Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, 2014. / Submitted by Victor Alves Girotto Borges (victorgirotto2@gmail.com) on 2014-07-31T14:57:02Z No. of bitstreams: 1 2014_AdrianaHaackdeArrudaDutra.pdf: 1131157 bytes, checksum: 6dfbbc9cae8a385fda2fe4861ba10111 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2014-07-31T15:40:43Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_AdrianaHaackdeArrudaDutra.pdf: 1131157 bytes, checksum: 6dfbbc9cae8a385fda2fe4861ba10111 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-07-31T15:40:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_AdrianaHaackdeArrudaDutra.pdf: 1131157 bytes, checksum: 6dfbbc9cae8a385fda2fe4861ba10111 (MD5) / A fibrose cística é uma doença de herança autossômica recessiva, que atinge as glândulas exócrinas, envolve múltiplos órgãos como sistema digestório, respiratório e evolui de forma crônica e progressiva, inclusive com desnutrição grave. O objetivo do estudo foi avaliar e descrever aspectos epidemiológicos, clínico-nutricionais e farmacológicos de pacientes atendidos no ambulatório de fibrose cística em um centro de referência do Distrito Federal. O estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa da Universidade de Brasília. Com os resultados obtidos, concluiu-se que práticas como atendimento multidisciplinar, intervenção clínico-nutricional e estímulo à atividade física devem ser incentivados nos pólos de atendimento e acompanhados para que a assistência seja precoce e a mais efetiva possível. Manifestações no trato digestório e respiratório podem comprometer o estado nutricional na fibrose cística. A suplementação enzimática e vitamínica, assim como, o uso de fármacos como antibióticos, mucolíticos entre outros são necessários para tratar e prevenir complicações. O estudo mostrou uma associação positiva entre o uso de suplementos - tipo e frequência, e a variável déficit nutricional. Alterações nas provas de função pulmonar também foram encontradas e foram associadas com medidas antropométricas como a circunferência de braço. O acesso aos suplementos, fármacos e a assistência clínica por meio de políticas públicas e financiamento pelas instituições governamentais, como programas domiciliares, podem contribuir para a menor morbidade e maior sobrevida dos fibrocísticos. O estudo não mostrou associação entre a P. aeruginosa e o estado nutricional, possivelmente pelo número de casos acometidos pela colonização das cepas mucóide e não mucóide. Modelos de serviço multiprofissional, baseados em triagem neonatal e no auxílio com fármacos, suplementos nutricionais, vitamínicos e enzimáticos devem ser estimulados e ampliados evitando-se quadros de exacerbação da doença que podem culminar com a necessidade de transplante e prejudicar a qualidade de vida de todos os envolvidos. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Cystic fibrosis is a genetic recessive disease that affects the exocrine glands and involves the digestive, respiratory and evolves from chronic and progressive manner, including severe malnutrition. The aim of the study was to assess and describe epidemiological, clinical and nutritional and pharmacological of clinical patients with cystic fibrosis in a reference center of the Federal District aspects. The study was approved by the Ethics Committee in Research of the University of Brasilia. With the obtained results, it was concluded that practices such as multidisciplinary care, clinical nutrition intervention and encouraging physical activity should be encouraged in centers of care and followed for that assistance is early and effective as possible. Manifestations in the digestive and respiratory tract may compromise the nutritional status in cystic fibrosis. The enzyme and vitamin supplementation, as well as the use of drugs such as antibiotics, mucolytics and others are required to treat and prevent complications. The study showed a positive association between the use of supplements - type and frequency, and variable nutritional deficit. Changes in pulmonary function were also found and were associated with anthropometric measurements such as arm circumference. Access to supplements, pharmaceuticals and clinical care through public policies and funding by government institutions such as residential programs, may contribute to lower morbidity and survival of cystic fibrosis patients. The study showed no association between P. aeruginosa and nutritional status, possibly by the number of cystic fibrosis patients affected by colonization of mucoid and non-mucoid strains. Multidisciplinary service models, based on neonatal screening and assistance with medications, nutritional, vitamin and enzyme supplements should be encouraged and extended frames avoiding exacerbation of the disease that can lead to the need for transplantation and impair the quality of life for all involved.

