Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / La fasciolosis es una importante infección parasitaria en Chile y otros países causada por el tremátodo, Fasciola hepatica, el cual parasita los conductos biliares de las especies de abasto y otros hospederos. Su importancia radica en las grandes pérdidas económicas que ocasiona debido a la disminución de la productividad de los animales infectados, muertes y decomiso de hígados en los mataderos, además de ser una zoonosis. El diagnóstico convencional de esta parasitosis, se realiza mediante exámenes coprológicos de sedimentación que detectan los huevos eliminados por los parásitos adultos. Esta prueba es ineficaz para el diagnóstico de las infecciones tempranas, en que los parásitos son inmaduros y aún no producen huevos (etapa prepatente de la infección). Es así como se han desarrollado pruebas inmunológicas, capaces de detectar en forma temprana esta parasitosis permitiendo la aplicación de tratamientos en forma oportuna, evitando que las fasciolas juveniles lleguen a adultas y éstas contaminen el ambiente con los huevos que salen junto con los excrementos de los animales infectados. Además, permiten el procesamiento de un alto número de muestras a la vez. El propósito de este trabajo fue evaluar la eficiencia diagnóstica de los antígenos enzimáticos purificados: Leucina aminopeptidasa (LAP) y Catepsinas L (CL1 y CL2) con sueros de animales de las especies ovina (90), porcina (60) y equina (60), comparando los resultados con la fracción antigénica de <30 kDa y con el examen post mortem de los animales estudiados. Se empleó para ello la prueba inmunodiagnóstica de ELISA, que ha demostrado ser muy eficiente según la calidad del antígeno que se emplee. El antígeno LAP fue el que presentó los resultados más satisfactorios, aunque sólo con la especie ovina, tanto en la etapa prepatente como patente de la infección con valores de sensibilidad de 86,7% y 93,3%, respectivamente. La especificidad demostrada fue de 86,7% en ambas fases de la infección. Sin embargo, los resultados obtenidos en las otras dos especies con la fracción LAP y con los antígenos enzimáticos catepsina CL1, CL2 fueron poco satisfactorios en las tres especies estudiadas, probablemente debido a una pérdida de actividad biológica a lo largo del tiempo transcurrido en el estudio. Por su parte la fracción de <30 kDa, demostró nuevamente su importancia en el diagnóstico de la fasciolosis, al obtenerse altos valores de sensibilidad de 80% y 93,3% y de especificidad de 93,3% y 96,6% en la etapa prepatente y patente de la infección en ovinos, respectivamente. La sensibilidad y especificidad de la fracción de <30 kDa en el inmunodiagnóstico de la fasciolosis en porcinos y equinos también fueron elevadas (valores entre 80% y 90%). / Proyecto FONDECYT 194-0245 Proyecto de Enlace DID E005/97

El objetivo del presente estudio fue estimar la prevalencia de Fasciola hepatica y de un Paramfistómido en el ganado lechero de los distritos de Huancabamba, Chontabamba y Oxapampa, de la provincia de Oxapampa, Pasco. Se colectaron 408 muestras de heces de bovinos lecheros, durante mayo y noviembre del 2006, las que fueron procesadas en el Laboratorio de Parasitología de la Facultad de Medicina Veterinaria, UNMSM, mediante el método de Sedimentación Rápida; diferenciándose los huevos de ambas especies por sus características morfológicas. En el análisis estadístico se consideró las variables lugar de procedencia y edad (2-4, 5-6 y >6 años). Los resultados mostraron prevalencias de 9.0, 5.4 y 13.4% para F. hepatica y de 18.6, 29.7 y 38.9% para un digeneo de la familia Paramphistomidae en los distritos de Huancabamba, Chontabamba y Oxapampa, respectivamente. Asimismo, se encontró el 7.5, 10 y 12.4% para F. hepatica y 21, 30.8 y 33.1% para un Paramfistómido en animales con 2-4, 5-6 y >6 años, respectivamente. El análisis de regresión logística no reportó asociación entre la presencia de Fasciola hepatica y del paramfistómido con el lugar de procedencia; así mismo no mostró asociación entre el distoma hepático y la edad de los animales; sin embargo para el paramfistómido demostró que los animales mayores de 6 años presentaron mayor probabilidad (p=0,025) de encontrarse infectados que los animales más jóvenes. / The aim of the current research was to estimate the prevalence of Fasciola hepatica and a Paramfistomide in the dairy cattle from the districts of Huancabamba, Chontabamba and Oxapampa, province of Oxapampa, Pasco. 408 samples of dregs of dairy cattle were collected, during May and November, 2006, which were tested in the Laboratory of Parasitology of the Veterinary Medicine School, UNMSM, using methods such as Rapid Sedimentation test; differentiating the eggs of both species for their morphologic characteristics. In the statistical analysis some variables were considered such as the place of origin and age (2-4, 5-6 y >6 years). The results showed prevalences of 9.0, 5.4 and 13.4 % for F. hepatica and of 18.6, 29.7 and 38.9 % for a digeneo of the Paramphistomidae family in the districts of Huancabamba, Chontabamba and Oxapampa, respectively. Likewise, there were found 7.5, 10 and 12.4 % for F. hepatica and 21, 30.8 and 33.1 % for a Paramfistomide in animals with 2-4, 5-6 y >6 years, respectively. The analysis of logistic regression did not report association between the presence of Fasciola hepatica and of the paranfistomido with the place of origin; likewise it did not show association among the hepatic distoma and the age of the animals; nevertheless for the paranfistomido it demonstrated that the animals older than 6 years presented major probability (p=0,025) of being infected than the youngest animals.

