Made available in DSpace on 2016-02-26T13:34:38Z (GMT). No. of bitstreams: 2 luciana_leo_ioc_mest_2015.pdf: 2510426 bytes, checksum: 7967d9273680443d5c735d2b5543fee6 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2016-02-23 / O papel da lipoxina A4 (LXA4) no sistema imunológico é bem estudado, mas o papel dessa molécula na fisiologia do sistema nervoso central (SNC) só foi abordado recentemente. Como um modulador alostérico positivo, a LXA4 produz efeitos canabimiméticos e pode, dessa forma, estar envolvida em vários aspectos de funções fisiológicas reguladas pelo sistema endocanabinóide (eCB). Nós investigamos essa hipótese analisando o comportamento de camundongos knockout (5-LO-/-) para a enzima 5-lipoxigenase (5-LO), que participa da síntese de LXA4. Ansiedade, consumo de água e alimento, locomoção, nocicepção e memórias aversivas são comportamentos reconhecidos como sob controle do sistema eCB e foram avaliados neste estudo. Nenhuma alteração foi observada no comportamento de 5-LO-/- em relação ao consumo de água e alimento e locomoção no teste de campo aberto. No entanto, o tratamento com LXA4 produziu efeito ansiolítico no labirinto em cruz elevada. Além disso, inibição farmacológica da 5- LO demonstrou um efeito ansiogênico em animais idosos, mas não em adultos jovens, indicando que a LXA4 endógena exerce um efeito regulatório sobre ansiedade de forma idade-dependente. Os animais 5-LO-/- apresentaram um aumento na sensibilidade e redução na tolerância à dor no teste de sensibilidade ao choque. Ainda, uma disfunção em memória de curto prazo e extinção de memória no teste de esquiva inibitória foi observada nos animais 5-LO-/-, indicando que a LXA4 pode agir na facilitação do aprendizado. Esse dado é de grande importância para o possível uso da LXA4 como tratamento do dano cognitivo decorrente de neuroinflamação O estudo da sepse nos revela que um estímulo inflamatório pode gerar produção exacerbada de moléculas pró-inflamatórias no SNC, o que causa neuroinflamação e disfunção cognitiva. A LXA4 é uma boa candidata como alvo de terapia para o dano cognitivo decorrente de neuroinflamação, uma vez que tem potencial anti-inflamatório e neuroprotetor por ação em receptores ALX e CB1, respectivamente. Neste estudo foi possível observar queda na produção de citocinas pró-inflamatórias no plasma e no cérebro de camundongos com inflamação sistêmica induzida por lipopolissacarídeo (LPS) mediante tratamento com LXA4. Além disso, o dano cognitivo observado sobre consolidação de memória neste modelo de sepse foi prevenido após tratamento com LXA4. Os dados apresentados neste estudo apontam funções do SNC sujeitas a modulação pela disponibilidade de LXA4 endógena e um efeito benéfico do tratamento da LXA4 no resgate de dano cognitivo decorrente de neuroinflamação. Apresentamos evidências que contribuem para o esclarecimento do papel fisiológico da LXA4 no SNC e para o seu potencial no tratamento de patologias inflamatórias que atingem o encéfalo / The role of lipoxin A 4 (LXA 4 ) in the immune system is well studied, however the part this molecule play s in central nervous system (CNS) physiology has only recently been addressed. LXA 4 , as a CB1 allosteric enhancer, has a cannabimimetic effect and may therefore be involved in various aspects of endocannabinoid system (eCB) physiological functions. We investigated this reasoning by analyzing the behavior of 5 - lipoxygenase ( 5 - LO ) knockout mice (5 - LO - / - ) . A nxiety - like behavior, a ppetitive behavior, locomotion, nociception and learning and memory are all known to be under control of the eCB system and were assessed in this study. No alteration was observed in the behavior of 5 - LO knockout mi ce regarding appetitive behavior, measured by food and water intake, or locomotion in the open field test. However, treatment with LXA 4 produced an anxiolytic - like effect on the elevated plus maze. Further, pharmacological inhibition of 5 - LO showed a n anxi ogenic - like effect in aged, but not adult mice, indicating that endogenous LXA 4 has an age - dependent effect on the modulation of anxiety - like behavior. 