Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:01Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-06-24 / A angiostatina é um potente inibidor de angiogênese gerado a partir da hidrólise limitada do plasminogênio. Existem evidências crescentes de que as catepsinas estão envolvidas na regulação de peptídeos pró- e anti-angiogênicos. As catepsinas cisteíno-peptidases têm sido associadas a inúmeros processos fisiológicos e fisiopatológicos em tecidos oculares. Nossos resultados mostraram uma intensa expressão protéica de plasminogênio em praticamente todos os tecidos oculares cadavéricos e ainda uma diferenciada atividade de cisteíno-peptidases nestes tecidos. Verificamos também que o processamento do plasminogênio endógeno pode ocorrer pela ação de cisteíno-peptidases presentes na córnea. Recentemente nosso grupo descreveu que a catepsina V recombinante é capaz de formar fragmentos angiostáticos a partir da hidrólise do plasminogênio. Na presente tese estendemos os estudos para a catepsina S recombinante e verificamos que esta enzima hidrolisa o plasminogênio em uma única ligação (Leu469-Leu470), gerando dois fragmentos de 60 kDa e 38 kDa. No entanto, este processamento não resulta em peptídeos angiostáticos e nem em atividade de plasmina. Baseado nas ligações hidrolisadas no plasminogênio pela catepsina S (aqui descrita) e pela catepsina V (anteriormente publicada), sintetizamos peptídeos com supressão intramolecular de fluorescência que contém as seqüências que flanqueiam estas ligações clivadas. O estudo resultou no desenvolvimento do substrato Abz- VLFEKKQ-EDDnp que é altamente seletivo para a catepsina V e que não foi hidrolisado nem mesmo pela catepsina L, enzima com a alta homologia à catepsina V. Considerando ainda a restrita distribuição tecidual da catepsina V, este substrato poderá se tornar uma importante ferramenta no monitoramento da atividade desta protease. Como as catepsinas cisteíno-peptidases estão implicadas em uma ampla variedade de processos patológicos, há um crescente estímulo para a caracterização de potentes inibidores e substratos específicos. Nossas investigações demonstraram ainda que o substrato Abz-VLFEKKVYLQ-EDDnp, também derivado d plasminogenio, apresenta uma eficaz atividade inibitória para a catepsina L (Ki app = 0,2 µM). / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2016-08-29T15:35:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_6797_Eder Lana e Silva.pdf: 2095519 bytes, checksum: 1cfc6feafafa1891d9501f8ae993c817 (MD5) Previous issue date: 2013-08-29 / Este trabalho descreve o estudo químico das folhas e dos galhos da espécie Dalbergia miscolobium visando à busca de inibidores das catepsinas K e V. A espécie de estudo é encontrada em regiões de Cerrado do Estado do Piauí ao Estado do Paraná, possuindo alguns relatos sobre as substâncias do tronco e uma isoflavona das folhas. Neste trabalho, os extratos hexânicos e acetato de etila das folhas e dos galhos de D. miscolobium foram submetidos a metodologias cromatográficas visando o isolamento dos constituintes químicos. Foram identificados quatro terpenos: α-amirina (1), β-amirina (2), lupeol (3) e fitol (4), três esteroides: campesterol (5), estigmasterol (6) e sitosterol (7) e isolados seis isoflavonoides: prunetina (8), di-O-metildaidzeina (9), 8-O-metilretusina (10), duartina (11), sativan (12) e salisoflavan (13). Todos os isoflavonoides foram ensaiados na concentração de 100 μM como inibidores das catepsinas K e V e para a primeira, a K, nenhuma substância mostrou-se efetiva, mas para a catepsina V, as isoflavanas 12 e 11 mostraram-se como potentes inibidoras, com valores de 88 e 89% respectivamente.