La galectine-3 (Gal-3) est biologiquement liée au processus d'inflammation et de fibrose dans l’insuffisance cardiaque (IC). Le système rénine-angiotensine-aldostérone (SRAA) a été largement démontré comme exerçant des effets profibrotiques, prohypertrophiques et pro-inflammatoires dans la pathophysiologie de l’IC. En outre, il existe des preuves expérimentales que Gal-3 et SRAA peuvent interagir dans le développement des dommages cardiovasculaires dans des modèles d’hypertension. Cependant, une telle interaction n'a pas été étudiée dans un contexte de dysfonction ventriculair gauche (VG). Nous avons donc cherché à tester les hypothèses suivantes: 1. La Gal-3 participe aux mécanismes de la fibrose cardiaque et du remodelage tissulaire médiés par l'aldostérone dans un modèle murin de dysfonction du VG; 2. Le niveau de Gal-3 est associé au développement du remodelage du VG et de la fibrose et peut prédire les effets des l'antagonistes neurohormonaux chez les patients atteints d'IC chronique due à une cardiomyopathie dilatée non ischémique (CMDNI). Méthode 1. Des souris mâles adultes atteintes d'hyperaldostéronisme cardiaque spécifique ont été soumises à des injections sous-cutanées d'isoprotérénol (200 mg/kg x 2/jour pendant deux jours), puis randomisées pour recevoir un placebo, un inhibiteur de Gal-3 (modified citrus pectin, MCP), un antagoniste de récepteurs aux minéralocortïcoides (canrenoate de potassium) ou l’association de deux (MCP+canrenoate) pendant 14 jours. 2. Nous avons recruté 150 patients avec un diagnostic de CMDNI. Tous les patients ont bénéficié d'une évaluation clinique et biohumorale, incluant le dosage de Gal-3, l'échocardiographie, et une imagerie par résonance magnétique cardiaque (IRM) contrastée pour l'évaluation des volumes et de la fibrose par le late gadolinium enhancement (LGE). Une plus petite cohorte de 70 patients a également reçu un dosage de soluble suppression of tumorigenicity protein 2 (sST2) à l’inclusion, et une IRM de suivi à 24 mois pour l'évaluation du remodelage inverse du VG, définie comme une augmentation de >10% de la fraction d’ejection du VG ou une diminution de 10% du volume diastolique du VG indexé. Résultats L’isoprotérénol a induit une diminution rapide et persistante de la fonction systolique du VG chez la souris, qui a été nettement améliorée par le traitement au MCP ou canrenoate. Le MCP et le canrenoate ont également prévenue l'hypertrophie et la fibrose cardiaques ainsi que l’augmentation de l'expression de gènes impliqués dans la fibrogénèse (Coll-1 et Coll-3) et l'infiltration de macrophages (CD-68 et MCP-1). L'utilisation combinée du MCP et canrenoate a entraîné des effets additifs sur l'hypertrophie cardiaque, l'inflammation et la fibrose, comparativement au MCP ou au canrenoate seul. Dans notre cohorte de patients avec CMDNI, la valeur médiane de Gal-3 était de 14,4 ng/mL; le LGE a été observée chez 106 patients. Les patients ayant un LGE positif avaient un taux de Gal-3 plus élevée que ceux qui n'en avaient pas (p=0,006). Après analyse multivariée suel la Gal-3, le sexe, l’ancienneté del la cardiopathie et la fraction d’éjection du ventricule droit sont des facteurs prédicteurs indépendants de la présence de LGE. L’IRM de suivi a montrée que 35 patients présentaient un remodelage inverse. L’analyse multivariée met en evidence Gal-3 comme un prédicteur indépendant du remodelage inverse contrairement au sST2. Conclusion La Gal-3 participe à des mécanismes de lésions myocardiques médiées par l'aldostérone dans un modèle murin de IC. De même, dans un cadre clinique