Orientador: Julio Lopes Sequeira / Banca: Alessandre Hataka / Banca: Noeme Sousa Rocha / Resumo: O presente trabalho teve por objetivos avaliar os graus de fibrose endometrial das éguas, especificando por técnicas histoquímicas os tipos de colágeno e sua proporção nas lesões crônicas, além de verificar por método imunoistoquímico a expressão e distribuição das metaloproteinases (MMP) 2 e 9 e um dos seus inibidores - TIMP-1 - nos processos crônicos endometriais. Foram utilizadas 82 biópsias endometriais classificadas histologicamente de acordo com Kenney e Doig (1986) e segundo as definições de Ricketts & Alonso (1991) para endometrite crônica infiltrativa e endometrose. A avaliação do colágeno foi realizada pelos métodos histoquímicos Tricrômico de Masson, Reticulina e Picrosirius Red. Estudo morfométrico da fibrose periglandular foi realizado utilizando-se a técnica histoquímica do Picrosirius Red. Os resultados mostraram que nos endométrios portadores de endometrite severa há deposição de colágeno do tipo III e do tipo I, sendo este predominante. Não houve diferença significativa na extensão da fibrose periglandular entre as endometrites crônicas infiltrativas e endometroses. Tanto no endométrio hígido como nas endometrites crônicas foi observada imuno-reatividade para as enzimas estudadas. A reação imunoistoquímica para MMP-2 foi localizada no epitélio luminal, glandular, parede vascular e células estromais. MMP-9 e TIMP-1 mostraram marcação mais difusa, sendo também observadas nas células inflamatórias e endoteliais. / Abstract: The aim of this study was to evaluate the degrees of endometrial fibrosis in mares, specifying the types of collagen in the chronical lesions and its ratio by histochemical analysis and, the expression and distribution of matrix metalloproteinases (MMP) 2, -9 and one of its inhibitors - TIMP-1 - in the endometrial chronic processes by means of immunohistochemistry. Eighty-two biopsies of chronic endometritis were classified according to Kenney and Doig (1986) and definitions of Ricketts & Alonso (1991) for chronic infiltrative endometritis and endometrosis. The collagen evaluation was made by Massonþs trichrome, Reticulin and Picrosirius Red staining methods. The endometrial periglandular fibrosis morfometric analysis was carried out by using Picrosirius Red stained slides. Deposition of type III collagen and type I collagen was seen in severe endometritis with type I predominance. The chronic infiltrative endometritis and endometrosis didn't show significant difference in the extension of periglandular fibrosis. Immunoreactivity of MMP-2, MMP-9 and TIMP-1 was detected in healthy endometrium as in severe chronic endometritis. The luminal epithelium, glandular epithelium, vascular wall and stromal cells expressed MMP-2. MMP-9 and TIMP-1 had shown diffuser marking, and were as well observed in the inflammatory cells and the endothelium. / Mestre

Orientador: Julio Lopes Sequeira / Banca: Lousiane de Carvalho Nunes / Banca: Noeme Sousa Rocha / Resumo: A biópsia uterina é uma ferramenta valiosa utilizada na avaliação da fertilidade da égua. 0 objetivo deste trabalho foi estudar a relação entre a presença de miofibroblastos, a expressão da MMP-2 e a intensidade do processo fibrótico nas endometrites crônicas das éguas. Foram utilizadas 60 biópsias uterinas de éguas provenientes da rotina do Hospital Veterinário da FMVZ - UNESP, Campus de Botucatu. Biópsias endometriais classificadas histologicamente de acordo com Kenney e Doig (1986) e segundo as definições de Ricketts e Alonso (1991) para endometrite cronica infiltrativa e endometrose. A avaliação dos graus de fibrose endometrial foi feita par meio dos métodos histoquímicos Tricrômico de Masson e Picrosirius Red. A expressão da MMP-2 assim como a expressão de actina de músculo liso α dos miofibroblastos foi avaliada utilizando-se tecnica imunoistoquímica. A quantidade de colágeno na fibrose endometrial foi maior nas regiões periglandulares, perivasculares e no estrato esponjoso, predominando o colágeno do tipo I. Tanto no endométrio hígido como nas endometrites crônicas foi observada imuno-reatividade para as enzimas estudadas. A α-SMA e a MMP-2 estão envolvidas nos processos fibróticos endometriais das éguas uma vez que estas enzimas aumentam em expressão e intensidade de reação conforme o grau de endometrite. / Abstract: Uterine biopsy is a valuable tool for evaluation of mare's fertility. The aim of this work was to study the relation between the presence of myofibroblasts, the expression of MMP-2 and the intensity of fibrotic process in chronic endometritis in mares. Sixty mare's uterine biopsies from the Veterinary Hospital routine of FMVZ-UNESP, Campus of Botucatu, were used. Biopsies of chronic endometrites were classified according to Kenney and Doig (1986) and definitions Ricketts & Alonso (1991) for chronic infiltrative endometrites and endometrosis. Evaluations of endometrial fibrotic levels were done by histochemical methods. Masson and Picrosirius Red Tricromio. The expression of MMP-2 as the expression of myofibroblasts straight α- smooth muscle actin was evaluated using immunohistochemical techniques. The collagen concentration in fibrotic endometrium was higher at periglandular, perivascular and stratum spongiosum regions with collagen type I predominance. Imnunoreactivity of α-SMA and MMP-2 was detected in healthy endometrium as in severe chronic endometritis. The a- SMA and MMP-2 showed variation in expression and reaction was more intense in the normal and chronic affected endometrium and may plays a hole in the endometrial fibrotic process. / Mestre

