Orientador: Alexandre Secorun Borges / Coorientador: José Paes de Oliveira-Filho / Banca: João Pessoa Araújo Junior / Banca: Marcos Bryan Heinemann / Resumo: A placa aural é uma doença que acomete uma ou ambas as orelhas dos equinos, caracterizada por lesões bem demarcadas, despigmentadas e geralmente cobertas por uma crosta queratinosa branca. O objetivo deste estudo foi pesquisar a presença de DNA viral dos Equus caballus papilomavirus (EcPV) 1-7 utilizando a técnica de PCR em tecidos de placas aurais de equinos de diferentes regiões do Brasil. Foram coletadas 108 biópsias e informações das características da lesão. Foi detectada a presença de DNA dos EcPVs em 97,22% (105/108) das amostras testadas. Nenhuma amostra foi positiva para os EcPV-2 e 7. Dentre as amostras, o vírus mais frequente foi o EcPV 4 (86,67%, 91/105), seguido do EcPV 3 (42,86%, 45/105), EcPV 1 (35,24%, 37/105), EcPV 6 (18,10%, 19/105) e do EcPV 5 (1,90%, 2/105). Quando avaliada a existência de coinfecção dos diferentes vírus, 59,05% (62/105) das amostras foram positivas para mais de um tipo viral, sendo as coinfecções mais frequentes EcPV 3+4, EcPV 3+1 e EcPV 3+4+1. Nenhuma associação foi encontrada quando avaliada a lesão (tipo e distribuição) com o tipo de papilomavirus detectado e a presença de coinfecção. Os resultados indicam que além dos tipos já detectados em lesões da placa aural em outros estudos (EcPV 3 e 4) no Brasil, também foi confirmada a participação dos EcPV 1, 5 e 6 nas lesões de placa aural em equinos. Além disso, os resultados sugerem a coinfecção como um possível fator na etiologia da placa aural equina. Portanto, conclui-se que o EcPV 4 é o vírus mais detectado isoladamente ou em coinfecção, mas que outros vírus também participam da etiologia da placa aural em equinos no Brasil / Abstract: Aural plaque is a disease that affects one or both equine ears characterized by well-demarcated depigmented lesions, generally cover by a whitish keratinose crust. The aim of this study was to research the presence of Equus caballus papillomavirus (EcPV) DNA in aural plaque lesions of horses from different regions of Brazil by PCR. One hundred eight biopsies and information about the lesion were collected. Was detected EcPVs DNA in 97.22% (105/108) of the tested samples. None of the samples were positive for EcPV 2 and 7. From all samples, EcPV 4 (86.67%, 91/105) was the most frequently found, followed by EcPV 3 (42.86%, 45/105), EcPV 1 (35.24%, 37/105), EcPV 6 (18.10%, 19/105) and EcPV 5 (1.90%, 2/105). When co-infection was assessed, 59.05% (62/105) of the samples were positive for more than one virus type and EcPV 3+4, EcPV 3+1 and EcPV 3+4+1, were the most frequently co-infections. No association was found between the lesion (type and distribution) and the type of papillomavirus and presence of co-infection. These results indicate that in addition to the types (EcPV 4 and 3) already detected in Brazil, was also confirmed the presence of the types 1, 5 and 6 in aural plaque lesions of equines. The results suggest the co-infection as a possible factor involved in aural plaque etiology. The EcPV 4 was the virus most detected alone or in coinfection, besides the other types also participate of equine aural plaque's etiology in Brazil / Mestre

Orientador: Ana Liz Garcia Alves / Banca: Carlos Alberto Hussni / Banca: Elisa Holthausen Caminoto / Banca: Luciane Rasera / Banca: Vânia Maria Vasconcelos Machado / Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos da aplicação de ondas de choque extracorpóreas no osso terceiro metacarpiano de equinos hígidos através da determinação da elasticidade óssea. Para tanto, foram utilizados 20 equinos da raça Puro Sangue Inglês, machos e fêmeas, com dois anos de idade, clinicamente sadios e em início de treinamento, sendo selecionados quanto ao estado de higidez com especial atenção quanto à integridade do aparelho locomotor. No D0, dia zero do experimento, todos os animais foram submetidos à avaliação da elasticidade óssea realizada no osso terceiro metacarpiano. Os animais foram divididos aleatoriamente em dois grupos de dez animais em cada (Grupo Controle e Grupo Tratamento). A aplicação da terapia com ondas de choque extracorpóreas (ESWT) foi realizada no membro torácico direito dos animais do Grupo Tratamento, na região coincidente à da avaliação da elasticidade óssea e para tanto foi utilizado aparelho para terapia de ondas extracorpóreas com densidade de fluxo de energia de 0,15 mJ/mm2 e 2000 pulsos com sonda E6R20, com a característica do foco da onda de choque de 20mm. As aplicações da ESWT foram repetidas a cada 21 dias totalizando três sessões (D0, D21 e D42). A análise da determinação da elasticidade óssea, além do D0, foi realizada no 21o dia após a primeira aplicação, no 21o dia após a segunda aplicação e no 30o dia após a terceira aplicação de ESWT (D21, D42 e D72). A média da velocidade ultrassonográfica (SOS) diferiu entre os grupos no D21, D42 e D72, sendo que os animais do Grupo Tratamento apresentaram menor densidade mineral óssea após as aplicações da ESWT. Houve diferença também à análise da massa óssea (Z-Score) entre os grupos no D21 e D42, quando... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The purpose of this study was to evaluate the effects of extracorporeal shock waves in third metacarpus bone from healthy horses by determination of bone elasticity. It were used 20 Thoroughbred horses, male and female, with two years old, clinically healthy and on top of training, selected as healthy state and special attention on the integrity of the locomotor system. At D0, day zero of the experiment, all animals were submitted to evaluation of bone elasticity held in the third metacarpus bone. The animals were randomly divided into two groups of ten animals (Control Group and Treatment Group). The application of extracorporeal shock wave therapy (ESWT) was performed on the right forelimb of the animals in the Treatment group in the same location evaluated for bone elasticity and extracorporeal therapy of waves was applied with 0.15mJ/mm2 energy flux density and 2000 pulses with E6R20 probe, with focus feature of the shock wave of 20mm. The applications of ESWT were repeated every 21 days, a total of three sessions (D0, D21 and D42). The analysis of bone elasticity determination was realized at D21, D42 and D72. The average speed ultrasound (SOS) differed between groups at D21, D42 and D72, and the animals from treatment group had lower bone mineral density after applications of ESWT. There was also difference in the analysis of bone mass (Z-Score) between the groups at D21 and D42, where animals from treatment group showed a significant decrease in bone mass. The risk of fracture were higher in animals from treatment group at D21. It was concluded that ESWT is able to promote change in bone mineral density. / Doutor

Orientador: Luiz Carlos Vulcano / Banca: Ana Liz Garcia Alves / Banca: Joffre Guazzelli Filho / Banca: Stefano Carlo Filippo Hagen / Banca: Masao Iwasaki / Resumo: Este estudo teve como objetivo, utilizando para tanto 22 cabeças de cadáveres equinos sadios, obtidas em abatedouro frigorífico, avaliar comparativamente de forma minuciosa e detalhada a anatomia da articulação temporo-hióide de equinos, por meio do exame radiográfico convencional, ultrassonográfico articular e tomográfico. Ambas as articulações, direita e esquerda, foram avaliadas. As imagens obtidas pelos três métodos foram identificadas e agrupadas sob aspecto das imagens que se repetem, que se somam e que se complementam, além da realização de avaliação minuciosa das características anatômicas da articulação temporo-hióide como um todo pelos diferentes acessos diagnósticos, buscando o meio de diagnóstico menos agressivo, não invasivo, rápido e de relativo baixo custo quando comparados. Observou-se que a tomografia visibilizou sempre de forma clara, ou seja, com melhor qualidade e precisão, todas as características e estruturas avaliadas. Já o raios-x e a ultrassononografia variaram bastante, algumas vezes de forma positiva, em concordância com a tomografia, outras nem tanto, limitando a avaliação de determinadas estruturas por estes métodos. Os três métodos de diagnóstico demonstraram uma concordância plena significativa (93,18%) apenas em relação à sua localização anatômica, o que não significa que os três métodos não podem gerar informações adicionais de grande valia. Concluiu-se que a TC é superior aos outros métodos, porém os três podem ser aliados no sentido de que se complementam, repetindo e somando imagens e informações importantes na escolha de um tratamento e na avaliação de seu prognóstico. Estes resultados propõem referências de abordagem que adicionarão informações na avaliação da região da articulação temporo-hióide dos equinos. / Abstract: Twenty-two equine heads obtained from healthy slaughtered horses were analyzed through conventional radiography, articular ultrasonography and Computed Tomography (CT). Both left and right joints were evaluated. Images obtained by the three methods were identified and grouped according to different aspects: repeated images, added images and complementary images. In addition, images were thoroughly evaluated for anatomical characteristics of the temporohyoid joint as a whole by the different diagnostic accesses, in an attempt to obtain a less aggressive, non-invasive, fast and relatively inexpensive diagnosis. Tomography always showed the evaluated characteristics and structures very clearly, i.e., with better quality and precision. In contrast, x-ray and ultrasonography varied significantly, sometimes positively, in agreement with tomography, and in other instances negatively, limiting the evaluation of certain structures by those methods. The three diagnostic methods showed a significant concordance (93.18%) only in relation to the anatomical localization. This, however, does not mean that the three methods may not generate additional useful information. It was concluded that CT is a superior method than the others, although the three methods are complementary and can be combined, by repeating and adding important images and information when choosing a treatment and in the evaluation of the prognostics. These results define a reference of access that will add information in the evaluation of the equines temporohyoid joint. tomography, articular ultrasonography. / Doutor