de CMDNI, Gal-3 semble être associée à la fibrose du VG et à l'évolution du remodelage cardiaque, en identifiant éventuellement le sous-ensemble de patients avec une réponse plus prononcée à l'antagonisme neuro-hormonal pharmacologique. / BackgroundGalectin-3 (Gal-3) is biologically linked to the process of inflammation and fibrosis in heart failure (HF). The renin-angiotensin-aldosterone system (RAAS) has been largely demonstrated to exert profibrotic, prohypertrophic and proinflammatory effects in the pathophysiology of HF. Further, there is initial experimental evidence that Gal-3 and RAAS may interplay in the development of cardiovascular damage in hypertensive models. However, such interaction has not been investigated in the setting of left ventricular (LV) dysfunction and HF. We aimed therefore to test the following hypotheses:1. Gal-3 participates in the mechanisms of aldosterone mediated cardiac fibrosis and tissue remodeling in a murine model of LV dysfunction;2. Gal-3 level is associated with the development of LV remodeling and fibrosis and can predict the effects of neurohormonal antagonism in patients with chronic HF due to non-ischemic dilated cardiomyopathy (NIDCM).Methods1. Adult male mice with cardiac-specific hyperaldosteronism (AS) underwent isoproterenol subcutaneous injections (200 mg/kg x 2/day over two days), to be then randomized to receive placebo, a Gal-3 inhibitor (modified citrus pectin, MCP), an aldosterone antagonist (potassium canrenoate), or MCP+canrenoate for 14 days.2. We enrolled 150 patients with a diagnosis of NIDCM. All patients underwent a comprehensive clinical and biohumoral evaluation, including Gal-3 assay, 2-D echocardiography, and a contrast-enhanced cardiac magnetic resonance (CMR) for the assessment of LV volumes and fibrosis by the late gadolinium enhancement (LGE) technique. A smaller cohort of 70 patients also received soluble suppression of tumorigenicity protein 2 (sST2) assay at baseline as well as a follow-up CMR after 24 months for the evaluation of LV reverse remodeling, defined as a >10 percentage units increase in LV ejection fraction or a >10% decrease in LV end-diastolic volume indexed.ResultsIsoproterenol induced a rapid and persistent decrease in LV systolic function which was markedly improved by treatment with either MCP or canrenoate. MCP and canrenoate also reduced cardiac hypertrophy and fibrosis and the expression of genes involved in fibrogenesis (Coll-1 and Coll-3) and macrophage infiltration (CD-68 and MCP-1). The combined use of antagonists of Gal-3 and aldosterone resulted in enhanced effects on cardiac hypertrophy, inflammation, and fibrosis, when compared to MCP or canrenoate alone. In our cohort of NIDCM patients, median Gal-3 value was 14.4 ng/mL; LGE was detected in 106. Patients with LGE had higher Gal-3 than those without (p=0.006). Among univariate predictors of LGE, Gal-3 maintained its predictive value at multivariate analysis, together with sex, hypertension, disease duration and right ventricular ejection fraction. At follow-up CMR, 35 patients showed reverse remodeling. Gal-3, but not sST2 resulted as an independent predictor of LV reverse remodeling at multivariate analysis.ConclusionGal-3 participates in mechanisms of aldosterone-mediated myocardial damage in murine model of HF. Likewise, in the clinical setting of NIDCM, Gal-3 seems to be associated with LV fibrosis and to the evolution of cardiac remodeling, possibly identifying the subset of patients with a more pronounced response to pharmacological neurohormonal antagonism.

