A doença pulmonar obstrutiva crônica é uma doença que leva à obstrução pulmonar geralmente irreversível e está intimamente relacionada com o hábito de fumar. Ao longo dos anos, ocorre destruição dos septos alveolares com a degradação das fibras elásticas e depósito do colágeno que compõe estes septos. Muito tem se discutido sobre a existência de inflamação sistêmica no paciente com DPOC e sobre as suas possíveis manifestações extra-pulmonares . O processo de aterosclerose pode fazer parte deste espectro inflamatório a partir da presença de dano endotelial. O fator de Von Willebrand é um marcador de dano endotelial e pode ser dosado de forma quantitativa e qualitativa. Este trabalho demonstra uma diferença estatisticamente significativa, qualitativa e quantitativamente, entre os níveis de fator de Von Willebrand em tabagistas e em pacientes com DPOC, quando comparados ao grupo controle. Ao analisarmos os pacientes com DPOC dividindo-os em subgrupos considerando quatro classificações distintas: GOLD 2006 (Anexo A), GOLD 2011 (Anexo B), grau de sintomatologia a partir da escala de dispneia MRC modificada (Anexo C) e número de exacerbações no último ano. Observamos uma diferença estatisticamente significativa, em relação ao nível qualitativo do fator de von Willebrand, apenas quando comparamos pacientes com DPOC sintomáticos e não sintomáticos. Demonstramos ainda uma correlação inversa entre o percentual predito de volume expiratório forçado no primeiro segundo (VEF1%) com os níveis qualitativos de fator de von Willebrand. Desta forma, o fator de von Willebrand está aumentado no paciente com DPOC, sendo um possível marcador sérico de sintomatologia relacionado a esta doença. Apesar de não se conseguir definir gravidade dos pacientes com DPOC pelo GOLD, o fator de von Willebrand estabelece uma correlação inversa com os níveis de VEF1%, sugerindo algum tipo de participação na progressão da doença. / Chronic obstructive pulmonary disease (COPD) is an entity that leads to pulmonary obstruction generally irreversible. This is closely related to the smoking habit and leads to alveolar septal destruction with elastic fibres degradation and collagen fibres degradation. There are many argues about the presence of systemic inflammation in the COPD patients. The atherosclerosis process can be part of this inflammation spectrum from the presence of endothelial damage. The von Willebrand factor is a marker of endothelial damage and may be measured in a quantitative and qualitative form. This study demonstrates a significant statistically difference in both qualitative and quantitative form of von Willebrand factor in smokers and COPD patients compared to the control group. When analyzing subgroups in COPD patients considering four different classifications: GOLD 2006, GOLD 2011, degree of symptoms from the MRC dyspnea scale and number of exacerbations in the last year. We observed a significant statistically difference in the level of qualitative von Willebrand factor only in the subgroup of the degree of symptoms. Inverse correlation was observed with the percent of forced expiratory volume in one second (FEV1%) and the qualitative von Willebrand factor. Thus, the von Willebrand factor is increased in COPD patient and could be a possible serum marker of the presence of symptoms in this patient. We cannot identify the severity of COPD patients in GOLD classification using von Willebrand factor, but we established a inverse correlation between qualitative von Willebrand factor and FEV1%, what may suggest a participation in the progression of the disease.