Orientador: Carlos Alberto Hussni / Banca: Hamilton Almeida Rollo / Banca: Regina Kiomi Takahira / Resumo: A tromboflebite jugular é uma das principais doenças vasculares em eqüinos, podendo levar a edema de cabeça, diminuição do desempenho atlético e até causar o óbito. A heparina é um dos medicamentos utilizados para o tratamento dessa enfermidade com o objetivo de minimizar a evolução do trombo. O objetivo desse experimento foi avaliar, por exames clínicos, laboratoriais, ultra-sonográficos e venográficos as alterações provocadas pela administração de heparina no tratamento da tromboflebite experimental em eqüinos. Dez eqüinos foram submetidos à indução de tromboflebite jugular unilateral. Os animais foram divididos em grupo controle e grupo tratado, composto por cinco animais que receberam durante 10 dias a administração de heparina. Previamente à indução da tromboflebite e diariamente após o estabelecimento da mesma foram realizados exames clínicos e ultra-sonográficos até o 18º dia. Os exames laboratoriais tempo de tromboplastina parcial ativada (TTPA), tempo de protrombina (TP) e contagem total de plaquetas foram determinados no dia anterior à indução da tromboflebite, durante o período de indução e mensurados diariamente, até o 12º dia pós-indução. Hemogramas foram realizados no período pré-indução, imediatamente após a cirurgia para a indução do trombo e no 3°, 7° e 10° dia após a tromboflebite induzida. Medidas diárias do comprimento dos trombos foram submetidas à comparação estatística pelo método de análise de variância. Venografias foram realizadas nos momentos pré-indução, imediatamente à indução, após a indução e a cada seis dias até o 18° dia. No grupo controle, os trombos cresceram até o 9° dia pós-indução, quando foi possível observar diminuição do comprimento dos trombos e aumento de fluxo lateral. No grupo tratado com heparina observou-se a interrupção no crescimento do trombo após ...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Jugular thrombophlebitis is a major vascular disease in horses which can lead to head edema, decreased athletic performance and even death. Heparin is used for the treatment of this disease in order to minimize the development of thrombus. The aim of this experiment was to evaluate clinical, laboratory, ultrasound and venographic changes caused by administration of heparin in the treatment of experimental thrombophlebitis in horses. Ten horses were subjected to induction of unilateral jugular thrombophlebitis. The animals were divided into control group and the treated group, composed of five animals each that received during 10 days the administration of heparin. Prior to the induction of thrombophlebitis and daily after the establishment of the same physical examinations and ultrasound were performed until the 18th day. The laboratory tests activated partial thromboplastin (APTT), prothrombin time (PT) and total count platelet were determined the day before the induction of thrombophlebitis, during the induction period and measured daily until the 12th day post-induction. Red blood cells counts were performed in the pre-induction, immediately after surgery for the induction of thrombus in the 3rd, 7th and 10th day after induced thrombophlebitis. Daily measurements of the length of the thrombi were subjected to statistical comparison with analysis of variance. Venographs were performed in the pre-induction, immediately before induction, after induction and every six days until the 18th day. In the control group, the thrombi to grow until the 9th day post-induction, when we observed a shortening of the thrombi and increased lateral flow. In the group treated with heparin there was a break in the growth of the thrombus after the start of administration of the drug and decrease in length of the thrombus with the appearance of flow down the sides of the cranial portion of the thrombus ...(Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Márcia Garcia Ribeiro / Banca: Antonio Carlos Paes / Banca: Lisiane de Almeida Martins / Resumo: A diarreia é causa comum de morbimortalidade em potros neonatos. Os principais agentes causais de origem bacteriana na enterite em potros são: Salmonella spp., Escherichia coli, Clostridium difficile, Clostridium perfringens e Rhodococcus equi. Foram colhidas 80 amostras de fezes de potros com diarreia e 26 sem diarreia, perfazendo 106 animais com idade até três meses de idade, de diferentes raças, provenientes de propriedades do interior do estado de São Paulo. Foi investigado fatores de virulência de Escherichia coli, caracterização dos sorotipos de Salmonella spp., detecção de toxinas de Clostridium difficille e Clostridium perfringens, e perfil de sensibilidade microbiana das linhagens de E. coli e Salmonella spp. Foram isoladas 64 (60,3%) estirpes de Escherichia coli, o gene fimH em 34 (53,9%) linhagens, o gene ag43 em 33 (52,3%) estirpes e o gene papC em seis (9,5%) isolados. Foram isoladas 17 (16,0%) linhagens do gênero Salmonella. Foram identificadas 20 linhagens de Clostridium perfringens,17 positivos para toxina A e três a toxina A beta 2. Duas amostras de fezes foi isolado Clostridium difficile, produtores das toxinas A/B. Infere-se no presente estudo a complexidade etiológica na enterite de potros até três meses de idade, a baixa relação dos fatores de virulência de E. coli pesquisados com linhagens isoladas de animais com diarreia, a relevância em saúde pública dos sorotipos de Salmonella spp. identificados nos