Le Virus de l’Hépatite C (HCV) est un problème majeur de santé publique qui touche plus de 170 millions de personnes dans le monde. Le HCV cible essentiellement les hépatocytes où il effectue son cycle de réplication qui peut-être divisé en trois étapes majeures : l’entrée de la particule virale qui aboutit à la libération de l’ARN viral dans le cytoplasme, la traduction/réplication du génome viral et l’assemblage/sécrétion des particules néosynthétisées. Durant ma thèse, nous nous sommes intéressés à l’étape d’entrée qui est un processus complexe multiséquentiel faisant intervenir de nombreux facteurs cellulaires. Le virus se lie d’abord à la surface cellulaire via des facteurs d’attachement puis interagit avec des facteurs d’entrée spécifiques tels que la tétraspanine CD81, le récepteur scavenger B1 et les protéines de jonctions serrées CLDN-1, -6, -9 et OCLN. La particule virale est ensuite internalisée via une endocytose dépendante de la clathrine, puis sous l’action du pH acide des endosomes les enveloppes virale et cellulaire fusionnent permettant la libération de la capside virale dans le cytoplasme de la cellule infectée. Parmi les facteurs cellulaires impliqués dans l’entrée du HCV, deux protéines de la famille des tétraspanines ont été identifiées, CD81 et CD63. Les tétraspanines sont des protéines transmembranaires capables de former des microdomaines enrichis en tétraspanines en interagissant entre elles ainsi qu’avec des protéines dites partenaires. Nous avons testé l’implication dans l’entrée virale des tétraspanines exprimées dans les hépatocytes. Ainsi, nous avons montré que CD151 semble également important pour l’entrée du HCV. CD151 aurait un rôle indirect sur l’entrée en jouant sur l’organisation membranaire, en empêchant CD81 de former des clusters qui restreignent l’entrée du virus. Nous avons aussi étudié le rôle que pouvait jouer les polymorphismes de facteurs d’entrée sur l’entrée virale. Sur une cohorte de patients toxicomanes infectés par le HIV mais non infectés par le HCV, deux mutations ont été identifiées, R209Q dans CLDN-6 et P24A dans OCLN, qui n’étaient pas présentes dans les populations contrôles ou coinfectées par le HCV. Chez les patients toxicomanes, il est très rare que les patients infectés par le HIV ne le soient pas par le HCV, suggérant une résistance naturelle de ces patients à l’infection. Nous avons émis l’hypothèse que ces deux mutations pouvaient bloquer l’entrée du HCV. Cependant, la caractérisation de ces mutations a montré qu’elles n’avaient pas d’effet fonctionnel in vitro. Enfin, nous avons exploré l’effet de la Monensine, un ionophore polyéther, sur l’infection par le HCV. Cette molécule augmente le pH des endosomes via ses capacités de transfert d’ions à travers les membranes cellulaires. Nous avons montré qu’elle inhibe l’entrée du HCV en bloquant la fusion. De manière intéressante, la transmission cellule-cellule, un mécanisme d’entrée du virus encore mal caractérisé, était également bloquée par la Monensine, suggérant une étape de fusion dépendante du pH pour cette voie. Nous avons généré des mutants de résistance à la Monensine, notamment le clone FL-8 qui portait deux mutations dans les glycoprotéines d’enveloppe, Y297H dans E1 et I399T dans E2. Les particules virales portant ces deux mutations infectaient les cellules de manière indépendante du pH, présentaient des propriétés physicochimiques différentes et ne se transmettaient plus de cellule à cellule. En conclusion ces études soulignent l’importance de l’organisation membranaire pour l’entrée du virus via certains facteurs cellulaires tels que CD151. Par ailleurs, nous avons mis en évidence que la transmission cellule-cellule était dépendante du pH et que des mutations ponctuelles dans E1 et E2 permettent une fusion indépendante du pH. En revanche, des polymorphismes naturels de CLDN-6 et OCLN n’affectent pas leur capacité à supporter l’entrée virale. / Hepatitis C Virus (HCV) is a global health problem with over 170 million infected people worldwide. HCV targets mainly the hepatocytes and its lifecycle is divided into three steps. Viral particle entry leads to the release of viral genomic RNA into the cytoplasm where translation and replication take place. Then, new viral particles are assembled and secreted. During my thesis, we focused on the entry step. Indeed, HCV entry is a complex multistep process that requires numerous cellular factors. First, the virus interacts with attachment factors and then interacts with specific cellular factors including the tetraspanin CD81, the scavenger receptor B1 and the tight junction proteins CLDN-1, -6, -9 and OCLN. The viral particle is next internalized through a clathrin-dependent endocytosis. Finally, fusion at low pH occurs between viral and endosomal membranes leading to the release of the capsid into the cytoplasm. Among cellular factors involved in HCV entry, two members of the tetraspanin superfamily were identified, CD81 and CD63. Tetraspanins are transmembrane proteins able to organize themselves in tetraspanin-enriched microdomains through tetraspanin-tetraspanin interactions and interactions with partner proteins. We tested the involvement in HCV entry of tetraspanins expressed in hepatocytes. Interestingly, we showed that CD151 is also involved in HCV entry. CD151 seems to play an indirect role in HCV entry through regulating membrane organization, especially by preventing CD81 clustering, which