objetivo desta pesquisa é produzir matrizes porosas de PLGA. Isto foi realizado através da dissolução do polímero em clorofórmio, seguida da adição de um composto porogênico. Uma haste de titânio com 2mm de diâmetro foi imersa na suspensão obtida e quando retirada, foi seca em capela, obtendo uma camada de PLGA/agente porogênico na superfície da haste. Na sequência, a haste foi imersa em uma solução de PLGA com clorofórmio. Após seca durante 2h em capela, as hastes de titânio foram submersas em água deionizada durante 48h, durante as quais, a água foi trocada a cada 8h, para remoção do agente porogênico. Após este processo, as estruturas tubulares formadas são facilmente removidas das hastes. Finalmente, os tubos confeccionados foram divididos em grupos, e tratados com diferentes concentrações de hidróxido de sódio, para criação de poros na ordem de nanômetros, sendo, subsequentemente, secos em forno a vácuo durante 48h. As estruturas obtidas foram caracterizadas por XRD, FTIR, MEV e a degradação in vitro foi acompanhada por GPC.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2018-06-28T13:47:05Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1071147 bytes, checksum: 59601a8061f947f5676850b41c2f93bb (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-28T13:47:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1071147 bytes, checksum: 59601a8061f947f5676850b41c2f93bb (MD5) Previous issue date: 2018-02-23 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / A osteoporose é uma doença metabólica, caracterizada pelo desequilíbrio entre a formação e reabsorção óssea. A capacidade de regeneração fica comprometida, sendo muitas vezes necessária a utilização de enxertos, que, devido à fatores como baixa disponibilidade, morbidade associada ao local doador e a possibilidade de transmissão de doenças, tem dado lugar à biomaterial osteocondutor e reabsorvível. A utilização de medicamento associado aos compósitos pode trazer benefícios à reparação óssea. Um desses medicamentos é o alendronato, um dos mais potentes fármacos do grupo dos bifosfonatos, que tem sido largamente utilizado na prevenção da reabsorção óssea sistêmica na osteoporose. Neste contexto, o objetivo desse trabalho foi avaliar o potencial reparador do compósito hidroxiapatita (HAP), policaprolactona (PCL) e alendronato (ALN) em defeitos ósseos experimentais no olecrano de coelhas com osteoporose induzida. Foram utilizadas 18 coelhas, que passaram por ovariectomia e posterior aplicação de metilprednisolona 1mg/kg em dias alternados durante duas semanas para indução da osteoporose. Estabelecida a osteoporose, foi realizado defeito de 5 mm de diâmetro no olecrano, sendo todos defeitos preenchido por três diferentes tratamentos: HAP+PCL; HAP+PCL+ALN; e controle (sem preenchimento). Logo após o procedimento cirúrgico, foi realizada avaliação clínica dos animais, onde foram avaliados a presença ou ausência de dor, edema, deiscência e inflamação. Foram realizadas radiografias seriadas para acompanhamento da densidade radiográfica. Aos 45 dias após a cirurgia, foi realizada coleta do olecrano para processamento e posterior análise tomográfica e histopatológica. Características histológicas e avaliação clínica foram analisadas descritivamente. As variáveis quantitativas foram submetidas à análise de variância, seguido de teste de Tukey em caso de significância. A ovariectomia e a aplicação de glicocorticoide foram capazes de desencadear perda óssea significativa nos animais. Na avaliação clínica, a presença de edema se restringiu aos primeiros dias pós-operatório, com evolução clínica satisfatória sugerindo biocompatibilidade do compósito. A densidade radiográfica dos animais que receberam algum tipo de tratamento foi significativamente maior que o grupo controle, diminuindo ao longo do tempo. A microtomografia computadorizada mostrou um crescimento de tecido ósseo em quase todo o defeito nos grupos HAP+PCL e controle, enquanto no grupo HAP+PCL+ALN haviam raras trabéculas ósseas restritas à borda do defeito ósseo. A histologia revelou formação de tecido ósseo imaturo entremeado à medula óssea e tecido conjuntivo nos grupos HAP+PCL e controle. No grupo HAP+PCL+ALN ocorreu inibição severa da regeneração óssea, havendo apenas a formação de uma matriz extracelular disposta de maneira desorganizada, que não se diferenciou em nenhum outro tecido. Concluiu-se que o compósito HAP+PCL é eficaz para o preenchimento de defeito ósseo crítico, entretanto, a aplicação local do alendronato interferiu negativamente na regeneração óssea. / Osteoporosis is a metabolic disease, characterized by imbalance between bone formation and resorption. The regeneration ability is impaired, being often necessary to use grafts wich due to factors like low availability, morbidity associated to the donor site and the possibility of disease transmission, have given rise to osteoconductive and resorbable biomaterials. The use of medication associated to composites may be beneficial to bone repair. One such drug is alendronate (ALN), one of the most potent drugs in the bisphosphonate group, that has been widely used to prevent systemic bone resorption in osteoporosis. The present study aimed to evaluate the repair potential