potros, o predomínio da toxina A nos isolados de C. perfringens e C. difficile, e a necessidade da adoção de tratamento das enterites com respaldo dos testes de sensibilidade microbiana / Abstract: Diarrhea is a common cause of morbidity and mortality in neonatal foals. The main causative agents of bacterial of enteritis in foals are: Salmonella spp., Escherichia coli, Clostridium difficile, Clostridium perfringens and Rhodococcus equi. Were collected 80 stool samples from foals with diarrhea and 26 without diarrhea, totaling 106 animals, aged three months old, different races and from properties in the state of São Paulo. Were investigated virulence factors from E. coli, characterization of the serotypes of Salmonella spp., detection of toxins of Clostridium perfringens and Clostridium difficille, and antimicrobial susceptibility to E. coli and Salmonella spp. strains. Were isolated 64 (60.3%) E. coli strains, the detection of the fimH gene in 34 (53.9%) strains, the gene ag43 in 33 (52.3%) strains and gene papC in six (9 , 5%) isolated. We isolated 17 (16.0%) strains of Salmonella. Were identified 20 strains of Clostridium perfringens, 17 detected the toxin A and three the toxin A beta 2. Two stool specimens was isolated Clostridium difficile toxin producer A / B. It is inferred in the present study the complexity enteritis in foals up to three months, the low ratio of virulence factors of E. coli strains isolated from animals with diarrhea, the public health relevance of the serotypes of Salmonella spp. identified in foals, the prevalence of toxin A in isolates of C. perfringens and C. difficile, and the need to adopt the treatment of bacterial enteritis in foals with the backing of microbial sensitivity tests / Mestre

Orientador: Stelio Pacca Loureiro Luna / Banca: Antônio José Araújo Aguiar / Banca: André Escobar / Banca: Marilda Onghero Taffarel / Banca: Sìlvia Elaine Rodolfo de Sá Lorena / Resumo: O reconhecimento da dor é fundamental para desenvolver estratégias analgésicas efetivas e para tal é imprescindível criar instrumentos de avaliação válidos e confiáveis. Um instrumento válido para reconhecer a dor deve produzir escores sensíveis e que se modifiquem após administração de analgésicos, além de não resultar em dano tecidual, ser de fácil aplicação, e apresentar validade e reprodutibilidade. Desta forma, compararam-se os estímulos nociceptivos elétrico, mecânico e térmico, quanto a sua exequibilidade, repetibilidade, sensibilidade e especificidade em oito equinos adultos conscientes e avaliaram-se os efeitos antinociceptivos da administração intravenosa da metadona associada à detomidina ou à acepromazina nos mesmos animais. Os estímulos mecânico (M) e térmico no membro (TM) foram aplicados sobre o metacarpo esquerdo e direito, respectivamente. O elétrico (E) foi aplicado sobre a banda coronária do membro torácico esquerdo e o térmico torácico (TT) no tórax, caudal à cernelha. Na etapa 1, realizaram-se aleatoriamente três estímulos verdadeiros e um falso, para cada um dos quatro testes, totalizando 32 estímulos/animal, em cada fase, realizadas com 6 meses de intervalo. Na etapa 2, os cavalos foram tratados com salina (C); metadona (0,2 mg/kg) associada à detomidina (10μg/kg) - MD ou à acepromazina (0,05 mg/kg) - MA, com intervalo mínimo de uma semana. A nocicepção foi mensurada antes e aos 15, 30, 45, 60, 75, 90, 105, 120 e 150 minutos após os tratamentos. As concordâncias geral e nas fases 1 e 2, avaliadas pelo coeficiente kappa, foram de 90%, 92% e 88%, respectivamente. O estímulo M apresentou 100% de concordância entre observadores, seguido de TM (97%), E (84%) e TT (75%). A sensibilidade e especificidade foram de 89% e 92%, respectivamente. Utilizaram-se o teste da soma de postos de Wilcoxon e o teste de postos de sinais de Wilcoxon... / Abstract: Recognition of pain is fundamental for the development of effective analgesic strategies, therefore, it is essential to develop valid and reliable instruments for assessment of pain. A valid instrument to recognize the pain should produce sensitive scores, which should be modified after the administration of analgesics and should not result in tissue damage, should be easy to apply, with a clear cut-off and present validity and reproducibility. This study aimed to compare the electrical, mechanical and thermal nociceptive stimuli and investigate their feasibility, repeatability, sensitivity and specificity in eight horses. In the second part of the study, the antinociceptive effects of intravenous administration of methadone combined with detomidine or acepromazine were evaluated in the same animals. The mechanical (M) and thermal in the limb (TL) stimuli were measured at the left and right metacarpus regions, respectively. The electrical stimulus (E) was measured at the left coronary band and thorax thermal stimulus (TT) in the thorax, caudal to the withers. In part 1 of the study, three real and one sham stimuli were randomly applied, for each of the four tests, giving a total of 32 stimulations/animal in each phase, repeated six months later. In the part 2 of the study, the horses were treated with saline (C), methadone (0,2 mg/kg) combined with detomidine (10 μg/kg) - MD or acepromazine (0,05 mg/kg), with a minimum of one week interval. Thresholds were measured before and at 15, 30, 45, 60, 75, 90, 105, 120 and 150 minutes after treatment. The agreement between observers measured by kappa coefficient was 90% for both phases grouped and 92% and 88% in phases 1 and 2, respectively. The M stimulus showed 100% agreement between observers, followed by TL (97%), E (84%) and TT (75%). Sensitivity and specificity were 89% and 92%, respectively. The Wilcoxon rank sum test and Wilcoxon signed rank test were used to compare differences ... / Doutor