Thesis (Ph.D.) - University of Queensland, 2005. / Includes bibliography.

El documento digital no refiere asesor / Determina la prevalencia de Fasciola hepática en bovinos y ovinos del distrito de Vilcashuamán, Ayacucho mediante examen coproparasitológico. Se tomaron 381 y 207 muestras fecales de bovinos y ovinos respectivamente, durante época seca (julio y agosto) y se analizaron mediante la técnica de sedimentación espontánea. Se determina que las prevalencias halladas en bovinos y ovinos del distrito de Vilcashuamán, Ayacucho fueron elevadas; con 35.9 ± 4.8% (139/387) y 39.1 ± 6.7% (81/207), y una prevalencia corregida de 47.6 ± 5.0% y 52.1 ± 6.8%, para bovinos y ovinos respectivamente. Las variables especie, sexo y edad no constituyeron factores de riesgo para distomatosis (p>0.05). Sin embargo, la tasa de infección se incrementó a medida que aumentó la altitud (p<0.01), constituyendo la zona altitudinal de procedencia un factor de riesgo para la enfermedad. / Tesis

Thesis (Ph.D.) - University of Queensland, 2005. / Includes bibliography.

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-17T12:50:42Z No. of bitstreams: 1 Tese_DIP_CamilladeMedeirosdeCarvalho.pdf: 5568046 bytes, checksum: a9d184ab8a961d7a7ec2135b588f09ef (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-17T12:51:16Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_DIP_CamilladeMedeirosdeCarvalho.pdf: 5568046 bytes, checksum: a9d184ab8a961d7a7ec2135b588f09ef (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-17T12:51:24Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_DIP_CamilladeMedeirosdeCarvalho.pdf: 5568046 bytes, checksum: a9d184ab8a961d7a7ec2135b588f09ef (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-17T12:51:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_DIP_CamilladeMedeirosdeCarvalho.pdf: 5568046 bytes, checksum: a9d184ab8a961d7a7ec2135b588f09ef (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa René Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil / Moluscos da família Lymnaeidae Rafinesque, 1815, atuam como hospedeiros intermediários do trematódeo Fasciola hepatica Linnaeus, 1758, agente etiológico da fasciolose, doença parasitária de importância médica e veterinária. As áreas mais críticas onde a doença representa um problema de saúde pública estão localizadas nos países Andinos (Bolívia, Peru, Chile, Equador), região do Caribe (Cuba), norte da África (Egito) e Europa ocidental (Portugal, França e Espanha). Estima-se que mais de 20 milhões de pessoas encontram-se infectadas em todo o mundo. A variabilidade na morfologia da concha e a uniformidade na anatomia interna são características de vários gêneros e espécies da família as quais dificultam a determinação específica. Os objetivos do presente trabalho foram: 1) Analisar a morfologia de espécimes tipo ou topótipos das espécies Galba viatrix d'Orbigny, 1835, G. truncatula (Müller, 1774), G. cubensis Pfeiffer, 1839, Lymnaea rupestris Paraense, 1982 e Pseudosuccinea columella (Say, 1817) e compará-las com limneídeos procedentes do Brasil; 2) Elucidar a localidade tipo de P. columella; 3) Refinar e definir novos caracteres morfológicos que possam ser utilizados na identificação; 4) Rever e retificar a taxonomia dos limneídeos do acervo da coleção Fiocruz-CMM; 5) Elaborar mapas de distribuição geográfica dos limneídeos brasileiros. Através das análises dos topótipos e de exemplares coletados no Brasil foram confirmadas a presença de G. viatrix, G. truncatula, G. cubensis e P. columella. Um neótipo é proposto para P. columella, considerando o