Orientador: Olga Maria Mascarenhas de Faria Oliveira / Banca: Iguatemy Lourenço Brunetti / Banca: José Carlos Rebuglio Vellosa / Banca: Luis Henrique Souza Guimarães / Banca: Ana Paula Rodrigues / Resumo: As peroxidases são hemeproteínas que catalisam a oxidação de vários xenobióticos na presença de peróxido. A soja é um dos principais produtos de exportação do Brasil e sua manufatura gera subprodutos em grande escala. Um destes, a casca, é uma fonte rica em peroxidase (SBP). Para a otimização da extração da SBP de casca de soja, e condições de ensaio, foi utilizado um planejamento fatorial com metodologia de superfície de resposta, resultando em 128 experimentos. Os dados definiram o meio reacional da SBP: pH 4,5 (transgênicas) e pH 7,0 (tradicionais); temperatura 500C; tratamento do tegumento com obtenção do pó cetonico; NaCl 0,1 mol/L; volume de amostra da enzima 330mL, guaiacol 30mmol/L, H2O2 46 mmol/L, em tampão 50mmol/L. Após, iniciou-se os estudos da SBP de diferentes cultivares: convencionais (BRS 258, BRS 260, BRS 262) e transgênicas (BRS 255 RR, BRS Charrua RR e BRS Pampa RR) de cascas de soja fornecidas pela EMBRAPA, visando estudo comparativo sobre o conteúdo de peroxidase (SBP), e posterior seleção para isolamento da enzima e estudos de seus parâmetros cinéticos. Para isso, a amostra, em pó cetônico, de cada cultivar foi ressuspensa em tampão extrator, a proteína precipitada com sulfato de amônio 70%, o precipitado ressuspenso em tampão extrator e eluído em coluna Sephadex G-25, para dessanilização. Nas frações (eluatos) foram realizados os spots test para identificação de SBP. As cultivares BRS 258, BRS 262, BRS 260 e BRS 255 RR foram selecionadas com maior conteúdo de enzima SBP. Assim, volumes (5mL) de tais cultivares foram eluídos em coluna Sephadex G-100 para purificação parcial e determinação da massa molecular. Com as frações (eluatos) obteve-se "pool" de enzima, onde se efetuou os estudos cinéticos: efeito de cátions mono e divalentes, determinação dos parâmetros cinéticos - kM, vmax, pH ótimo, temperatura ótima... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The peroxidases are hemeproteins that catalyze the oxidation of various xenobiotics in the presence of peroxide. Soybean is a major export products from Brazil and its manufacture creates byproducts in large scale. One of these, the bark is a rich source of peroxidase (SBP). To optimize the extraction of the SBP of soybean seed coat, and test conditions, we used a factorial planning with response surface methodology, resulting in 128 experiments. The data defined the reaction medium SBP pH 4.5 (transgenic) and pH 7.0 (traditional), temperature 500C; treatment of sample to obtain the "acetone powder", NaCl 0.1 mol / L, sample volume of the enzyme 330 mL, guaiacol 30 mmol / L, H2O2 46 mmol / L in buffer 50mmol / L. After he began the studies of SBP from different cultivars: Conventional (BRS 258, BRS 260, BRS 262) and transgenic (BRS 255 RR, BRS and BRS Pampa RR) soybean seeds coat supplied by EMBRAPA, doing comparative study on the content of peroxidase (SBP), and subsequent selection to isolate the enzyme and studies of its kinetic parameters. For this, the sample in "acetone powder" of each cultivar was re-suspended in extraction buffer, the protein precipitated with ammonium sulfate 70%, the precipitate resuspended in extraction buffer and eluted in Sephadex G-25 column, for desalination. In the fractions (eluates) were performed to identify test spots SBP. BRS 258, BRS 262, BRS 260 and BRS 255 RR were selected with the highest content of enzyme SBP. Thus, volumes (5mL) of these cultivars were eluted in Sephadex G-100 column for partial purification and determination of molecular weight. With the fractions (eluate) obtained a pool of enzyme, which has made the kinetic studies: effects of mono-and divalent cations, determination of kinetic parameters - kM, vmax, optimum pH, optimum temperature. The data showed: i) optimum pH 4.5, ii) the optimum temperature, BRS 260... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Rosemeire Cristina Linhari Rodrigues Pietro / Banca: Suraia Said / Banca: Luiz Henrique Souza Guimarães / Banca: Tais Maria Bauab / Banca: Edwil Aparecida de Lucca Gattás / Resumo: Enzimas são catalisadores fundamentais para os sistemas biológicos sendo amplamente estudadas e aplicadas em todo o mundo, especialmente na área da saúde. Neste trabalho foi avaliada a aplicação de enzimas quitinolíticas e queratinolíticas em ensaios in vitro contra Pedicullus humanus capitis e na degradação de calos humanos, respectivamente. Foram selecionados os micro-organismos com maior potencial para produção dessas enzimas e determinados os parâmetros de produção, as condições de separação, purificação e caracterização das enzimas. Os micro-organismos com maior potencial para a produção de quitinases e queratinases foram os fungos Metarhizium anisopliae CG374 e Aspergillus oryzae, respectivamente. As maiores produções de quitinases foram obtidas em biorreator a 28°C, pH 7,0, 1,5 vvm e 200 rpm após 120 h. Quando produzida em biorreator hiperbárico sob pressão de 5 bar, apresentou um aumento de 21,3% na produtividade em relação ao biorreator convencional. Para queratinases em biorreator, os parâmetros de produção foram 28°C, pH 6, 200 rpm, 1,5 vvm e 120 h. A produção das quitinases e queratinases em biorreator foi 83 e 154% maior do que em frascos Erlenmeyer, respectivamente. A quitinase foi concentrada 5,12 vezes na purificação apresentando massas molares aproximadas de 24, 28 e 80 kDa. Fração purificada contendo quitinase apresentou estabilidade a 40°C por 60 minutos. A queratinase foi concentrada 4,52 vezes após purificação com massas molares de 40 e 50 kDa apresentando estabilidade térmica a 40°C por 60 min. A avaliação das enzimas quitinolíticas frente a piolhos humanos apontou para uma eficiência 9,1% maior quando comparadas com produtos comerciais. A avaliação da ação de enzimas queratinolíticas na degradação de calos humanos demonstrou resultados significativos quando comparados com produtos disponíveis no mercado... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Enzymes are catalysts for fundamental biological systems is extensively studied and applied worldwide, especially in health. In this study were evaluated the application of enzymes chitinolytic and keratinolytic in tests in vitro against Pedicullus humanus capitis and degradation of human callus, respectively. Were selected microorganisms with the greatest potential for production of these enzymes and determined the production parameters, conditions of separation, purification and characterization of enzymes. The microorganisms with the higher potential for the production of chitinases and keratinases were Metarhizium anisopliae CG374 and Aspergillus oryzae, respectively. The highest yields of chitinases obtained in fermentations in a bioreactor were 28°C, pH 7.0, 1.5 vvm and 200 rpm after 120 h. When produced in the hyperbaric bioreactor at a pressure of 5 bar, an increase of 21.3% in yield over conventional production in a conventional bioreactor was observed. To keratinases in a bioreactor, the production parameters were 28°C, pH 6.0, 200 rpm, and 1.5 vvm after 120h. The production of chitinases and keratinases in bioreactor was 83 and 154% higher than in Erlenmeyer flasks, respectively. The chitinase was 5.12 times concentred on the purification presenting molar weight of approximately 24, 28 and 78 kDa. Fraction containing purified chitinase showed thermal stability of 40°C for 60 min. Keratinase was concentred 4.52 times after purification and presents molar weight of 40 and 50 kDa. The purified fraction was thermal stability at 40°C for 60 min. Evaluation of chitinolytic enzymes against human lice showed an efficiency of 9.1% higher for the enzymatic extract when compared with commercial products. The evaluation of the action of keratinolytic enzyme in the degradation of human callus showed significative results when compared to products on the market less time reaching maximum degradation / Doutor

Resumo: Neste trabalho estudou-se a queratinase produzida por uma cepa de Streptomyces sp LMI-1 isolada de uma fábrica de processamento de aves domésticas. A enzima degradou 87% das penas após 120h de cultivo. Ela foi estimulada por íons Ba+2 e inibida por Ca+2, Mn+2, EDTA e Hg+. O pH ótimo de atividade da enzima foi 8,5 e a temperatura de maior atividade foi 60oC. A enzima é estável por até 2h em 50oC. Na análise do caldo de cultura detectou-se a presença dos aminoácidos serina, metionina, prolina, tirosina e leucina logo após 72h de cultivo. A enzima apresenta potencial para utilização industrial na produção de ração animal. / Abstract: In the present work was studied keratinase produced by Streptomyces sp LMI-1 isolated of an industrial