Um enfoque analítico, envolvendo centrifugação diferencial de homogeneizados de cecos gástricos de Rhynchosciara americana preparados em condições brandas e vigorosas, suporta a asserção de que existe uma classe principal de aril-α- e β -glicosidases, aril-α- e β-galactosidases e celobiases que é ligada à membrana plasmática, e duas classes de maltases, aminopeptidases, carboxipeptidases e dipeptidases. Maltases ocorrem na membrana plasmática e no interior de lisossomos na forma solúvel, enquanto que as peptidases (amino-carboxi- e dipeptidase) são encontradas na membrana plasmática e citossol. A ocorrência das enzimas citadas acima na membrana plasmática das células cecais, foi confirmada por resultados obtidos em preparações de microvilosidades realizadas com técnica desenvolvida para enterocito de mamíferos. O tratamento de microvilosidades com solução hiperosmótica de Tris, seguido de centrifugação em gradiente de densidade, permitiu a separação de quatro frações de membrana e de uma fração que contém microvilosidades intactas e, provavelmente, microfilamentos isolados. Eletroferogramas do material recolhido do gradiente mostrou diferenças entre as frações de membrana e sugeriu a ocorrência de actina como componente majoritário dos microfilamentos das microvilosidades. Ensaios enzimáticos nas diferentes frações do gradiente confirmaram a ocorrência de celobiase e carboxipeptidase ligadas à membrana plasmática. Os resultados de distribuição intracelular de hidrolases nos cecos de R. americana permitiram propor que a digestão terminal de proteínas ocorre na membrana plasmática e no citossol, por ação de amino-, carboxi- e dipeptidases, enquanto que a digestão de carboidratos, com exceção da trealose, ocorre somente na superfície das microvilosidades. / An analytical approach involving differencial centrifugation of Rhynchosciara Americana midgut caeca homogenates prepared in mild and in vigorous conditions support the assumption there are one main class of aryl-α- e β-glucosidases, aryl-α - e β-galactosidases and cellobiases, which are plasma membrane bound, and two classes of maltases, aminopeptidades, carboxypeptidases and dipeptidases. Maltases, occur in plasma membrane and in lysosomes (as a soluble enzyme) and the others are found in plasma membrane and cytosol. A succeful purification of caeca cells brush-borders by tecniques used for mammal enterocytes confirmed the assumptions based on differential centrifugation data. Treatment of purified microvilli with a hyperosmotic solution of Tris, followed by density gradient centrifugation, resulted in the separation of four membrane fractions and one fraction containing intact microvilli and, probably, isolated microfilaments. Electropherograms of the material recovered from the gradient showed differences among the membrane fractions, and they permitted to propose that actin is a major component of microvilli microfilaments. Enzymatic assays in the different fractions from the gradient confirmed the occurrence of cellobiase and carboxypeptidase plasma membrana bound. The results permite to propose that the majority of the terminal digestion of proteins and carbohydrates, with the exception of trehalose, occurs on the surface of the insect midgut caeca cells microvilli.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:32Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-02-24Bitstream added on 2014-06-13T19:04:37Z : No. of bitstreams: 1 torres_kaa_dr_jabo.pdf: 619941 bytes, checksum: e0160fe883801063a539b7087e557875 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Experimento 1: Foram avaliados os efeitos da substituição do milho pelo sorgo na ração para frangos de corte sobre o desempenho, o rendimento de carcaça e partes, a morfometria (densidade de vilos, altura dos vilos, profundidade das criptas, número de células caliciformes e índice mitótico nas criptas) e a integridade da mucosa do duodeno, jejuno e íleo, e a atividade das enzimas de membrana (aminopeptidase, fosfatase alcalina e maltase) da mucosa do jejuno. Foram utilizados 792 pintainhos de um dia machos, Cobb-500, distribuídos ao acaso em quatro tratamentos (0, 50, 75 ou 100% de substituição do milho pelo sorgo do 1º ao 42º dia) e seis repetições. No 7º, 21º e 42º dia o peso dos frangos e as sobras das rações foram aferidas, e foram obtidas amostras do intestino delgado de um frango por repetição. Experimento 2: Foi avaliado o efeito da substituição total do milho pelo sorgo sobre as Enterobactérias, Lactobacillus spp, Clostridium perfringens (Log10 UFC/g), a viscosidade e o pH do conteúdo ileal. Cem pintainhos foram distribuídos em dois grupos e alimentados com rações à base de milho ou sorgo do 1º ao 42º dia de idade. Concluiu-se desses experimentos que a substituição do milho da ração por sorgo, na fase inicial (1 a 21 dias), não altera o desempenho e a função da mucosa do intestino delgado dos frangos. A substituição parcial do milho pelo sorgo (50 ou 75%) durante a fase total de criação (1 a 42 dias) melhora a conversão alimentar dos frangos. A substituição total (100%), até os 42 dias, prejudica a estrutura dos vilos do duodeno e jejuno, mas, diminui a colonização por Clostridium perfringens no íleo e a viscosidade do conteúdo ileal. A substituição de 75 ou 100% até os 42 dias diminui a atividade de