desconhecimento da localidade tipo e a invalidade da série tipo para essa espécie. As diferenças evidenciadas entre as espécies de limneídeos foram encontradas principalmente na concha (microescultura e formato), sistema digestivo (estômago e glândulas salivares) e sistema reprodutor (oviduto, próstata, complexo peniano, vesicular seminal e ovotestis). Após avaliação e retificação, o acervo Fiocruz-CMM ficou composto por sete espécies em um total de 98 pontos de coleta, sendo 64 (65.3%) identificados com exemplares da espécie P. columella, 14 (14.3%) com G. truncatula, oito (8.2%) com G. cubensis, sete (7.1%) com G. viatrix, dois (2%) com L. diaphana King, 1830, dois (2%) com L. peregra (Müller, 1774) e um (1%) com L. stagnalis (Linnaeus, 1758). Após o levantamento da ocorrência das espécies no Brasil registrou-se: P. columella em 400 municípios (95,7%), G. viatrix em 10 (2,4%), G. cubensis em seis (1,4%), G. truncatula em três (0,7%) e L. rupestris em um (0,2%). Pela primeira vez, foi elaborado mapas de distribuição de limneídeos no Brasil. / Snails of the family Lymnaeidae act as intermediate hosts of the trematode Fasciola hepatica, the etiologic agent of fasciolosis, a parasitic disease of medical and veterinary importance. The most critical areas where this disease is a problem of public health are located in the Andean countries (Bolivia, Peru, Chile, Ecuador), the Caribbean region (Cuba), North Africa (Egypt) and western Europe (Portugal, France and Spain). It is estimated that over 20 million people are infected worldwide. The variability in shell morphology and uniformity in the internal anatomy of various genera and species are characteristic of the family Lymnaeidae hampering the specific determination. The objectives of this study were to perform: 1) To analyze the morphology of the type specimens or topotypes of species Galba viatrix d'Orbigny, 1835, G. truncatula (Müller, 1774), G. cubensis Pfeiffer, 1839, Lymnaea rupestris Paraense, 1982 and Pseudosuccinea columella (Say, 1817) and compares them with those species occurring in Brazil; 2) Elucidate the type locality of P. columella; 3) Refine and define new morphological characters for lymnaeids species from Brazil; 4) Review and rectify the taxonomy of the lymnaeids samples from Fiocruz-CMM; 5) Develop maps geographic distribution of brazilian lymnaeids. Through the analysis of topotypes and specimens collected in Brazil, we confirmed the presence of G. viatrix, G. truncatula, G. cubensis and P. columella. A new neotype was proposed for P. columella, regarding the unknown type locality and the invalidity of types series to this species. The differences observed between lymnaeids species were mainly found in the shell (microsculpture and shape), digestive system (stomach and salivary glands) and reproductive system (oviduct, prostate, penial complex, seminal vesicle and ovotestis). After rectifying and evaluating the collection Fiocruz-CMM is composed of seven species in a total of 98 sampling points, with 64 (65.3%) identified as P. columella, 14 (14.3%) as G. truncatula, eight (8.2%) as G. cubensis, seven (7.1%) as G. viatrix, two (2%) as L. diaphana King, 1830, two (2%) as L. peregra (Müller, 1774) and one (1%) as L. stagnalis (Linnaeus, 1758). After the research about occurrences of the species in Brazil was registered: P. columella in 400 municipalities (95.7 %), G. viatrix in 10 (2.4 %), G. cubensis in six (1.4 %), G. truncatula in three (0.7 %) and L. rupestris in one (0.2 %). For the first time, maps of the distribution of lymnaeids were developed in Brazil.