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-01-03T17:36:12Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2000761 bytes, checksum: 8f77b739f400a6cd9d8c72e2e1e545f0 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-03T17:36:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2000761 bytes, checksum: 8f77b739f400a6cd9d8c72e2e1e545f0 (MD5) Previous issue date: 2011-02-25 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A pesquisa foi desenvolvida na forma de dois subprojetos: o primeiro foi intitulado Ativação de plaquetas: ultraestrutura e morfometria no plasma rico em plaquetas de equinos Imunoistoquímica de TIMP-1 e TGF- morfometria em tendão de equino tratado com plasma rico em plaquetas primeiro subprojeto foi investigar a capacidade de ativação do plasma rico em plaquetas (PRP) por substâncias farmacológicas, assim como verificar a necessidade ou não dessa ativação para uso terapêutico. O PRP foi obtido de quatro equinos mestiços hígidos, machos castrados, com 13 a 16 anos (15±1anos) de idade, e processado para classificação e quantificação da morfologia plaquetária, mediante a utilização da microscopia eletrônica de transmissão. Todas as amostras de PRP foram ativadas com cloreto de cálcio (CaCl2) a 10%, trombina bovina pura ou associada a CaCl2. O controle (PRP puro) não foi ativado farmacologicamente. Nas amostras de PRP puro, 49% das plaquetas foram classificadas como ativação incerta, 41% em descanso, 9% totalmente ativada e 1% com dano irreversível. O tratamento com CaCl2 a 10% proporcionou uma distribuição de 54% de plaquetas com ativação incerta, 24% totalmente ativada, 20% em descanso, e 2% como com dano irreversível. Amostras tratadas com trombina bovina pura ou associada com CaCl2 apresentaram morfologia plaquetária que não se enquadraram na classificação adotada, apresentando forma irregular com emissão de grandes pseudópodes filamentosos, aspecto de lise celular e grânulos inteiros no citoplasma remanescente e meio extracelular. Houve efeito do tratamento sobre a morfologia plaquetária (P=0,03). O CaCl2 a 10% é um adequado agente ativador de plaquetas. Entretanto, nos casos onde se faz necessário o uso de PRP na forma mais líquida, recomenda-se o uso do PRP puro, que além de apresentar uma adequada porcentagem de plaquetas totalmente ativadas, também possui importante quantidade do tipo em descanso, que pode ser ativado por substâncias presentes no tecido lesionado. O segundo subprojeto teve como objetivo verificar o efeito terapêutico do PRP no tratamento da tendinopatia do tendão do músculo flexor digital superficial (TFDS), mediante a realização de estudos histológico e imunoistoquímico (TIMP-1 e TGF- fases inflamatória e de proliferação do processo de reparação. Tendinopatia do TFDS de ambos os membros torácicos foi induzida em seis equinos mestiços hígidos, machos castrados e com idade entre 5 e 16 anos (13±4,05anos), mediante administração intratendínea de 2.090 unidades de digestão tecidual de colagenase. Após cinco dias, um dos membros de cada animal foi tratado com 1,8 mL de PRP puro e o outro com NaCl a 0,9%. Biópsia para obtenção de amostra para exames histológico e imunoistoquímico foi realizada três (fase inflamatória) ou dezesseis (fase de proliferação) dias após realização dos tratamentos. O processamento das amostras para histologia seguiu os métodos rotineiros, e os cortes foram corados com hematoxilina-eosina, Picrosirius Red e tricrômico de Masson para avaliação de características morfológicas e organização tecidual, além de realização da morfometria. Para a imunoistoquímica foi adotado o método da peroxidase indireta, utilizando anticorpos primários anti-TIMP-1 e anti-TGF- 1, sendo verificada a presença ou ausência de marcação citoplasmática. Em ambas as fases, independentemente do tratamento, a área da lesão estava preenchida por tecido de granulação contendo fibras colágenas esparsas com perda do paralelismo, fibroblastos com morfologia variada e endotendão hipertrofiado, sendo essas características mais acentuadas na fase de proliferação. Os infiltrados inflamatórios predominantes foram do tipo misto. Ainda que o tendão tratado com PRP tenha apresentado melhor orientação das fibras colágenas, histologicamente não houve diferença (P>0,05) entre os grupos. A marcação do TFDS foi negativa para TGF- -1 em alguns membros, sem diferença (P>0,05) entre tratamentos e fases do reparo. Uma única aplicação intralesional de PRP puro, cinco dias após a indução de tendinopatia, não influencia o processo de reparação, nem a presença de TIMP-1 e TGF- nas fases inflamatória e de proliferação do processo de reparação. / The research was conducted in two different subprojects: the first was entitled -rich plasma of horses , and the second Immunohistochemistry of TIMP-1 and TGF- 1, histology