Os minerais sáo essenciais para a saúde e para reprodução de vacas leiteiras. O objetivo desse trabalho foi avaliar o efeito da utilização de um suplemento de microminerais injetável contendo cobre, manganês, selênio e zinco, 20 dias antes da inseminação artificial, sobre a saúde uterina, perfil de progesterona, desenvolvimento do embrião e fertilidade de vacas Holandesas. O experimento doi dividido em duas fases. Na primeira fase foram usados 306 vacas, entre 2 a 8 anos de idade, foram divididas em um grupo que recebeu suplemento de microminerais injetável (SIM)contendo cobre, manganês, selênio e zinco, 20 dias antes da inseminação artificial (IA) e um grupo controle, que não recebeu nenhum tratamento. Esses animais foram bloqueados por pariedade (primíparas e multíparas), período voluntário de espera (pequeno período de espera PPE e longo período de espera - LPE) e por fazenda (fazenda 1 e 2). Nessa etapa foi avaliada saúde uterina, atraves do corrimento vaginal uterino e pela endometrite citológica. Na segunda fase foram separados 130 animais, divididos em um grupo que recebeu suplemento de microminerais injetável contendo cobre, manganês, selênio e zinco, 20 dias antes da inseminação artificial e um grupo controle, que não recebeu nenhum tratamento, esse animais foram bloqueados por pariedade (primíparas e multíparas). Foi avaliada a concentração de progesterona, o diagnóstico de gestação e a morfometria da vesícula amniótica e do embrião/feto. Não foi encontrado diferença estatística entre grupos experimentais nas avaliações do corrimento vaginal purulento e na endometrite citológica, quando foi bloqueado por pariedade, período voluntário de espera e fazenda, também não foi encontrado diferença estatística. Não houve diferença entre os grupos no ferfil de progesterona, mas quando foi analisada a porcentagem de animais que estava púberes, encontrou-se diferença estatística dentre os grupos no dia 4 (dias após IA), onde a porcentagem de animais púberes no grupo que recebeu SIM foi maior que o grupo tratamento (P = 0,0319). Não foi encontrada diferença no diagnostico de gestação e na perda de prenhez. Na avaliação da morfometria do embrião, os animais que receberam SIM, a vesícula amniótica (longitudinal) e o comprimento do embrião (cabeça-nádega e abdominal) foram maiores que o grupo controle com 36 dias. Em conclusão o emprego com o tratamento com Sim 20 dias antes da IA, não tem efeito sobre a saúde uterina, prenhez e na perda de prenhez, mas melhorou a porcentagem de animais púberes e o tamanho do embrião. / Minerals are essentials to the health and reproduction of dairy cattle. The aim of this study was to evaluate the effect of the use of na injectable trace element supplement containing copper, manganese, selenium and zinc 20 days before the artificial insemination, on the uterine health, progesterone profile, embryo development and fertility of Hostein dairy cows. The trial was divided in two steps. In the first step, 306 cows, between 2 and 8 years old were divided in two groups. The first group received injectable trace element supplement (ITES) containing copper, manganese, selenium and zinc 20 days before the artificial insemination (AI). The second group did not receive the treatment, constituting the control group. These animals were blocked by parity (primiparous and multiparous), voluntary waiting period (short voluntary waiting period SVWP and long voluntary waiting period - LVWP) and farm (farm 1 and 2).In this step, uterine healthy was evaluated by checking the uterine vaginal discharge and by cytological endimetritis. In the second step, 130 cows were divided in two groups, which cows received same treatments used in the first step. These cows were blocked by parity (primiparous and multiparous) and progesterone concentration, pregnancy diagnosis, and amniotic vesicle and embryo/fetus morfology were evaluated. The evaluation of purulent vaginal discharge and cytological endometritis showed no statistical significance between treatment groups. When cows were blocked by parity, the voluntary waiting period and farm did not show any difference. While no differences were detected between groups when progesterone proflile was evaluated, the percentage of pubescent animais on day 4 after showed diferences. In the ITES group, the percentage of pubescent animals was increased compared to the treatment group (P = 0.0319). No differences were detected to pregnancy diagnosis and pregnancy loss. Studying embryo morphometry, the amniotic vesicle (longitudinal) and embryo length (head-buttock) were higher in ITES group compared to treatment group at 36 days. In conclusion, although the use of ITES 20 days before AI did not show any effect on the uterine healthy, pregnancy and pregnancy loss, the percentage of pubescent animais and embryo length was increased.

O diagnóstico presuntivo da Hiperplasia Endometrial Cística (HEC)-Piometra é comumente realizado por meio da avaliação ultrasonográfica bidimensional. Entretanto, o diagnóstico diferencial das afecções que constituem o complexo HEC-Piometra (HEC-mucometra, endometrite e piometra) é confirmado por meio dos achados ultrasonográficos, avaliação clínica, avaliação macroscópica e histológica do útero. Com o objetivo de instituir um meio de diagnóstico precoce e não invasivo, o presente estudo caracterizou a dinâmica vascular uterina por ultrasonografia Doppler em cadelas com HEC-Piometra. O total de 28 cadelas foram alocadas em 4 grupos, de acordo com a sintomatologia clínica, avaliação ultrasonográfica e histologica uterina: Grupo Controle (n=6); Grupo HEC-mucometra (n=10); Grupo Endometrite-Piometra (n=12). O Doppler colorido foi utilizado para o mapeamento dos vasos e o Doppler espectral, para caracterização da forma