Fasciola hepatica é o parasito causador da fasciolose, doença transmitida através dos alimentos, que afeta a produção pecuária e a saúde humana. Embora a doença seja tratada com anti-helmínticos, as possibilidades de reinfecção e o desenvolvimento de resistência ao triclabendazol exigem novas estratégias de controle. Os produtos de excreção/secreção liberados pelo parasito durante a infecção auxiliam a sobrevivência do parasito, protegendo-o das respostas do hospedeiro, permitindo sua sobrevivência durante um longo período no hospedeiro vertebrado e a finalização do ciclo larval no hospedeiro intermediário. Este trabalho teve como objetivo gerar uma análise proteômica dos estágios intra-mamífero, adulto e NEJ (juvenil recentemente desencistado), de F. hepatica. Até o momento, os dados gerados representam o maior número de proteínas identificadas para este parasito. A classificação funcional revelou a presença de proteínas envolvidas em diferentes processos biológicos, muitos dos quais representam achados originais para este organismo. Além disso, os padrões de infecção dos parasitos são frequentemente ligados ao comportamento do hospedeiro intermediário, o qual pode desempenhar um papel na distribuição e acumulação dos parasitos. Os dois proteomas analisados neste trabalho possuem diferenças em abundância de proteínas individuais e entre as categorias funcionais. Estas diferenças podem ser causadas pelas características do ciclo biológico do parasito em cada hospedeiro (duração do ciclo de vida, quantidade de cercárias geradas, durabilidade das metacercárias, competição com outros parasitos), aspectos biológicos (como idade ou espécie) ou variações ambientais (temperatura, umidade, estação). A compreensão dos mecanismos moleculares subjacentes à interação com os hospedeiros intermediário e definitivo pode fornecer dados que auxiliem a busca de novos alvos no diagnóstico e controle da fasciolose. / Fasciola hepatica is the agent of fasciolosis, a foodborne zoonosis that affects livestock production and human health. Although flukicidal drugs are available, re-infection and expanding resistance to triclabendazole demand new control strategies. Parasite compounds released during infection, known as excretory/secretory products, mediate parasite survival within the host. ESP are thought to protect parasites from host responses, allowing them to survive for a long period in the vertebrate host and complete their larval cycle in the intermediate host. This work provides in-depth proteomic analysis of F. hepatica intra-mammalian stages, adult and NEJ (newly existed juvenile), and represents the largest number of proteins identified to date for this parasite. Functional classification revealed the presence of proteins involved in different biological processes, many of which represent original findings for this organism and are can be vital for parasite survival within the host. In addition, infection patterns of parasites are often tied to host behavior, and intermediate host behavior can play a role in shaping the distribution and accumulation of parasites. The two proteomes analyzed here have differences in protein abundance, categories and individual proteins. The differences found here could be due to differences in the biological cycle of the parasite in the host (as duration of the life cycle, amount of cercariae generated, durability of metacercariae, competition with other parasites), biological aspects (as age or species) or environmental variabilities (as temperature, humidity, season). Understanding the molecular mechanisms underlying the complex interaction with the intermediate and definitive host could provide relevant clues, aiding the search for novel targets in diagnosis and control of fasciolosis.

Fasciola hepatica é o parasito causador da fasciolose, doença transmitida através dos alimentos, que afeta a produção pecuária e a saúde humana. Embora a doença seja tratada com anti-helmínticos, as possibilidades de reinfecção e o desenvolvimento de resistência ao triclabendazol exigem novas estratégias de controle. Os produtos de excreção/secreção liberados pelo parasito durante a infecção auxiliam a sobrevivência do parasito, protegendo-o das respostas do hospedeiro, permitindo sua sobrevivência durante um longo período no hospedeiro vertebrado e a finalização do ciclo larval no hospedeiro intermediário. Este trabalho teve como objetivo gerar uma análise proteômica dos estágios intra-mamífero, adulto e NEJ (juvenil recentemente desencistado), de F. hepatica. Até o momento, os dados gerados representam o maior número de proteínas identificadas para este parasito. A classificação funcional revelou a presença de proteínas envolvidas em diferentes processos biológicos, muitos dos quais representam achados originais