Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Spilanthes Acmella (L.) Murray (Asteraceae) is native to South America, popularly known as jambu. This plant is used in Northern Region of Brazil as a condiment in typical dishes such as tacacá and pato no tucupi and has application in traditional medicine to treat toothache, stomatitis and throat diseases. Furthermore, several therapeutic properties have been reported for S. acmella such as antiviral, antibacterial, antiseptic, diuretic, anti-inflammatory and healing agent. Spilanthol is the major constituent from flowers of this species, which is associated with several biological activities: analgesic, larvicide, insecticide, antibacterial, antifungal, etc. Currently, extracts of jambu and spilanthol are also used as ingredients for cosmetic anti-aging. Given the above, this work reports the development of a HPLC-DAD method for determination of spilanthol in samples of S. acmella. This study used samples from accessions of S. acmella (fresh whole plant and its parts: leaves, stems and flowers, fresh and dried) cultivated and collected in the Rural Campus-UFS. The conditions for analysis using HPLC-DAD system Shimadzu LC 20A Prominence were: analytical column Luna ® C18 (250 mm x 4.6 mm, 5 m) Phenomenex, gradient elution using as mobile phase MeOH (B): H2O (A): 85% (A) for 6 min., 85-100% (A) for 1 min., 100% (A) for 5 min.; 100-85% (A) for 1 min.; 85% (A) for 10 min; flow rate 1.0 mL/min, injection volume 20 L and the chromatograms obtained at =230 nm. Spilanthol was used as a reference standard (tr=5.1 min). The method was validated according to RE 899/03 (ANVISA). Linearity was determined by external standard calibration curve (r2=0.9997) and by the standard addition method (r2=0.9995). The limit of quantification and detection were 0.7 and 0.1 g/mL, respectively. The repeatability showed coefficients of variation (CV, %) between 0.21 to 2.85% and the accuracy, expressed as a recovery percentage ranged from 100.2 to 103.3%. The method was applied in 41 samples of S. acmella including samples from genetic improvement. Samples of dried flowers and accession J-05 had the highest content of spilanthol (101.2 g/mL and 120.5 g/mL, respectively). Therefore, this work presents a contribution to the quality control of extracts of S. acmella. / Spilanthes acmella (L.) Murray (Asteraceae) é uma planta nativa da América do Sul conhecida popularmente como jambú. Esta planta é usada como condimento em pratos típicos da Região Norte como o tacacá e o pato no tucupi e tem aplicação na medicina tradicional para tratar dor de dente, estomatite e doenças da garganta. Além disso, várias propriedades terapêuticas foram relatadas para S. acmella tais como antiviral, antibacteriana, anti-séptica, diurética, antiinflamatória e cicatrizante. Espilantol é o constituinte majoritário das flores desta espécie, o qual está associado a várias atividades biológicas: analgésica, larvicida, inseticida, antimicrobiana, fungicida, etc. Atualmente, extratos de jambú e o espilantol são usados como ingredientes para cosmético antienvelhecimento. Diante do exposto, este trabalho relata o desenvolvimento de um método analítico por CLAE-DAD para determinação de espilantol em amostras de S. acmella. Neste estudo foram utilizadas amostras dos acessos de S. acmella (planta inteira fresca e suas partes: folhas, caules e inflorescências frescas e secas) cultivadas e coletadas no Campus Rural da UFS. As condições de análise utilizando o sistema CLAE-DAD Shimadzu LC 20A Prominence foram: coluna analítica C18 Luna® (250 mm x 4,6mm, 5 m) Phenomenex; eluição gradiente no modo reverso, utilizando como fase móvel MeOH(B): H2O(A): 85% (A) por 6 min., 85-100% (A) por 1 min., 100% (A) por 5 min.; 100-85% (A) por 1 min.; 85% (A) por 10 min; vazão 1,0 mL/min; volume de injeção 25 μL e os cromatogramas obtidos em =230 nm. Espilantol foi usado como padrão de referência (tr=5,1 min). O método foi validado conforme RE no 899/03 (ANVISA). A linearidade foi determinada pela curva de padrão externo (r2=0,9997) e por adição de padrão (r2=0,9995). O limite de quantificação e de detecção foram 0,7 e 0,1 μg/mL, respectivamente. A repetibilidade apresentou coeficientes de variação (CV%) entre 0,21 a 2,85% e a exatidão, expressa como percentual de recuperação, variou de 100,2 a 103,3%. O método foi aplicado em 41 amostras de S. acmella incluindo amostras oriundas de melhoramento genético. As amostras da flores seca e do acesso J-05 apresentaram o maior teor de espilantol (101,2 μg/mL e 120,5 g/mL, respectivamente). Esse trabalho apresenta uma contribuição ao controle de qualidade de extratos de S. acmella.

Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-06-26T15:15:30Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_UtilizacaoTecnicasHifenadas.pdf: 2148528 bytes, checksum: e4cf156ec901be080f61599c50e61ac5 (MD5) / Approved for entry into archive by Irvana Coutinho (irvana@ufpa.br) on 2017-06-28T12:44:37Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_UtilizacaoTecnicasHifenadas.pdf: 2148528 bytes, checksum: e4cf156ec901be080f61599c50e61ac5 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-28T12:44:37Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_UtilizacaoTecnicasHifenadas.pdf: 2148528 bytes, checksum: e4cf156ec901be080f61599c50e61ac5 (MD5) Previous issue date: 2016-08-31 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O emprego de técnicas hifenadas que permitam a separação e o isolamento de substâncias de um extrato vegetal mostra-se necessário tanto para o conhecimento da composição química, de um composto, como também para a determinação de uma substância, ou grupo de substâncias, que sirvam como marcadora de determinada espécie. A espécie Acmella oleracea (L.) R.K.Jansen, cresce na Amazônia Legal, uma região sociogeográfica no norte do Brasil, onde é conhecido como Jambu, Agrião Bravo ou Agrião do Pará. É utilizada na medicina popular na forma de chá, xaropes e tinturas e indicada para o uso como anestésico e antisséptico. O objetivo deste trabalho foi utilizar a HPLC-UV-ELSD e a UHPLC-DAD-MS para o desenvolvimento de programações que possam identificar metabólitos de interesse em Acmella oleracea. O material vegetal foi adquirido no município de Tailândia, estado do Pará, sítio Santa Inês na microrregião de Tomé-Açu as margens da rodovia PA150, posicionado a 260 km da capital Belém, nas coordenadas 02º56‘22‘‘ de latitude sul e 48º57‘03‘‘ de longitude oeste, e consistia de 10 maços de Acmella oleracea (jambu) frescos, compostos de folhas, flor, raiz e caule, após a higienização o material in natura foi triturado e em seguida macerado por 7 dias com etanol a 92,8 ºGL numa proporção de 1:10. Os extratos hidroetanólicos, de cada parte da planta, foram filtrados e concentrados a baixa pressão e em seguida liofilizados para posterior análise com técnicas hifenadas. O espilantol foi registrado nas análises por UHPLC-DAD-ESI-MS em modo Scan e Produto de íon, através da detecção do íon m/z 222 em todos os órgãos analisados. Uma substância que apresentou m/z 376.80 para análise com etoh/água e m/z 388.20 para acn/água, que apresenta perfil promissor foi encontrada através das análises por UHPLC-DAD-MS e precisa de experimentos específicos para a confirmação de flavonoides. Durante o desenvolvimento das programações, observou-se que os melhores perfis cromatográficos de EEAOFOC e EEAOR foram obtidos quando a fase móvel era composta por etanol e água. / The use of hyphenated techniques that allow the separation and isolation of substances of a herbal extracts is necessary both for the knowledge of the chemical composition of a compound, as well as for the determination of a substance or a group that serve as marker of particular species. The species Acmella oleracea (l.) R. K. Jansen, grows in Legal Amazon, a geographic region in northern Brazil, where is known as Jambu, Agrião Bravo ou Agrião do Pará. It is used in folk medicine in the form of tea, syrups and tinctures and indicated for use as anesthetic and antiseptic. The aim of this study was to use the HPLC-UV-ELSD and HPLC-DAD-MS for the development of methods that can identify metabolites of interest on Acmella oleracea. The plant material was acquired in Tailândia, State of Pará, in the Santa Inês farm, city of Tomé-Açu, PA150 highway margins, positioned the 260 km from Belém, at 02° 56 ' 22 '' south latitude and 48° 57 ' 03 '' west longitude, and consisted of 10 packs of Acmella oleracea (jambu), composed of leaves, flower, root and stem, after cleaning the material was grinded and then macerated for 7 days with 92.8° GL ethanol at a ratio of 1:10. Hydroethanolic extracts, of each part of the plant, were filtered and concentrated at a low pressure and then lyophilized for further analysis with hyphenated techniques. The Spilanthol was registered in the analysis by HPLC-DAD-ESI-MS, Scan mode and Product ion, through the detection of ion m/z 222 in all analyzed organs. A substance which showed m/z 376.80 for analysis with etoh/water and m/z 388.20 for acn/water, which has promising profile was found through the analysis by HPLC-DAD-MS and needs specific experiments for confirmation of flavonoids. During the development of methods, it was observed that the best chromatographic profiles of EEAOFOC and EEAOR were obtained when the mobile phase was composed of ethanol and water.