Submitted by Pedro Barros (pedro.silvabarros@ufpe.br) on 2018-08-02T17:54:03Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Lecílio Soares da Silva Junior.pdf: 2930216 bytes, checksum: 22cc3fdd85e10a6f45cd37b6f91d4458 (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-08-03T20:53:04Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Lecílio Soares da Silva Junior.pdf: 2930216 bytes, checksum: 22cc3fdd85e10a6f45cd37b6f91d4458 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-03T20:53:04Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Lecílio Soares da Silva Junior.pdf: 2930216 bytes, checksum: 22cc3fdd85e10a6f45cd37b6f91d4458 (MD5) Previous issue date: 2014-02-21 / CNPq / Proteases de Cisteína da família papaína (Clã CA, família C1) tem sido relacionadas como fator-chave na patogênese de várias doenças, entre as quais, o câncer, artrite, osteoporose e infecções microbianas. Isto posto, as enzimas dessa família constituem alvo potencial para o desenvolvimento de estratégias que possam levar ao desenvolvimento de novos fármacos para essas patologias. Várias dessas enzimas têm sido caracterizadas nas espécies de Leishmania, tais como a catepsina L (CPA e CPB) e catepsina B (CPC), as quais têm sido atribuídas o papel de fator de virulência, permitindo-lhes evitar e suprimir o sistema imune do hospedeiro. No câncer, observou-se que as catepsinas eram frequentemente reguladas positivamente, principalmente nos tumores mais agressivos, e sido implicadas em vários processos tumorais, como como proliferação, disseminação, degradação da MEC (Matriz Extra Celular), invasão, angiogênese e metástase. Os inibidores das proteases de cisteína que formam ligação covalente irreversível, embora muito potentes, apresentam uma fraca seletividade e seu perfil toxicológico permanece um problema, já dos inibidores contendo um grupo reativo do tipo reversível como a tiossemicarbazida e seus derivados, pode-se esperar que possuam um melhor perfil de segurança no que diz respeito à sua potencial aplicação como medicamento. Neste contexto foram sintetizados sete novos derivados Ariloxaetiltiossemicarbazônicos, através de uma rota sintética composta de três etapas: formação dos intermediários acetais, através de uma reação SN2 entre o bromo acetaldeído dietil acetal e os diferentes compostos fenólico substituídos em meio básico tendo sido utilizado o KI como catalizador, passando em seguida pela hidrólise dos mesmos e concomitantemente condensação com a tiossemicarbazida, sendo obtidos de forma satisfatória. A elucidação estrutural foi realizada através da análise dos dados espectroscópicos de RMN 1H, 13C e IV. Três compostos foram testados frente a forma promastigota da Leishmania amazonensis, apresentandoatividade leishmanicida dose dependente e superior a droga de referência, o Glucantime, o composto Lss2 mostrou-se quase duas vezes mais potente que a Pentamidina, uma droga utilizada nos casos de resistência a primeira. No teste da atividade antiproliferativa as sete substâncias foram testadas em linhagens de células tumorais numa concentração de 25μg/mL, exibindo uma potência citotóxica que variou de 35,5% a 100%, sendo mais sensíveis às linhagens consideradas de tumores mais agressivos, com o composto Lss7 apresentando atividade superior que a Doxorrubicina para todas as linhagens. / Cysteine protease papain family (CA clan, family C1) has been implicated as a key factor in the pathogenesis of various diseases, including, cancer, arthritis, osteoporosis and microbial infections. So, the enzymes of this family are potential target for the development of strategies that can lead to the development of new drugs for these diseases. Many of these enzymes have been characterized in Leishmania species, such as cathepsin L (CPA and CPB) and cathepsin B (CPC), which have been assigned the responsibility of virulence factors, allowing them to avoid and suppress the immune system host. In cancer, it was observed that cathepsins were often upregulated, especially in more aggressive tumors and tumor been implicated in various processes such as proliferation, dissemination, degradation of ECM (extracellular matrix), invasion, angiogenesis and metastasis. Inhibitors of cysteine proteases that form an irreversible covalent bond, although very potent, have a low selectivity and toxicological profile remains a problem, while inhibitors containing a reactive group such as reversible type thiosemicarbazide and its derivatives, one can expect that have a better safety profile with regard to their potential use as a medicament. In this context seven new derivatives have been synthesized Ariloxaetiltiossemicarbazônicos, through a synthetic route comprises three steps: formation of acetals intermediate over the SN2 reaction between bromo acetaldehyde diethyl acetal and the various substituted phenolic compounds under alkaline conditions have been used as KI catalyst, followed by passing the same hydrolysis and condensation with thiosemicarbazide concomitantly being achieved satisfactorily. The structural elucidation was performed by analysis of spectroscopic data of RMN 1H, 13C and IV. Three compounds were tested against Leishmania amazonensis promastigote form, with dose-dependent leishmanicidal activity and greater than the reference drug, Glucantime, Lss2 compound proved to be almost twice as potent as pentamidine, a drug used in cases of resistance to first. In the test the antiproliferative activity of the seven compounds were tested on tumor cell lines at a concentration of 25 mcg/ml, exhibiting a cytotoxic potency that ranged from 35.5% to 100%, being more sensitive to strains considered more aggressive tumors with Lss7 compound showing higher activity than doxorubicin for all strains.