5 - LO - / - mice presented an increase in pain sensitivity and a decrease in pain tolerance in the foot shoc k sensitivity test. Interestingly, the animals also presented impairment in short - term memory and extinction learning in the step - down inhibitory avoidance task, pointing out that LXA 4 may act in the facilitation of fear learning. These data are of great i mportance to the possible use of LXA 4 as treatment to neuroinflammation induced cognitive impairment. The study of sepsis reveals that an inflammatory stimulus can induce the exacerbated production of pro - inflammatory cytokines in the CNS, which causes neu roinflammation and cognitive impairment. LXA 4 is a good candidate as target in the treatment of neuroinflammation induced cognitive impairment, since it has anti - inflammatory and neuroprotection potential due to its action on ALX and CB1 receptors, respect ively. In this study, we observed a decrease in the production of pro - inflammatory cytokines in plasma and brain of mice with induced systemic inflammation by lipopolysaccharide (LPS) injection due to treatment with LXA 4 . Moreover, the memory consolidation impairment observed in this sepsis animal model was prevented following LXA 4 treatment. The data presented in this study point out CNS functions subjected to modulation by endogenous LXA 4 availability and a beneficial effect of LXA 4 tr eatment on neuroinflammation induced cognitive impairment. We present evidence that contributes to the understanding of the physiological role of LXA4 in the CNS and its potential in the treatment of inflammatory pathologies that affect the brain

Orientador: José Roberto Ruggiero / Coorientador: Jorge Chahine / Banca: Manoel de Arcísio Miranda Filho / Banca: Pedro Pascutti / Banca: Ronaldo Junio de Oliveira / Banca: Alexandre Sumán de Araújo / Resumo: A anandamida é uma molécula anfipática que tem papel fundamental nas funções neurofisiológicas, sendo o agonista endógeno dos receptores canabinóides conhecidos como CB1 e CB2, os mesmos receptores dos compostos psicoativos da Cannabis sativa. Estudos mostram que a anandamida é capaz de realizar suas funções neurofisiológicas mesmo com seus receptores inativos, sugerindo uma atuação independente de receptores. Essa hipótese aliada com a teoria dos lipídios sugere que a anandamida interaja com os fosfolipídios alterando suas propriedades elásticas que levam a uma abertura ou fechamento das proteínas de membrana que são responsáveis por seu efeito biológico. As propriedades elásticas de uma bicamada lipídica podem ser associadas com seu perfil de pressão lateral, dessa forma, para obtermos informações a respeito do modo de ação independente de receptor investigamos como a anandamida particiona em uma bicamada de DOPC e quais propriedades estruturais e elásticas são alteradas por ela. Os resultados mostraram que a preferência do AEA é particionar na bicamada com seus grupos hidrofílicos voltados para a fase aquosa, na posição próxima ao grupo fosfato e éster e mantendo uma estrutura preferencial estendida, onde sua cauda acílica fica protegida das moléculas de água no núcleo hidrofóbico da bicamada. A crescente concentração de AEA não é capaz de alterar significantemente propriedades da membrana como, espessura, área por lipídio e parâmetro de ordem, porém altera... / Abstract: Anandamide is an amphipathic molecule that plays a fundamental role in neurophysiological functions, being the endogenous agonist of the cannabinoid receptors known as CB1 and CB2, the same receptors of the psychoactive compounds of Cannabis sativa. Studies show that anandamide is able to perform its neurophysiological functions even with its inactive receptors, suggesting an independent performance of receptors. This hypothesis allied with the lipid theory suggests that anandamide interacts with the phospholipids by altering its elastic properties that lead to an opening or closing of the membrane proteins that are responsible for its biological effect. The elastic properties of a lipid bilayer can be associated with its lateral pressure profile, so, to obtain information about the receptor-independent mode of action, we investigated how anandamide partitions in a DOPC bilayer and which structural and elastic properties are altered for her. The results showed that the AEA preference is to partition the bilayer with its hydrophilic groups facing the aqueous phase, in the position close to the phosphate and ester group and maintaining an extended preferred structure, where its acrylic tail is protected from the water molecules in the hydrophobic core of the bilayer. The increasing concentration of AEA is not capable of significantly changing membrane properties such as thickness, area by lipid and order parameter, but it significantly alters the lateral pressure profile and ... / Doutor