da onda. Os parâmetros de velocidade do fluxo sanguíneo e os índices hemodinâmicos foram calculados automaticamente. A avaliação quantitativa da vascularização uterina apresentou variação entre os grupos, sendo: Grupo Controle mínimo 1 e máximo 1; Grupo HEC-mucometra mínimo 1 e máximo 2; Grupo Endometrite-Piometra - mínimo 2 e máximo 4. Observou-se que nos grupos Controle (PS 47,30 ± 2,63; ED 1,29 ± 0,54; TAMAX 8,47 ± 1,13) e HEC-mucometra (PS 60,80 ± 4,50; ED 9,76 ± 0,77; TAMAX 20,47 ± 0,12) as velocidades do fluxo sanguíneo foram menores que no Grupo Endometrite-Piometra (PS 86,72 ± 6,35; ED 33,34 ± 3,02; TAMAX 48,34 ± 4,14). Em relação aos índices hemodinâmicos, os grupos Controle (RI 0,97 ± 0,01; PI 6,45 ± 0,60; S/D 78,83 ± 9,82) e HEC-mucometra (RI 0,84 ± 0,008; PI 2,59 ± 0,12; S/D 6,73 ± 0,36) os índices foram superiores em relação ao Grupo Endometrite-Piometra (RI 0,62 ± 0,02; PI 1,22 ± 0,09; S/D 2,86 ± 0,17), sendo caracterizado um fluxo sanguíneo contínuo. Pode-se inferir que as alterações do diâmetro uterino e, principalmente, a presença de processo inflamatório culminam com fluxo de baixa resistência e pulsatilidade. A análise comparativa entre os Grupos HEC-Mucometra e Endometrite-Piometra permite sugerir que quanto maior a severidade da afecção uterina, maiores os índices de velocidade de fluxo sanguíneo, uma vez que tal característica pode contribuir para a eliminação do agente. Para os quadros clínicos nos quais a ausência de sintomatologia clínica e as alterações encontradas na avaliação ultra-sonográfica bidimensional não permitem o diagnóstico diferencial, os índices de RI, PI e S/D podem ser conclusivos. Conclui-se que na Endometrite-Piometra, a velocidade do fluxo sanguíneo e os índices hemodinâmicos da artéria uterina são fundamentais nos mecanismos compensatórios do organismo frente à ação do agente infeccioso; foi determinado a velocidade do fluxo sanguíneo e os índices hemodinâmicos da artéria uterina na HEC-Piometra; o escore de vascularização endometrial, bem como a forma da onda difere em fêmeas com e sem afecção uterina; a ultrasonografia Doppler é uma ferramenta diagnóstica, não invasiva, de alta sensibilidade e especificidade no diagnóstico diferencial entre HEC-Mucometra e Endometrite- Piometra na espécie canina. / The presumptive diagnosis of Cystic Endometrial Hyperplasia (CEH)-Pyometra Complex is ultimately determined through two-dimensional ultrasound examination. However, the differential diagnosis between CEH-mucometra, endometritis and pyometra is achieved by the combined analysis of ultrasonographic findings, clinical signs, uterine macroscopic and histological evaluation. In order to establish an accurate, precocious and noninvasive method of diagnosis, the aim of this study was to characterize the uterine blood flow in bitches with distinct uterine pathological conditions. For this purpose, we allocated 28 bitches into 3 groups, according to clinical signs, ultrasound analysis and uterine histological examination: Control Group (n = 6), CEH-mucometra Group (n = 10); Endometritis-Pyometra Group (n = 12). Scanning of the uterine horns by colour Doppler was performed for quantitative assessment of the overall uterine vascularization. With the use of colour Doppler, the uterine vessels were identified and the flow velocity waveforms generated with the pulsed-wave Doppler. Parameters of blood flow velocity, as well as hemodynamic parameters were calculated electronically. Groups showed quantitative variations of uterine vascularization: Control Group - minimum and maximum of score 1, CEH-Mucometra Group - minimum of score 1 and maximum of score 2; Endometritis-Pyometra Group - minimum of score 2 and maximum of score 4. No differences were observed between right and left uterine arteries for blood flow velocimetry. However, Control (SPV: 47.30 ± 2.63; EDV: 1.29 ± 0.54; TAMAX: 8.47 ± 1.13) and CEH-mucometra (SPV: 60.80 ± 4.50; EDV: 9.76 ± 0.77; TAMAX: 20.47 ± 0.12) groups showed lower blood flow velocities when compared to Endometritis-Pyometra Group (SPV: 86.72 ± 6.35; EDV: 33.34 ± 3.02; TAMAX: 48.34 ± 4.14). Conversely, Control (RI: 0.97 ± 0.01; PI: 6.45 ± 0.60; S/D: 78.83 ± 9.82) and CEH-mucometra (RI: 0.84 ± 0.008; PI: 2.59 ± 0.12; S/D: 6.73 ± 0.36) Groups presented higher hemodynamic indices in comparison to Endometritis- Pyometra Group (RI: 0.62 ± 0.02; PI: 1.22 ± 0.09; S/D: 2.86 ± 0.17). In the latest Group, uterine perfusion was characterized as continuous blood flow. This study demonstrated that the changes in uterine diameter and especially, the presence of inflammatory process culminate with the rise in uterine blood flow, marked by low resistance and pulsatility. In addition, the severity of the uterine disease is associated with low blood flow, thus contributing to further elimination of the infectious agent. Doppler velocimetric evaluation may be a promising adjuvant diagnostic tool for uterine disorders, mainly because of its noninvasive feature. It may allow for the differential diagnosis between CEH-mucometra and endometritis-pyometra, whenever clinical symptoms and ultrasonographic findings are inconclusive. In conclusion, the blood flow velocity and the hemodynamic index of the uterine artery are fundamental compensatory mechanisms for the elimination of the infectious agent in endometritis-pyometra; uterine blood flow velocity and hemodynamic indices were determined for HEC-Pyometra; endometrial vascularization score and the waveforms differ in females with or without uterine disease; the Doppler ultrasound is a noninvasive diagnostic method, with sensitivity and specificity for the differential diagnosis of HEC-Mucometra and Endometritis-Pyometra in dogs.