plant of poultry processing when cultived with feathers as a carbon source. The enzyme degraded 87% of feathers after 120 hours. The enzyme was stimulated by Ba+2 and inhibited by Ca+2, Mn+2, EDTA and Hg+. The optimum pH and temperature for the enzyme was 8,5 and 60oC, respectively. The enzyme was stable after 2 hours at 50oC. The culture broth analysis by thin layer chromatogram showed presence of amino acids serine, methionine, proline, tyrosine and leucine after 72 hours of incubation. The enzyme presents potential for industrial use in the production of animal feed preparation. / Orientador: Jonas Contiero / Coorientador: Eleonora Cano Carmona / Banca: José Carlos Marconato / Banca: Eloízio Júlio Ribeiro / Mestre

Resumo: Este trabalho teve como objetivo avaliar dietas para frangos de corte contendo complexo multienzimático e fontes lipídicas sobre o desempenho, rendimento de carcaça e cortes, metabolismo de nutrientes e atividade de enzimas pancreáticas. O delineamento foi inteiramente casualizado em esquema fatorial (2 x 2) + 2, duas fontes lipídicas (óleo de soja e gordura de frango) com dois níveis de inclusão (2 e 4%) em rações suplementadas com complexo multienzimático (CMe), e dois tratamentos controle sem adição de lipídio, sendo um tratamento controle positivo com ração suplementada com CMe e um tratamento controle negativo sem adição de CMe. Não houve interação das fontes lipídicas com os níveis de inclusão para nenhuma das variáveis estudadas, bem como não houve diferença entre o óleo de soja e a gordura de frango. Pelos resultados obtidos, observou-se na análise de desempenho, que o CMe mostrou-se eficaz apenas na fase inicial. À medida que se aumentou o conteúdo de lipídios nas rações, as aves apresentaram maior ganho de peso e consumo de ração. Aos 42 dias de idade, após 8 horas de jejum cinco aves por repetição foram abatidas para determinar o rendimento de carcaça e cortes e a porcentagem de gordura abdominal. Os tratamentos não influenciaram o rendimento de carcaça, cortes e o teor de gordura abdominal. A adição de CMe e das fontes lipídicas proporcionaram maior coeficiente de metabolizabilidade do extrato etéreo (CMEE), não havendo diferença na metabolizabilidade do nitrogênio e da energia em ambas as idades analisadas. A atividade de enzimas pancreáticas das aves foi afetada pelas dietas apenas aos 21 dias de idade, sendo que a atividade de amilase e lipase foram maiores, respectivamente, no tratamento controle negativo (maior teor de amido) e nas dietas com maiores quantidades de lipídio. Observou-se correlação positiva entre o CMEE... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: This paper had as its goal to evaluate diets for broilers chickens containing multienzyme complex and lipid sources on performance, carcass and cuts productivity, nutrients metabolism and pancreatic enzyme activity. The delimitation was totally at random in a factorial scheme (2 x 2) + 2, two lipid sources (soy oil and chicken fat) with two levels of inclusion (2 and 4%) in rations supplemented with multienzyme complex (MeC), and two control treatments without lipid addition, in which one positive control treatment is with ration supplemented with MeC and one negative control treatment is without MeC addition. There wasn't any interaction of the lipid sources with the inclusion levels to any of the variables studied, as well as there was not any difference between the soy oil and the chicken fat. Through the results that were obtained, it was observed in the performance analysis, that MeC was effective only in the starter phase. As the amount of lipid was increased in rations, the birds presented a higher weight gain and ration consumption. At the age of 42 days, after 8 hours of fasting five birds by repetition were slaughtered to determine the carcass and cuts productivity and the percentage of abdominal fat. The treatments didn't influence the carcass, cut and abdominal fat content productivity. MeC and lipid source addition provided a higher ether extract metabolizability coefficient (EEMC), without any difference in the nitrogen metabolizability and in the energy in both ages that were analyzed. The birds pancreatic enzyme activity was affected by the diets only at 21 days of age, when the amylase and lipase activity were higher, respectively, in the negative control treatment (higher content of starch) and in the diets with higher lipid quantities. It was observed a positive correlation between EEMC and lipase activity at the age of 21 and 35 days of the birds... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Antonio Celso Pezzato / Coorientador: Valquíria Cação da Cruz / Banca: José Roberto Sartori / Banca: Ricardo de Albuquerque / Mestre