para este organismo. Além disso, os padrões de infecção dos parasitos são frequentemente ligados ao comportamento do hospedeiro intermediário, o qual pode desempenhar um papel na distribuição e acumulação dos parasitos. Os dois proteomas analisados neste trabalho possuem diferenças em abundância de proteínas individuais e entre as categorias funcionais. Estas diferenças podem ser causadas pelas características do ciclo biológico do parasito em cada hospedeiro (duração do ciclo de vida, quantidade de cercárias geradas, durabilidade das metacercárias, competição com outros parasitos), aspectos biológicos (como idade ou espécie) ou variações ambientais (temperatura, umidade, estação). A compreensão dos mecanismos moleculares subjacentes à interação com os hospedeiros intermediário e definitivo pode fornecer dados que auxiliem a busca de novos alvos no diagnóstico e controle da fasciolose. / Fasciola hepatica is the agent of fasciolosis, a foodborne zoonosis that affects livestock production and human health. Although flukicidal drugs are available, re-infection and expanding resistance to triclabendazole demand new control strategies. Parasite compounds released during infection, known as excretory/secretory products, mediate parasite survival within the host. ESP are thought to protect parasites from host responses, allowing them to survive for a long period in the vertebrate host and complete their larval cycle in the intermediate host. This work provides in-depth proteomic analysis of F. hepatica intra-mammalian stages, adult and NEJ (newly existed juvenile), and represents the largest number of proteins identified to date for this parasite. Functional classification revealed the presence of proteins involved in different biological processes, many of which represent original findings for this organism and are can be vital for parasite survival within the host. In addition, infection patterns of parasites are often tied to host behavior, and intermediate host behavior can play a role in shaping the distribution and accumulation of parasites. The two proteomes analyzed here have differences in protein abundance, categories and individual proteins. The differences found here could be due to differences in the biological cycle of the parasite in the host (as duration of the life cycle, amount of cercariae generated, durability of metacercariae, competition with other parasites), biological aspects (as age or species) or environmental variabilities (as temperature, humidity, season). Understanding the molecular mechanisms underlying the complex interaction with the intermediate and definitive host could provide relevant clues, aiding the search for novel targets in diagnosis and control of fasciolosis.

Made available in DSpace on 2018-08-01T22:56:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_7265_Laila Machado.pdf: 3008300 bytes, checksum: d3b207ad3439153c5340a5e72562426e (MD5) Previous issue date: 2015-07-28 / A fasciolose bovina apresenta alta prevalência na região sul do Espírito Santo e uma das principais características deste processo é a fibrose hepática. Em matadouros frigoríficos é comum a condenação de fígados que apresentam fibrose por fasciolose, mesmo na ausência do parasito. Objetivou-se com este estudo realizar o diagnóstico diferencial de lesões fibróticas em fígados bovinos condenados por esta enfermidade. Foram avaliados macro e microscopicamente fígados bovinos condenados por fasciolose no Sul do Estado do Espírito Santo e consideradas as variáveis: infiltrado inflamatório, fibrose, metaplasia mucoide e macrófagos espumosos nas regiões periportais. Utilizou-se estatística descritiva e teste de Qui-quadrado seguido do teste V de Cramer a 5% de probabilidade. No total, 28 fígados foram analisados e revelaram fibrose periportal e infiltrado inflamatório linfocítico predominantemente discretos. Também se verificou inflamação eosinofílica, predominantemente intensa. Os macrófagos espumosos foram observados em 25% dos casos e a metaplasia mucoide em 39,28%. Houve associação significativa entre fibrose e infiltrado inflamatório linfocítico e vice-versa, entre fibrose e macrófagos espumosos e vice-versa e entre metaplasia e infiltrado inflamatório eosinofílico. Conclui-se com este estudo que a fibrose e o infiltrado inflamatório são as alterações mais frequentes em fígados condenados por fasciolose. Contudo, a fibrose hepática também está associada à presença de macrófagos espumosos, que pode ser decorrente de outras enfermidades. Assim, a fibrose, isoladamente, não deveria ser utilizada como um critério para condenação por fasciolose. Por outro lado, a metaplasia mucoide é uma alteração frequente em animais com esta doença e poderia ser considerada como um critério de julgamento pela histopatologia.