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / El estrés nociceptivo (NS) en ratones macho durante la lactancia, genera alteraciones metabólicas que se manifiestan en el estado adulto. El objetivo de este estudio fue determinar si algunas de dichas alteraciones que involucran al tejido adiposo epididimal están asociadas a una hiperactivación del Sistema Endocanabinoide (SEC). Al respecto, una parte fundamental del SEC lo constituyen los receptores tipo 1 para canabinoides/endocanabinoides (CB1R), su ligando endógeno Anandamida (ADA) y la enzima que degrada a ADA, la amido hidrolasa de ácidos grasos (FAAH). Doce horas posterior al nacimiento, crías macho de ratones de la cepa CD-1, de semejante tamaño de camada y peso corporal (PC), conformaron 2 grupos: Control (C) y Estrés (E), recibiendo ambos lactancia cruzada al azar. Durante la lactancia, el grupo E recibió diariamente una inyección subcutánea de suero fisiológico y ambos grupos se sometieron a un control diario de PC. A partir del día 30, el PC se evaluó cada 10 días en conjunto con la ingesta de alimento; ambos parámetros no mostraron diferencias significativas entre C y E, al igual que una prueba de tolerancia a la glucosa realizada a los 150 días de edad. Posteriormente, animales de 160 días fueron sacrificados para extraer sangre y panículo adiposo epididimal (PAE). Las concentraciones plasmáticas de corticosterona inmunoreactiva (ir-CTT), leptina y adiponectina se determinaron mediante ensayos de ELISA comerciales. En el PAE, se analizó la expresión de CB1R y adipofilina mediante RT-PCR y Western Blot, además de la actividad enzimática de la FAAH mediante su capacidad de hidrolizar ADA radioactiva y la actividad de la lipasa lipoproteica (LPL) mediante espectrofluorimetría utilizando un sustrato sintético. Los resultados mostraron cantidades significativamente mayores de grasa epididimal, ir-CTT, leptina y expresión proteica de CB1R y adipofilina en el grupo E. Contrariamente, la actividad de la FAAH como los niveles de adiponectina son significativamente menores en este grupo. No hubo diferencias significativas en la LPL (sólo tendencia a ser mayor en el grupo E), ni en la expresión de mRNA para CB1R y adipofilina. La mayor acumulación de grasa epididimal en el grupo E adulto, sugiere una reprogramación disfuncional de dicho tejido causada por el NS, reforzado a largo plazo por los niveles aumentados de leptina plasmática y molecularmente evidenciada por una hiperactividad de CB1R, debido a la acción concertada de su mayor expresión proteica con la menor actividad de la FAAH / FONDECYT 1070663/1100145

Made available in DSpace on 2016-02-05T18:30:09Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-07-31. Added 1 bitstream(s) on 2016-02-05T18:34:19Z : No. of bitstreams: 1 000857839.pdf: 1265917 bytes, checksum: 668aecd70d30203ad662b956638e0da8 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O objetivo do presente estudo foi caracterizar o impacto da breve bloqueio dos receptores canabinóides CB1 ou CB2 durante o período neonatal sobre o crescimento somático e desenvolvimento esquelético durante a infância, puberdade e na idade adulta em ratos. Ratos Wistar recém-nascidos foram distribuídos aleatoriamente em seis grupos, três grupos do sexo masculino e três grupos femininos. Os grupos tratados receberam durante os primeiros sete dias de vida de uma dose subcutânea de antagonistas dos receptores CB1 (AM251) ou CB₂ (SR144528) (3 mg/kg dissolvidos em 50 uL de veículo composto em álcool absoluto e tampão fosfato salino - PBS). Os grupos controle receberam a solução veículo com mesmo volume e período. O peso corporal foi mensurado aos 20, 40, 120 dias de idade e os fêmures direitos foram coletados. O comprimento e a espessura dos