As condições do trato reprodutivo da fêmea, assim como a qualidade do sêmen são fatores que interferem na fertilidade. Os objetivos deste trabalho foram avaliar a resposta inflamatória uterina e a taxa de prenhez em éguas, considerando hemodinâmica uterina e citologia endometrial após a inseminação artificial (IA) com sêmen congelado de alta e baixa qualidade. Para o presente estudo foram realizados dois experimentos. No Experimento 1 foram utilizadas 15 éguas distribuídas de forma aleatória em quatro grupos: CT - controle: mimetização do procedimento de IA (n=7), DIL: infusão intrauterina de diluidor a base de leite desnatado (n=7), ALTA: IA com sêmen de alta qualidade (n=7), e BAIXA: IA com sêmen de baixa qualidade (n=7). A avaliação uterina foi realizada por ultrassonografia transretal com Doppler nos modos Espectral e Color-flow em sete momentos: prévio à indução da ovulação (TIO), imediatamente antes da IA (TIA), 2 (T2), 6 (T6), 12 (T12), 24 (T24) e 48 horas (T48) após a IA. Foram considerados os valores de índice de resistência (RI) da artéria uterina e de escore de vascularização (EV) uterino. A citologia uterina foi realizada 6 h após a IA. No Experimento 2 foram utilizadas 12 éguas, e seus ciclos foram distribuídos nos tratamentos: CT - controle: mimetização do procedimento de IA (n=8), DIL: infusão intrauterina de diluidor (n=8), ALTA: IA com sêmen de alta qualidade (n=8), e BAIXA: IA com sêmen de baixa qualidade (n=8). O delineamento experimental foi em Quadrado Latino 4X4. A avaliação uterina foi realizada por ultrassonografia transretal com Doppler modos Espectral e Color-flow em três momentos: prévio à indução da ovulação (TIO), imediatamente antes da IA (TIA) e 6 horas (T6) após a IA. A citologia uterina foi realizada 6 h após a IA. Neste experimento foi considerada a taxa de prenhez comparando-se os ciclos utilizados para os grupos ALTA e BAIXA. O diagnóstico de gestação foi realizado 14 dias após a ovulação. Foi utilizado o procedimento misto (PROC MIXED) do SAS (Versão 9.3) para a análise estatística e foi considerada diferença significativa quando p ≤0,05. No Experimento 1, não foi encontrada diferença estatística entre os grupos para os valores de hemodinâmica uterina RI e EV. Houve aumento significativo de células inflamatórias no endométrio de éguas inseminadas com sêmen de baixa qualidade, porém não diferiu do grupo de éguas inseminadas com sêmen de alta qualidade. No Experimento 2, não houve diferença estatística entre os grupos para os valores de RI, mas se observou maior EV uterino nos grupos inseminados com sêmen de alta e de baixa qualidade quando comparados com o grupo controle. Na citologia uterina não foi encontrada diferença estatística. A taxa de prenhez para os grupos ALTA (81,82%) e BAIXA (54,55%) não foi estatisticamente diferente. Conclui-se que a deposição de sêmen no útero, leva a um processo inflamatório do endométrio, e esta pode alterar a hemodinâmica uterina detectável por ultrassonografia Doppler em éguas. Não existe diferença significativa na resposta inflamatória entre as qualidades de sêmen. A inseminação com sêmen congelado de menor qualidade não altera a taxa de prenhez, mas são necessários mais estudos para verificar esta diferença. / The female reproductive tract soundness, as well as semen quality are factors that interfere in fertility. The aims of this study were to evaluate inflammatory uterine response and pregnancy rate in mares, considering uterine hemodynamics and endometrial cytology after artificial insemination (IA) with frozen semen of high and low quality. Two experiments were executed for the present study. For Experiment 1, fifteen mares were randomly distributed between four groups: CT - control: mimic of the procedure of IA (n=7), DIL: intrauterine infusion of skim milk semen extender (n=7), ALTA: IA with high quality semen (n=7), and BAIXA: IA with low quality semen (n=7). Uterine evaluation was done using transrectal Doppler ultrasonography by Spectral and Color-flow modes on seven moments: immediately before ovulation induction (TIO), immediately before AI (TIA), 2 (T2), 6 (T6), 12 (T12), 24 (T24) and 48 (T48) hours after IA. There were considered the numerical values of resistance index (RI) of uterine arteries and vascularity scores (EV) of uterine horns. Endometrial cytology was done at 6 h after IA. On Experiment 2, were used 12 mares which their cycles were distributed between the treatments: CT - control: only mimic of IA procedure (n=8), DIL: intrauterine infusion of semen extender (n=8), ALTA: IA with high quality semen (n=8), and BAIXA: IA with low quality semen (n=8). The experimental design was a Latin Square. Uterine evaluation was done using transrectal Doppler ultrasonography by Spectral and Color-flow modes on three moments: before ovulation induction (TIO), immediately before AI (TIA) and 6 hours (T6) after IA. Endometrial cytology was done at 6 h after IA. In this experiment it was considered the pregnancy rate comparing the cycles for groups ALTA e BAIXA. The pregnancy diagnosis was done 14 days after ovulation. It was used the Mixed Procedure (PROC MIXED) from SAS (Version 9.3) for statistical analysis and significant difference was considered when p≤0.05. On Experiment 1, no statistical difference was found between the groups for uterine hemodynamic values RI and EV. There was a significant increase of inflammatory cells on the mares inseminated with low quality semen, however it wasnt different from the group if mares inseminated with high quality semen. On Experiment 2, there was no statistical difference between the groups for RI values, but the uterine EV was higher for the groups inseminated with high and low quality when compared with the control group. There was no statistical difference on endometrial cytology. There was no statistical difference on pregnancy rate for the groups ALTA (81,82%) and BAIXA (54,55%). As a conclusion, the deposition of semen in the uterus causes an inflammatory process on the endometrium, and it could alter uterine dynamics detected by Doppler ultrasonography in mares. It does not exist significant difference on the inflammatory response between semen qualities. Low quality frozen-semen insemination does not alter pregnancy rate, but more studies are necessary in order to verify this difference.

