Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Many studies have been developed to characterize the function of angiotensin-renin system (ARS) in the female reproductive organs. Evidences from the literature have pointed a relevant role of angiotensin II (Ang II) in mammals, through its type 2 receptor (AT2) in oocyte maturation as in ovulation. Nevertheless, the participation of Ang II in other important reproductive features such as steroidogenesis has not been fully clarified. Therefore, the main objective of this work was to detect in vitro the steroidogenic effects of Ang II in theca cells. For that, bovine theca cells were obtained from follicles (larger than 8mm of diameter) collected from a local abattoir and submitted to different treatments in a sequence of experiments. In Experiment 1, Ang II was added to LH-treated (10 ng/ml) theca cells. Experiment 2 employed Ang II, in different concentrations, in addition to insulin (100 ng ̸ml) and LH (100 ng ̸ml). Experiment 3 explored the effects of an Ang II antagonist (saralasin) in theca cells co-stimulated by insulin and LH (both at 100 ng ̸ml). After 24 hours, culture media were collected and evaluated for testosterone and androstenedione levels measured by high performance liquid chromatography (HPLC). In parallel, gene expression of key steroidogenic enzymes and proteins, respectively, HSD3B2, CYP11A1 e CYP17A1 and STAR were accessed by qRT-PCR, with exception of experiment 1, in which only CYP17A1 was evaluated. Overall, absence of Ang II action was observed in all Ang II doses evaluated. Despite the difference in gene expression for CYP17A1 against controls in experiment 1, neither an increase in androgens levels nor a negative impact of saralasin were detected. Although very important for oocyte maturation and the ovulation, Ang II seems not influence androgen production by theca cells in vitro. In conclusion our results do not support the role for Ang II in thecal steroidogenesis, at least in bovine, as the primary hypothesis of the study. / Diversos estudos vêm sendo desenvolvidos para caracterizar o sistema renina angiotensina (RAS) no aparelho reprodutivo feminino. Evidências da literatura apontam um importante papel da angiotensina II (Ang II), via receptor tipo 2 (AT2), tanto na maturação dos oócitos quanto na ovulação em mamíferos. No entanto, a participação da Ang II em outros aspectos reprodutivos importantes, como a esteroidogênese, ainda não foi completamente elucidada. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi verificar o efeito in vitro da Ang II nas células da teca cultivadas. Para isso, células da teca bovina foram obtidas de folículos com mais de 8mm de diâmetro de ovários oriundos de abatedouro local e submetidas a diferentes tratamentos em uma sequência de experimentos. No experimento 1, Ang II foi adicionada a células da teca tratadas com LH na dose de 10 ng/ml. No experimento 2, foi utilizada Ang II em diferentes concentrações em adição ao tratamento com insulina (100 ng ̸ml) e LH (100 ng ̸ml). O experimento 3, explorou o possível efeito de um antagonista da Ang II (saralasina) em células da teca co-estimuladas com insulina e LH (ambos em 100 ng ̸ml). Após 24 horas, o meio de cultura foi coletado e avaliado para verificação dos níveis de testosterona e androstenediona aferidos pela técnica de cromatografia líquida de alta performance (HPLC). Em paralelo, a expressão gênica de enzimas e proteínas chaves na esteroidogênese, respectivamente, HSD3B2, CYP11A1 e CYP17A1 e STAR, foram avaliadas por qRT-PCR, com exceção do experimento 1 onde somente a CYP17A1 foi estudada. De maneira geral, não foi observada uma ação da Ang II nas doses utilizadas. Apesar de uma diferença na expressão de CYP17A1 ter sido verificada em relação aos controles, nem o aumento dos níveis de androgênios ou um impacto negativo pelo uso de saralasina foram detectados. Embora reconhecida como muito importante para maturação oocitária e ovulação, a Ang II parece não influenciar a produção de androgênios in vitro. Em conclusão, nossos resultados não demonstraram um papel da Ang II na esteroidogênese tecal, pelo menos na espécie bovina, ao contrário da hipótese original deste estudo.