and morphometry in equine tendon treated with platelet-rich plasma . The aim of the first study was to investigate the capability of activating the platelet-rich plasma (PRP) by pharmacological substances, as well as the need of this activation for the therapeutic uses. The PRP was obtained from four healthy, crossbred gelding, aged 13 to 16 years (15±1 year), and processed for observation and quantification of the platelets morphology by using of transmission electron microscopy. All PRP samples were activated with 10% calcium chloride (CaCl2) solution, bovine thrombin, and bovine thrombin associated with CaCl2. The control (pure PRP) was not activated pharmacologically. In PRP pure samples, 49% of the platelets were classified as state of activation uncertain, 41% as resting, 9% as fully activated, and 1% as irreversibly damaged. The 10% CaCl2 solution treatment provided a distribution of 54% as state of activation uncertain, 24% as fully activated, 20% as resting, and 2% as irreversibly damaged. Samples treated with bovine thrombin alone or associated with CaCl2 showed platelet morphology that did not fit in the classification adopted, revealing irregular shape with large filamentous pseudopodia emission, cell lysis aspect, and whole granules remaining in the cytoplasm remaining, and extracellular environment. There was an effect of treatment on platelet morphology (P=0.03). The CaCl2 10% is an appropriate platelet activator agent. However, in cases where it is necessary the use of PRP in a more liquid form, it is recommended the use of pure PRP, which besides presenting an adequate percentage of fully activated platelets, also has significant amount of the resting type, which can be activated by substances present in the injured tissue. The aim of the second subproject was to investigate the therapeutic effect of PRP in the treatment of superficial digital flexor (SDF) tendinopathy, through histological and immunohistochemical (TIMP-1 and TGF- 1) studies, in inflammatory and proliferative phases of healing. SDF tendinopathy of both forelimbs was induced in healthy, crossbred gelding, by intratendinous administration of 2.090 units of collagenase tissue digestion. After five days, one forelimb of each animal was intralesional treated with 1.8 mL of pure PRP, and the other limb with 0.9% NaCl solution. Biopsy to obtain samples for histologic and immunohistochemical studies was performed three (inflammatory phase) or sixteen (proliferative phase) days after treatments. The samples were processed following the histologic routine method, and sections were stained with hematoxylin-eosin, Picrosirius Red, and Masson's trichrome, for evaluation of morphological characteristics and tissue organization, besides performing morphometry. For immunohistochemistry evaluation, indirect peroxidase technique was adopted, by using of the primary antibodies anti-TIMP-1 and anti-TGF- 1, being the presence or absence of cytoplasmic staining verified. In both phases, regardless the treatments, the injured area was filled by a granulation tissue containing sparse collagen fibers with loss of parallelism, fibroblasts with variable morphology, and endotenon hypertrophy, being these characteristics more pronounced in the proliferation phase. Mixed inflammatory cell infiltrate was predominant. Although the PRP treated tendon presented a better orientation of collagen fibers, no differences (P>0.05) were detected between groups in histologic variables. The SDF tendon was immunonegative stained for TGF- 1, and immunopositive stained for TIMP-1 in some samples, but no difference (P>0.05) was detected between treatments and stages of tendon repair. A single intralesional application of pure PRP, five days after the induction of tendinopathy, does not influence the healing process, nor the presence of TIMP-1 and TGF- 1 in fibroblasts in both inflammatory and proliferation phases of the repair process.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:06Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-11-23Bitstream added on 2014-06-13T20:21:52Z : No. of bitstreams: 1 carvalho_am_dr_botfmvz_parcial.pdf: 86138 bytes, checksum: d515fed4a55e2525dda1d5a656ecfe36 (MD5) Bitstreams deleted on 2015-02-04T11:39:27Z: carvalho_am_dr_botfmvz_parcial.pdf,Bitstream added on 2015-02-04T11:40:12Z : No. of bitstreams: 1 000712006.pdf: 483818 bytes, checksum: c5b2ca06d97c52e38a0b52ec53856bd6 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A lesão do tendão flexor digital superficial (TFDS) é uma importante causa de claudicação em equinos. Embora existam diversos tratamentos descritos, poucos são eficazes na melhora significativa da qualidade da matriz extracelular. Recentemente, diversos experimentos vêm focando no potencial terapêutico das células-tronco mesenquimais (CTMs) e do plasma rico em plaquetas (PRP) em casos de lesões de difícil cicatrização. O objetivo geral deste estudo foi a obtenção, cultivo e caracterização das células tronco mesenquimais derivadas do tecido adiposo (AdCTMS), a adoção de uma nova técnica de indução de lesão tendínea utilizando colagenase em gel e a avaliação da reparação tendínea após terapia com a associação terapêutica de AdCTMs e PRP através da análise clínica, ultrassonográfica, histopatológica, imunoistoquímica (colágeno tipo III e fator VIII) e da expressão gênica (COL1A1, COL3A1, TNC, TNMD, SCX). Foi possível isolar e cultivar as AdCTMs, concluir sua caracterização através da diferenciação adipogênica, osteogênica e condrogênica, além da confirmação da expressão destas células aos marcadores CD44, CD90 e CD105 na citometria de fluxo. A indução da lesão do TFDS foi realizada com sucesso, sendo observado na avaliação clínica e ultrassonográfica o desenvolvimento de tendinite focal similar a lesão de ocorrência natural. O uso das AdCTMs associadas ao PRP demonstrou ser viável e resultou na prevenção da progressão da área da lesão no grupo tratado na avaliação ultrassonográfica, maior fluxo sanguíneo do grupo tratado na avaliação com Power Doppler, e melhora da organização cicatricial, com diminuição do infiltrado inflamatório na avaliação histopatológica. Não foram observadas diferenças entre os grupos... / Superficial digital flexor tendon (SDFT) lesion is an important cause of lameness in horses. Although there are many treatments described, few are effective in maintain the quality of the extracellular matrix. Recently several studies have focused on the therapeutic potential of mesenchymal stem cells (MSCs) and platelet-rich plasma (PRP) in some damage tissues. The aim of this study was to perform the isolation, cultivation and characterization of mesenchymal stem cells derived from adipose tissue (AdMSCs), the adoption of a new tendon lesion induction technique using collagenase in gel, and evaluation of tendon repair after treatment with the AdMSCs and PRP association by clinical, ultrasonographic, histopathological, immunohistochemical (collagen type III and factor VIII) and gene expression (COL1A1, COL3A1, TNC, TNMD, SCX) analysis. It was possible to isolate, cultivate and perform the characterization of AdMSCs by adipogenic, osteogenic, chondrogenic differentiation, and to confirm the expression of CD44, CD90 and CD105 cell markers on flow cytometry. The SDFT injury induction was successful observed in clinical and ultrasonographic evaluation, with development of focal lesion similar to naturally occurring. The use of AdMSCs and PRP association proved to be feasible and resulted in preventing the progression of the lesion area in the treated group on ultrasound evaluation, increased blood flow on the Power Doppler evaluation and decreased inflammatory infiltrate and improved the organization on histopathological evaluation. No differences were observed between the groups regarding the immunohistochemistry evaluation and the expression of the tested genes. It can be concluded based on the results observed: (1) that the AdMSCs were properly processed and characterized with the methods employed; (2) tendon.. (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-08-13Bitstream added on 2014-06-13T20:01:45Z : No. of bitstreams: 1 maia_l_dr_botfmvz.pdf: 18060170 bytes, checksum: 35902efcd3573630e0675fd37df370df (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Fundação para o Desenvolvimento da UNESP (FUNDUNESP) / O interesse terapêutico e biológico nas células-tronco tem aumentando nos últimos anos, fato este demonstrado pelo número crescente de pesquisas e publicações na área. Na espécie equina, as pesquisas envolvendo o uso da terapia celular com células-tronco mesenquimais (CTMs) estão focadas, particularmente para o tratamento de lesões tendíneas e osteoarticulares, havendo poucos relatos da sua utilização em outros tecidos, tais como o sistema nervoso. Desta forma, as vias de aplicação mais utilizadas até então para uso clínico em equino são as intralesionais e intra-articulares, carecendo assim na medicina equina de estudos pré-clínicos que avaliem a segurança de administração das CTMs em outras vias, tais como a intratecal por via liquórica. Nesse sentido, o objetivo geral deste estudo foi a obtenção, o cultivo e a caracterização das CTMs provenientes da medula óssea (MO) de equinos, além da avaliação da viabilidade e da segurança de aplicação dessas células autólogas por via intratecal através do espaço atlanto-occiptal. Também foi avaliado in vitro o potencial de transdiferenciação das CTMs-MO em fenótipos neurais, utilizando-se dois protocolos de diferenciação neural: P1 (forksolin e ácido retinóico) e P2 (2- mercaptoetanol). Ao término do cultivo primário, a análise imunofenotípica revelou a presença de CTMs com elevada expressão do marcador CD90, seguida de menor expressão para o marcador CD44 e ausência de expressão do marcador CD34. Nos ensaios de diferenciação nas tri-linhagens mesodermais ficou evidenciada a resposta positiva às diferenciações osteogênica (OST), condrogênica (CDG) e adipogênica (ADP) caracterizadas pela deposição de matriz extracelular rica em cálcio (OST), proteoglicanos e colágeno... / Biological and therapeutic interest in stem cells has increased in recent years, a fact demonstrated by the crescent number of research and publications in the area. In equine species, research involving the use of cell therapy with mesenchymal stem cells (MSCs) are focused, particularly for the treatment of tendineous and osteoarticular injuries, having scarces reports of its use in other tissues such as the nervous system. Thus, the pathways of administration most used so far for clinical use in