Hintergrund Jede Implantation alloplastischer Materialien führt durch Aktivierung der körpereigenen Immunabwehr zu einer Fremdkörperreaktion. An der Synthese der Extrazellulärmatrix und der entstehenden Kollagenkapsel sind insbesondere Makrophagen und Fibroblasten beteiligt. Diese Reaktionen können die Material-Funktionsfähigkeit abschwächen, aufheben oder zu deren operativer Entfernung zwingen. Fragestellung und Ziele Spinnenseide ist ein Material mit hoher Biokompatibilität. Nachdem es gelungen ist, Spinnenseide rekombinant herzustellen, soll untersucht werden, wie sich die Verträglichkeit alloplastischer Materialien durch eine Beschichtung mit biotechnologisch hergestellter Spinnenseide beeinflussen lässt. Eine weitere Möglichkeit ist der TGF-β-Synthese-Inhibitor Halofuginon, der ebenfalls hinsichtlich seiner Potenz, die Ausbildung einer Fibrosekapsel zu vermindern, untersucht werden soll. Methodik Anhand von in-vitro-Untersuchungen wurden die bei der Fremdkörperreaktion beteiligten Zelltypen auf ihr Proliferationsverhalten und die Expression unterschiedlicher Genprodukte hinsichtlich bestehender Unterschiede zwischen den jeweiligen Oberflächenbeschichtungen untersucht. Es wurden immunhistochemische Färbungen zum Nachweis spezifischer Oberflächenantigene, Bestimmungen von ATP- und DNA-Gehalt als Maß für die Zellzahl, sowie molekulargenetische Untersuchungen hinsichtlich der Expression relevanter Markergene (rtPCR) durchgeführt. Ergebnisse Eine Beschichtung mit rekombinanter Spinnseide führt - im Vergleich zu reinen Silikonimplantaten - zu einer verzögerten und reduzierten Immunreaktion. Die EZM-Synthese und die damit verbundene fremdkörperassoziierte Fibrose werden vermindert und so die Biokompatibilität alloplastischer Materialien gesteigert. / Introduction: Optimisation of the biocompatibility of silicone implants and reduction of capsule formaiton around the surface of such implants are in the focus of plastic surgical biomaterial research. In addition to its extraordinary physical and biochemical properties, spider silk shows high biocompatibility. Therefore, the coating of silicone implant surfaces with recombinant spider silk wwas analysed regarding foreign body reactions. Another possibility to modify the surface is a coating with chinazolinone derivative halofuginone which is a type I collagen synthesis inhibitor that interferes with the TGF-beta signaling pathway. Methods: We compared proliferation and expression of different gene products in-vitro by immunhistochemistry, content of ATP and DNA, and rtPCR. Conclusion: The results confirmed a decrease in foreign body responses to spider silk or halofuginone surface-modified silicone implants and mark their potential for obtaining a lessened capsular fibrosis by way of a local antifibrotic effect.

Le développement de nouveaux outils et de nouvelles techniques pour la biologie et la médecine a toujours été un moteur pour la recherche en microscopie. Les premiers microscopes permirent à Antoine Von Leeuwenhoek en 1677 de découvrir les bactéries, les spermatozoïdes et les globules rouges et aujourd'hui nous cherchons à visualiser les processus intracellulaires, l'interaction des protéines, l'interaction des cellules dans les tissus... Chaque année de nouvelles techniques apparaissent pour voir plus petit, plus spécifique, plus physiologique. Le laboratoire d'optique et biosciences dans lequel j'ai effectué ma thèse s'intéresse plus particulièrement aux techniques de microscopie multiphoton. Ce type de microscopie, qui re- pose sur les interactions non linéaires entre la matière et la lumière, est principalement utilisé aujourd'hui pour suivre des marqueurs