Os Galea spixii são roedores que tem despertado o interesse de pesquisadores devido ao seu peculiar dimorfismo sexual, uma vez que, as fêmeas possuem a genitália externa com características masculinizadas. O objetivo da presente pesquisa foi estabelecer os parâmetros morfológicos do desenvolvimento e diferenciação sexual de machos e fêmeas durante o período intrauterino e as possíveis fontes de produção de hormônios andrógenos e estrógenos durante a gestação. Foram utilizados conceptos provenientes de 30 fêmeas gestantes. Foi descrita a concentração hormonal das gestantes. Em seguida, os órgãos genitais dos conceptos foram analisados macroscopicamente e microscopicamente. E, para detectar possíveis fontes de andrógenos e estrógenos, as placentas, ovários e testículos foram submetidos a técnicas imunológicas de detecção de enzimas esteroidogênicas. Aos 25 dias de gestação (DG) se inicia o processo de diferenciação sexual das gônadas (para formar os ovários ou os testículos) e da genitália externa. O tubérculo genital sofre a canalização da uretra aos 30 DG para formar o pênis nos machos e aos 40 DG para formar o clitóris das fêmeas. Nos machos, a partir dos ductos mesonéfricos, se diferenciam os ductos epididimários e os ductos deferentes. Nas fêmeas, os ductos paramesonéfricos formam as tubas e cornos uterinos, o útero parcialmente duplo e a porção cranial da vagina. A porção caudal se origina do seio urogenital e a membrana de oclusão vaginal, da membrana urogenital. Também ficou demonstrado que, a concentração de testosterona sofre grande aumento, dos 25 DG até o final da gestação e que o mesmo não ocorre com o estradiol. Os resultados para detecção de enzimas esteroidogênicas sugerem que, a placenta pode ser o órgão que atua na produção de hormônios andrógenos e pode não realizar a conversão desses hormônios em estrógenos, devido à ausência da enzima responsável por este processo. Por fim, os testículos e ovários também podem contribuir com a produção dos principais andrógenos e o ovário também possui a enzima necessária para a produção de estrógenos. / Galea spixii are rodents that have aroused the interest of researchers because of their peculiar sexual dimorphism, since females have the external genitalia with masculinized characteristics. The aim of the present research was to establish the morphological parameters of the development and sexual differentiation of males and females during the intrauterine period and the possible sources of androgen and estrogen hormones production during pregnancy. Concepts from 30 pregnant females were used. The hormonal concentrations of pregnant were described. Then, the genital organs of the concepts were analyzed macroscopically and microscopically. And, to detect possible sources of androgens and estrogens, placentas, ovaries and testes were subjected to immunological techniques for the detection of steroidogenic enzymes. At 25 days of gestation (DG) the process of sexual differentiation of the gonads (to form the ovaries or testicles) and the external genitalia begins. The genital tubercle undergoes channeling of the urethra at 30 DG to form the penis in males and at 40 DG to form the clitoris of females. In males, the epididymal ducts and the vas deferens differentiate from the mesonephric ducts. In females, the paramesonephric ducts form the uterine tubes and horns, the partially double uterus and the cranial portion of the vagina. The caudal portion originates from the urogenital sinus and the vaginal closure membrane originates from the urogenital membrane. It has also been shown that the testosterone concentration is greatly increased from 25 DG until the end of gestation and that the same does not occur with estradiol. The results for the detection of steroidogenic enzymes suggest that the placenta may be the organ that acts in the production of androgen hormones and may not perform the conversion of these hormones into estrogens due to the absence of the enzyme responsible for this process. Finally, the testicles and ovaries can also contribute to the production of the main androgens and the ovary also has the enzyme necessary for the production of estrogens.

Os Galea spixii são roedores que tem despertado o interesse de pesquisadores devido ao seu peculiar dimorfismo sexual, uma vez que, as fêmeas possuem a genitália externa com características masculinizadas. O objetivo da presente pesquisa foi estabelecer os parâmetros morfológicos do desenvolvimento e diferenciação sexual de machos e fêmeas durante o período intrauterino e as possíveis fontes de produção de hormônios andrógenos e estrógenos durante a gestação. Foram utilizados conceptos provenientes de 30 fêmeas gestantes. Foi descrita a concentração hormonal das gestantes. Em seguida, os órgãos genitais dos conceptos foram analisados macroscopicamente e microscopicamente. E, para detectar possíveis fontes de andrógenos e estrógenos, as placentas, ovários e testículos foram submetidos a técnicas imunológicas de detecção de enzimas esteroidogênicas. Aos 25 dias de gestação (DG) se inicia o processo de diferenciação sexual das gônadas (para formar os ovários ou os testículos) e da genitália externa. O tubérculo genital sofre a canalização da uretra aos 30 DG para formar o pênis nos machos e aos 40 DG para formar o clitóris das fêmeas. Nos machos, a partir dos ductos mesonéfricos, se diferenciam os ductos epididimários e os ductos deferentes. Nas fêmeas, os ductos paramesonéfricos formam as tubas e cornos uterinos, o útero parcialmente duplo e a porção cranial da vagina. A porção caudal se origina do seio urogenital e a membrana de oclusão vaginal, da membrana urogenital. Também ficou demonstrado que, a concentração de testosterona sofre grande aumento, dos 25 DG até o final da gestação e que o mesmo não ocorre com o estradiol. Os resultados para detecção de enzimas esteroidogênicas sugerem que, a placenta pode ser o órgão que atua na produção de hormônios andrógenos e pode não realizar a conversão desses hormônios em estrógenos, devido à ausência da enzima responsável por este processo. Por fim, os testículos e ovários também podem contribuir com a produção dos principais andrógenos e o ovário também possui a enzima necessária para a produção de estrógenos. / Galea spixii are rodents that have aroused the interest of researchers because of their peculiar sexual dimorphism, since females have the external genitalia with masculinized characteristics. The aim of the present research was to establish the morphological parameters of the development and sexual differentiation of males and females during the intrauterine period and the possible sources of androgen and estrogen hormones production during pregnancy. Concepts from 30 pregnant females were used. The hormonal concentrations of pregnant were described. Then, the genital organs of the concepts were analyzed macroscopically and microscopically. And, to detect possible sources of androgens and estrogens, placentas, ovaries and testes were subjected to immunological techniques for the detection of steroidogenic enzymes. At 25 days of gestation (DG) the process of sexual differentiation of the gonads (to form the ovaries or testicles) and the external genitalia begins. The genital tubercle undergoes channeling of the urethra at 30 DG to form the penis in males and at 40 DG to form the clitoris of females. In males, the epididymal ducts and the vas deferens differentiate from the mesonephric ducts. In females, the paramesonephric ducts form the uterine tubes and horns, the partially double uterus and the cranial portion of the vagina. The caudal portion originates from the urogenital sinus and the vaginal closure membrane originates from the urogenital membrane. It has also been shown that the testosterone concentration is greatly increased from 25 DG until the end of gestation and that the same does not occur with estradiol. The results for the detection of steroidogenic enzymes suggest that the placenta may be the organ that acts in the production of androgen hormones and may not perform the conversion of these hormones into estrogens due to the absence of the enzyme responsible for this process. Finally, the testicles and ovaries can also contribute to the production of the main androgens and the ovary also has the enzyme necessary for the production of estrogens.