Fasciola hepatica infections cause morbidity and mortality in sheep and have a significant economic impact on farmers. The commonly used diagnostic tests; faecal egg count (FEC), anti-Fasciola antibody ELISA (AbELISA) and the biochemical assays (measuring GLDH and GGT) all have limitations, particularly in detection of pre-patent infections in sheep. A coproantigen ELISA (cELISA) is reported to detect low burdens of infection from 4 weeks post-challenge (wpc) and to only detect current infection. A faecal PCR has been used for early detection of infection, but is limited by inhibitory factors in faecal samples. Loop-mediated isothermal amplification (LAMP) is more resistant to inhibitory factors and has the potential to be a pen-side assay. Triclabendazole (TCBZ) is the drug of choice to treat immature F. hepatica but there have been increasing reports of TCBZ treatment failure in the UK. Treatment outcome is determined using a FEC reduction test (FECRT). A cELISA reduction test (CRT) has recently been proposed. Within this thesis the cELISA, along with FEC, and where feasible the AbELISA and the use of GLDH and GGT concentrations, are evaluated in (1) an experimental challenge model in sheep, (2) individual naturally exposed sheep, in early infection, pre- and post-treatment situations, (3) groups of naturally exposed sheep, including composite samples, in pre- and post-treatment situations and evaluating the FECRT and CRT, lastly a LAMP assay is developed for the detection of F. hepatica, and evaluated against cELISA, FEC and PCR based detection. Two groups of 6 sheep were challenged with F. hepatica metacercarial cysts. In both studies, AbELISA was first to detect infection (3-4 weeks post-challenge (wpc)), followed by cELISA (3-10 wpc) and then FEC (9-10 wpc). Minor fluctuations were seen in both FEC and cELISA levels over both studies and a transient increase in cELISA levels was seen in the first study at 3-8 wpc. All animals were dosed with TCBZ 2 weeks prior to slaughter. The highest FECR was 37% and all sheep had live fluke present in their livers post-mortem. 27 lambs were sampled monthly between June and November with AbELISA, GLDH, GGT, FEC and cELISA tests performed. GLDH and GGT concentrations were above reference ranges from June. AbELISA detected infection in most animals by September and in all but one animal by November. FEC and cELISA both detected some very early positive results, most likely false-positive results, but the majority of animals became positive in November. Twelve lambs were followed to slaughter and all had low burdens of fluke (≤10). A cross-sectional study was conducted including 36 British farms, comprising 812 and 528 sheep pre- and post-treatment, respectively. Low FEC and cELISA results were seen, with better agreement between the two tests pre- than post-treatment. Disagreements between the two tests were more frequently seen where the FEC detected infection but the cELISA did not. This was true both before and after treatment. 80 animals from 2 Scottish farms were confirmed to be infected with liver fluke and given either a TCBZ or closantel treatment and followed for 56 days. A closantel treatment was given to animals that were still infected at 21 days post-treatment (dpt). The highest FECR and CR of the TCBZ-treated groups was 60.3% and 56.4%, respectively, and the lowest FECR and CR of the closantel-treated groups was 83.7% and 94.9%, respectively. A small proportion of closantel-treated animals maintained a low FEC following treatment. Both the FECRT and CRT indicated treatment outcome from 7 dpt. In a postal survey, 41 sample packs were sent to British farmers, of which 25 farmers participated. Samples from 44 and 36 groups were submitted pre- and post-treatment, respectively. Individual and composite faecal samples from each group were tested by FEC and cELISA. Group mean FECs were low and prevalence of infection on farms did not follow a normal distribution. The composite cELISA was more sensitive than the average cELISA, whilst the opposite was true for FEC. The composite cELISA was less sensitive than the composite FEC in low burden situations. A modified version of the composite CRT showed good agreement with the composite FECRT and appears promising in situations where burden was sufficiently high. A faecal LAMP assay, specific to F. hepatica, was developed and evaluated using samples from one of the groups of 6 experimentally challenged animals described above. FEC, cELISA and PCR testing were also performed and compared to the LAMP results. LAMP first detected infection at 3 wpc, followed by cELISA (7 wpc), FEC (10 wpc) and PCR (13 and 14 wpc). The studies within this thesis (1) confirm that cELISA can detect experimental infection of sheep with F. hepatica later than AbELISA but earlier than FEC, and confirm the TCBZ resistant status of a British isolate (Moredun isolate), (2) demonstrate that in animals naturally exposed to F. hepatica, the cELISA does not have an advantage of earlier detection over FEC and is not as sensitive as FEC in established infections (3) show that the modified CRT and composite CRT appear to give a good indication of treatment outcome from 7 dpt, but is of limited use in flocks with a low burden of infection, and (4) demonstrate that a faecal LAMP can detect F. hepatica infection at 3 wpc.