O diagnóstico presuntivo da Hiperplasia Endometrial Cística (HEC)-Piometra é comumente realizado por meio da avaliação ultrasonográfica bidimensional. Entretanto, o diagnóstico diferencial das afecções que constituem o complexo HEC-Piometra (HEC-mucometra, endometrite e piometra) é confirmado por meio dos achados ultrasonográficos, avaliação clínica, avaliação macroscópica e histológica do útero. Com o objetivo de instituir um meio de diagnóstico precoce e não invasivo, o presente estudo caracterizou a dinâmica vascular uterina por ultrasonografia Doppler em cadelas com HEC-Piometra. O total de 28 cadelas foram alocadas em 4 grupos, de acordo com a sintomatologia clínica, avaliação ultrasonográfica e histologica uterina: Grupo Controle (n=6); Grupo HEC-mucometra (n=10); Grupo Endometrite-Piometra (n=12). O Doppler colorido foi utilizado para o mapeamento dos vasos e o Doppler espectral, para caracterização da forma da onda. Os parâmetros de velocidade do fluxo sanguíneo e os índices hemodinâmicos foram calculados automaticamente. A avaliação quantitativa da vascularização uterina apresentou variação entre os grupos, sendo: Grupo Controle mínimo 1 e máximo 1; Grupo HEC-mucometra mínimo 1 e máximo 2; Grupo Endometrite-Piometra - mínimo 2 e máximo 4. Observou-se que nos grupos Controle (PS 47,30 ± 2,63; ED 1,29 ± 0,54; TAMAX 8,47 ± 1,13) e HEC-mucometra (PS 60,80 ± 4,50; ED 9,76 ± 0,77; TAMAX 20,47 ± 0,12) as velocidades do fluxo sanguíneo foram menores que no Grupo Endometrite-Piometra (PS 86,72 ± 6,35; ED 33,34 ± 3,02; TAMAX 48,34 ± 4,14). Em relação aos índices hemodinâmicos, os grupos Controle (RI 0,97 ± 0,01; PI 6,45 ± 0,60; S/D 78,83 ± 9,82) e HEC-mucometra (RI 0,84 ± 0,008; PI 2,59 ± 0,12; S/D 6,73 ± 0,36) os índices foram superiores em relação ao Grupo Endometrite-Piometra (RI 0,62 ± 0,02; PI 1,22 ± 0,09; S/D 2,86 ± 0,17), sendo caracterizado um fluxo sanguíneo contínuo. Pode-se inferir que as alterações do diâmetro uterino e, principalmente, a presença de processo inflamatório culminam com fluxo de baixa resistência e pulsatilidade. A análise comparativa entre os Grupos HEC-Mucometra e Endometrite-Piometra permite sugerir que quanto maior a severidade da afecção uterina, maiores os índices de velocidade de fluxo sanguíneo, uma vez que tal característica pode contribuir para a eliminação do agente. Para os quadros clínicos nos quais a ausência de sintomatologia clínica e as alterações encontradas na avaliação ultra-sonográfica bidimensional não permitem o diagnóstico diferencial, os índices de RI, PI e S/D podem ser conclusivos. Conclui-se que na Endometrite-Piometra, a velocidade do fluxo sanguíneo e os índices hemodinâmicos da artéria uterina são fundamentais nos mecanismos compensatórios do organismo frente à ação do agente infeccioso; foi determinado a velocidade do fluxo sanguíneo e os índices hemodinâmicos da artéria uterina na HEC-Piometra; o escore de vascularização endometrial, bem como a forma da onda difere em fêmeas com e sem afecção uterina; a ultrasonografia Doppler é uma ferramenta diagnóstica, não invasiva, de alta sensibilidade e especificidade no diagnóstico diferencial entre HEC-Mucometra e Endometrite- Piometra na espécie canina. / The presumptive diagnosis of Cystic Endometrial Hyperplasia (CEH)-Pyometra Complex is ultimately determined through two-dimensional ultrasound examination. However, the differential diagnosis between CEH-mucometra, endometritis and pyometra is achieved by the combined analysis of ultrasonographic findings, clinical signs, uterine macroscopic and histological evaluation. In order to establish an accurate, precocious and noninvasive method of diagnosis, the aim of this study was to characterize the uterine blood flow in bitches with distinct uterine pathological conditions. For this purpose, we allocated 28 bitches into 3 groups, according to clinical signs, ultrasound analysis and uterine histological examination: Control Group (n = 6), CEH-mucometra Group (n = 10); Endometritis-Pyometra Group (n = 12). Scanning of the uterine horns by colour Doppler was performed for quantitative assessment of the overall uterine vascularization. With the use of colour Doppler, the uterine vessels were identified and the flow velocity waveforms generated with the pulsed-wave Doppler. Parameters of blood flow velocity, as well as hemodynamic parameters were calculated electronically. Groups showed quantitative variations of uterine vascularization: Control Group - minimum and maximum of score 1, CEH-Mucometra Group - minimum of score 1 and maximum of score 2; Endometritis-Pyometra Group - minimum of score 2 and maximum of score 4. No differences were observed between right and left uterine arteries for blood flow velocimetry. However, Control (SPV: 47.30 ± 2.63; EDV: 1.29 ± 0.54; TAMAX: 8.47 ± 1.13) and CEH-mucometra (SPV: 60.80 ± 4.50; EDV: 9.76 ± 0.77; TAMAX: 20.47 ± 0.12) groups showed lower blood flow velocities when compared to Endometritis-Pyometra Group (SPV: 86.72 ± 6.35; EDV: 33.34 ± 3.02; TAMAX: 48.34 ± 4.14). Conversely, Control (RI: 0.97 ± 0.01; PI: 6.45 ± 0.60; S/D: 78.83 ± 9.82) and CEH-mucometra (RI: 0.84 ± 0.008; PI: 2.59 ± 0.12; S/D: 6.73 ± 0.36) Groups presented higher hemodynamic indices in comparison to Endometritis- Pyometra Group (RI: 0.62 ± 0.02; PI: 1.22 ± 0.09; S/D: 2.86 ± 0.17). In the latest Group, uterine perfusion was characterized as continuous blood flow. This study demonstrated that the changes in uterine diameter and especially, the presence of inflammatory process culminate with the rise in uterine blood flow, marked by low resistance and pulsatility. In addition, the severity of the uterine disease is associated with low blood flow, thus contributing to further elimination of the infectious agent. Doppler velocimetric evaluation may be a promising adjuvant diagnostic tool for uterine disorders, mainly because of its noninvasive feature. It may allow for the differential diagnosis between CEH-mucometra and endometritis-pyometra, whenever clinical symptoms and ultrasonographic findings are inconclusive. In conclusion, the blood flow velocity and the hemodynamic index of the uterine artery are fundamental compensatory mechanisms for the elimination of the infectious agent in endometritis-pyometra; uterine blood flow velocity and hemodynamic indices were determined for HEC-Pyometra; endometrial vascularization score and the waveforms differ in females with or without uterine disease; the Doppler ultrasound is a noninvasive diagnostic method, with sensitivity and specificity for the differential diagnosis of HEC-Mucometra and Endometritis-Pyometra in dogs.

