Este trabalho teve como objetivo a obtenção de embriogênese somática em cultivares brasileiras de bananeira e subsequente conversão dos embriões somáticos em plantas. Estudos desta natureza visam possibilitar trabalhos futuros que envolvam a manipulação genética, para melhoramento desta cultura. O projeto consistiu, primeiramente, na indução de embriogênese somática a partir de ápices vegetativos testando-se: diferentes auxinas (dicamba, picloram, 2,4-D e NAA) em meio MS (Murashige & Skoog, 1962); três meios de cultura com diferentes razões entre nitrogênio nítrico e amoniacal (NO3-: NH4+); e tempo necessário para permanência do explante no meio de indução. Indução foi obtida, porém, embriões somáticos não converteram-se em plantas. Em seguida, estudou-se o efeito do tratamento de maturação, através de cultivo contendo concentração mais elevada de sacarose (60 g/L) ou PEG (polietilenoglicol), na conversão e germinação de embriões somáticos a partir de ápices vegetativos. Alternadamente, foram utilizados explantes de inflorescências masculinas na indução de embriogênese somática. Em todas as etapas foram realizadas análises morfo-anatômicas através de microscopia ótica e eletrônica de varredura. Na indução a partir de ápices vegetativos, as auxinas dicamba e picloram apresentaram formação de estruturas embriogênicas e embriões somáticos, enquanto que as demais apresentaram ausência de resposta embriogênica. Cortes histológicos dos explantes em meio com dicamba, mostraram regiões embriogênicas com formação de pró- embriões e regiões meristemáticas não organizadas, que possivelmente, originaram estruturas monopolares. Os embriões somáticos eram morfologicamente semelhantes aos embriões zigóticos de Musa acuminata, porém, diferenciação de protoderme, ápices meristemáticos e procâmbio, não foram observados. Entre os três diferentes meios de cultura testados na indução (SH, FN-Lite ou 1/2 MS), o meio FN-Lite e 1/2 MS, com razão nitrato:amônio de 4:1 e 2:1, respectivamente, apresentaram melhor qualidade dos embriões somáticos, do que os embriões em meio SH com razão de 9,5:1, e o melhor tempo de indução foi de 4 semanas. Cortes histológicos foram realizados para observação das características dos embriões somáticos formados. O tratamento de maturação dos embriões somáticos favoreceu a conversão dos embriões em plântulas, porém, em baixo percentual. Frequentemente foram observadas, tanto em meio de indução, como de maturação, uma alteração de desenvolvimento dos embriões somáticos, com um crescimento preferencial do ápice radicular, e ausência de desenvolvimento do ápice caulinar. Em explantes de inflorescências masculinas, identificaram-se através de análises morfo-anatômicas, dois tipos de embriões somáticos: um tipo semelhante ao embrião zigótico de Musa acuminata e, em menor frequência, desenvolveram-se embriões somáticos semelhantes a embriões zigóticos de outras monocotiledôneas, indicando que em um único protocolo de embriogênese somática, é possível ocorrer a formação de diferentes padrões morfológicos de embriões somáticos. / The present work aimed to obtain somatic embryogenesis in Brazilian cultivars of banana and their subsequent conversion into plants. These studies are important for the development of protocols involving genetic manipulation techniques for crop improvement of this species. Initially, the induction of somatic embryogenesis from shoot apices was tested using MS medium (Murashige & Skoog, 1962) supplemented with different auxins (dicamba, picloram, 2,4-D and NAA); three culture media with different ratios of nitric:amoniacal nitrogen (NO3-: NH4+); and length of time in the induction medium. Induction was obtained but the somatic embryos did not convert into plants. Maturation treatments with higher sucrose levels or PEG (polyethylene glicol) were then tested. In addition, the use of male inflorescences were used as explants for somatic embryo induction. During the experiments, morpho-anatomic analyses were performed through light and scanning electron microscopy. When shoot apices were used as explants, the auxins dicamba and picloram showed the formation of embryogenic structures and somatic embryos, while 2,4-D and NAA were not. Explants in medium containing dicamba presented both embryogenic regions with pro-embryos and non-organized meristematic regions, which may have formed unipolar structures. The somatic embryos were morphologically similar to the zygotic embryos of Musa acuminata, however lacked the differentiation of protoderm, meristematic apices and procambium. These somatic embryos did not convert into plants. Among the three different culture media tested for induction (SH, FN-Lite or 1/2 MS), FN- Lite and 1/2 MS provided better quality embryos and four weeks was considered the best period for induction. These two media have a 4:1 and 2:1 NO3-: NH4+ ratio, while SH has a 9,5:1 ratio. Histological sections were done to evaluate the somatic embryos formed. Somatic embryo maturation treatments favored the conversion of embryos into plants, however at low frequency. Frequently, somatic embryos showed the development of the root pole only. This behavior was observed both during induction and maturation. Male inflorescence explants formed two types of somatic embryos: one morphologically resembling the zygotic embryo of Musa acuminate, and less frequently somatic embryos with morphological characteristics of other monocots. This behavior indicates that in one protocol of somatic embryogenesis it is possible to obtain different morphological patterns of somatic embryos.