Orientador: Silvio José Bicudo / Banca: Dirceu Maximino Fernandes / Banca: Helio Grassi Filho / Banca: José Roberto Santos / Banca: Hideaki Wilson Takahashi / Resumo: Considerando a hipótese de que a eficácia da utilização do molibdênio é dependente do ajuste em etapas importantes da determinação de sua concentração no solo, bem como da dose e forma de aplicação, realizou-se a presente pesquisa com o objetivo de aprimorar a etapa de retirada do molibdênio da resina trocadora de íons, durante o procedimento analítico de determinação de molibdênio na solução do solo; e avaliar a eficácia de doses e formas de aplicação de molibdênio na cultura do milho. Para o aprimoramento da etapa de retirada do molibdênio da resina trocadora de íons, durante o procedimento analítico de determinação de molibdênio, foram realizados estudos no laboratório para avaliar qual a solução que retira o molibdênio retido na resina melhor representava o molibdênio adicionado ao solo, sendo aplicados nesses estudos o delineamento inteiramente casualizado, com quatro repetições. Para avaliar a eficácia de doses e formas de aplicação de molibdênio na cultura do milho, foram instalados três experimentos em casa de vegetação pertencente à FCA/UNESP, Campus de Botucatu, em dois anos. No primeiro ano foram realizados dois experimentos, um com calagem: Experimento I; e outro sem calagem: Experimento II; no segundo ano foi realizado mais um experimento com calagem: Experimento III. O delineamento experimental, para os três experimentos foi o de blocos casualizados, com quatro repetições. Os experimentos I e II obedeceram a um arranjo fatorial de 2x3x4+1, sendo seus tratamentos compostos por dois tipos solos com texturas diferentes: Neossolo Litólico (RL) e Latossolo Roxo álico (LRa); três formas de aplicação: via folha, via semente e via solo; e quatro doses de molibdênio: 25, 100, 400 e 1600 g ha-1 (para a aplicação via folha e via solo) e 5,625; 11,25; 22,5 e 45,0 g ha-1 (para a aplicação via semente), mais uma testemunha absoluta... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Assuming that the effective use of molybdenum is dependent on accurate determination of its concentration in soil as well as the dose and method of application, put into practice this research with the objective of improving the determination of the concentration of molybdenum in soil and evaluate the effectiveness of application methods and doses in maize. To improve the determination of molybdenum in soil, studies were carried in the laboratory to evaluate which solution mixed extraction of molybdenum contained in the resin that best represented the molybdenum added to soil, being applied in these studies the entirely randomized design, with four replications. To evaluate the effectiveness of doses and methods of application of molybdenum in maize, essays were carried in a greenhouse belonging to the FCA/UNESP, Botucatu, in two years. In the first year two experiments had been carried through, one with lime: Experiment I; another without lime: Experiment II; in the second year it was carried through an experiment with lime: Experiment III. The experimental design, in the three experiments, was a randomized block with four replications. In the experiments I and II used a factorial arrangement of 2x3x4+1, being their treatments made of two soils with different textures: soil Neossolo Litólico (LR) and soil Latassolo Roxo álico (LRa), three application forms (leaf, seeds, and soil aplications) and four levels of molybdenum: 25, 100, 400 and 1600 g ha-1 (for leaf and soil applications) and 5.625, 11.25, 22.5 and 45.0 g ha-1 (for seeds application) and a control without molybdenum fertilization. The Experiment III was installed in only kind of soil, the Nitossolo Litólico (RL), in factorial arrangement of 3x4+1, being their treatments made of by same application forms and levels of molybdenum used in Experiments I and II. The essays were conducted on experimental plots... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Roberval Daiton Vieira / Banca: Francisco Carlos Kryzanowski / Banca: José de Barros França Neto / Banca: Julio Marcos Filho / Banca: Silvelena Vanzolini Segato / Resumo: A deterioração de sementes de soja durante o período de armazenamento tem sido bastante estudada. O trabalho teve por objetivo monitorar a deterioração em sementes e tecidos embrionários de soja. Foi utilizada semente da cultivar de soja MGBR-46 Conquista colhidas em três épocas: maturidade fisiológica (estádio R7), R7+ 7 dias e R7 + 15 dias, foram armazenadas em câmara fria (10 ºC, 45- 50% UR do ar) e câmara climatizada (25 ºC, 60-75% UR do ar). No primeiro experimento, com a finalidade de obterem-se informações a cerca dos danos estruturais e fisiológicos causados pelo armazenamento e época de colheita, as sementes de soja foram eletromicrografadas em microscópio eletrônico de varredura, assim como o potencial fisiológico avaliado trimestralmente, utilizando-se os testes de germinação (rolo de papel e areia como substrato) e de vigor (condutividade elétrica, tetrazólio, envelhecimento acelerado, e emergência de plântulas em campo) e teor de água. No segundo experimento, foram avaliados os perfis de bandas das enzimas esterase, malato e glutamato desidrogenase. Para isso, foram extraídos 10 eixos embrionários das sementes de cada época de colheita para análise eletroforética. De acordo com os resultados obtidos, pode-se concluir que: o armazenamento sob condições adversas de sementes de soja no campo, após o estádio R7 e no armazém a 25 ºC durante os 12 meses reduziu seu potencial fisiológico danificando a estrutura da testa; sementes de soja colhidas em diferentes épocas e com alto potencial fisiológico podem apresentar diferenças nos padrões izoenzimáticos em resposta ao armazenamento; as análises das enzimas foram sensíveis para avaliação do potencial fisiológico, indicando o início da deterioração em função do período de armazenamento e da época de colheita; a atividade das enzimas esterase, malato desidrogenase e glutamato desidrogenase / Abstract: The soybean seed deterioration has been widely studied during the seed storage. The study was conducted in order to monitor the soybean embryonic tissue and seed deterioration. Soybean seed, cv. MGBR-46 Conquista harvested at three different times: physiological maturity (R7), R7 + 7days and R7 + 15 days and stored in cold room (10 ºC, 45-50% of air RH) and climatic chamber (25 ºC) were used. In the first experiment, in order to obtain information on the structural and physiological damage caused by storage and harvest, the soybean seeds were electromicrographed using an electron microscope scanning and the seed vigor evaluated quarterly using the germination (rolled paper towel and sand as substrate) and vigor (electrical conductivity, tetrazolium, accelerated aging and field seedling emergence) tests. Also the seed water content was determined. In the second experiment, the assessment profiles of the bands of esterase, malate and glutamate dehydrogenase enzymes were also quarterly evaluated. For that, 10 embryonic axes were extracted for each treatment to run electrophoretic analysis. According to the results obtained, it can be concluded that: soybean seeds stored under adverse conditions, in the field after R7 stage and stored at 25 °C for 12 months reduced their physiological potential, damaging the seed coat structure; soybean seeds harvested at different times with high vigor may influence izoenzymatic patterns in response to the storage; the enzyme analyses were sensitive to evaluate the physiological potential, indicating the begin of soybean seed deterioration in function of storage and harvest times; the activity of esterase, malate and glutamate dehydrogenase enzymes may be influenced by time and storage temperatures / Doutor

Orientador: Eleni Gomes / Banca: Marta Cristina Teixeira Duarte / Banca: Suraia Said / Banca: Valéria Marta Gomes de Lima / Banca: Heloiza Ferreira Alves do Prado / Resumo: As α-glicosidases (EC 3.2.1.20) são exoamilases que atuam nas ligações glicosídicas α-1,4 da extremidade nãoredutora, preferencialmente em pequenos oligossacarídeos para liberar α-glicose. Os objetivos desse trabalho foram purificar a α-glicosidase produzida, em fermentação submersa, pelo fungo Thermoascus aurantiacus CBMAI 756; caracterizar a enzima purificada; avaliar a ação sobre os derivados de amido e substratos sintéticos e construir um biblioteca de cDNA de Thermoascus aurantiacus para isolar o gene