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / La fasciolosis es una importante infección parasitaria en Chile y otros países causada por el tremátodo, Fasciola hepatica, el cual parasita los conductos biliares de las especies de abasto y otros hospederos. Su importancia radica en las grandes pérdidas económicas que ocasiona debido a la disminución de la productividad de los animales infectados, muertes y decomiso de hígados en los mataderos, además de ser una zoonosis. El diagnóstico convencional de esta parasitosis, se realiza mediante exámenes coprológicos de sedimentación que detectan los huevos eliminados por los parásitos adultos. Esta prueba es ineficaz para el diagnóstico de las infecciones tempranas, en que los parásitos son inmaduros y aún no producen huevos (etapa prepatente de la infección). Es así como se han desarrollado pruebas inmunológicas, capaces de detectar en forma temprana esta parasitosis permitiendo la aplicación de tratamientos en forma oportuna, evitando que las fasciolas juveniles lleguen a adultas y éstas contaminen el ambiente con los huevos que salen junto con los excrementos de los animales infectados. Además, permiten el procesamiento de un alto número de muestras a la vez. El propósito de este trabajo fue evaluar la eficiencia diagnóstica de los antígenos enzimáticos purificados: Leucina aminopeptidasa (LAP) y Catepsinas L (CL1 y CL2) con sueros de animales de las especies ovina (90), porcina (60) y equina (60), comparando los resultados con la fracción antigénica de <30 kDa y con el examen post mortem de los animales estudiados. Se empleó para ello la prueba inmunodiagnóstica de ELISA, que ha demostrado ser muy eficiente según la calidad del antígeno que se emplee. El antígeno LAP fue el que presentó los resultados más satisfactorios, aunque sólo con la especie ovina, tanto en la etapa prepatente como patente de la infección con valores de sensibilidad de 86,7% y 93,3%, respectivamente. La especificidad demostrada fue de 86,7% en ambas fases de la infección. Sin embargo, los resultados obtenidos en las otras dos especies con la fracción LAP y con los antígenos enzimáticos catepsina CL1, CL2 fueron poco satisfactorios en las tres especies estudiadas, probablemente debido a una pérdida de actividad biológica a lo largo del tiempo transcurrido en el estudio. Por su parte la fracción de <30 kDa, demostró nuevamente su importancia en el diagnóstico de la fasciolosis, al obtenerse altos valores de sensibilidad de 80% y 93,3% y de especificidad de 93,3% y 96,6% en la etapa prepatente y patente de la infección en ovinos, respectivamente. La sensibilidad y especificidad de la fracción de <30 kDa en el inmunodiagnóstico de la fasciolosis en porcinos y equinos también fueron elevadas (valores entre 80% y 90%). / Proyecto FONDECYT 194-0245 Proyecto de Enlace DID E005/97

A mucopolisacaridoses tipo I é uma doença lisossomal com características multisistêmicas. No sistema cardiovascular observa-se aumento do coração, disfunção das válvulas cardíacas, rigidez e dilatação aórtica. Trabalhos anteriores demonstraram que camundongos MPS I superexpressam catepsina B em múltiplos tecidos, incluindo aqueles do sistema cardiovascular. Neste trabalho hipotetizamos que a catepsina B poderia melhorar as anormalidades encontradas no coração, aorta e valvas de animais com MPS I . Em primeiro lugar, encontramos que a atividade de elastase total em aortas MPS I era elevada. Também, demostramos a ocorrência de liberação de catepsina B dos lisossomos em fibroblastos MPS I, o que poderia degradar os componentes da matriz extracelular da aorta, do coração e das válvulas cardíacas. Em seguida, utilizamos um inibidor de catepsina B in vivo em camundongos MPS I. Após 4 meses de tratamento, a inibição parcial de atividade catepsina B em camundongos tratados reduziu a dilatação da aorta, bem como o espessamento da válvula cardíaca e levou a melhorias nos parâmetros ecocardiográficos, porém nenhum destes parâmetros foram completamente normalizados. Com base nestes resultados, concluímos que as alterações no lisossomo