fêmures foram medidos e a densidade mineral óssea areal (DMO areal) foi determinada por meio de um densitômetro de dupla emissão de raios-X (DEXA). O teste biomecânico de flexão da cabeça do fêmur foi utilizado para avaliar a força máxima, a energia para fratura, e rigidez extrínseca dos ossos. Ganho de massa corporal, DMO areal e propriedades biomecânicas do osso aumentaram rapidamente com a idade em todos os grupos. Entre animais veículo, os padrões de dimorfismo sexual esquelética foram evidentes após a puberdade. No entanto, o bloqueio neonatal dos receptores canabinóides CB1 e CB2 promoveu um efeito transitório e sexo-dependentes sobre a massa corporal e desenvolvimento ósseo ao longo da vida, e que a inibição neonatal desses receptores nos machos promoveu um efeito bifásico sobre a aquisição de DMO areal ao longo do desenvolvimento, e aumento da fragilidade óssea nos machos AM251 na idade adulta. Este estudo demonstrou que... / The aim of the present study was to characterize the impact of brief blockade of cannabinoid CB1 or CB2 receptors during neonatal period on somatic growth and skeletal development during childhood, puberty, and adulthood in rats. Newborn Wistar rats were randomly divided into six groups, three male groups and three female groups. The treated groups received during the firsts seven days of life a subcutaneous dose of a CB1 (AM251) or CB₂ (SR144528) receptors antagonist (3 mg/kg dissolved in 50 μl of a vehicle consisting of absolute ethanol and phosphate buffered saline - PBS). Control groups received the vehicle solution in the same volume and period. Body weight was measured at 20, 40, 120 days of age and femurs were collected. The length and thickness of the femurs were measured and the areal bone mineral density (areal BMD) was determined by dual-energy X-ray absorptiometry (DEXA). Biomechanical femoral neck bending testing was used to evaluate bone breaking strength, energy to fracture, and extrinsic stiffness. Weight gain, areal BMD and bone biomechanical properties increased rapidly with respect to age in all groups. In vehicle animals, skeletal sexual dimorphism patterns were evident after puberty. However, neonatal blockade of cannabinoid CB1 and CB2 receptors promoted a transient and sex-dependent effect on the body weight and bone development throughout the life, and that neonatal inhibiting the CB1 and CB2 receptors in males promotes a biphasic effect on the acquisition of areal BMD throughout development, and increased bone fragility in males AM251 in adulthood. This study demonstrated that brief blockade of cannabinoid CB1 or CB2 receptors during neonatal period causes a long-lasting and sex-dependents modification in somatic growth and skeletal development in rats

Os efeitos dos canabinoides em algumas áreas encefálicas que expressam receptores endocanabinoides, como é o caso dos núcleos hipotalâmicos, não são ainda muito bem definidos. Vários estudos têm demonstrado o papel de alguns núcleos hipotalâmicos na organização das reações induzidas pelo medo inato e pelo pânico. As respostas de defesa induzidas pelo medo instintivo caracterizam-se por serem mais elaboradas e dirigidas para algum abrigo ou rota de fuga. O estado de pânico pode ser provocado experimentalmente em animais de laboratório através da diminuição da atividade do sistema GABAérgico. O objetivo deste trabalho foi estudar os padrões comportamentais de fuga elaborada induzidos pelo bloqueio de receptores GABAérgicos do tipo A, com microinjeções intra-hipotalâmicas de bicuculina (BIC), especificamente na divisão dorso-medial do hipotálamo ventro-medial (VMHDM), assim como estabelecer o envolvimento endocanabinoides e o papel do receptor canabinoide do tipo 1 (CB1) na modulação das respostas defensivas organizadas pelo hipotálamo medial. Os resultados mostraram que a administração prévia de doses intermediárias (5pmol) de anandamida (AEA) atenuaram as respostas defensivas induzidas pela microinjeção intra-VMHDM de bicuculina (40ng), efeito este prevenido pelo pré-tratamento intra-hipotalâmica com antagonista de receptores CB1. Os resultados indicam que a AEA pode modular os efeitos pró-aversivos da bicuculina no VMHDM por meio do recrutamento de receptores CB1. / The effects