codificando para esta característica. As estratégias adotadas para isolar a α-glicosidase foram: a) concentração do extrato enzimático bruto usando uma membrana de ultrafiltração, b) por precipitação com sulfatodeamônio, c) cromatografias detroca aniônica (Q-Sepharose)e a filtração em gel(Sephacryl S-200 e Superose 12). Após o último passo, filtração em gel na coluna Superose 12, obteve-se uma atividade específica final de 404 (U/mg proteína) e um fator de purificação de 173 vezes. A eletroforese em SDS-PAGE usando amostra semi-desnaturada possibilitou aobservação de uma única banda protéica, a qual correspondeu à banda observada em gel de atividade e no gel específico para glicoproteína. A aparente massa molecular da enzima em SDS-PAGE foi83 kDa. Essa enzima apresentou 42% de carboidrato ligado à estrutura protéica. A atividade máxima foi observada em pH 4,5 e a 70°C. A enzima mostrou-se estável nas faixas de pH 3,0-9,0 e perdeu 40% da atividade original nas temperaturas de 40, 50 e 60°C, incubadas por 1hora. Na presença dos íons Na+, Ba2+, Co2+,Ni2+, Mg2+, Mn2+,Al3+, Zn2+ e Ca2+ a enzima manteve 90-105% da atividade máxima e foi inibida por Cr3+, Ag+ eHg2+. Baseados no cálculo do IC50, a hidrólise da maltose foi mais sensível a castanospermina (0,015 mM) do que a acarbose (0,11 mM) e voglibose (0,06 mM). OKm foi 0,07 μM e o Vmax... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: α-Glucosidase (EC 3.2.1.20) are exoamylase that act on α-1,4 bonds from nonreducing end, preferentially short oligosaccharides to release α-glucose. The objective of this work was to purify the -glucosidase produced in submerged fermentation, with the fungus Thermoascus aurantiacus CBMAI 756, characterize the purified enzyme and to evaluate its action on starch derivatives and synthetic substrates, and construction of cDNA library of Thermoascus aurantiacus. The strategies adopted to isolate the -glucosidase were: a) concentration of crude enzyme using a membrane ultra filtration b) by ammonium sulphate precipitation, c) anion exchange chromatography (Q-Sepharose) and gel filtration (Sephacryl S-200 and Superose). After the last step, gel filtration on Superose 12 column, it was obtained a final specific activity of 404 (U/mg protein) and 173-fold enzyme purification. The electrophoresis in SDS-PAGE using semi-denatured sample allowed the observation of a single protein band, which corresponded to the bands obtained in gel of -glucosidase activity and in a specific gel for glycoprotein. The apparent molecular mass of the enzyme in SDSPAGE was 83 kDa. This enzyme exhibited a carbohydrate content of 42%. Maximum activity was observed at pH 4.5 and at 70°C. It was stable in the pH range 3.0-9.0 and the enzyme lost 40% of its initial activity at 40, 50 and 60 °C, incubated for 1 h. In the presence of ions Na+, Ba2+, Co2+, Ni2+, Mg2+, Mn2+, Al3+, Zn2+, Ca2+ the enzyme maintained 90-105% of its maximum activity and was inhibited by Cr3+, Ag+ and Hg2+. Based on IC50 values, hydrolysis of maltose was more sensitive to castanospermine (0.015 mM) than acarbose (0.11 mM) and voglibose (0.06 mM). The Km was 0.07 μM, and the Vmax was 318.0 μmol/min/mg. The - glucosidase showed a transglycosylation property, by the release of oligosaccharides after 3h of incubation with maltose... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Resumo: O conhecimento de atributos bioquímicos dos resíduos, associado à disponibilidade de metais pesados em virtude da utilização de lodo de esgoto em solos agricultáveis, tem por objetivo fornecer ferramentas para minimizar os riscos de poluições ambientais trazidos pela utilização do lodo de esgoto nos solos. Portanto, para avaliar o efeito do nível de contaminação de cádmio nas propriedades bioquímicas do lodo de esgoto e posterior disponibilidade do metal no solo, foram incubadas amostras de 500g de lodo com CdCl2, CdSO4, Cd(NO3)2 e Cd metálico em casa de vegetação. Posteriormente, lodo incubado e não incubado, na dose de 10 Mg ha-1, foram adicionados a amostras de Latossolo Vermelho distrófico e cultivado com sorgo granífero. Determinaram-se as atividades enzimáticas de amilases, arilsulfatases, desidrogenases e proteases nas amostras de lodo incubadas durante 58 dias. Após incubação e cultivo de sorgo granífero com lodo incubado e não incubado, avaliaram-se os teores de cádmio extraídos com Mehlich I e DTPA no lodo incubado e a disponibilidade do