Made available in DSpace on 2016-04-28T20:16:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008 - Carla Fernanda Paranhos de Moura Carvalho.pdf: 1771401 bytes, checksum: c667c96887e192532875afccc25cfc83 (MD5) Previous issue date: 2008-09-05 / This study was conducted during 2005-2007 seasons, and aimed at the evaluation of the activity of extracts of plants in isolated bacteria from susceptible uterus of mares. Twenty-one susceptible to endometritis animals were selected after a gynecological exam performed in 135 mares located in private properties and Instituto de Zootecnia from UFRRJ. Uterine smears were collected with guarded swabs to perform bacteriology, cytology and samples to endometrial biopsy. Pure cultures of Escherichia coli (10, 47,6%), Streptococcus equi subsp. zooepidemicus (8, 38%) and Staphylococcus aureus (2, 9,5%) were isolated, and compounds of nonpathogenic microorganisms like: Staphylococcus coagulase negative, micrococcus, Streptococci alpha-hemolytic, bacillus gram positives e Enterobacter spp. Species of S. aureus, Streptococci of group C, Enterococcus sp. e Escherichia coli isolated from uterine smears was submitted to Microbiological sensitivity test according to CLSE (2005). The antimicrobiological sensitivity test in vitro demonstrated resistance to eritromycin in one specimen of Streptococcus equi subsp. zooepidemicus and intermediary resistance to cephalotin in E. coli specimens. Antimicrobial activity in vitro of aqueous extracts (AE) of three plants: Stryphnodendron adstringens, Kalanchoe pinnata and Kalanchoe brasiliensis, in AACT standard form, was available. Results revealed antimicrobial activity of Stryphnodendron adstringens (barbatim?o) against Gram positive bacteria. A total of 57,1% mares presented endometritis in cytological exams. Out of the 12 females that presented inflammation, nine were diagnosed with severe inflammation (>5 neutrophils for field). In Pearson s correlation to evaluate the relationship between the isolation of pathogenic bacteria and uterine inflammation, a high correlation between the two variable (r =0,94) was observed. Among the evaluated specimens, chronic endometritis was diagnosed in 11 mares (52,3%); seven mares (33,3%) presented endometritis in chronic and acute forms and in three mares (14,3%) acute endometrites were observed. Fibrosis and infiltration of mononuclear cells were the most commonly found. On the in vivo testing with aqueous extract of S. adstringens, the 12 mares in which uterine smears Gram positive bacteria was isolated were divided in 3 groups that received 3 different treatments: Group 1, uterine infusion with 20 ml of antibiotic (Penicillin and streptomycin), group 2 infusion with 20ml of saline solution and group 3 infusion with 20 ml of aqueous extract of S. adstringens. The aqueous extract of S. adstringens has variable effectiveness to inhibit Gram positive specimes isolated from uterus of mares, partly differing from the in vitro results. The effect of Stryphnodendron adstringens extracts suggests the need of further studies toward the isolation of the compounds associated with the biological activity, to provide an alternative treatment to equine bacterial endometritis. / O trabalho foi conduzido durante o per?odo de 2005 a 2007, e teve por objetivo avaliar a atividade de extratos de plantas frente a bact?rias isoladas do ?tero de ?guas suscept?veis a endometrite. Ap?s realiza??o de exame ginecol?gico em 135 ?guas localizadas em propriedades particulares e pertencentes ao Instituto de Zootecnia da UFRRJ, selecionou-se 21 animais com caracter?sticas de susceptibilidade a endometrite. Foram coletadas secre??es uterinas com swabs protegidos para os estudos bacteriol?gicos e citol?gicos e coleta de fragmentos para bi?psia endometrial. Foram isoladas cepas de Escherichia coli (10, 47,6%), seguidas de Streptococcus equi subsp. zooepidemicus (8, 38%) e Staphylococcus aureus (2, 9,5%), al?m de componentes da microbiota, considerados n?o patog?nicos, como estafilococos coagulase negativos, micrococos, Streptococcus ? hemol?ticos, bacilos gram positivos e enterecocos. Cepas de S. aureus, Streptococos do grupo C, Enterococcus sp. e E. coli isoladas das secre??es uterinas foram submetidas ao teste de sensibilidade aos antimicrobianos de acordo com as recomenda??es do CLSI (2005). O perfil de sensibilidade antimicrobiana in vitro demonstrou resist?ncia a eritromicina em um isolado de Streptococcus equi subsp. zooepidemicus e resist?ncia intermedi?ria a cefalotina entre isolados de E. coli. Posteriormente, a atividade anti-bacteriana in vitro dos extratos aquosos (EA) das plantas Stryphnodendron adstringens, Kalanchoe pinnata e Kalanchoe brasiliensis, frente as cepas padr?o ATCC, foram avaliadas. Observou-se a??o da planta Stryphnodendron