of cannabinoids in some brain areas that express endocannabinoid receptors, such as some hypothalamic nuclei, are not yet well known. Several studies have demonstrated a role of hypothalamic nuclei in the organisation of behavioural responses induced by innate fear and panic attacks. The defensive responses induced by instinctive fear are more elaborated and oriented toward a burrow or alternative route of escape. Panic-prone states are able to be experimentally induced in laboratory animals decreasing the GABAergic system activity. The aim of this work was to study panic-like elaborated defensive behaviour evoked by GABAA receptor blockade with bicuculline (BIC) in the dorsomedial division of the ventromedial hypothalamus (VMHDM), we also aimed to establish the involvement of endocannabinoids and the role of CB1 cannabinoid receptor in the modulation of elaborated defense behavioural responses organised by medial hypothalamus. The results showed that intra-hypothalamic administration of anandamide (AEA) at the intermediate dose (5pmol) attenuated defensive responses induced by intra-VMHDM microinjection of bicuculline (40ng). This effect, however, was prevented by the pre-treatment of VMHDM with the CB1 receptor antagonist AM251. These results indicate that AEA can modulate the pro-aversive effects of bicuculline into the VMHDM, recruiting CB1 receptors.

Os efeitos dos canabinoides em algumas áreas encefálicas que expressam receptores endocanabinoides, como é o caso dos núcleos hipotalâmicos, não são ainda muito bem definidos. Vários estudos têm demonstrado o papel de alguns núcleos hipotalâmicos na organização das reações induzidas pelo medo inato e pelo pânico. As respostas de defesa induzidas pelo medo instintivo caracterizam-se por serem mais elaboradas e dirigidas para algum abrigo ou rota de fuga. O estado de pânico pode ser provocado experimentalmente em animais de laboratório através da diminuição da atividade do sistema GABAérgico. O objetivo deste trabalho foi estudar os padrões comportamentais de fuga elaborada induzidos pelo bloqueio de receptores GABAérgicos do tipo A, com microinjeções intra-hipotalâmicas de bicuculina (BIC), especificamente na divisão dorso-medial do hipotálamo ventro-medial (VMHDM), assim como estabelecer o envolvimento endocanabinoides e o papel do receptor canabinoide do tipo 1 (CB1) na modulação das respostas defensivas organizadas pelo hipotálamo medial. Os resultados mostraram que a administração prévia de doses intermediárias (5pmol) de anandamida (AEA) atenuaram as respostas defensivas induzidas pela microinjeção intra-VMHDM de bicuculina (40ng), efeito este prevenido pelo pré-tratamento intra-hipotalâmica com antagonista de receptores CB1. Os resultados indicam que a AEA pode modular os efeitos pró-aversivos da bicuculina no VMHDM por meio do recrutamento de receptores CB1. / The effects of cannabinoids in some brain areas that express endocannabinoid receptors, such as some hypothalamic nuclei, are not yet well known. Several studies have demonstrated a role of hypothalamic nuclei in the organisation of behavioural responses induced by innate fear and panic attacks. The defensive responses induced by instinctive fear are more elaborated and oriented toward a burrow or alternative route of escape. Panic-prone states are able to be experimentally induced in laboratory animals decreasing the GABAergic system activity. The aim of this work was to study panic-like elaborated defensive behaviour evoked by GABAA receptor blockade with bicuculline (BIC) in the dorsomedial division of the ventromedial hypothalamus (VMHDM), we also aimed to establish the involvement of endocannabinoids and the role of CB1 cannabinoid receptor in the modulation of elaborated defense behavioural responses organised by medial hypothalamus. The results showed that intra-hypothalamic administration of anandamide (AEA) at the intermediate dose (5pmol) attenuated defensive responses induced by intra-VMHDM microinjection of bicuculline (40ng). This effect, however, was prevented by the pre-treatment of VMHDM with the CB1 receptor antagonist AM251. These results indicate that AEA can modulate the pro-aversive effects of bicuculline into the VMHDM, recruiting CB1 receptors.