nesta doença levam ao escape de catepsina B para fora da organela, onde esta proteína pode ter múltiplas funções patológicas. A atividade catepsina B pode ser, pelo menos em parte, responsável pelas anormalidades cardiovasculares observadas nesta doença. Este estudo destaca, pela primeira vez, a possibilidade de utilizar inibidores de catepsina como agente terapêutico numa doença de depósito lisossomal. / Mucopolysaccharidosis type I is a lysosomal storage disorder with multisystemic features, including heart enlargement, heart valve dysfunction, and aortic stiffness and dilatation. Previous studies have shown that MPS I mice overexpress cathepsin B in multiple tissues, including those from the cardiovascular system. Here we hypothesized that inhibiton of cathepsin B could ameliorate heart, aorta and valve abnormalities found in MPS I. Firstly we found that total elastase activity in MPS I aorta is elevated. Following that, we demonstrated that cathepsin B leaks from the lysosome in MPS I fibroblasts, and therefore could be degrading extracellular matrix components from aorta, heart, and heart valves. We then used a cathepsin B inhibitor in vivo in MPS I mice. After 4 months of treatment, partial inhibition of cathepsin B activity in treated mice reduced aortic dilatation, as well as heart valve thickening and lead to improvements in echocardiographic parameters, although none of these were completely normalized. Based on these results, we conclude that alterations in the lysosome in this disease lead to leakage of cathepsin B to outside the organelle, where this protein can have multiple pathological roles. Cathespin B activity may be, at least in part, responsible for the cardiovascular abnormalities observed in this disease. This study highlights for the first time the possibility of using cathepsin inhibitors as a therapeutic agent in a lysosomal storage disease.

A mucopolisacaridoses tipo I é uma doença lisossomal com características multisistêmicas. No sistema cardiovascular observa-se aumento do coração, disfunção das válvulas cardíacas, rigidez e dilatação aórtica. Trabalhos anteriores demonstraram que camundongos MPS I superexpressam catepsina B em múltiplos tecidos, incluindo aqueles do sistema cardiovascular. Neste trabalho hipotetizamos que a catepsina B poderia melhorar as anormalidades encontradas no coração, aorta e valvas de animais com MPS I . Em primeiro lugar, encontramos que a atividade de elastase total em aortas MPS I era elevada. Também, demostramos a ocorrência de liberação de catepsina B dos lisossomos em fibroblastos MPS I, o que poderia degradar os componentes da matriz extracelular da aorta, do coração e das válvulas cardíacas. Em seguida, utilizamos um inibidor de catepsina B in vivo em camundongos MPS I. Após 4 meses de tratamento, a inibição parcial de atividade catepsina B em camundongos tratados reduziu a dilatação da aorta, bem como o espessamento da válvula cardíaca e levou a melhorias nos parâmetros ecocardiográficos, porém nenhum destes parâmetros foram completamente normalizados. Com base nestes resultados, concluímos que as alterações no lisossomo nesta doença levam ao escape de catepsina B para fora da organela, onde esta proteína pode ter múltiplas funções patológicas. A atividade catepsina B pode ser, pelo menos em parte, responsável pelas anormalidades cardiovasculares observadas nesta doença. Este estudo destaca, pela primeira vez, a possibilidade de utilizar inibidores de catepsina como agente terapêutico numa doença de depósito lisossomal. / Mucopolysaccharidosis type I is a lysosomal storage disorder with multisystemic features, including heart enlargement, heart valve dysfunction, and aortic stiffness and dilatation. Previous studies have shown that MPS I mice overexpress cathepsin B in multiple tissues, including those from the cardiovascular system. Here we hypothesized that inhibiton of cathepsin B could ameliorate heart, aorta and valve abnormalities found in MPS I. Firstly we found that total elastase activity in MPS I aorta is elevated. Following that, we demonstrated