aminopeptidase e maltase. O rendimento de carcaça e partes, a atividade da fosfatase alcalina intestinal e as populações... / Experiment 1: The effects of substitution of corn by sorghum in diets for broiler chickens on performance, carcass and parts (breast and thigh+drumstick), morphology (density of villi, villous height, depth crypts, number of goblet cells and mitotic index in the crypts) and integrity (score of epithelial loss) of the duodenum, jejunum and ileum mucosa, and the activity of membrane enzymes (aminopeptidase, intestinal alkaline phosphatase, and maltase) of the jejunum. We used 792 day-old chicks male Cobb-500, were randomly assigned to four treatments (0, 50, 75 or 100% replacement of corn by sorghum 1 to 42 days) and six replications. At 7, 21 and 42 days the weight of the chickens and the remains of the diets were measured, and samples were collected from the small intestine of a chicken for replication. Experiment 2: The effect of total substitution of corn by sorghum on the counts of Enterobacteriaceae, Lactobacillus spp and Clostridium perfringens, viscosity and pH of ileal contents. One hundred chicks were divided into two groups and fed diets based on corn or sorghum, 1 to 42 days of age. From the results of these experiments it was concluded that the substitution of corn by sorghum in the initial phase (1 to 21 days) does not affect the performance and function of small intestinal mucosa of chickens. The partial substitution of corn by sorghum (50 or 75%) during the total period (1 to 42 days) seems to improve feed conversion of chickens. Total substitution (100%), up to 42 days, affect the structure of the villi of the duodenum and jejunum, but reduced colonization by Clostridium perfringens in the ileum and the viscosity of ileal contents. The replacement of 75 or 100% up to 42 days reduces the activity of aminopeptidase and maltase. The carcass and parts, the activity of intestinal alkaline phosphatase and the count of Enterobacteriaceae and Lactobacillus spp, are not affected by treatments

Um enfoque analítico, envolvendo centrifugação diferencial de homogeneizados de cecos gástricos de Rhynchosciara americana preparados em condições brandas e vigorosas, suporta a asserção de que existe uma classe principal de aril-α- e β -glicosidases, aril-α- e β-galactosidases e celobiases que é ligada à membrana plasmática, e duas classes de maltases, aminopeptidases, carboxipeptidases e dipeptidases. Maltases ocorrem na membrana plasmática e no interior de lisossomos na forma solúvel, enquanto que as peptidases (amino-carboxi- e dipeptidase) são encontradas na membrana plasmática e citossol. A ocorrência das enzimas citadas acima na membrana plasmática das células cecais, foi confirmada por resultados obtidos em preparações de microvilosidades realizadas com técnica desenvolvida para enterocito de mamíferos. O tratamento de microvilosidades com solução hiperosmótica de Tris, seguido de centrifugação em gradiente de densidade, permitiu a separação de quatro frações de membrana e de uma fração que contém microvilosidades intactas e, provavelmente, microfilamentos isolados. Eletroferogramas do material recolhido do gradiente mostrou diferenças entre as frações de membrana e sugeriu a ocorrência de actina como componente majoritário dos microfilamentos das microvilosidades. Ensaios enzimáticos nas diferentes frações do gradiente confirmaram a ocorrência de celobiase e carboxipeptidase ligadas à membrana plasmática. Os resultados de distribuição intracelular de hidrolases nos cecos de R. americana permitiram propor que a digestão terminal de proteínas ocorre na membrana plasmática e no citossol, por ação de amino-, carboxi- e dipeptidases, enquanto que a digestão de carboidratos, com exceção da trealose, ocorre somente na superfície das microvilosidades. / An analytical approach involving differencial centrifugation of Rhynchosciara Americana midgut caeca homogenates prepared in mild and in vigorous conditions support the assumption there are one main class of aryl-α- e β-glucosidases, aryl-α - e β-galactosidases and cellobiases, which are plasma membrane bound, and two classes of maltases, aminopeptidades, carboxypeptidases and dipeptidases. Maltases, occur in plasma membrane and in lysosomes (as a soluble enzyme) and the others are found in plasma membrane and cytosol. A succeful purification of caeca cells brush-borders by tecniques used for mammal enterocytes confirmed the assumptions based on differential centrifugation data. Treatment of purified microvilli with a hyperosmotic solution of Tris, followed by density gradient centrifugation, resulted in the separation of four membrane fractions and one fraction containing intact microvilli and, probably, isolated microfilaments. Electropherograms of the material recovered from the gradient showed differences among the membrane fractions, and they permitted to propose that actin is a major component of microvilli microfilaments. Enzymatic assays in the different fractions from the gradient confirmed the occurrence of cellobiase and carboxypeptidase plasma membrana bound. The results permite to propose that the majority of the terminal digestion of proteins and carbohydrates, with the exception of trehalose, occurs on the surface of the insect midgut caeca cells microvilli.