O sistema endocanabinoide é composto por ligantes endógenos, enzimas responsáveis pela síntese e degradação desses ligantes, além de receptores específicos. As duas principais moléculas endógenas, anandamida (AEA) e 2- araquidonilglicerol (2-AG), após sintetizadas, são difundidos para a fenda sináptica e agem retrogradamente em receptores canabinóides do tipo 1 e/ou 2 (CB1 e CB2, respectivamente). A ação da AEA termina após processo de internalização seguido por hidrólise através da enzima FAAH (fatty acid amid hydrolase; amidohidrolase de acidos graxos), presente no neurônio pós-sináptico. O 2-AG, por sua vez, é degradado pela MAGL (monoacilglicerol lipase), localizada pré-sinapticamente. O receptor CB1 modula negativamente a liberação de diversos neurotransmissores no sistema nervoso central. A participação dos endocanabinoides é amplamente descrita em diversas estruturas cerebrais envolvidas na expressão de respostas relacionadas aos comportamentos de ansiedade e medo, tendo seus efeitos mediados principalmente por CB1 e CB2. Entretanto, o papel dos endocanabinoides em algumas estruturas ainda não está completamente elucidado. Dentre essas, destaca-se o Núcleo Leito da Estria Terminal (NLET), uma estrutura límbica com importante papel na integração de informações associadas com controle autonômico, endócrino e comportamental durante situações aversivas. Há poucas evidências da presença e do envolvimento do sistema endocanabinoide no NLET sobre a modulação de respostas de ansiedade. Desta forma, o objetivo do presente estudo foi avaliar o envolvimento do sistema endocanabinoide presente no NLET na modulação de respostas aversivas inata e aprendida. Para isso ratos Wistar (240g - 270g) foram implantados com cânulas guia bilateralmente no NLET para administração de drogas. Foram utilizados: veículo (DMSO 10%), antagonista de receptores CB1, o AM251 nas doses de 0,1 a 0,3 nmol/100nL e um inibidor da enzima FAAH, URB597 nas doses de 0,01 e 0,1 nmol/100nL. Cinco dias após a cirurgia estereotáxica, os animais foram submetidos ao teste de resposta inata do Labirinto em cruz elevado por 5 minutos. Avaliou-se o número de entradas e o tempo gasto nos braços abertos e fechados. Dois a três dias após, os animais foram submetidos ao protocolo do medo condicionado ao contexto, realizado em 3 dias consecutivos. No dia do teste, respostas comportamentais (tempo de congelamento) e autonômicas (Pressão arterial média; Frequência cardíaca, e Temperatura cutânea da cauda) foram continuamente avaliadas durante 10 min. Nossos resultados demonstraram que o bloqueio ou ativação de receptores CB1 no NLET não alterou as respostas de medo inato. Entretanto, no medo aprendido, o antagonismo de receptores CB1 no NLET aumentou o componente comportamental e pressórico. Ainda, a inibição da FAAH no NLET, via CB1, diminuiu o componente comportamental e pressórico da resposta emocional condicionada. Desta maneira, podemos sugerir que o sistema endocanabinoide presente no NLET modula respostas de medo aprendido, sem intervir nas respostas de medo inato. / The cannabinoid system is composed by two main endogenous ligands, enzymes responsible for synthesis and degradation of these ligands, and specific receptors. The two main endogenous molecules, anandamide (AEA) and 2-arachidonoylglycerol (2- AG), after synthesized post-synaptically, are released into the synaptic cleft, where they activate cannabinoid receptors type 1 and 2 (CB1 and CB2, respectively). AEA action terminates after internalization followed by enzymatic hydrolysis via FAAH (fatty acid amid hydrolase) located in the postsynaptic neuron. Meanwhile, 2-AG is degraded presynaptically by MAGL (monoacylglycerol lipase). CB1 receptor negatively modulates the release of several neurotransmitters in central nervous system. The endocannabinoid system is widely present in several brain structures involved on fear expression and anxiety-related responses, mostly mediated via CB1 and CB2 