O objetivo dessa dissertação foi avaliar os efeitos do cálcio na indução de morfogênese, mais especificamente na embriogênese somática de Eucalyptus urophylla a partir de hipocótilos cultivados “in vitro". Análises bioquímicas e histológicas foram realizadas visando observar o papel do cálcio nos conteúdos de proteínas e açúcares totais, na atividade específica da peroxidase e na morfogênese, a qual foi avaliada mediante técnicas de histologia. As concentrações de cálcio (na forma de CaCl2H20) variaram de O a 12,12 mM e foram adicionadas ao meio de cultura descrito por Simola (1985) sendo que a concentração de cálcio presente nos calos foi determinada diretamente por Espectrometria  de Fluorescência de Raios-X, um método não-destrutivo que permitu que as mesmas amostras quantificadas fossem utilizadas nas análises histológicas. Uma análise estatística multivariada (Análise de Componentes Principais - PCA) permitiu agrupar os tratamentos em 5 blocos e indicou o grupo mais responsivo para uma resposta morfogênicas considerando as interações entre todos os parâmetros avaliados. Em baixas concentrações de cálcio veirificou-se ausência de resposta morfogênica e a histologia revelou tecidos colapsados e dessaranjados. Aumentando a concentração do cátion, os teores de proteínas e açúcares totais e a atividade específica da peroxidase também aumentaram. Ao nível histológico foram verificadas diferenças entre os tratamentos e foi possível verificar que a concentração de cálcio de 6,62 mmoI.L-1 , estimulou a formação de embriões somáticos globulares. / The aim of this work was to evaluate the calcium effects in the morphogenesis induction, speciffically in the somatic embryogenesis of Eucalyptus urophylla hipocotils. Biochemical and histological analysis were performed in order to observe the calcium role in the total protein and sugar contents, in the peroxidase specific activity and in the morphogenesis, wich was evalueted by histology. The calcium (CaCb.2H20) concentrations from 0.0 to 12.12 mM were added to Simola (1985) culture medium and calcium concentration in calli was determined directly by X-Ray Flourescence Spectrometry, a non-destructive technique, allowing for the processing of thesame tissue for histological analysis. A multivariate analysis (PCA-Principal Components Analysis) grouped the treatments into 5 clusters and indicated the more responsive group for a morphogenic response considering the interactions between the evaluated parameters and the calcium concentration. Lack of calcium supply caused a complete absence of a morphogenic process and tissue collapsing. The increase in calcium concentration favored the presence of higher total protein and sugar contents, the increase of peroxidase specific activity and changes in the histological characteristics. It was possible to verify that calcium stimulated globular somatic embryo formation at concentration of .62 mmoI.L-1

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-03-29T11:36:45Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1817587 bytes, checksum: 926162ce1f44cc0b545b80273c21b20b (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-29T11:36:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1817587 bytes, checksum: 926162ce1f44cc0b545b80273c21b20b (MD5) Previous issue date: 2013-03-13 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / O objetivo geral do trabalho foi determinar um protocolo de embriogênese somática e de calogênese em raízes de Passiflora morifolia Masters, e realizar análises fitoquímicas em calos e em diferentes órgãos da espécie. Explantes radiculares foram incubados em meio Murashige & Skoog (MS) suplementado com diferentes concentrações de ácido 2,4-diclorofenoxiacético (2,4-D). Avaliaram-se o número de explantes com formação de zonas embriogênicas e de calos, aspectos anatômicos, estruturais e moleculares, assim como, a caracterização fitoquímica de calos, de diferentes órgãos de vitroplantas e de plantas cultivadas em casa de vegetação. O primeiro capítulo teve como objetivos estabelecer um protocolo de indução da embriogênese somática em raízes de P. morifolia, e realizar a caracterização morfoanatômica do processo e de expressão do gene SERK por hibridização in situ. As concentrações de 2,4-D iguais ou superiores a 6,78 μM induziram embriogênese somática. O teste de dupla coloração com carmin acético e azul de Evans confirmou a natureza embriogênica do material. O contínuo desenvolvimento de zonas de proliferação formadas a partir do periciclo e de tecidos vasculares associados promoveu o rompimento do córtex e da epiderme da raiz, culminando na diferenciação de embriões somáticos. Adicionalmente, a hibridização in situ com sonda heteróloga de PcSERK (Passiflora cincinnata SERK), confirmou a embriogênese somática. O segundo capítulo teve como objetivos estabelecer um protocolo de calogênese em explantes radiculares de P. morifolia, e realizar análises fitoquímicas em calos submetidos a tratamentos com luz UV-B, e em diferentes órgãos da espécie cultivada em casa de vegetação e in vitro sob iluminação fornecida por lâmpadas de LED. Por cromatografia em camada delgada foram observadas diferenças fitoquímicas entre plantas e vitroplantas. Flavonoides foram facilmente observados em folhas de plantas em ambas as condições de cultivo, exceto em calos. Por cromatografia líquida de alta eficiência foi identificado isovitexina como o flavonoide presente em maior concentração nas folhas e caules de plantas cultivadas em casa de vegetação. Outros flavonoides foram identificados nos demais órgãos em ambas as condições de cultivo, com exceção dos calos. Diferenças entre a atividade antioxidante de plantas e vitroplantas foram verificadas, ao contrário do observado para os calos submetidos ao tratamento com UV-B, quando comparados com o tratamento controle. O presente estudo demonstrou a versatilidade de raízes de P. morifolia para a calogênese e embriogênese, e a possibilidade de produção de metabólitos secundários em vitroplantas cultivadas sob iluminação de lâmpadas de LED. / The general objective of the study was to establish a protocol for somatic embryogenesis and callogenesis in roots of Passiflora morifolia Masters and carry out phytochemical analysis in root-derived calluses and in different plant organs. Root explants were plated on Murashige and Skoog (MS) supplemented with different concentrations of 2,4-dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D). It was evaluated the number of explants forming embryogenic areas and calluses, anatomical, molecular and structural aspects, as well as the phytochemical characterization of calluses from different organs of in vitro plants and plants grown in the greenhouse. Chapter 1 aimed to establish a protocol for induction of somatic embryogenesis in roots of P. morifolia and its morphoanatomical characterization as well as of the SERKgene expression through in situ hybridization. Concentrations of 2,4-D greater than or equal to 6.78 μM induced somatic embryogenesis. The double staining test with carmine acid and Evans blue confirmed the embryogenic nature of the material. The continuous development of proliferation zones from the pericycle and associated vascular tissue caused the epidermis and cortex of the root to break, leading to the differentiation of somatic embryos. Additionally, the in situ hybridization with the heterologous probe PcSERK (Passiflora cincinnata SERK) confirmed the occurrence of somatic embryogenesis. Chapter 2 aimed to establish a protocol for callus formation in root explants of P. morifolia, perform phytochemical analysis in callus undergoing treatment with UV-B light and perform phytochemical analysis in different organs of greenhouse-grown and in vitro-grown plants under LED illumination. Phytochemical differences between greenhouse plants and in vitro plants were detected by thin layer chromatography. Flavonoids were easily observed in leaves of plants in both culture conditions, except calluses. High performance liquid chromatography identified isovitexin as the flavonoid present with greater intensity in leaves and stems of greenhouse-grown plants. Other flavonoids were identified in other organs of plants under both culture conditions, with the exception of calluses. Differences in the antioxidant activity between greenhouse plants and in vitro plants were detected, contrary to that found for calluses treated with UV-B when compared with the control. The present study showed the versatility of P. morifolia roots for callus formation and embryogenesis and the possibility of secondary metabolite production in in vitro plants grown under LED illumination. / Tese enviada pela secretaria do curso por e-mail, em 28-03-17.