of hydroxyapatite (HAP), polycaprolactone (PCL) and alendronate composites in experimental bone defects in the olecranon of rabbits with induced osteoporosis. Animals were submitted to ovariectomy and subsequent application of 1mg / kg methylprednisolone every other day for two weeks to induce osteoporosis. Once the osteoporosis was established, a 5 mm defect was made in olecranon, and defects were filled by three different treatments: HAP + PCL; HAP + PCL + ALN; and SHAM (unfilled). Right after surgical procedure, clinical evaluation of the animals was performed, in which pain, edema, dehiscence and inflammation were observed. Serial radiographs were performed to monitor radiographic density. At 45 days after surgery, olecranon was collected for processing and subsequent histopathological and microcomputed tomography analysis. Histological characteristics and clinical evaluation were analyzed descriptively. Quantitative variables were submitted to variance analysis, followed by Tukey test in case of significance. Ovariectomy and glucocorticoid application were able to trigger significant bone loss in the animals. In clinical evaluation, presence of edema was restricted to the first postoperative days, with a satisfactory clinical evolution suggesting composite biocompatibility. Radiographic density of animals that received some type of treatment was significantly higher than control group, decreasing over the time. The microcomputed tomography showed bone tissue growth in almost all defects from HAP + PCL and control groups, whereas in HAP + PCL + ALN group there were rare bone trabeculae restricted to the defect edge. Histology revealed formation of immature bone tissue interspersed with bone marrow and connective tissue in HAP + PCL and control groups. In the HAP + PCL + ALN group, severe inhibition of bone regeneration occurred, with only formation of a disorganized extracellular matrix, which did not differentiate in any other tissue. Taken together, the results showed that the HAP + PCL composite is effective for critical bone defect filling, however, the local application of alendronate interfered negatively in bone regeneration.

Orientadores: Marcos Akira d'Ávila, Cecília Amélia de Carvalho Zavaglia / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Mecânica / Made available in DSpace on 2018-08-18T04:11:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ramos_SergioLopesFernandes_M.pdf: 1999649 bytes, checksum: 3668df0532fba5829156d8937f7ba8be (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: O uso e pesquisa do polímero Policaprolactona (PCL) como biomaterial vem sendo amplamente difundido nas últimas décadas. Sua capacidade de interagir com o organismo, propriedades mecânicas e capacidade de reabsorção são as principais características que levaram a escolha deste material para o desenvolvimento de uma estrutura que aja como suporte celular para uso em Engenharia Tecidual. Neste trabalho, o objetivo foi produzir e caracterizar membranas de PCL obtidas pelo processo de eletrofiação ou "electrospinning". Este processo, que utiliza uma diferença de potencial para extrair "fios" a partir de uma solução polimérica eletricamente carregada, é relativamente novo e versátil, sendo capaz de produzir redes macrométricas a partir de um emaranhado de "fios" que variam de diâmetros nano até micrométricos. As amostras foram devidamente analisadas e caracterizadas utilizando Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV), Calorimetria Diferencial de Varredura (DSC), Termogravimetria (TG), Infravermelho por Transformada de Fourrier (FTIR), Análise Dinâmico Mecânica (DMA) e ensaio in vitro com células tronco mesenquimais de tecido adiposo (MSCs). As membranas exibiram propriedade de biocompatibilidade, o que levou à crer que a porção de solvente utilizada para fabricação dos fios foi eliminada, possibilitando adesão, penetração e proliferação celular através da estrutura / Abstract: The Policaprolactone polymer has been widely investigated as cellular support for tissue engineering purposes. Its biocompatibility, adequate mechanical properties and resorption capability are the main aspects that has led to the choice of this material for a possible use as tissue engineering scaffolds. In this work, the objective was to prepare and characterize PCL non-woven fibrous networks obtained through the electrospinning process. This process, which uses electrical potential in order to extract fibers from a electrically charged polymer solution is relatively new and versatile, being capable to produce a macroscopic structure composed of non-woven networks of fibers varying from the nanoscale to the microscale range. The samples were characterized using Scanning Electron Microscopy (SEM), Scanning Differential Calorimetry (DSC), Thermogravimetry (TG), Infrared Fourrier Transform (FTIR), Dynamic Mechanical Analysis (DMA) and in vitro tests with Mesenquimal Stem Cells (MSCs). The membranes were considered biocompatible, which led to believe that the solvent portion was eliminated during the process, enabling adhesion, penetration and cellular proliferation within the structure / Mestrado / Materiais e Processos de Fabricação / Mestre em Engenharia Mecânica