fluorescents dans les tissus grâce au processus de fluo- rescence sous excitation à deux photons. En cela, elle sert à suppléer la microscopie confocale pour visualiser des phénomènes à des profondeurs de pénétration qui lui sont inaccessibles, et permet ainsi de travailler sur l'ensemble d'un tissu. Toutefois, la microscopie multiphoton ne se borne pas à la fluorescence sous excitation à 2 photons ; elle donne aussi accès à des processus non linéaires comme la génération d'harmoniques ou l'émission Raman anti-Stockes stimulée. Ces interactions non linéaires sont encore peu utilisées en biologie et font l'objet de recherches dans notre laboratoire. L'un des processus non linéaires étudiés au laboratoire est la génération de second harmo- nique (SHG). Celle-ci a été mise en évidence en 1961 par P. A. Franken[1] dans des cristaux non linéaires et s'utilise couramment pour doubler la fréquence des lasers. En 1979, ce proces- sus a été appliqué en biologie par Samuel Roth et Isaac Freund[2] sur des tendons de rat où l'organisation du collagène permet d'obtenir l'effet non linéaire. Presque trente années se sont écoulées depuis cette expérience, mais la génération de second harmonique par le collagène reste mal comprise. De plus, même si de nombreuses études ont montré le potentiel de cette technique, elle reste peu utilisée par les biologistes. Cette thèse, sous la direction de Marie-Claire Schanne-Klein, veut répondre à plusieur questions : - Quel est le rôle de l'organisation submicrométrique du collagène dans la génération du signal de second harmonique ? - Que peut apporter cette technique dans la visualisation du collagène par rapport aux autres techniques déjà existantes ? - Quelle est la pertinence de cette technique pour répondre à des problématiques biolo gique ? Nous nous sommes focalisés sur la fibrose qui est une accumulation anormale de collagèn dans les tissus. Une thèse précédente réalisée dans notre laboratoire par Ana-Maria Pena avai déjà montré le potentiel de la génération de second harmonique pour évaluer la gravité d fibroses pulmonaires induites par la bléomycine. Toutefois, ces études réalisées en collabora tion avec le service de pneumologie de l'hôpital Bichat sont restées à l'état de démonstration de principe. Nous avons alors engagé une collaboration étroite avec une équipe de néphro logues composée de Pierre Louis Tharaux, Monica Hernest et Cécile Fligny (Cardiovascula Research Center Inserm Lariboisière INSERM U689, France) qui travaillent sur les phéno mènes de fibroses dans le rein, et nous avons appliqué la microscopie par génération de second harmonique à cette problématique biomédicale. Dans ce manuscrit, le premier chapitre introduit les notions biologiques sur le collagèn et la fibrose nécessaires à la compréhension de la suite. Le deuxième chapitre présente le diverses techniques de visualisation du collagène, insiste sur les principes et le dispositif d microscopie multiphoton et enfin développe une modélisation du signal de génération de se cond harmonique par le collagène observé en microscopie. Nous proposons ensuite dans l troisième chapitre une méthodologie pour quantifier la fibrose rénale, que nous validons su un modèle murin de fibrose rénale. Enfin, le dernier chapitre est consacré à l'application d notre méthodologie à diverses problématiques biologiques liées à la fibrose rénale.

Diss. phil.-hist. Bern, 1993.

Würzburg, Univ., Diss., 2008.

Proefschrift Universiteit Leiden. / Auteursnaam op omslag: Hans Baelde. Met bibliogr., lit. opg.-Met samenvatting in het Nederlands.

Proefschrift Rijksuniversiteit Groningen. / Met lit.opg. - Met samenvatting in het Nederlands.

Made available in DSpace on 2013-08-07T18:41:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000442543-Texto+Completo-0.pdf: 1310049 bytes, checksum: b871097892a0a347db7e651a3cb4154d (MD5) Previous issue date: 2012 / Liver fibrosis is the wound healing response to repeated injury of the liver. It is characterized by disruption of the liver architecture associated with increased expression of extracellular matrix components. Hepatic stellate cells (HSCs) play a key role in the process of fibrogenesis. In normal liver, HSCs are quiescent and its main function is to store vitamin A. During liver injury, these cells undergo activation, become myofibroblasts and acquire fibrogenic properties. Capsaicin, the active ingredient of red pepper has been extensively studied in recent years for possessing a wide range of pharmacological properties, including analgesic, anti-inflammatory, antiproliferative and anticarcinogenic in a variety of cell types. Therefore, the aim of this study was to investigate the in vitro effects of capsaicin on deactivation, differentiation and proliferation of HSCs, besides studying the possible mechanisms involved. The results showed that capsaicin is capable of inducing the quiescent phenotype in HSCs via PPARγ activation and blockage of TGF-β signaling. Increased levels of antifibrotic cytokines (IFN-γ and IL-10) and the reduction of pro-inflammatory and pro-fibrotic mediators (COX-2, MCP-1, type I collagen) showed that capsaicin inhibits the activation and migration of these cells. Furthermore, the mechanism used by capsaicin to inhibit cell proliferation is via cell cycle arrest. These findings demonstrate that capsaicin has the potential to be a novel therapeutic agent in the treatment of liver fibrosis due to its antifibrogenic and antiproliferative actions. / A fibrose hepática é a resposta cicatricial do fígado a lesões repetidas, caracterizada pelo rompimento da arquitetura hepática associada ao aumento da expressão dos componentes da matriz extracelular. As células estreladas hepáticas (HSCs) desempenham um papel-chave no processo de fibrogênese. No fígado normal, as HSCs encontram-se em sua forma quiescente de depósito de vitamina A. Durante a lesão hepática, essas células passam por uma ativação fenotípica, tornam-se miofibroblastos e adquirem propriedades fibrogênicas. A capsaicina, princípio ativo da pimenta vermelha, tem sido muito estudada nos últimos anos por possuir uma extensa gama de propriedades farmacológicas, que incluem efeitos analgésicos, anti-inflamatórios, antiproliferativos e anticarcinogênicos em uma variedade de tipos celulares. Por essa razão, o objetivo deste estudo foi investigar os efeitos in vitro da capsaicina na inativação, diferenciação e proliferação das HSCs, além de estudar os possíveis mecanismos envolvidos. Os resultados obtidos mostraram que a capsaicina é capaz de induzir o fenótipo quiescente nas HSCs via ativação de PPARγ e bloqueio da sinalização de TGF-β. O aumento nos níveis de citocinas antifibróticas (IFN-γ e IL-10) e a diminuição de mediadores próinflamatórios e pró-fibróticos (COX-2, MCP-1, colágeno tipo I) comprovaram que a capsaicina inibe a ativação e migração dessas células. Além disso, o mecanismo utilizado pela capsaicina para inibir a proliferação celular é via parada do ciclo celular. Essas descobertas mostram que a capsaicina tem potencial para ser um novo agente terapêutico no tratamento da fibrose hepática devido a suas ações antifibrogênicas e antiproliferativas.

Objetivos: Avaliar a associação do estado nutricional com volume expiratório forçado no primeiro segundo (VEF1) em pacientes com Fibrose Cística. Avaliar níveis séricos de albumina, condição sócio-econômica e colonização bacteriana com o VEF1. Métodos: Estudo transversal prospectivo, realizado com 85 pacientes com Fibrose Cística de seis a dezoito anos. Os fatores em estudo foram estado nutricional, níveis séricos de albumina, condições sócio-econômicas e colonização bacteriana. O desfecho clínico avaliado foi VEF1. Resultados: O VEF1 foi associado significativamente com percentual Peso/Estatura, percentil de Índice de massa corpórea (IMC), albumina, colonização por Staphylococcus aureus meticilina resistente (MRSA), insuficiência pancreática e anos de escolaridade da mãe. A análise de regressão demonstrou que, controlado os demais fatores, apresentar o IMC menor que Percentil 10 está associado a uma queda do VEF1 de 25,58% e ter uma albumina menor ou igual a 4,1mg/dL equivale a uma diminuição de 18,6% no VEF1. Ser colonizado por MRSA equivale a uma redução de 14,4 % no VEF1. Colonização por Psedomonas aeruginosa, sexo e anos de estudo da mãe não foram estatisticamente significativos. Albumina de 4,25 mg/dL foi associada como preditora de VEF1 60% com uma sensibilidade de 76,9% e a especificidade de 72,2% e com uma acurácia de 85,7%. Conclusões: Os resultados desse estudo permitem concluir que IMC abaixo do percentil 10 é fator preditivo de redução de VEF1. Contudo, a relação causal entre estado nutricional e função pulmonar não está completamente elucidada.