Made available in DSpace on 2016-08-29T15:36:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_7199_Micheli Sossai Spadeto.pdf: 1074523 bytes, checksum: 2ccb0312d06bd6cb23fd34afb8d8d8c0 (MD5) Previous issue date: 2015-02-28 / CAPES / As técnicas de cultura de tecidos in vitro podem gerar subsídios à propagação e manutenção do germoplasma de espécies florestais de interesse, como Myrsine coriacea (Sw.) R.Br. ex Roem. & Schult. (Primulaceae). Essa espécie vem se destacando na indústria farmacêutica por produzir substâncias como o ácido mirsinóico B, de efeito antinociceptivo e a proteína lectina, com ação potencial na cura do câncer. Além disso, o estabelecimento in vitro de M. coriacea, é importante no fornecimento de material vegetal (folhas e raízes) para análises citogenéticas e de citometria de fluxo, que podem ser utilizadas para a caracterização cariotípica da espécie. Com base no exposto, o presente trabalho teve como objetivos: estabelecer um protocolo de propagação in vitro para M. coriacea, mensurar o conteúdo de DNA nuclear e determinar o número cromossômico dessa espécie. Desse modo, plântulas de M. coriacea foram obtidas por duas vias de propagação in vitro: germinação de sementes maduras e regeneração a partir de embriões zigóticos imaturos. A maior frequência de germinação (100%) foi observada para sementes previamente tratadas com HCl 10% e inoculadas em meio MS suplementado com 10.74 µM de ácido giberélico, no qual, as primeiras plântulas foram geradas após 41 dias de cultivo. Na embriogênese somática, utilizando embriões zigóticos imaturos, calos friáveis e embriões somáticos foram obtidos em meio MS suplementado com 4.44 µM de 6-benzilaminopurina, sendo que as plântulas foram regeneradas após 120 dias de cultivo. Folhas e raízes das plântulas obtidas in vitro foram utilizadas nas análises de citometria de fluxo, as quais revelaram uma variação intraespecífica no conteúdo de DNA nuclear de M. coriacea. Tal variação se confirmou nas análises citogenéticas, onde alguns indivíduos apresentaram 2n = 45 e outros 2n = 46 cromossomos. Tendo em vista a dioicia em M. coriacea, os dados sugerem que essa variação esteja relacionada à presença de cromossomos sexuais. Além disso, grupos de pares de cromossomos morfologicamente idênticos também foram observados indicando uma possível origem poliploide da espécie. Os resultados obtidos nesse estudo contribuem com estudos sobre determinação do sistema sexual, evolução e cultivo in vitro do gênero Myrsine. / In vitro tissue culture techniques can generate subsidies for the propagation and germplasm maintenance of forest species of interest such as Myrsine coriacea (Sw.) R. Br. Ex Roem. & Schult. (Primulaceae). This species has been highlighted in the pharmaceutical industry for producing substances like mirsinoic acid B, showing analgesic effects, and the lectin protein, with potential câncer - healing action. Thus, the establishment and in vitro culture of M. cor iacea is a potential alternative for the production of these substances and the generation of seedlings for reforestation programs. Besides the economic relevance, M. coriacea is a dioecious species with male and female representatives clearly defined in the reproductive period. Based on the above, this study aimed to establish a protocol for in vitro propagation of M. coriacea, measure the nuclear DNA content and determine the chromosome number of the species. M. coriacea seedlings were obtained by in vitro propagation thro ugh two routes: mature seed germination and regeneration from immature zygotic embryos. The highest frequency of germination (100%) was observed for seeds previously treated with 10% HCl and inoculated in medium MS (Murashige and Skoog) supplemented with 10.74 mM of gibberellic acid, in which the first seedlings were generated after 41 days of culture. In somatic embryogenesis using immature zygotic embryos, friable calli and somatic embryos were obtained in medium MS s upplemented with 4.44 μM of 6 - benzylaminopurine, and the plantlets were regenerated after 120 days of cultivation. Leaves and roots of the seedlings obtained in vitro were used in flow cytometric analysis, which revealed an intraspecific variation in nucle ar DNA content in M. coriacea. This variation was confirmed by cytogenetic analysis, xv where some individuals showed 2n = 45 and others 2n = 46 chromosomes. Given the dioecy of M. coriacea, the data suggest that this variation is related to the presence of sex chromosomes. Furthermore , groups of morphologically identical chromosome pairs were also observed indicating a possible polyploidy origin of the specie. The establishment of the in vitro culture protocol for M. coriacea enabled the mass propagation of the species and is useful for the large - scale production of plants with reduced time and space. The flow cytometry and cytogenetic data showed for the first time that the male and female individuals of M. coriacea differ in DNA content and chromosome number

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2018-04-17T12:36:52Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2648713 bytes, checksum: fd5018dff4d49561871e7d27e6ba1e9f (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-17T12:36:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2648713 bytes, checksum: fd5018dff4d49561871e7d27e6ba1e9f (MD5) Previous issue date: 2015-03-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A propagação do E. grandiflorum ocorre de forma sexuada e assexuada. Sendo que, a propagação por sementes apresenta ampla variabilidade genética com relação a muitas características importantes, incluindo ciclo de desenvolvimento, taxa de crescimento, formato da folha, coloração das flores, morfologia da inflorescência, sensibilidade ao etileno e indução ao florescimento que é influenciado pelo comprimento do dia e pela temperatura. A exposição de cultivares de lisianthus a temperaturas elevadas, durante e após a germinação das sementes pode levar à indução da formação da planta em roseta, inibindo o florescimento. Uma das técnicas utilizadas para evitar este distúrbio fisiológico é a exposição das sementes ou mudas a determinados períodos de frio, permite o crescimento e desenvolvimento normal das plantas, bem como diferenciação da gema vegetativa em reprodutiva. Por outro lado, programas de melhoramento também são direcionados no sentido de aumentar a tolerância da planta a temperaturas elevadas, bem como às doenças, à germinação das sementes e vigor das mudas, indução e uniformidade de floração e vida pós-colheita, tornando-se dessa forma necessário mais estudos na área de propagação sexuada e assexuada. Objetivou-se propor um protocolo eficiente de embriogênese somática a partir de explantes foliares e radiculares de E. grandifloru, caracterização morfo-anatômica e molecular do processo. Assim como, avaliar o efeito da vernalização das sementes na produção de mudas e no florescimento das cultivares Mariachi, Echo e Excalibur. Após os estudos de embriogênese somática realizados, recomenda-se o uso de 10 μM de 2,4-D na fase de indução embriogênica de explantes foliares e radiculares com permanência de 30 e 40 dias, respetivamente. Para a fase de diferenciação e maturação de embriões somáticos, recomenda-se o uso de 2 μM de BA no meio. Os estudos anatômicos realizados comprovaram que a origem de calos embriogênicos está associada às intensas divisões anticlinais e periclinais de células do sistema vascular. Após a transferência dos embriões somáticos para o meio de diferenciação e maturação observou-se germinação assincrônica e regeneração de vitroplantas. Os testes histoquímicos indicaram a presença