that cathepsin B leaks from the lysosome in MPS I fibroblasts, and therefore could be degrading extracellular matrix components from aorta, heart, and heart valves. We then used a cathepsin B inhibitor in vivo in MPS I mice. After 4 months of treatment, partial inhibition of cathepsin B activity in treated mice reduced aortic dilatation, as well as heart valve thickening and lead to improvements in echocardiographic parameters, although none of these were completely normalized. Based on these results, we conclude that alterations in the lysosome in this disease lead to leakage of cathepsin B to outside the organelle, where this protein can have multiple pathological roles. Cathespin B activity may be, at least in part, responsible for the cardiovascular abnormalities observed in this disease. This study highlights for the first time the possibility of using cathepsin inhibitors as a therapeutic agent in a lysosomal storage disease.

A mucopolisacaridoses tipo I é uma doença lisossomal com características multisistêmicas. No sistema cardiovascular observa-se aumento do coração, disfunção das válvulas cardíacas, rigidez e dilatação aórtica. Trabalhos anteriores demonstraram que camundongos MPS I superexpressam catepsina B em múltiplos tecidos, incluindo aqueles do sistema cardiovascular. Neste trabalho hipotetizamos que a catepsina B poderia melhorar as anormalidades encontradas no coração, aorta e valvas de animais com MPS I . Em primeiro lugar, encontramos que a atividade de elastase total em aortas MPS I era elevada. Também, demostramos a ocorrência de liberação de catepsina B dos lisossomos em fibroblastos MPS I, o que poderia degradar os componentes da matriz extracelular da aorta, do coração e das válvulas cardíacas. Em seguida, utilizamos um inibidor de catepsina B in vivo em camundongos MPS I. Após 4 meses de tratamento, a inibição parcial de atividade catepsina B em camundongos tratados reduziu a dilatação da aorta, bem como o espessamento da válvula cardíaca e levou a melhorias nos parâmetros ecocardiográficos, porém nenhum destes parâmetros foram completamente normalizados. Com base nestes resultados, concluímos que as alterações no lisossomo nesta doença levam ao escape de catepsina B para fora da organela, onde esta proteína pode ter múltiplas funções patológicas. A atividade catepsina B pode ser, pelo menos em parte, responsável pelas anormalidades cardiovasculares observadas nesta doença. Este estudo destaca, pela primeira vez, a possibilidade de utilizar inibidores de catepsina como agente terapêutico numa doença de depósito lisossomal. / Mucopolysaccharidosis type I is a lysosomal storage disorder with multisystemic features, including heart enlargement, heart valve dysfunction, and aortic stiffness and dilatation. Previous studies have shown that MPS I mice overexpress cathepsin B in multiple tissues, including those from the cardiovascular system. Here we hypothesized that inhibiton of cathepsin B could ameliorate heart, aorta and valve abnormalities found in MPS I. Firstly we found that total elastase activity in MPS I aorta is elevated. Following that, we demonstrated that cathepsin B leaks from the lysosome in MPS I fibroblasts, and therefore could be degrading extracellular matrix components from aorta, heart, and heart valves. We then used a cathepsin B inhibitor in vivo in MPS I mice. After 4 months of treatment, partial inhibition of cathepsin B activity in treated mice reduced aortic dilatation, as well as heart valve thickening and lead to improvements in echocardiographic parameters, although none of these were completely normalized. Based on these results, we conclude that alterations in the lysosome in this disease lead to leakage of cathepsin B to outside the organelle, where this protein can have multiple pathological roles. Cathespin B activity may be, at least in part, responsible for the cardiovascular abnormalities observed in this disease. This study highlights for the first time the possibility of using cathepsin inhibitors as a therapeutic agent in a lysosomal storage disease.