equines are the intralesional and intra-articular, needing thereby in equine medicine of preclinical studies that asses the security of administration of MSCs in other pathways such as intrathecal by liquoric way. In this sense, the general aim of this study was the obtaining, cultivation and characterization of MSCs from bone marrow (BM) of equines, besides the evaluation of the feasibility and safety of application of these autologous cells by intrathecal pathway through atlanto-occipital space. It was also evaluated in vitro the potential of transdifferentiation of MSCs-MO in neural phenotypes, using two protocols of neural differentiation: P1 (forksolin and retinoic acid) and P2 (2- mercaptoethanol). At the end of the primary culture immunophenotypic analysis revealed the presence of MSCs with high expression of marker CD90, followed by the lower expression for the marker CD44 and absence of expression of marker CD34. In tests of differentiation in the tri-lineage mesodermal became evidenced the positive response to osteogenic (OST), chondrogenic (CDG) and adipogenic (ADP) differentiation characterized by the deposition of extracellular matrix rich in calcium (OST), proteoglycans and collagen II (CDG) and deposition of intracellular lipid droplets (ADP). In immunocytochemical characterization MSCs were... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Rogério Martins Amorim / Coorientador: Fernanda da Cruz Landim Alvarenga / Coorientador: Reneé Laufer-Amorim / Banca: Ana Liz Garcia Alves / Banca: Maria Verônica de Souza / Banca: Brunna Patrícia A. da Fonseca / Banca: Márjorie de Assis Golim / Resumo: O interesse terapêutico e biológico nas células-tronco tem aumentando nos últimos anos, fato este demonstrado pelo número crescente de pesquisas e publicações na área. Na espécie equina, as pesquisas envolvendo o uso da terapia celular com células-tronco mesenquimais (CTMs) estão focadas, particularmente para o tratamento de lesões tendíneas e osteoarticulares, havendo poucos relatos da sua utilização em outros tecidos, tais como o sistema nervoso. Desta forma, as vias de aplicação mais utilizadas até então para uso clínico em equino são as intralesionais e intra-articulares, carecendo assim na medicina equina de estudos pré-clínicos que avaliem a segurança de administração das CTMs em outras vias, tais como a intratecal por via liquórica. Nesse sentido, o objetivo geral deste estudo foi a obtenção, o cultivo e a caracterização das CTMs provenientes da medula óssea (MO) de equinos, além da avaliação da viabilidade e da segurança de aplicação dessas células autólogas por via intratecal através do espaço atlanto-occiptal. Também foi avaliado in vitro o potencial de transdiferenciação das CTMs-MO em fenótipos neurais, utilizando-se dois protocolos de diferenciação neural: P1 (forksolin e ácido retinóico) e P2 (2- mercaptoetanol). Ao término do cultivo primário, a análise imunofenotípica revelou a presença de CTMs com elevada expressão do marcador CD90, seguida de menor expressão para o marcador CD44 e ausência de expressão do marcador CD34. Nos ensaios de diferenciação nas tri-linhagens mesodermais ficou evidenciada a resposta positiva às diferenciações osteogênica (OST), condrogênica (CDG) e adipogênica (ADP) caracterizadas pela deposição de matriz extracelular rica em cálcio (OST), proteoglicanos e colágeno... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Biological and therapeutic interest in stem cells has increased in recent years, a fact demonstrated by the crescent number of research and publications in the area. In equine species, research involving the use of cell therapy with mesenchymal stem cells (MSCs) are focused, particularly for the treatment of tendineous and osteoarticular injuries, having scarces reports of its use in other tissues such as the nervous system. Thus, the pathways of administration most used so far for clinical use in equines are the intralesional and intra-articular, needing thereby in equine medicine of preclinical studies that asses the security of administration of MSCs in other pathways such as intrathecal by liquoric way. In this sense, the general aim of this study was the obtaining, cultivation and characterization of MSCs from bone marrow (BM) of equines, besides the evaluation of the feasibility and safety of application of these autologous cells by intrathecal pathway through atlanto-occipital space. It was also evaluated in vitro the potential of transdifferentiation of MSCs-MO in neural phenotypes, using two protocols of neural differentiation: P1 (forksolin and retinoic acid) and P2 (2- mercaptoethanol). At the end of the primary culture immunophenotypic analysis revealed the presence of MSCs with high expression of marker CD90, followed by the lower expression for the marker CD44 and absence of expression of marker CD34. In tests of differentiation in the tri-lineage mesodermal became evidenced the positive response to osteogenic (OST), chondrogenic (CDG) and adipogenic (ADP) differentiation characterized by the deposition of extracellular matrix rich in calcium (OST), proteoglycans and collagen II (CDG) and deposition of intracellular lipid droplets (ADP). In immunocytochemical characterization MSCs were... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor