ALVES FILHO, João Garcia. Clonagem, sequenciamento e caracterização parcial dos genes relacionados à lectina de Vatairea macrocarpa. 2008. 81 f. Dissertação (Mestrado)-Universidade Federal do Ceará, Fortaleza-CE, 2008. / Submitted by Eric Santiago (erichhcl@gmail.com) on 2016-05-25T14:10:53Z No. of bitstreams: 1 2008_dis_jgalvesfilho.pdf: 1626131 bytes, checksum: fbd1ed851edb7139baaf9677e39e516a (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa (jairo@ufc.br) on 2016-07-05T20:59:57Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_dis_jgalvesfilho.pdf: 1626131 bytes, checksum: fbd1ed851edb7139baaf9677e39e516a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-05T20:59:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_dis_jgalvesfilho.pdf: 1626131 bytes, checksum: fbd1ed851edb7139baaf9677e39e516a (MD5) Previous issue date: 2008 / In this paper is made a description of three distinct genes that encode Vatairea macrocarpa lectin and related proteins. The sequences were obtained by amplification of genomic DNA and cDNA of leaves using semi - degenerate primers constructed from the information of the amino acid sequence of VML lectin deposited in GenBank. The result of sequencing rev eals the presence of three different genes, called contig 1, 2 and 3 . The VML lectin corresponds to contig1 long as one assumes that the lectin contains heterogeneities deposited VML or ambiguities arising in the Edman degradation . The translation of cont igs 2 and 3 show sequence identity of 77% compared to VML. Sequences, despite having conserved regions show differences in amino acid N - glycosylation sites, carbohydrate binding sites and metals and the presence of cysteine residues suggests that these pro teins may have other biological activities . The analysis of the sequence obtained by 3 'RACE proved complementary to contig3. Thus, the sequence contig3/contigA hybrid has two cysteine residues in addition to revealing differences in amino acid C - terminal region when aligned with other legume lectins. Phylogenetic analysis revealed that the observed contigs form a monophyletic group and has high similarity with lectins from Robinia pseudoacacia Sohora japonica and, in addition to the lectin - related protein Cladrastis lutea. / No presente trabalho é feita a descrição de três genes distintos que codificam lectinas ou proteínas relacionadas à lectina de Vatairea macrocarpa. As sequências foram obtidas pela amplificação de DNA genômico e cDNA de folhas utilizando primers semi-degenerados construídos a partir da informação da sequência de aminoácidos da lectina VML depositada no GenBank. O resultado do sequenciamento revelou a presença de três contigs. O contig1 corresponde à lectina VML desde que se assuma que a lectina depositada VML contenha heterogeneidades ou ambiguidades decorrentes na degradação de Edman. A tradução dos contigs 2 e 3 mostram identidade de sequência de 77% quando comparadas com VML. As sequências, apesar de apresentar regiões conservadas, mostram diferenças de aminoácidos nos sítios de N-glicosilação, sítios de ligação a carboidrato e metais além da presença de resíduos de cisteína sugerindo que tais proteínas podem ter outras atividades biológicas. A análise da sequência obtida pelo 3’ RACE se mostrou complementar ao contig3. Sendo assim, a sequência híbrida contig3/contigA possui 2 resíduos de cisteína além de revelar diferenças de aminoácidos na região C-terminal quando alinhada com outras lectinas de leguminosas. Análises filogenéticas revelaram que os contigs observados formam um grupo monofiletico e tem alta similaridade com as lectinas de Sohora japonica e Robinia pseudoacacia, além da proteína relacionada à lectina de Cladrastis lutea.

Made available in DSpace on 2017-07-21T19:59:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 LeonardoGoll.pdf: 2578520 bytes, checksum: e4dc5f18aad72bd8d62d5803fed3c4ef (MD5) Previous issue date: 2012-02-29 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / TheColeopterahave a large variationof the sex determinationsystem, being the Xypmechanism considered ancestorfor thisorder. The presenceof a argyrophilous material associated with thesexbivalent is described asresponsible formaintenance andassociation of thesechromosomes.However,there is no consensus in the literature about the nature ofthisargyrophilous material. In addition,few species have been studied using fluorescence in situhybridization (FISH) tothe location of the multigene families, which areuseful and can elucidate the variation in the karyotype and genomic organization of several species.To date,there is no cytogenetic analysis in the genus Lagria.Thus, theaim of this study was tocharacterizecytogeneticallyLagriavillosa, throughconventional andmolecularcytogenetics, forinvestigating the mechanism ofassociationofsex chromosomesXyp,through analysis of nature of argyrophilous material in the lumen of sex bivalent. Additionally, thechromosomalmapping of 5S rDNA multigene families, 18S rDNA and histone H3 genes in L. villosa, was carried out, and showing for the first timein Coleoptera, that genes 18S and 5S DNAs are interspersed. In addition, the analysis oftesticular cellsshowed 2n=18=16+Xypand formulameiotic 2n=8II+Xyp.In this workwe discuss thepossible mechanismsevolvingin the association ofXypsex chromosomes,where it is consideredthat the combination ofsynaptonemalcomplex proteinsmayparticipate in thecorrect segregationofchromosomes.In addition, the fiber-FISH technique with dual probes (18S and 5S) was used for better resolution mapping of these regions in L. villosa, showing that the two DNAs are closely interspersed with varying amounts of both classes of DNA. Association between the two rDNA families have been reported for other species and different hypotheses are raised about the functional organization in these families. / Os Coleoptera apresentam grande variação quanto aos sistemas de determinação sexual, sendo o mecanismo cromossômico do tipo Xyp considerado ancestral para esta ordem. A presença de uma substância argirofílica associada ao bivalente sexual é descrita como sendo a responsável pela manutenção e associação desses cromossomos, porém não existe um consenso na literatura sobre a natureza desse material. Além disso, poucas espécies têm sido analisadas utilizando a Hibridação in situ Fluorescente (FISH) para a localização das famílias multigênicas, as quaissão úteis marcadores e podem elucidar a variação do cariótipo e a organização genômica de diversas espécies.Até o presente momento, não existe análise citogenética em espécies do gênero Lagria. Desta forma, o objetivo desse trabalho foi caracterizar citogeneticamente Lagria villosa, através da citogenética convencional e molecular, investigando o mecanismo de associação dos cromossomos sexuais Xyp, através da análise da natureza do material argirofílico presente no lúmen do bivalente sexual. Adicionalmente, realizou-se o mapeamento cromossômico das famílias multigênicasDNAr 5S, DNAr18S e genes de histona H3 em L. villosa, mostrando pela primeira vez uma associação intercalar dosgenes DNAs 5S e 18S em Coleoptera. Além disso, aanálise de células testiculares evidenciou 2n=18=16+Xype fórmula meiótica 2n=8II+Xyp.No presente trabalho são discutidos os possíveis mecanismos evolvidos na associação dos cromossomos sexuais Xyp, onde é considerado que a associação de proteínas do complexo sinaptonêmico pode participar da correta segregação desses cromossomos. Além disso, atécnica de fiber-FISH com dupla sonda (18S e 5S) foi utilizada para uma melhor resolução do mapeamento dessas regiões genômicas em L. villosa, mostrando que os dois DNAs estão intimamente intercalados com quantidades variáveis de ambas as classes de DNA. Associação entre as duas famílias DNArtem sido relatadopara outras espécies e diferentes hipóteses são levantadas sobre a organização funcional dessas famílias.