metal em amostras de terra, coletadas aos 60 e 120 dias de cultivo, com os extratores DTPA, HNO3 e HF. As fontes de cádmio adicionadas ao LE alteraram a atividade enzimática de amilases, arilsulfatases, desidrogenases e proteases. A produção de matéria seca e grãos pela cultura do sorgo granífero não foram influenciadas pelos tratamentos no lodo, assim como, pelas fontes acrescidas de cádmio. A extração de cádmio do solo foi influenciada pelo período de incubação. / Abstract: Knowing the biochemical attributes of residues, associated with the heavy metals availability due to the use of sewage sludge in cropped soils, aims to supply tools in order to minimize the risks of environmental pollution brought by the use of that residue as a fertilizer. However, in order to evaluate the effect of the contamination level by the addition of cadmium on the biochemical properties of the sewage sludge and the posterior metal availability in the soil, 500g of sludge were incubated with CdCl2, CdSO4, Cd(NO3) or metallic Cd in a green house. Incubated and no-incubated sewage sludge was then added to a Typic Haplorthox in the rate 10 mg/ha and sorghum was grown. Enzymatic activity of amylases, arylsulphatases, dehydrogenases and proteases in the sewage sludge samples incubated for 58 days were evaluated. Cadmium was evaluated in the sewage sludge incubated for 58 days using the extractors Mehlich I and DTPA and in soil samples obtained at the 60th and 120th days of sorghum cultivation using the extractors DTPA, HNO3 and HF. The results demonstrated that the time of incubation, as well as the cadmium sources, clearly influenced sewage sludge enzymatic activities by increasing and decreasing the activities. Cadmium sources did not alter significantly the amounts of metal extracted from incubated sewage sludge with Mehlich I and DTPA extractors. Cadmium extraction from soil samples treated with sewage sludge incubated with Cd was greater with DTPA and HNO3 extractors. The different Cd sources added to sewage sludge affected the activity of amylases, arylsulphatases, dehydrogenases and proteases in the residue. Dry matter and grain production by sorghum were not affected by the treatments apppied to sewage sludge (incubation and no-incubation) and by the Cd sources. Cd extracted from the soil was affected by the incubation of sewage sludge after Cd contamination. / Orientador: Wanderley José de Melo / Coorientador: Gabriel Maurício Peruca de Melo / Banca: Marcos Omir Marques / Banca: Cássio Hamilton Abreu Junior / Mestre

Resumo: O néctar é coletado pelas operárias coletoras e transportado em sua vesícula nectarífera para a colméia. Durante a sua transformação em mel, o néctar recebe enzimas provenientes das glândulas hipofaringeanas, as quais atuam em seu processamento. A invertase é uma das enzimas adicionadas ao néctar e promove a inversão da sacarose em frutose e glicose. Com o objetivo de se conhecer o pH ideal dessa enzima nas abelhas operárias foram extraídas as glândulas hipofaringeanas de abelhas com oito dias de idade. O método utilizado para a dosagem da invertase foi o do ácido 3-5þ dinitrosalicílico (DNS) para determinação de açúcares redutores, utilizando-se medida de leitura espectrofotométrica em absorbância da glicose em comprimento de onda (?) igual a 540nm. De acordo com os resultados, verificou-se que a atividade catalítica da enzima foi mais eficiente no pH 5,0 e em 40 minutos de reação em comparação com outros valores de pH e tempos de reação. Não foi possível a reutilização das glândulas. Desta forma, concluiu-se que a enzima invertase aumentou sua eficiência em função do tempo de reação de forma linear e significativa em pH 5,0. / Abstract: The nectar is collected by the collecting workers that carry it in its nectar gallbladder to the beehive. During its transformation in honey, the nectar receives enzymes proceeding from the hypopharyngeal glands, which act in its processing. Invertase is one of enzymes added to the nectar and promotes the inversion of sacarose in fructose and glucose. With the aim of knowing the ideal pH, in the worker bees, the bee's hypopharyngeal glands with eight days of age had been extracted. The used method, for the dosage of invertase, had been the 3-5 ' dinitrosalisilic acid for determination of reducing sugars, using absorbance spectrophotometry data from the glucose in ? equal to 540nm. According to the results, it had been verified that the enzyme catalytic activity had been more efficient in pH 5,0 and in 40 minutes of reaction, comparing to other pH values and times of reaction. The glands reuse had not been possible. At this way, it was concluded that the invertase enzyme had increased its efficiency by the reaction time at linear and significant way in pH 5,0. / Orientador: Sílvia Regina Cunha Funari / Coorientador: Carlos Ducatti / Doutor

