Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Erva-mate (Ilex paraguariensis) has an economical and environmental importance to the southern area of Brazil. However, there is no enough technologies of vegetative propagation, which are important to improve yield and quality. This study had as objectives to evaluate the propagation of erva-mate trees trough cuttings and to establish an ex vitro acclimatization and micro-cutting rooting protocols from embryo cultures. Vegetative propagation potential was evaluated considering shading intensity of the stock plant and origin and size of the cuttings. Cuttings were grabbed from stock plants growing under light or shade conditions and prepared in two types (one-bud and regular types). The evaluations were the percentage of lived and died cuttings, cuttings unchanged, shoot and callus growth, shoot length, rooting, leaf survival, number and length of roots and number and length of leaves in new shoots. For acclimatization and ex vitro rooting were evaluated five concentrations of indol butyric acid (IBA) (0; 250; 500; 1,000 and 2,000 ppm) and five substrates (vermiculite, sand, carbonized rice hull, commercial substrate of pinus bark, and coconut bark). The evaluations were the percentage of cuttings unchanged, callus formation, rooting and mortality, number and length of roots, micro-cutting length, fresh weight of roots, and number of leaves in new shoots. The highest cutting unchanged was gotten with cuttings from plants growing in light. Callus formation, presence of leaves and new shoot growth affected rooting. Cuttings collected from vegetative propagated plants showed higher percentage of rooting and root length. The highest rooting percentage and micro-cutting growth were found with 1,000 ppm of IBA during acclimatization period. Acclimatization and ex vitro rooting of erva-mate micro-cuttings can be done in the substrate of carbonized rice hull and commercial substrate of pinus bark. / A erva-mate (Ilex paraguariensis) assume uma importância ambiental e socioeconômica para a região sul do Brasil, porém carece de tecnologias de propagação vegetativa necessárias para o aumento da produção e da qualidade. O presente estudo teve por objetivos analisar a propagação via estaquia de material adulto e estabelecer a aclimatização ex vitro e o enraizamento de microestacas originadas de cultivo de embriões de erva-mate. Para a estaquia, analisaram-se o efeito do nível de sombreamento da planta matriz, a origem e o tamanho da estaca, avaliando o potencial de propagação vegetativa. As estacas foram coletadas de plantas matrizes de dois níveis de sombreamento (crescimento a pleno sol e sombreado), de duas origens (seminal e propagada vegetativamente) e de dois tipos (estaca convencional e de gema única). Os parâmetros utilizados para avaliar as estacas foram a porcentagem de estacas vivas e mortas, de estacas inalteradas, emissão e comprimento de brotos, formação de calos, enraizamento, permanência das folhas primárias, número e comprimento de raízes e número e comprimento de folhas dos brotos. Na aclimatização e enraizamento ex vitro de erva-mate foram testadas cinco concentrações de ácido indol butírico (AIB) (0, 250, 500, 1.000 e 2.000 ppm), e cinco tipos de substratos (vermiculita, areia, casca de arroz carbonizada, substrato comercial a base de casca de pinus e casca de coco), visando o enraizamento de microestacas. As microestacas foram avaliadas quanto a porcentagem de estacas inalteradas, de formação de calos, de enraizamento e de mortalidade, número de raízes, comprimento de raízes, tamanho total da microestaca, biomassa radicular e número de folhas dos brotos. Estaca coletada de planta matriz em pleno sol apresentou maiores porcentagens de estacas inalteradas. A presença de calo, das folhas primárias e a emissão de brotos afetaram o enraizamento. Estacas coletadas de matrizes propagadas vegetativamente apresentam maior taxa de enraizamento e comprimento de raízes. Na microestaquia, a concentração de 1.000 ppm de AIB foi eficiente para o enraizamento e crescimento de microestacas na aclimatização. Microestacas de erva-mate podem ser aclimatizadas e enraizadas ex vitro em substrato de casca de arroz carbonizada e em substrato comercial a base de casca de pinus.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The aim of this study was to evaluate the in vitro productivity of micro-stumps, in vitro and ex vitro rooting and acclimatization of micropropagated plantlets, and to assess the genetic diversity of Apuleia leiocarpa (Vogel) J. F. Macbride (apuleia) with RAPD markers. Micro-stumps originated from drastic pruning of aseptic seedlings were grown in WPM culture medium supplemented with 0; 2.2; 4.4; 6.6 and 8.8 μM of 6-benzylaminopurine (BAP) and sub-cultured in WPM medium without cytokinin. Apuleia micro-stumps were also grown in WPM, MS or ½ MS, with or without 1.5 g L-1 of activated charcoal. Three shoot collections were done at 30, 60 and 90 days of cultivation. Nodal segments and micro-cuttings were maintained in WPM culture medium with 0; 4.9; 9.8; 14.7 and 19.6 μM of indole