e mobilização de compostos de reserva ao longo da embriogênese somática nas células. Foram isoladas duas sequências parciais de SERK, as quais constituem possíveis homólogos de SERK1 e SERK3, provavelmente associados com aquisição de competência embriogênica das células somáticas. O sinal de expressão de SERK somente foi observado com o início das divisões célulares e estendeu-se ao longo do desenvolvimento embriogênico sendo mais intenso nos pró-embriões. Os dados obtidos no presente trabalho podem auxiliar em futuras pesquisas para transformação genética, bem como, para identificação de outros genes marcadores da embriogênese somática, assim como dos fatores envolvidos na transição embriogênica. Para os tratamentos de vernalização de sementes de E. grandiflorum conclui-se que o uso de temperaturas de 5 e 10 °C levou à maior eficiência na indução do florescimento e redução do ciclo de cultivo. Recomenda-se vernalizar as sementes por 24 d a 5 °C para as cultivares Mariachi e Echo e para a cultivar Excalibur recomenda-se a vernalização das sementes por 36 d a 5 °C para a produção de mudas de lisianthus de alta qualidade. / The spread of E. grandiflorum occurs by sexual and asexual form. Propagation by seeds has great variability in many important features, including development cycle, growth rate, leaf shape, color of flowers, inflorescence morphology, ethylene sensitivity and induction of flowering which is influenced by day length and temperature. Exposure of lysianthus cultivars to high temperatures during and after seeds germination can lead to plant rosette formation and inhibition of flowering. One of the techniques used to avoid this physiological disorder is the exposure of the seeds or seedlings to periods of cold temperatures, allowing normal growth and development of plants, as well as differentiation of vegetative bud in reproductive one. On the other hand, breeding programs aimed to increase plant tolerance to high temperatures as well as to diseases, seed germination and seedling vigor, flowering induction and uniformity, and post-harvest life, leading to the need of more studies in the sexual and asexual propagation. This work aims to develop an efficient protocol of somatic embryogenesis from leaf and root explants of E. grandiflorum, by studying the cytological and molecular changes at different stages of embryogenic cultures. The study also evaluates the vernalization seeds effect in the production of seedlings and flowering of Mariachi, Echo and Excalibur cultivars. Our results suggest the use of 10 μM of 2,4-D in embryo induction phase of leaf and root explants for the period of 30 and 40 days, respectively. For the differentiation and maturation phase of somatic embryos we recommend the use of 2 μM BA. The anatomical studies performed showed that the origin of somatic embryogenesis is associated with intense anticlinal and peryclinal divisions of vascular system cells. We observed asynchronous germination and seedling regeneration after transferring the somatic embryos to the differentiation and maturation medium. The histochemical analysis indicated the presence and mobilization of storage compounds along the somatic embryogenesis in cells. Two partial sequences of potential homologs of SERK1 and SERK3 were isolated, and probably associated with acquisition of embryogenic competence of somatic cells. The SERK expression signal was only observed with the beginning of cell divisions and increased gradually along the embryonic induction with a strong signal in the pro-embryos. The results obtained in this study can be useful for future research in genetic transformation, as well as for the identification of other marker genes of somatic embryogenesis, and factors involved in embryogenic transition. For vernalization of lysianthus seeds treatments greater flowering induction efficiency and a reduction in crops lifecycle was obtained when using we conclude that the use of 5 or 10 °C temperatures. For Mariachi and Echo cultivars is recommended seed vernalization at 5 °C for 24 days f and for cv. Mariachi is recommended to vernalized at 5 °C for 36 day in order to obtain high quality lisianthus seedlings.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Botânica, Programa de Pós-Graduação em Botânica, 2016. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2017-03-10T17:17:55Z No. of bitstreams: 1 2016_PatríciaMonahCunhaBartos_Parcial.pdf: 450830 bytes, checksum: dd052eba7cbb7314b7b1801a4a1eed38 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2017-04-06T22:32:47Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_PatríciaMonahCunhaBartos_Parcial.pdf: 450830 bytes, checksum: dd052eba7cbb7314b7b1801a4a1eed38 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-06T22:32:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_PatríciaMonahCunhaBartos_Parcial.pdf: 450830 bytes, checksum: dd052eba7cbb7314b7b1801a4a1eed38 (MD5) / O objetivo do presente trabalho foi aperfeiçoar e avaliar estruturalmente e bioquimicamente as etapas de indução e multiplicação de linhagens embriogênicas de dendezeiro (Elaeis guineensis Jacq.) originadas a partir de folhas imaturas de plantas adultas de alto rendimento. Para a indução, segmentos de folhas da variedade B35-17-29 foram inoculadas em meio de cultura de MS, contendo cinco concentrações (0, 225, 450, 675 e 900 μM) de ANA, 2,4-D e Picloram. Em seguida foram avaliadas duas regiões do palmito (apical e basal) na indução de calos em seis variedades (B35-29-32, B35-29-33, B35-17-33, B35-17-29, A25-15-11 e A25-14- 28). Para a multiplicação, duas consistências de meio (líquido e sólido) e dois tipos de explantes (calo primário e embriogênico) da variedade B35-17-29 foram testados. A caracterização morfoanatômica e a extração e quantificação dos açúcares, amido, ácidos graxos, aminoácidos, proteínas e a análise do perfil metabólico contidos em explantes foliares aos zero dias de cultivo, com raízes, com calos e que não reagiaram, além de calo primário, calo embriogênico e calo embriogênico formado, a partir de calo primário, foi realizada utilizando-se materiais do genótipo B35-17-33. Verificou-se que as melhores taxas de indução de calos da variedade B35-17-29 foram obtidas com a utilização de 2,4-D (900 μM) e Picloram (225 μM). Analisando os genótipos e as posições das folhas verificou-se que as melhores taxas foram observadas com a inoculação da parte apical em todos os genótipos testados. Na multiplicação, verificou-se que o maior ganho de biomassa fresca foi observado com a multiplicação de calos embriogênicos em meio líquido sob agitação. Anatomicamente, verificou-se que os explantes foliares utilizados para a indução de calos apresentavam epiderme unisseriada, com estômatos apenas na face abaxial da folha, presença de hipoderme bi-estratificada, em ambas as faces, com mesofilo dorsiventral. Foi possível observar o desenvolvimento inicial dos calos associados aos feixes vasculares em 100% dos propágulos analisados. Na formação do calo primário, as divisões celulares começam próximo aos feixes vasculares. Foi observado que calos primários são constituídos por células meristemáticas apenas em sua região mais interna, enquanto que calos embriogênicos são compostos inteiramente por este tipo celular. A partir do calo embriogênico, é verificada a formação de embriões somáticos. Com relação às análises bioquímicas, verificou-se que não há diferenças significativas entre as concentrações de açúcares nos segmentos foliares que se mostraram responsivos ou não à indução da embriogênese somática. Em contrapartida, folhas com calos apresentaram níveis inferiores de frutose, e maiores concentrações de amido, quando