adstringens frente a cepas de bact?rias Gram positivas. Um total de 57,1% das ?guas do experimento apresentaram endometrite no exame citol?gico. Dentre as 12 ?guas que apresentaram inflama??o, em nove foi diagnosticada inflama??o severa (>5 neutr?filos por campo). Empregando-se a correla??o de Pearson para avaliar a rela??o entre o isolamento de bact?rias patog?nicas e inflama??o uterina, observou-se uma correla??o positiva entre as duas vari?veis (r =0,94). Nas amostras analisadas, obtivemos endometrite cr?nica em 11 ?guas (52,3%), sete ?guas (33,3%) apresentaram endometrite com resposta cr?nica e uma rea??o aguda se sobrepondo e em tr?s ?guas (14,3%) foi observada endometrite aguda. O achado histopatol?gico mais freq?ente foi a fibrose e o infiltrado inflamat?rio de mononucleares. No teste in vivo com extrato aquoso da planta S. adstringens, as 12 ?guas que foram isoladas bact?rias Gram positivas das secre??es uterinas, foram divididas em 3 grupos com tr?s diferentes tratamentos: Grupo 1, infus?o uterina com 20 ml de antibi?tico (Penicilina e estreptomicina), grupo2 infus?o com 20ml de solu??o fisiol?gica e grupo 3 infus?o com 20ml de extrato aquoso de S. adstringens. O extrato aquoso da planta S. adstringens teve efic?cia vari?vel frente as cepas Gram positivas isoladas do ?tero das ?guas, diferindo, em parte, dos resultados obtidos in vitro. Os resultados obtidos sugerem a necessidade de estudos criteriosos com o Stryphnodendron adstringens buscando o isolamento dos princ?pios ativos, no sentido de contribuir para tratamentos alternativos da endometrite infecciosa eq?ina. Palavras-chave: O trabalho foi conduzido durante o per?odo de 2005 a 2007, e teve por objetivo avaliar a atividade de extratos de plantas frente a bact?rias isoladas do ?tero de ?guas suscept?veis a endometrite. Ap?s realiza??o de exame ginecol?gico em 135 ?guas localizadas em propriedades particulares e pertencentes ao Instituto de Zootecnia da UFRRJ, selecionou-se 21 animais com caracter?sticas de susceptibilidade a endometrite. Foram coletadas secre??es uterinas com swabs protegidos para os estudos bacteriol?gicos e citol?gicos e coleta de fragmentos para bi?psia endometrial. Foram isoladas cepas de Escherichia coli (10, 47,6%), seguidas de Streptococcus equi subsp. zooepidemicus (8, 38%) e Staphylococcus aureus (2, 9,5%), al?m de componentes da microbiota, considerados n?o patog?nicos, como estafilococos coagulase negativos, micrococos, Streptococcus ? hemol?ticos, bacilos gram positivos e enterecocos. Cepas de S. aureus, Streptococos do grupo C, Enterococcus sp. e E. coli isoladas das secre??es uterinas foram submetidas ao teste de sensibilidade aos antimicrobianos de acordo com as recomenda??es do CLSI (2005). O perfil de sensibilidade antimicrobiana in vitro demonstrou resist?ncia a eritromicina em um isolado de Streptococcus equi subsp. zooepidemicus e resist?ncia intermedi?ria a cefalotina entre isolados de E. coli. Posteriormente, a atividade anti-bacteriana in vitro dos extratos aquosos (EA) das plantas Stryphnodendron adstringens, Kalanchoe pinnata e Kalanchoe brasiliensis, frente as cepas padr?o ATCC, foram avaliadas. Observou-se a??o da planta Stryphnodendron adstringens frente a cepas de bact?rias Gram positivas. Um total de 57,1% das ?guas do experimento apresentaram endometrite no exame citol?gico. Dentre as 12 ?guas que apresentaram inflama??o, em nove foi diagnosticada inflama??o severa (>5 neutr?filos por campo). Empregando-se a correla??o de Pearson para avaliar a rela??o entre o isolamento de bact?rias patog?nicas e inflama??o uterina, observou-se uma correla??o positiva entre as duas vari?veis (r =0,94). Nas amostras analisadas, obtivemos endometrite cr?nica em 11 ?guas (52,3%), sete ?guas (33,3%) apresentaram endometrite com resposta cr?nica e uma rea??o aguda se sobrepondo e em tr?s ?guas (14,3%) foi observada endometrite aguda. O achado histopatol?gico mais freq?ente foi a fibrose e o infiltrado inflamat?rio de mononucleares. No teste in vivo com extrato aquoso da planta S. adstringens, as 12 ?guas que foram isoladas bact?rias Gram positivas das secre??es uterinas, foram divididas em 3 grupos com tr?s diferentes tratamentos: Grupo 1, infus?o uterina com 20 ml de antibi?tico (Penicilina e estreptomicina), grupo2 infus?o com 20ml de solu??o fisiol?gica e grupo 3 infus?o com 20ml de extrato aquoso de S. adstringens. O extrato aquoso da planta S. adstringens teve efic?cia vari?vel frente as cepas Gram positivas isoladas do ?tero das ?guas, diferindo, em parte, dos resultados obtidos in vitro. Os resultados obtidos sugerem a necessidade de estudos criteriosos com o Stryphnodendron adstringens buscando o isolamento dos princ?pios ativos, no sentido de contribuir para tratamentos alternativos da endometrite infecciosa eq?ina.