butyric acid (IBA). For acclimatization, rotted nodal segments and micro-cuttings were planted in equal proportions of commercial substrate + vermiculite + coarse sand, and commercial substrate + vermiculite. For ex vitro rooting, nodal segments and micro-cuttings were treated or not with 4920 μM of IBA for 10 seconds and cultivated in equal proportions of commercial substrate + vermiculite + coarse sand, commercial substrate + vermiculite, and commercial substrate + coarse sand. For genetic analysis, DNA was extracted from leaf samples of 88 plants of apuleia. Eighteen RAPD primers were tested. The amplified fragments were separated in agarose gel of 1.2% (v/v), containing 3 μL of ethidium bromide. The fragments were marked as absence or presence, generating a binary matrix. Total polymorphism and the relative contribution of each primer for the polymorphism were calculated. The polymorphism information content (PIC) was calculated for each fragment and primer. Cluster analysis was based upon Jaccard similarity and UPGMA method. The conservation of the apuleia micro-stumps in WPM or ½ MS media supplemented with 8.8 μM of BAP and sub-cultured in culture medium without citokynin increases number and length of shoots. Maintaining micro-stumps in culture medium supplemented with activated charcoal increases micro-cuttings production, but in its absence results in callus formation and indirect organogenesis of shoots. Nodal segments were more competent than micro-cuttings for rooting in culture medium without IBA. Substrate composition does not affect survival and growth during acclimatization of in vitro produced plantlets. Nodal segments treated with 4920 μM of IBA and cultivated in commercial substrate + vermiculite + coarse sand show the best responses for ex vitro rooting. Both in vitro conservation of apuleia micro-stumps and ex vitro rooting are promising strategies for plantlet production. The RAPD is a feasible technique for genetic analysis, and it identifies high genetic variability in apuleia. / Os objetivos deste trabalho foram avaliar a produtividade de microcepas mantidas in vitro, o enraizamento e a aclimatização de plantas micropropagadas, assim como avaliar a diversidade genética em Apuleia leiocarpa (Vogel) J. F. Macbride (grápia) com uso de marcadores RAPD. Microcepas oriundas da poda drástica de plantas assépticas foram cultivadas em meio de cultura WPM acrescido de 0, 2,2, 4,4, 6,6 e 8,8 μM de 6-benzilaminopurina (BAP) e subcultivadas em meio de cultura WPM sem citocinina. Microcepas também foram cultivadas em meio de cultura WPM, MS ou ½ MS, acrescido ou não de 1,5 g L-1 de carvão ativado e submetidas a três coletas de brotos aos 30, 60 e 90 dias de cultivo. No enraizamento in vitro, segmentos nodais e microestacas foram mantidos em meio de cultura WPM com 0, 4,9, 9,8, 14,7 e 19,6 μM de ácido indolbutírico (AIB). Na aclimatização das plantas foram testadas as composições de substrato comercial + vermiculita + areia grossa e substrato comercial + vermiculita, em iguais proporções. Para o enraizamento ex vitro, segmentos nodais e microestacas foram tratados ou não com 4920 μM de AIB por 10 segundos e cultivados em iguais proporções de substrato comercial + vermiculita + areia grossa, substrato comercial + vermiculita e substrato comercial + areia grossa. Para as análises RAPD, o DNA foi extraído de amostras foliares de 88 plantas. Foram avaliados 18 iniciadores, sendo a visualização dos fragmentos realizada em gel de agarose preparado a 1,2% (p/v), contendo 3 μL de brometo de etídio e submetido a eletroforese. Os fragmentos foram pontuados com ausência ou presença gerando uma matriz binária. Foi calculada a contribuição relativa de cada iniciador para o polimorfismo bem como o polimorfismo total. Também foi calculado o conteúdo de informação para o polimorfismo (PIC) para cada fragmento e por iniciador. A análise de agrupamento foi realizada com base na similaridade de Jaccard e no método UPGMA. A manutenção das microcepas de grápia em meio de cultura WPM ou ½ MS suplementado com 8,8 μM de BAP, seguido do subcultivo em meio de cultura sem citocinina aumenta o número e comprimento das brotações. O cultivo de microcepas em meio de cultura com carvão ativado aumenta a produção de microestacas por microcepas, enquanto a ausência de carvão ativado favorece a formação de calos e brotos por organogênese indireta. Quanto ao enraizamento in vitro, os segmentos nodais apresentaram maior resposta do que microestacas, sendo necessária a suplementação do meio de cultura com AIB. A composição do substrato não afetou a sobrevivência e o crescimento das plantas produzidas in vitro durante a aclimatização. As melhores respostas de enraizamento ex vitro foram obtidas com segmentos nodais, assim como com explantes tratados com 4920 μM de AIB e cultivados em substrato comercial + vermiculita + areia grossa. Tanto a manutenção in vitro de microcepas quanto o enraizamento ex vitro são técnicas promissoras para a produção de plantas de grápia. O marcador RAPD é eficiente para a análise genética e detectou alta variabilidade genética na grápia.