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario. / En especies pelágicas como S. lalandi, se ha descrito que la flotabilidad en huevos y embriones es el reflejo de la viabilidad y calidad de estos. Esta característica, se adquiere con la proteólisis del vitelo provocando la hidratación y generando nutrientes para el desarrollo del embrión. Las enzimas involucradas en este proceso son las catepsinas, por lo que han sido propuestas como biomarcadores de calidad en estas especies. Con el objeto de conocer aspectos moleculares involucrados en la adquisición de la flotabilidad en S. lalandi, se evaluó la relación entre la expresión del mRNA que codifica para las catepsinas B, D y L y el nivel de flotabilidad de huevos y embriones tempranos de S. lalandi previamente categorizados como flotantes y no flotantes. Para esto, se colectaron muestras con distintos niveles de flotabilidad y en diferentes etapas del desarrollo. La expresión se evaluó en forma relativa mediante RT-qPCR utilizando partidores diseñados por alineamiento de secuencias de otros peces teleósteos. Los niveles de mRNA de catepsina B fueron mayores en los estadíos de huevo, mórula y blástula, sin diferencias significativas (p> 0,05) entre estadíos. En el estadío de gástrula la expresión de catepsina B disminuyó significativamente, sin presentar cambios en embriones de 24 horas. El mayor nivel de expresión de catepsina D se registró en los huevos no flotantes en comparación con los flotantes. En otros estadíos la expresión de catepsina D no presentó diferencias relacionadas con la flotabilidad de los embriones. Catepsina L, por el contrario, tuvo mayores niveles de expresión en huevos flotantes, así como también en los estadíos de gástrula y embriones de 24 horas con flotabilidad positiva. La expresión del mRNA de estas enzimas en diferentes etapas del desarrollo temprano de S. lalandi confirman su rol descrito en especies pelágicas, cumpliendo funciones específicas en la degradación de las proteínas del vitelo. Además, los perfiles de expresión observados en muestras flotantes y no flotantes permiten proponer a catepsina L como un marcador de buena calidad y a catepsina D como un marcador de mala calidad para los huevos de S. lalandi. / In pelagic species such as S. lalandi, it has been described that the buoyancy in eggs and embryos reflect their viability and quality. This feature is acquired with the yolk proteolysis, which is responsible for the hydration process and generates nutrient for the embryos. The enzymes involved in this process are the cathepsins, which have been proposed as quality biomarkers in these species. In order to know molecular aspects involved in the acquisition of buoyance in S. lalandi, the expression of cathepsin B, D and L was assessed in eggs and early embryos previously classified as floating and non- floating samples. For this, floating and non- floating samples in different developmental stages were collected. Relative expression was evaluated by RT-qPCR using primers designed from sequence alignment of others teleost fish. Cathepsin B mRNA expression levels where higher in eggs, morula and blastocyst stage, with none- statistically significant differences (p> 0,05) between these stages. In gastrula stage, the cathepsin B expression decreased significantly, without changes in 24 hours embryos. The highest expression level of cathepsin D was recorded in non-floating eggs, in comparison with those floating. In others stages, cathepsin D expression did not show differences related with the embryo buoyancy. On the contrary, cathepsin L had higher expression levels in floating eggs as well as in gastrula stage and 24 hours embryos with positive buoyancy. The enzymes mRNA expression during different early development stages in S. lalandi confirms their role described in pelagic species in the yolk protein degradation. In addition, the expression profiles observed in floating and non-floating samples allow proposing to cathepsin L as a good quality marker and cathepsin D as poor quality marker in S. lalandi eggs. / Financiamiento: Proyecto Fondecyt No. 11140639.

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / El pez dorado S. lalandi, es una especie marina pelágica, que posee características favorables para su producción intensiva, tales como altas tasas de crecimiento y de conversión alimenticia, resistencia a las altas densidades de los cultivos, docilidad y demanda internacional creciente (Poortenaar et al., 2001). Sin embargo, en su acuicultura se ha observado una baja sobrevivencia en las etapas de hatchery, la que se atribuiría principalmente a la producción de huevos y embriones de baja calidad (Carnevali et al., 2001). Una de las principales causas de esta deficiencia, sería una deficiente acumulación y procesamiento del vitelo durante la ovogénesis y el desarrollo embrionario temprano. Se ha visto, que las catepsinas B, D y L son las principales enzimas lisosomales involucradas en la proteólisis del vitelo en los vertebrados ovíparos (Carnevali et al., 2006). La expresión de estas enzimas, así como su actividad durante la ovogénesis y la embriogénesis, parecen ser especie-específicas, desconociéndose estos antecedentes en miembros del género Seriola. En este trabajo, se evaluó la expresión de las catepsinas B, D y L durante diferentes etapas del desarrollo embrionario temprano de S. lalandi (E1: huevos recién fecundados, E2: 4 células, E3: 16 células, E4: bástula, E5: 24 HPF y E6: 48 HPF). Se utilizó la técnica RT-qPCR y como estrategia de cuantificación, la normalización de la expresión con los genes constitutivos Tubulina (TUB) y -actina (ACTB), los cuales se validaron como referencia entre seis genes constitutivos candidatos. Las tres catepsinas se expresaron durante los distintos estadíos, presentando un nivel de expresión alto en los primeros estadíos, representando probablemente los niveles de transcritos maternos. Luego, durante la blastulación donde ocurre la MBT, hubo una disminución brusca de la expresión. Posteriormente, la expresión presentó una disminución en catepsina B, no así para catepsina D y L, que aumentaron sus niveles de expresión indicando la expresión cigótica de estas enzimas. Estos resultados concuerdan con la función de estas proteasas en generar las condiciones osmóticas necesarias para la hidratación final del ovocito y además, proveer al embrión de energía durante su periodo de alimentación endógena, a través de los aminoácidos libres generados de la proteólisis del vitelo / Financiamiento: Proyecto Fondecyt Postdoctorado 3120211 y PDACH Área Genética

Made available in DSpace on 2016-08-29T15:35:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_7655_Leandra Gobira.pdf: 1528402 bytes, checksum: d570f2c6d1e6f3959ce5057ffbac18dd (MD5) Previous issue date: 2014-03-27 / Este trabalho descreve o estudo fitoquímico das folhas da espécie Pavonia multiflora visando o isolamento e a identificação de seus metabólitos secundários que possam ser direcionados à busca por atividade biológica. A espécie de estudo é endêmica do Estado do Espírito Santo, e é encontrada na região de Mata Atlântica. Essa espécie ainda não possui registros de estudos fitofarmacológicos na comunidade científica. Portanto, neste trabalho, as partições hexânica e acetato de etila, provenientes do extrato etanólico das folhas de Pavonia multiflora, foram submetidos a diversas metodologias cromatográficas visando o isolamento dos seus constituintes químicos. Tais métodos cromatográficos incluíram Cromatografia em Camada Delgada Comparativa, Cromatografia Líquida em Coluna, Cromatografia em Camada Delgada Preparativa, Cromatografia Líquida de Alta Eficiência e Cromatografia Líquida à Vácuo, as quais tiveram diversificadas fases estacionárias e eluentes. Através de técnicas espectroscópicas e espectrométricas, foram identificadas dez substâncias, sendo quatro compostos fenólicos: o ácido phidroxibenzóico, ácido p-cumárico, ácido vanílico e ácido ferúlico; cinco derivados terpênicos: loliolida, vomifoliol, 4,5 dihidroblumenol A, 3-oxo-&#945;-ionol e o blumenol C; e um triterpeno esterificado derivado do taraxerol, o p-metoxibenzoato de taraxerol. O extrato total foi ensaiado em diferentes concentrações como inibidor das catepsinas K, L e V, o qual apresentou atividade inibitória da catepsina K e V com concentração de 500 &#956;g/mL.