receptors. Nevertheless, the role of the endocannabinoids system role in specific brain structures is not yet completely elucidated. One structure in particular, is the Bed Nucleus of Stria Terminales (BNST), which is a limbic structure responsible for integration of autonomic, neuroendocrine and behavioral information during aversive situations. There is little evidence about the presence and involvement of endocannabinoid system in the BNST on anxiety responses modulation. Therefore, the aim of the present study was to evaluate the role of the endocannabinoid system in the BNST on the modulation of innate and learned aversive responses. Male Wistar rats (240 - 270g) were submitted to stereotaxic surgery for bilateral guide cannula implantation directed to the BNST, for drug administration. Animals received local injections of vehicle, AM251 (CB1-antagonist; 0,1 - 0,3 nmol/100nL), URB597 (an inhibitor of FAAH; 0,01 - 0,1 nmol/100nL). Five days after the stereotaxic surgery, animals were submitted to the innate response test, the elevated plus maze, for 5 minutes. The percentage of entries and time spent in open and the number of enclosed arms entries were analyzed. After two to three days, animals were submitted to the contextual fear conditioning protocol, performed in three consecutive days. On test day, behavioral (freezing) and autonomic responses (mean arterial pressure, heart rate and tail cutaneous temperature) were recorded for 10 min. Our data suggest that after CB1 receptors blocking or activation in the BNST do not promote changes in innate fear responses. However, during fear learning, CB1 receptor antagonism in the BNST increased freezing behavior and mean arterial pressure. In addition, FAAH inhibition in the BNST, via CB1, reduced freezing behavior and mean arterial pressure in the emotional conditioned response. These results suggest that endogenous cannabinoid system in the BNST can modulate defensive responses in fear learning, but not innate fear responses.

O sistema endocanabinoide é composto por ligantes endógenos, enzimas responsáveis pela síntese e degradação desses ligantes, além de receptores específicos. As duas principais moléculas endógenas, anandamida (AEA) e 2- araquidonilglicerol (2-AG), após sintetizadas, são difundidos para a fenda sináptica e agem retrogradamente em receptores canabinóides do tipo 1 e/ou 2 (CB1 e CB2, respectivamente). A ação da AEA termina após processo de internalização seguido por hidrólise através da enzima FAAH (fatty acid amid hydrolase; amidohidrolase de acidos graxos), presente no neurônio pós-sináptico. O 2-AG, por sua vez, é degradado pela MAGL (monoacilglicerol lipase), localizada pré-sinapticamente. O receptor CB1 modula negativamente a liberação de diversos neurotransmissores no sistema nervoso central. A participação dos endocanabinoides é amplamente descrita em diversas estruturas cerebrais envolvidas na expressão de respostas relacionadas aos comportamentos de ansiedade e medo, tendo seus efeitos mediados principalmente por CB1 e CB2. Entretanto, o papel dos endocanabinoides em algumas estruturas ainda não está completamente elucidado. Dentre essas, destaca-se o Núcleo Leito da Estria Terminal (NLET), uma estrutura límbica com importante papel na integração de informações associadas com controle autonômico, endócrino e comportamental durante situações aversivas. Há poucas evidências da presença e do envolvimento do sistema endocanabinoide no NLET sobre a modulação de respostas de ansiedade. Desta forma, o objetivo do presente estudo foi avaliar o envolvimento do sistema endocanabinoide presente no NLET na modulação de respostas aversivas inata e aprendida. Para isso ratos Wistar (240g - 270g) foram implantados com cânulas guia bilateralmente no NLET para administração de drogas. Foram utilizados: veículo (DMSO 10%), antagonista de receptores CB1, o AM251 nas doses de 0,1 a 0,3 nmol/100nL e um inibidor da enzima FAAH, URB597 nas doses de 0,01 e 0,1 nmol/100nL. Cinco