comparadas àquelas que não reagiram. Verificou-se que calos primários apresentaram maiores concentrações de açúcares e amido quando comparados com calos embriogênicos, diferindo também por apresentarem concentrações mais elevadas de sacarose. Com relação à concentração dos ácidos graxos, não houve diferença significativa entre explantes foliares com calos e aqueles que não reagiram. Os teores de aminoácidos apresentam um acúmulo gradativo durante a etapa da indução de calos. Em todo o cultivo, apenas calos embriogênicos apresentaram as maiores concentrações de prolina. Explantes foliares com zero dias de cultivo e aqueles que não reagiram apresentaram níveis intermediários de proteínas, sendo observada a redução das taxas com a formação dos calos primários e aumento quando no caso de tratarse de calos embriogênicos. / The main goal of the current project was enhancing and evaluating biochemically and structurally the induction and multiplication steps of the African oil palm tree’s (Elaeis guineensis Jacq.) embryogenic lineage spread originally from high performance adult plant’s half-grown leaves. In order to induct, leave’s cantle from the variety B35-17-29 were inoculated in MS cultivation environment, containing 5 concentrations (0, 225, 450, 675 e 900 μM) of NAA, 2,4-D and Picloram. Subsequently, two heart of palm’s zones were evaluated (apical and basal) during calluses induction in 6 varieties (B35-29-32, B35-29-33, B35-17-33, B35-17-29, A25-15- 11 e A25-14-28). For the multiplication, two media consistencies (solid and liquid) and two sorts of explant (primary and embryogenic callus) from B35-17-29’s variety were tested. The morphoanatomic characterization and the extraction and quantification of the sugars, starch, fatty acids, amino acids and proteins and the metabolic profile analysis contained in foliar explants on zero days of cultivation with roots, with callus and which did not react, besides primary callus, embryogenic callus and full-grown embryogenic callus, from primary callus, was carried out using materials from the genotype B35-17-33. It has been observed that the best calluses induction rates from the variety B35-17-29 were obtained with the use of 2,4-D (900 μM) and Picloram (225 μM). Analyzing the genotypes and the position of the leaves it’s been found that the best rates were observed with the inoculation of the apical part in all tested genotypes. On the multiplication, it was verified that the best fresh biomass gain was seen with embryogenic calluses multiplication in stirring liquid media. Anatomically, it was verified that the foliar explants used for calluses induction presented uniseriate epidermis, with stomas only on the abaxial face, bi-stratified hypodermis presence, on both faces, with dorsiventral mesophilic. It could be observed the initial development of the calluses associated to vascular bundles in 100% out of the propagating material analyzed. On the primary callus formation, the cell divisions begin around the vascular bundles. It’s been observed that the primary calluses are only made up of meristematic cells in its more internal area, whilst embryogenic calluses are fully made up of these cells. From the embryogenic callus, the somatic embryos formation is seen. Regarding the biochemical analysis, it’s verified that there are no considerable differences between the sugar content in the foliar segments which was proved to be responsive or not to the somatic embryogenic induction. On the other hand, leaves with calluses presented lower fructose levels and higher starch concentration when compared with those that didn’t react. It was found that primary calluses presented higher concentration of sugar compared with embryogenic calluses, which also differs for presenting higher sucrose concentration. In regard to fatty acids concentration, there wasn’t a major difference between foliar explants with calluses and those that didn’t react. The amino acids content presented gradual increase during the calluses induction step. In every cultivation, only embryogenic calluses presented higher proline concentration. Foliar explants with zero cultivation days and those that didn’t react presented intermediate protein levels, being noticed a reduction of the rates with the formation of primary calluses and enhancement in case of embryogenic calluses.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Botânica, 2013. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2016-01-05T15:26:42Z No. of bitstreams: 1 2013_TatianeRosaMonteiro.pdf: 1181969 bytes, checksum: ddebb94d5e4df135650c9219569bfb53 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2016-01-06T14:44:58Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_TatianeRosaMonteiro.pdf: 1181969 bytes, checksum: ddebb94d5e4df135650c9219569bfb53 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-01-06T14:44:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_TatianeRosaMonteiro.pdf: 1181969 bytes, checksum: ddebb94d5e4df135650c9219569bfb53 (MD5) / O presente trabalho objetivou avaliar aspectos morfo-fisiológicos envolvidos na embriogênese somática e regeneração de plantas de dendezeiro (Elaeis guineensis Jacq.) a partir do uso de meios de consistência líquida e de cultivos em suspensão. Embriões zigóticos obtidos das variedades C 2501, C 2528 e C 7201 foram induzidos em meio de MS com 450 μM de Picloram, 30 g.L-1 de sacarose, 0,5 g.L-1 de glutamina, 2,5 g.L-1 de carvão ativado e 2,5 g.L-1 de Phytagel, sendo subcultivados ou não a cada 30 dias. Foi avaliado o efeito da passagem de calos embriogênicos por meios de cultura líquido e o estabelecimento de cultivos em suspensão sobre o processo de embriogênese somática e regeneração de plantas, porções embriogênicas foram transferidas para dois meios liquido: MeA (MS com 5 μM de Picloram) e MeB (MS com 5 μM de 2,4-D). Nessa fase foi possível separar dois tipos de propágulos: aqueles que não desagregaram completamente e aqueles considerados estabelecidos em suspensão. Num primeiro experimento, porções embriogênicas não desagregadas em meio líquido sob agitação (calos embriogênicos) foram transferidas para três meios de diferenciação: M1: ½ MS; M2: MS com 40 μM de Picloram e; M3: MS com 12,3 μM de 2iP e 0,6 μM de ANA. A partir dos embriões somáticos diferenciados, a regeneração de plantas foi realizada em meio de MS desprovido de reguladores de crescimento. Posteriormente, as plantas foram individualizadas e transferidas para meio de MS dupla-fase com 57 μM de AIB para induzir a formação de raízes, antes de serem aclimatizadas e transferidas para casa de vegetação. As plantas foram analisadas por citometria de fluxo para verificar possíveis alterações no conteúdo genômico. Os resultados revelaram que a condição de subcultivar a cada 30 dias foi determinante para estimular a formação de calos embriogênicos (20,8%). Verificou-se que a passagem de calos embriogênicos por meio líquido na presença de 2,4-D (MeB) proporcionou aumentos significativos na percentagem de calos com embriões somáticos diferenciados. Entre os meios testados, o M1 foi o que proporcionou os melhores resultados, com até 58,2% dos calos com embriões somáticos diferenciados. A variedade C 2528 no meio M3 apresentou os maiores índices de calos com embriões somáticos (80,2%), embora tenha sido no meio M1 que essa variedade apresentou o maior número de embriões tipo torpedo por calo (8,3). Embriões somáticos oriundos dos meios M1 e M3 também foram os que apresentaram as maiores frequências de regeneração, com 29,5% e 31,7% respectivamente. Na fase de aclimatização a percentagem de sobrevivência das mudas foi de 95,2%, ao final de 90 dias. Nas plantas regeneradas, a citometria de fluxo não evidenciou diferenças significativas no conteúdo médio de DNA nuclear quando comparadas com as plantas controle, tendo sido observado valores na ordem de 2C = 3,89±0,16 pg. Num segundo experimento, calos embriogênicos da variedade C 2528, estabelecidos e multiplicados em meio líquido MeB por um período de 210 dias, sob forma de agregados celulares, foram utilizados para diferenciação de embriões somáticos. Para tanto, os agregados foram transferidos para meio líquido de MS com 0,1 mg.L-1 de 2,4-D onde permaneceram por 0, 30 e 60 dias. Após os respectivos tempos, os agregados foram plaqueados em meio semissólido com a mesma constituição do meio anterior e acondicionados na ausência e presença de luz por até 90 dias. Para avaliar a influência do tamanho dos agregados na formação de embriões somáticos e regeneração de plantas durante o plaqueamento, os agregados foram divididos em duas classes: classe 1 e classe 2 (2 mm e 4 mm, respectivamente). Após 120 dias em meio semissólido, embriões somáticos foram transferidos para meio de MS para regeneração de plantas. Neste experimento, análises anatômicas foram realizadas para caracterizar e descrever as etapas envolvidas na diferenciação dos agregados celulares. Verificou-se que acima de 90% de ambas as classes de propágulos produzidos progrediram após serem plaqueados em meio semissólido. Quanto a taxa de embriões somáticos diferenciados, não foram observadas diferenças significativas entre as classes 1 e classe 2 de agregados (18,8% e 13,1%, respectivamente). No entanto, quando se avaliou agregados da classe 1, após 30 dias de diferenciação em meio sob suspensão, verificou-se que até 33,3% dos explantes apresentaram diferenciação de embriões somáticos, com a maior quantidade de embriões somáticos no estádio torpedo (8,3 por explante). ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The aim of this study is to evaluate morpho-physiological aspects involved in somatic embryogenesis and plant regeneration of the African oil palm (Elaeis guineensis Jacq.) based on the use of liquid consistency media and cultures in suspension. Zygotic embryos of the varieties C 2501, C 2528 and C 7201 were induced in an MS medium with 450 μM Picloram, 30 g.L-1 sucrose, 0.5 g.L-1 glutamine, 2.5 g.L-1 activated charcoal and 2.5 g.L-1 Phytagel, being subcultured (or not) every 30 days. The effect of the passage of embryogenic calluses through a liquid culture media and the establishment of cultures in suspension on the processes of somatic embryogenesis and plant regeneration was evaluated. The embryogenic portions were transferred to two liquid media: MeA (MS with 5 μM Picloram) and MeB (MS with 5 μ2,4-D). In this stage it was possible to separate two types of propagules: those that did not completely disaggregate and those considered as established in suspension. In the first experiment, embryogenic portions that were not disaggregated in a liquid medium under agitation (embryogenic callus) were transferred to three differentiation media: M1 - ½ MS; M2 - MS with 40 μM Picloram and; M3 - MS with 12.3 μM 2iP and 0.6 μM NAA. Based on the differentiated somatic embryos, plant regeneration was performed in an MS medium devoid of growth regulators. Subsequently, the plants were individualized and transferred to a double-phase MS medium with 57 μM IBA to induce rooting, before being acclimatized and transferred to greenhouse. The plants were analyzed by flow cytometry to verify changes in genomic content. The results showed that the condition of subculturing every 30 days was a determining factor to stimulate the formation of embryogenic callus (20.8%). It was found that the passage of embryogenic calluses through a liquid medium in the presence of 2,4-D (MeB) provided significant increases in the percentage of calluses with differentiated somatic embryos. Among the media tested, M1 was the one that provided the best results, with up to 58.2% of the calluses with differentiated somatic embryos. The C 2528 variety in M3 medium showed the highest rates of calluses with somatic embryos (80.2%), although it was in the M1 medium that this variety exhibited the highest number of embryos per torpedo-shaped callus (8.3). Somatic embryos originating from M1 and M3 media were also the ones that showed the highest frequency of regeneration, with 29.5% and 31.7% respectively. During the acclimatization phase, the seedling survival percentage was 95.2% at the end of 90 days. In regenerated plants, flow cytometry showed no significant differences in the average nuclear DNA content when compared with control plants; values in the range of 2C = 3.89±0.16 pg were observed. In the second experiment, calluses of the C 2528 variety, established and multiplied in MeB liquid medium for a period of 210 days, in the form of cell aggregates, were used for the differentiation of somatic embryos. For both, the aggregates were transferred to liquid MS medium with 0.1 mg.L-1 2,4-D, where they remained for 0, 30 and 60 days. After the respective periods, the aggregates were plated in a semi-solid medium with the same constitution as the previous medium and placed in the absence and presence of light for up to 90 days. To assess the influence of the size of the aggregates on the formation of somatic embryos and regeneration of plants during plating, the aggregates were divided into two classes: Class 1 and Class 2 (2 mm and 4 mm, respectively). After 120 days in a semi-solid medium, the somatic embryos were transferred to an MS medium for plant regeneration. In this experiment, anatomical analyses were performed to characterize and describe the steps involved in the differentiation of the cell aggregates. It was found that over 90% of both classes of propagules produced progressed after being plated in a semi-solid medium. Regarding the rate of differentiated somatic embryos, no significant differences were observed between class 1 and class 2 of aggregates (18.8% and 13.1%, respectively). However, when the class 1 aggregates were evaluated, after 30 days of differentiation in a medium under suspension, it was found that 33.3% of the explants displayed differentiation of somatic embryos, with the highest number of embryos in the torpedo stage (8.3 per explant).

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, 2006. / Submitted by wesley oliveira leite (leite.wesley@yahoo.com.br) on 2009-11-25T16:38:05Z No. of bitstreams: 1 tese TANIA MARIA DE ANDRADE RODRIGUES.pdf: 1596619 bytes, checksum: 19f1be4f615d67ff61d6579d7d4262ba (MD5) / Approved for entry into archive by Joanita Pereira(joanita) on 2009-12-07T19:44:15Z (GMT) No. of bitstreams: 1 tese TANIA MARIA DE ANDRADE RODRIGUES.pdf: 1596619 bytes, checksum: 19f1be4f615d67ff61d6579d7d4262ba (MD5) / Made available in DSpace on 2009-12-07T19:44:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese TANIA MARIA DE ANDRADE RODRIGUES.pdf: 1596619 bytes, checksum: 19f1be4f615d67ff61d6579d7d4262ba (MD5) Previous issue date: 2006 / Doenças cardíacas tanto congênitas quanto adquiridas apresentam alta morbi-mortalidade, constituindo no Brasil a primeira causa de óbito (29,9%). O impacto sócio-econômico dessas patologias repercute no sistema de saúde e em uma realidade de escassez de recursos e necessidade de priorização em sua alocação, direcionando para a primacia de investimentos em ciências básicas. Este estudo de cardiogênese experimental é de extrema importância para a compreensão dos mecanismos envolvidos na formação do coração, e o modelo de camundongos geneticamente modificados constitui valiosa ferramenta investigativa. Camundongos com deleção do gene Ringer finger 4 (rnf4) foram