Orientador: Juliana Regina Peiró / Banca: Guilherme de Paula Nogueira / Banca: Valéria Marçal Felix de Lima / Banca: João Pessoa Araujo Junior / Banca: Daniel de Jesus Cardoso de Oliveira / Resumo: A endometrite é um dos problemas de maior frequência e relevância na reprodução de éguas. Os objetivos deste trabalho foram determinar o perfil das concentrações de IFN-γ, TNF-α, IL-2, IL-6, IL-10 e IL-4 presentes no soro sanguíneo e no lavado uterino de éguas com endometrite naturalmente adquirida e naquelas clinicamente saudáveis, bem como definir o padrão da resposta imune (TH1 e TH2); observar se a inflamação local no útero pode gerar inflamação sistêmica; e, verificar se o lavado uterino e o tratamento com enrofloxacina alteram o perfil de concentração das citocinas nestas éguas. Foram utilizadas 12 éguas da raça Quarto de Milha incluídas em programa de transferência de embriões e subdivididas em 2 grupos, com 6 animais cada: GC (animais sadios) e GE (animais com endometrite). Amostras de soro e lavado uterino foram colhidas nos dias 1 (início do cio), 2, 3, 4 e 5 dias após o início do cio. As concentrações de TNF-α, IL-2 e IFN-γ (TH1); IL-4, IL-6, e IL-10 (TH2) foram mensuradas por citometria de fluxo pelo método Cytometric Bead Array (CBA). As diferentes citocinas avaliadas nas amostras de lavado uterino, à exceção da IL-4, apresentaram concentrações mais elevadas em éguas do GE comparadas às do GC no dia 1. A utilização de lavados uterinos seriados associados a antibioticoterapia sistêmica não provocaram alterações significativas nas concentrações de citocinas presentes no útero de éguas do GC. As concentrações séricas de citocinas não diferiram entre os grupos. Nosso... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Endometritis is one of the most frequent and relevant diseases in mares. The goals of this study were to determine the profile concentration of cytokines such as IFN-γ, TNF-α, IL-2, IL-6, IL-10 and IL-4 present in blood serum and uterine lavage of mares with naturally acquired endometritis and those clinically healthy, well as set the pattern of immune response (TH1 and TH2); see if local inflammation in the uterus can cause systemic inflammation; and check whether the uterine lavage and the treatment with enrofloxacin alter the concentration profile of cytokines in these mares. Twelve Quarter Horse mares from an embryo transfer program were divided into 2 groups, with 6 animals each: control group (CG, healthy animals) and experimental group (EG, animals with endometritis). Blood serum and uterine lavage samples were collected on days 1 (onset of estrus), 2, 3, 4 and 5 (after onset of estrus). Concentrations of TNF-α, IL-2 and IFN-γ (TH1); IL-4, IL-6, and IL-10 (TH2) were measured by flow cytometry using the Cytometric Bead Array method (CBA). All cytokines, but not IL- 4, evaluated in the uterine lavage samples showed higher concentrations in mares with endometritis compared to healthy animals on day 1. The use of serial uterine lavages associated with systemic antibiotic therapy did not cause significant changes in concentrations of cytokines in the uterus of mares without endometritis. Serum concentrations of cytokines did not differ between groups. Our results establishe... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

As enfermidades reprodutivas representam um entrave à produção de bovinos leiteiros, à medida que a enfermidade diminui a fertilidade dos rebanhos e causa muitos prejuízos ligados ao custo de tratamento e perda produtiva. Entre estas as endometrites possuem papel de destaque. Existem diferentes técnicas para o diagnóstico destas enfermidades como a palpação uterina por via transretal, a vaginoscopia, o cultivo microbiológico de fluidos uterinos, a biópsia uterina, a citologia endometrial e a ultrassonografia que variam em grau de praticidade, especificidade e sensibilidade. O presente trabalho teve por finalidade avaliar e comparar a vaginoscopia, ultrassonografia, a histopatologia e suas possíveis associações para o diagnóstico da endometrite através da determinação da sensibilidade, da especificidade e do coeficiente de concordância kappa utilizando a citologia endometrial como padrão ouro. Para este fim foi necessário desenvolver um método adaptado para avaliação do exame histopatológico de útero bovino. Neste estudo, 106 bovinos do sexo feminino da raça Holandesa, foram submetidos ao exame ginecológico. Destes animais, os que não apresentaram secreção vaginal de aspecto catarral foram submetidos ao exame ultrassonográfico, à colheita de material para exames de citologia endometrial e a colheita de biópsia uterina. Os resultados demonstraram que a ultrassonografia constitui um método diagnóstico pratico e rápido, sendo da associação entre a determinação da presença de líquido uterino e a determinação do diâmetro cervical a maior eficiência diagnóstica neste contexto, com sensibilidade, especificidade e coeficiente de concordância kappa de 50%, 88% e 39% respectivamente. A histopatologia por sua vez também constituiu um bom método diagnóstico, no entanto menos prático que a ultrassonografia / Reproductive diseases are a great barrier to the dairy production, as it diminishes fertility and causes economical losses with treatment costs and lowering production. In this context, endometritis plays an important role. There are different diagnostic techniques for endometritis, rectal uterine palpation vaginoscopy, microbiological tests, uterine biopsies, endometrial cytology and ultrasonography, these tests vary in sensitivity and specificity. This work had as an objective evaluating and comparing vaginoscopic, ultrasongraphic and histopathological examinations, as well as their associations, for the endometritis diagnosis by determining their sensitivity, specificity and kappa agreement coefficient using endometrial cytology as gold standard. It was necessary developing an adaptive reading score to perform the uteris histological examination. In this study 106 female Holstein cows were submitted to a gynecological examination. The ones that had no vaginal catarrh were submitted to an ultrasonographic examination, to endometrial cytology examination and uterine biopsy. Results shows that ultrasonography is a practical and good diagnostic method, the association between the determination of intra-uterine fluid and cervical diameter was the most efficient ultrasonographic method, with 50%, 88% and 39% of sensitivity, specificity and agreement coefficient kappa respectively. Histopathological examination was good diagnostic method, even though not as practical as ultrasonography

This thesis is an investigation of the interactions of insulin resistance (IR), metabolic markers, neutrophil function, and reproductive health in peripartum dairy cows, including the evaluation of a hand-held glucometer for diagnosis of IR. The neutrophil functions of interest were oxidative burst and phagocytosis capacity, and reproductive diseases were endometritis and cervicitis. A total of 81 Holstein cows were enrolled 3 wk prior to expected calving date from November 2010 until October 2011, and were followed until 5 wk postpartum. Known markers of IR, neutrophil function, and disease were monitored through this period. The hand-held glucometer was identified as a useful alternative to laboratory measurements of glucose. Markers of IR influenced phagocytosis capacity and reproductive disease. High haptoglobin concentrations were associated with increased risk of reproductive disease and diminished oxidative burst function. Metabolically related inhibition of neutrophil function may be important in development of reproductive disease. / National Sciences and Engineering Research Council of Canada, Ontario Graduate Scholarship Program