dias após a cirurgia estereotáxica, os animais foram submetidos ao teste de resposta inata do Labirinto em cruz elevado por 5 minutos. Avaliou-se o número de entradas e o tempo gasto nos braços abertos e fechados. Dois a três dias após, os animais foram submetidos ao protocolo do medo condicionado ao contexto, realizado em 3 dias consecutivos. No dia do teste, respostas comportamentais (tempo de congelamento) e autonômicas (Pressão arterial média; Frequência cardíaca, e Temperatura cutânea da cauda) foram continuamente avaliadas durante 10 min. Nossos resultados demonstraram que o bloqueio ou ativação de receptores CB1 no NLET não alterou as respostas de medo inato. Entretanto, no medo aprendido, o antagonismo de receptores CB1 no NLET aumentou o componente comportamental e pressórico. Ainda, a inibição da FAAH no NLET, via CB1, diminuiu o componente comportamental e pressórico da resposta emocional condicionada. Desta maneira, podemos sugerir que o sistema endocanabinoide presente no NLET modula respostas de medo aprendido, sem intervir nas respostas de medo inato. / The cannabinoid system is composed by two main endogenous ligands, enzymes responsible for synthesis and degradation of these ligands, and specific receptors. The two main endogenous molecules, anandamide (AEA) and 2-arachidonoylglycerol (2- AG), after synthesized post-synaptically, are released into the synaptic cleft, where they activate cannabinoid receptors type 1 and 2 (CB1 and CB2, respectively). AEA action terminates after internalization followed by enzymatic hydrolysis via FAAH (fatty acid amid hydrolase) located in the postsynaptic neuron. Meanwhile, 2-AG is degraded presynaptically by MAGL (monoacylglycerol lipase). CB1 receptor negatively modulates the release of several neurotransmitters in central nervous system. The endocannabinoid system is widely present in several brain structures involved on fear expression and anxiety-related responses, mostly mediated via CB1 and CB2 receptors. Nevertheless, the role of the endocannabinoids system role in specific brain structures is not yet completely elucidated. One structure in particular, is the Bed Nucleus of Stria Terminales (BNST), which is a limbic structure responsible for integration of autonomic, neuroendocrine and behavioral information during aversive situations. There is little evidence about the presence and involvement of endocannabinoid system in the BNST on anxiety responses modulation. Therefore, the aim of the present study was to evaluate the role of the endocannabinoid system in the BNST on the modulation of innate and learned aversive responses. Male Wistar rats (240 - 270g) were submitted to stereotaxic surgery for bilateral guide cannula implantation directed to the BNST, for drug administration. Animals received local injections of vehicle, AM251 (CB1-antagonist; 0,1 - 0,3 nmol/100nL), URB597 (an inhibitor of FAAH; 0,01 - 0,1 nmol/100nL). Five days after the stereotaxic surgery, animals were submitted to the innate response test, the elevated plus maze, for 5 minutes. The percentage of entries and time spent in open and the number of enclosed arms entries were analyzed. After two to three days, animals were submitted to the contextual fear conditioning protocol, performed in three consecutive days. On test day, behavioral (freezing) and autonomic responses (mean arterial pressure, heart rate and tail cutaneous temperature) were recorded for 10 min. Our data suggest that after CB1 receptors blocking or activation in the BNST do not promote changes in innate fear responses. However, during fear learning, CB1 receptor antagonism in the BNST increased freezing behavior and mean arterial pressure. In addition, FAAH inhibition in the BNST, via CB1, reduced freezing behavior and mean arterial pressure in the emotional conditioned response. These results suggest that endogenous cannabinoid system in the BNST can modulate defensive responses in fear learning, but not innate fear responses.