Resumo: Angiotensina II, um peptídeo hipertensivo, e bradicinina, um peptídeo hipotensivo, são fatores humorais cruciais para a regulação da pressão sanguínea. A enzima chave desse sistema é a enzima conversora de angiotensina que produz angiotensina II a partir de angiotensina I e degrada bradicinina. A descoberta dos primeiros inibidores naturais dessa enzima, os peptídeos potenciadores de bradicinina (BPPs), tornou possível o desenvolvimento dos primeiros medicamentos utilizados no controle da pressão arterial humana. Caracteristicamente, os BPPs contêm de 5 a 13 resíduos de aminoácidos apresentando um resíduo de piroglutâmico no N-terminal e um resíduo de prolina no Cterminal. O precursor de BPPs encontrado na glândula de veneno de Bothrops jararaca contém 256 resíduos de aminoácidos e codifica para sete BPPs alinhados em tandem seguidos pelo peptídeo natriurético tipo-C. Até o momento, não se conhecem os mecanismos envolvidos para a liberação desses peptídeos da proteína precursora. Dessa forma, a resolução da estrutura dessa proteína pode contribuir para a elucidação do mecanismo evolvido no processamento do precursor para a liberação dos BPPs. Duas construções da proteína precursora de BPPs (domínio BPP e domínios BPP+CNP) da glândula de veneno de B. jararaca foram expressas, purificadas e suas identidades confirmadas por experimentos de western blotting. A pureza das amostras foi avaliada por SDS-PAGE e a presença de enovelamento após expressão heteróloga foi observada por experimentos de dicroísmo circular e fluorescência. Os ensaios de cristalização não foram promissores. Isso pode ser explicado pela baixa concentração da proteína usada no experimento. Assim, devido ao baixo nível de expressão de ambas as proteínas, métodos para maximização da expressão foram empregados resultando em significante...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Angiotensin II, a hypertensive peptide, and bradykinin, a hipotensive peptide, are crucial humoral factors for the regulation of blood pressure. The key enzyme for this system is the angiotensin-converting enzyme that produces angiotensin II from angiotensin I and degrades bradykinin. The discovery of the first natural inhibitors for this enzyme, the bradykinin potentiating peptides (BPPs), made it possible to develop the early drugs aimed at controlling unbalanced cardiovascular functions. Characteristically, BPPs contain 5 to 13 amino acid residues that have a pyroglutamyl residue at the N-terminus and a praline residue at the C-terminus. The BPP precursor protein contains 256 amino acid residues coding for seven BPPs aligned in tandem followed by the C-type natriuretic peptide. At present, there are no suggested mechanisms for understanding the release of BPPs from the precursor protein. Two constructs of the BPP precursor protein (BPP domain and BPP+CNP domains) from the venom gland of Bothrops jararaca were over-expressed, purified and the identity of both recombinant proteins confirmed by western blotting experiments. The purity of the samples was assessed by SDS-PAGE and the protein fold after expression was observed by circular dichroism and fluorescence experiments. Crystallization assays were not successful, probably due to the low protein concentration used for the experiment. Considering the low expression level observed for both recombinant proteins, the experimental methods were optimized to maximize the yield and resulted in high protein amounts in inclusion bodies. Methods were applied aiming at the solubilization of the proteins from the insoluble fraction and protein purification under denaturing conditions was carried out yielding high amounts of pure protein. Until this moment, none of the procedures were successful in producing refolded proteins. Work ...(Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Raghuvir Krishnaswamy Arni / Coorientador: Mirian Akemi Furue Hayashi / Banca: Fátima Pereira de Souza / Banca: Patrick Jack Spencer / Mestre