gerados com o objetivo de avaliar a repercussão nos embriões recessivos negativos das alterações anátomo-patológicas, visando entender a função deste gene na formação do coração. RNF4 é um fator de transcrição que é expresso no coração durante a embriogênese. Foram utilizados camundongos das linhagens BALBc e C57Bl6. Foram dissecados 825 embriões, sendo 423 BALBc e 402 C57Bl6, distribuídos entre as seguintes faixas etárias: de 11 a 17 dias de desenvolvimento embrionário, animais com menos de um dia de vida e animais com 21 dias pós-natal. Os resultados demonstraram que 34.6% dos camundongos com deleção total do rnf4, a partir do décimo terceiro dia de desenvolvimento embrionário, apresentaram defeito do septo ventricular, paredes ventriculares finas e desorganização das camadas ventriculares, ocasionando repercussão hemodinâmica e clínica sugestiva de insuficiência cardíaca congestiva. Além disso, nenhum animal foi viável. Conclui-se que a deleção do gene rnf4 é letal para os embriões de camundongos por ser essencial na formação do coração. Esses resultados contribuem para entendermos os mecanismos moleculares envolvidos na embriogênese. Ademais, serão úteis no desenvolvimento de novas estratégias terapêuticas para as doenças cardíacas. ________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Cardiac diseases, whether congenital or acquired, show a high mortality rate worldwide and in Brazil, they represent the major cause in natural deaths with 29.9% of the cases. The social and economical impact of those pathologies on the Brazilian Public Health System is particularly worsened due to the lack of resources and the need to optimize the scarce resource allocation, leading to the prioritization of investments towards the basic sciences. For all the above reasons, research in experimental cardiogenesis is of vital importance to the understanding of the mechanisms involved in the heart formation, where models using genetically altered mice constitute an invaluable tool in the investigation for cures. Our study was conducted by deleting the Ring Finger 4 (Rnf4) mouse genes and observing the effects the absence of such gene has in the formation of their hearts. RNF4 is a transcription factor which is expressed in the heart during embryogenesis. In that sense, mice of lineage BALBc and C57B6 which presented the Rnf4 deletion were selected for our experiments. A total of 825 embryos were dissected, where 423 were of the BALBc lineage and 402 of the C57B16 lineage. In either case, the embryos were separated into age groups: 1) 11 to 17 days of embryonary development; 2) less than 1 day old; and 3) 21-day old specimens. The results show that 34.6% of the mice with deletion of the Rnf4 gene presented ventricular septal defect (VSD), thin ventricular walls, and disorder of the ventricular layers, leading to hemodynamic and clinical pathologies that suggest congestive heart failure (CHF). Moreover, animals which lack of functional Rnf4 gene die due to cardiac defect. We concluded that deletion of the rnf4 gene is lethal for mice embryos, since such gene is apparently essential in the heart formation. These results will contribuite to understand the molecular mecanisms involved in the heart embryogenesis. In addition, it will be helpful to development new therapeutical strategies to heart diseases.

Made available in DSpace on 2018-08-01T22:57:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_9996_Dissertação de mestrado_Cristiana Torres Leite.pdf: 1087059 bytes, checksum: a830621e53c2439402a16faf39da62b8 (MD5) Previous issue date: 2016-08-31 / Assim como para outros taxa, diferente respostas morfogênicas in vitro (organogênese direta / indireta ou embriogênese) foram relatadas para as espécies de Passiflora, utilizando as mesmas condições ambientais in vitro. O número de cromossomos distintos entre algumas espécies do gênero Passiflora tem sido apontado como um possível fator genético relacionado com as diferentes respostas in vitro. Com base nesta hipótese, o presente estudo teve como objetivo avaliar as respostas in vitro de espécies de Passiflora que exibem diferentes números cromossômicos, níveis de ploidia e conteúdo de DNA nuclear para responder a seguinte pergunta: estes aspectos genômicos influenciam à resposta in vitro? Para isso, embriões zigóticos maduros (MZE) de cinco espécies, pertencentes a quatro subgêneros de Passiflora, foram inoculados em meio MS suplementado com 4.4 μM de benzilaminopurina (BAP) e nove concentrações de 2,4-ácido diclorofenoxiacético (4.53 - 144.96 μM 2,4-D). Corroborando com os estudos anteriores, diferentes respostas morfogênicas foram observadas sob as mesmas condições in vitro. Apenas calos friáveis (FC) foram obtidos a partir MZE de Passiflora coriacea Juss (2n = 12 cromossomos, 2C = 1,00 pg), Passiflora lindeniana TR & Planch (2n = 24, 2C = 2.42 pg) e Passiflora contracta Vitta (2n = 48 cromossomos, 2C = 4.78 pg). Plântulas foram recuperadas a partir de MZE de Passiflora foetida L. (2n = 20, 2C = 1.04 pg) e Passiflora miniata Vanderpl. (2n = 18, 2C = 3,40 pg) via organogênese indireta e embriogênese, respectivamente. Como em outros estudos, as plântulas foram regeneradas a partir de embriogênese somática indireta somente para as espécies de Passiflora com 2n = 18 cromossomos (P. 12 miniata). Apesar do número de cromossomos e do nível de ploidia relativamente mais baixo do que em outros taxa de Passiflora, o tamanho do genoma nuclear das espécies com 2n = 18 é relativamente mais elevado. Assim, as mudanças no cariótipo (poliploidia, hibridização e disploidia) que amplamente ocorrem durante a evolução de Passiflora, provavelmente resultaram em número de cópias distintas dos genes relacionados ao processo morfogênico em plantas. Portanto, para o gênero Passiflora é importante olhar simultaneamente algumas características genômicas para compreender as respostas in vitro.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Tecnologia, Departamento de Engenharia Florestal, Programa de Pós-Graduação em Ciências Florestais, 2014. / Texto parcialmente liberado pelo autor. Conteúdo restrito: capítulos 1 e 2. / Submitted by Ana Cristina Barbosa da Silva (annabds@hotmail.com) on 2015-02-11T19:43:44Z No. of bitstreams: 1 2014_ElineadeOliveiraFreitas_Parcial.pdf: 700810 bytes, checksum: 1d12f8a837e8db083a11cc3d70ac0c4c (MD5) / Approved for entry into archive by Ruthléa Nascimento(ruthleanascimento@bce.unb.br) on 2015-02-12T17:30:18Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_ElineadeOliveiraFreitas_Parcial.pdf: 700810 bytes, checksum: 1d12f8a837e8db083a11cc3d70ac0c4c (MD5) / Made available in DSpace on 2015-02-12T17:30:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_ElineadeOliveiraFreitas_Parcial.pdf: 700810 bytes, checksum: 1d12f8a837e8db083a11cc3d70ac0c4c (MD5) / O presente trabalho objetivou desenvolver e otimizar o protocolo de embriogênese somática em açaizeiro (Euterpe oleracea Mart.), a partir do uso de propágulos formados por embriões zigóticos (EZ) oriundos de sementes em diferentes estádios de maturação, além de folhas e inflorescências imaturas provenientes de plantas adultas. Adicionalmente, análises morfo-anatômicas e por citometria de fluxo foram realizadas para melhor caracterizar e entender as etapas do processo. Na primeira parte deste trabalho, a embriogênese somática em EZ maduros e imaturos foi obtida, inicialmente a partir da indução de calos embriogênicos em meio de Murashige e Skoog (MS), suplementado com 2,5 g.L-1 de carvão ativado e com a auxina picloram nas concentrações de 225 e 450 μM. Uma vez obtidos, calos embriogênicos com embriões somáticos em início de diferenciação foram transferidos