is unfavourable to HCV entry. We also studied the effect of some entry factors polymorphisms on viral entry. In a cohort of drug users infected by HIV but not by HCV, we identified two mutations, R209Q in CLDN-6 and P24A in OCLN, not found in control or coinfected patients. It is very rare for drug users patients infected by HIV not to be infected by HCV, suggesting a natural resistance of these patients to HCV infection. We hypothesized that the two mutations identified might impair HCV entry. However, the characterization of these mutations showed that they did not have a functional effect in vitro. Finally, we investigated the effect of Monensin, a polyether ionophore, on viral entry. This molecule increases endosomal pH through its ions transfer properties across cell membranes. We showed that Monensin inhibits HCV entry through impairing the fusion step. Interestingly, HCV cell-to-cell transmission, another poorly characterized entry pathway, was also blocked by Monensin, suggesting that a pH-dependent fusion step is also required for this transmission route. We generated resistant mutants to Monensin, notably the FL-8 mutant carrying two mutations in envelope glycoproteins, namely Y297H in E1 and I399T in E2. Viral particles expressing these two mutations infected cells in a pH-independent manner, displayed different biophysical properties and were not cell-to-cell transmitted. To conclude, these studies highlight the importance of membrane organization for viral entry through cell factors like CD151. We also pointed out that cell-to-cell transmission is a pH-dependent process. In addition, point mutations in E1 and E2 are sufficient to enable HCV to be pH-independent for its entry. However, polymorphisms in CLDN-6 and OCLN seem to have no effect on viral entry.

Syftet med studien är att utifrån självbiografier undersöka unga svenska kvinnors väg in i att börja sälja sex. Då mörkertalet är stort kring hur många unga kvinnor som säljer sex behövs en kunskapshöjning hos myndigheter i syfte att kunna identifiera vilka de främsta faktorerna för en väg in i prostitution är. Det finns starka samband mellan att sälja sex och psykisk ohälsa, samt en ökad risk att utsättas för allvarligt sexuellt våld och övergrepp. Genom att belysa de riskfaktorer som finns för unga kvinnor att hamna i prostitution kan stödinsatser ges i tidigt skede. Frågeställningen “Hur beskriver unga kvinnor de faktorer som påverkat vägen in i att börja sälja sex?” har besvarats genom en kvalitativ forskningsmetod och analyserats med hjälp av en tematisk innehållsanalys. Resultatet har analyserats med hjälp av tidigare forskning och teorier för att ge ett djupare perspektiv på kvinnornas berättelser. De sju unga kvinnornas berättelser visar att de har liknande erfarenheter som även går att finna i den tidigare forskningen. Resultatet visar att de fyra främsta anledningarna till att börja sälja sex som svenskfödd kvinna är erfarenheter kring att ha blivit utsatt för sexuella övergrepp, ångest och självskada, svårigheter i barndomen och ekonomiska aspekter. Majoriteten av de unga kvinnorna som sålt sex berättar om hur de varit utsatta för sexuella övergrepp i tidig ålder, och flera kvinnor berättar om hur prostitution används som ett sätt att dämpa ångest samtidigt som ångesten förvärras efteråt, vilket blir som en ond cirkel. Många av kvinnorna beskriver erfarenheter av föräldrar med missbruk och psykisk ohälsa, vilket påverkat deras barndom och vuxna liv negativt. Den ekonomiska aspekten beskrivs av vissa kvinnor som en lockelse och ett snabbt sätt att tjäna pengar på vid bristande ekonomiska resurser för att öka livskvaliteten. / The aim of the study is to illustrate young Swedish women's path into selling sex through autobiographies. As there is a large unknown number of young women who sell sex, there is a need for an increase in knowledge among authorities to identify the main factors leading to prostitution. There are strong correlations between selling sex and mental illness, as well as an increased risk of experiencing serious sexual violence and abuse. By highlighting the risk factors for young women to end up in prostitution, interventions can be given in the early stages. The research question "How do young women describe the factors that influenced the path into start selling sex?" has been answered through a qualitative research method and analyzed using thematic content analysis. The results have been analyzed using previous research and theories to provide a deeper perspective on the women's stories. The stories of the seven young women show that they have similar experiences that can also be found in previous research.The results show that the four main reasons for women born in Sweden to start selling sex are experiences of sexual abuse, anxiety and self-harm, childhood difficulties, and economic aspects. The majority of young women who end up in prostitution describe how they have been subjected to sexual abuse at a young age, and several women describe how prostitution is used as a way to alleviate anxiety while it becomes worse afterwards, which becomes a vicious circle. Many of the women describe experiences of parents with addiction and mental illness, which have negatively affected their childhood and adult lives. The economic aspect is described by some women as a lure and a quick way to earn money when economic resources are lacking to improve their quality of life.