para meio de cultura com 12,3 μM de 2iP e 0,6 μM de ANA, visando a diferenciação e maturação de embriões somáticos. A regeneração de plantas foi realizada em meio de cultura com 1,0 μM BAP e 0,5 μM AG3. Em meio de indução foi possível observar a formação de calos embriogênicos em todos os tratamentos, independentemente do estádio de desenvolvimento dos EZ testados. O picloram na concentração de 450 μM proporcionou os melhores resultados para a formação de calos embriogênicos (84,7%). Na fase de diferenciação e maturação 100% dos explantes que apresentavam formação de calo embriogênico formaram embriões somáticos. A maior frequência de regeneração de plantas (58,7%) foi observada no tratamento em que se utilizou o meio de indução constituído por 450 μM de picloram e em embriões somáticos obtidos de explantes oriundos de EZ imaturos. A partir de análises morfoanatômicas comprovou-se que a indução da embriogênese somática apresentou estádios característicos do tipo indireto. As plantas regeneradas apresentaram desenvolvimento normal, com crescimento de raízes e parte aérea. Os calos, embriões somáticos e as plantas obtidas foram analisados por citometria de fluxo para verificar possíveis alterações no DNA, fato que não foi observado. A segunda parte deste trabalho utilizou explantes provenientes de inflorescências e folhas imaturas para a indução da embriogênese somática. Os explantes provenientes de plantas adultas, uma vez obtidos, foram colocados em meio de cultura de MS, suplementado com 2,5 g.L-1 de carvão ativado e as auxinas picloram e 2,4-D na concentração de 450 μM para a indução de calos. Foram testadas inflorescências imaturas em diferentes estádios de desenvolvimento (estádios I= 6 cm; II= 8 cm e III= 12 cm), e folhas imaturas de diferentes regiões foliares do palmito (basal, mediano e apical). Para a diferenciação de embriões somáticos, calos embriogênicos e embriões somáticos foram transferidos para meio de cultura com as concentrações de picloram e 2,4-D reduzidas para 0,1 mg.L-1. Embriões somáticos em início de diferenciação foram transferidos para meio de cultura com 12,3 μM de 2iP e 0,6 μM de ANA para a maturação de embriões somáticos. Verificou-se que a auxina picloram proporcionou os melhores resultados na indução de calos embriogênicos, tanto para inflorescências como para as folhas imaturas. Os diferentes estádios de desenvolvimento das inflorescências não apresentaram diferenças significativas nas respostas, enquanto que nas folhas imaturas resultados superiores na etapa de indução para a formação de calos foram observados quando os explantes eram provenientes das regiões basal e mediana do palmito. Na etapa de diferenciação, calos embriogênicos provenientes de inflorescências imaturas em meio de cultura com picloram apresentaram até 100% dos explantes diferenciando embriões somáticos, que progrediram lentamente para estádios de torpedo em meio de maturação. Já em calos embriogênicos provenientes de folhas imaturas a diferenciação de embriões somáticos foi observada somente em explantes cultivados originalmente em meio suplementado com picloram em porcentagens que atingiram até 50% dos explantes da região mediana do palmito, embora, esses embriões somáticos não tenham apresentado progressão para estádios mais tardios de desenvolvimento. Os resultados obtidos sugerem que tanto os explantes provenientes de inflorescências como de folhas imaturas podem ser utilizados como fontes de explantes para a embriogênese somática em açaizeiro. __________________________________________________________________________________ ABSTRACT / This study had the aim of developing and optimizing the protocol for somatic embryogenesis in açaí palm (Euterpe oleracea) using explants from zygotic embryos removed from seeds at different stages of maturation and from leaf and immature inflorescences from adult plants. Moreover, morphological, anatomical and citometry of flux analyses were achieved to a better characterization and comprehension of the process phases. At the first part of this work, somatic embryos (SE) were obtained from mature and immature zygotic embryos (ZE). Initially, embryogenic calli were induced on Murashige & Skoog (MS) medium supplemented with 2.5 g.L-1 of activated charcoal and the auxin picloram at the concentration of 225 or 450 μM. Once developed, embryogenic calli carrying SE at the begin of differentiation were transferred to culture medium containing 12.3 μM of 2iP and 0.6 μM of NAA, in order to induce the differentiation and maturation of the somatic embryos. Plant regeneration occurred at culture medium supplemented with 1.0 μM BAP and 0.5 μM GA3. At the induction medium, embryogenic calli were formed in all treatments, independently of the maturation state of the ZE used as explant, however, the medium with 450 μM picloram showed the best results for the formation of embryogenic calli (84.7%). At the differentiation and maturation phase, 100% of the explants containing embryogenic callus allowed the development of somatic embryos. The higher frequency of plant regeneration (58.7%) was obtained at the induction medium with 450 μM picloram and using the immature ZE explants. Through the morpho-anatomical analysis it could be proved that the induction of the somatic embryogenesis showed characteristics stages of the indirect development. The plants regenerated from the embryos showed a normal development, with a normal growing of roots and aerial part. At the end, the calli, SE and plants regenerated were analyzed by flow cytometry to quantify the amount of DNA, which showed no differences between the samples. At the second part of this work, explants from inflorescences and immature leaves were used to induce somatic embryogenesis. Those explants, from adult plants, were inoculated at culture medium MS supplemented with 2.5 g.L-1 of activated charcoal and two auxins, picloram or 2,4-D, at the concentration of 450 μM for the callus induction. Immature inflorescences at three developmental states (I = 6 cm; II = 8 cm and III = 12 cm) and immature leaves from different regions (basal, median and apical) of the heart of palm were tested. To the differentiation of the somatic embryos, embryogenic calli and SE were transferred to a culture medium containing the same original auxin, picloram or 2,4-D, with the concentration reduced to 0.1 mg.L-1. Somatic embryos at the beginning of differentiation were transferred to a culture medium containing 12.3 μM of 2iP and 0.6 μM of NAA for the maturation of the somatic embryos. The auxin picloram showed best results at embryogenic callus induction in both inflorescences and immature leaves. The inflorescences at different stage of development did not show significant differences at the end, while for the immature leaves, explants from the portions basal and median of the heart of palm gave rise to the best results at the induction of callus phase. At the differentiation phase, embryogenic calli from the immature inflorescences grown at medium containing picloram showed 100% of differentiation to somatic embryos, and these developed slowly to torpedo stage under the maturation medium. While considering the embryogenic calli from the immature leaves, the differentiation of somatic embryos occurred only on explants cultivated originally at medium supplemented with picloram, reaching the percentage of 50% for the explants from the median region, although, those somatic embryos did not developed to later stages of development. The results allow suggesting that explants from both immature inflorescences and leaves from adult plants of açaí palm can be used as explant sources to somatic embryogenesis.