A doença de von Willebrand (DvW) é um defeito qualitativo/quantitativo do fator de von Willebrand (FvW), uma glicoproteína que desempenha um papel essencial na adesão e agregação plaquetária. Cães acometidos por esta diátese hemorrágica hereditária podem ser assintomáticos, ou apresentar sinais clínicos de um problema hemostático primário, especialmente hemorragias em superfícies mucosas. O diagnóstico da DvW baseia-se na quantificação do FvW plasmático, este sendo atualmente realizado por ELISA – antígeno FvW (Ag:FvW). O presente trabalho desenvolveu um ensaio para quantificação do Ag:FvW em amostras caninas e aplicou o teste em uma população de cães. Também determinou intervalos de referência para o ensaio e para tempos de coagulação. O ensaio apresentou R² médio de 0,9810, com coeficientes de variação intra-teste de 1,83 a 4,54% e entre-teste de 9,02 a 17,75%. Valores de referência para Ag:FvW, Tempo de Protrombina e Tempo de Tromboplastina Parcial Ativada obtidos foram de 24,87 a 224,5%, 6,0 a 9,3 segundos e 15,2 a 24,5 segundos, respectivamente. Completando, foi feita uma revisão da literatura sobre a doença em cães. Em conclusão, a determinação do Ag:FvW é um teste essencial para pacientes com histórico de diátese hemorrágica sem coagulopatia e/ou trombocitopenia e pode ser conclusivo para o diagnóstico de DvW. Obter valores de referência para a população local e padronizar os reagentes e instrumentos utilizados são extremamente importantes para um diagnóstico acurado dos distúrbios de hemostasia. Finalmente, um caso clínico de um cão com DvW também foi descrito. / The von Willebrand disease (vWD) is a von Willebrand factor (vWF) quantitative/qualitative defect. This glycoprotein plays a crucial role on platelet adhesion and aggregation. Dogs affected by the hemorrhagic diathesis may be asymptomatics, or show clinical signs of a primary hemostatic disturbance, such as bleeding from mucosal surfaces. The diagnosis is based on vWF quantification by ELISA techniques – vWF antigen (vWF:Ag). The current study developed an assay for vWF:Ag quantification on canine samples, and the test was conducted on a dog population. Also, reference intervals were determined for this assay and for clotting times. The assay achieved a mean R² of 0.9810, with coefficient of variation for intra-assay of 1.83 to 4.54% and for inter-assay of 9.02 to 17.75%. The vWF:Ag assay, Prothrombin Time and activated Partial Thromboplastin Time reference intervals were 24.87 to 224.5%, 6.0 to 9.3 seconds and 15.2 to 24.5 seconds, respectively. In addition, a literature review about the disease in dogs was done. In conclusion, vWF:Ag determination is an essential assay for patients with hemorrhagic diathesis history without coagulopathy and/or thrombocytopenia, and might be conclusive for the disease diagnosis. Reference values for local population and standard protocols are extremely important for an accurate diagnosis of disorders of hemostasis. Finally, a case report of a dog with vWD was also described.

A doença pulmonar obstrutiva crônica é uma doença que leva à obstrução pulmonar geralmente irreversível e está intimamente relacionada com o hábito de fumar. Ao longo dos anos, ocorre destruição dos septos alveolares com a degradação das fibras elásticas e depósito do colágeno que compõe estes septos. Muito tem se discutido sobre a existência de inflamação sistêmica no paciente com DPOC e sobre as suas possíveis manifestações extra-pulmonares . O processo de aterosclerose pode fazer parte deste espectro inflamatório a partir da presença de dano endotelial. O fator de Von Willebrand é um marcador de dano endotelial e pode ser dosado de forma quantitativa e qualitativa. Este trabalho demonstra uma diferença estatisticamente significativa, qualitativa e quantitativamente, entre os níveis de fator de Von Willebrand em tabagistas e em pacientes com DPOC, quando comparados ao grupo controle. Ao analisarmos os pacientes com DPOC dividindo-os em subgrupos considerando quatro classificações distintas: GOLD 2006 (Anexo A), GOLD 2011 (Anexo B), grau de sintomatologia a partir da escala de dispneia MRC modificada (Anexo C) e número de exacerbações no último ano. Observamos uma diferença estatisticamente significativa, em relação ao nível qualitativo do fator de von Willebrand, apenas quando comparamos pacientes com DPOC sintomáticos e não sintomáticos. Demonstramos ainda uma correlação inversa entre o percentual predito de volume expiratório forçado no primeiro segundo (VEF1%) com os níveis qualitativos de fator de von Willebrand. Desta forma, o fator de von Willebrand está aumentado no paciente com DPOC, sendo um possível marcador sérico de sintomatologia relacionado a esta doença. Apesar de não se conseguir definir gravidade dos pacientes com DPOC pelo GOLD, o fator de von Willebrand estabelece uma correlação inversa com os níveis de VEF1%, sugerindo algum tipo de participação na progressão da doença. / Chronic obstructive pulmonary disease (COPD) is an entity that leads to pulmonary obstruction generally irreversible. This is closely related to the smoking habit and leads to alveolar septal destruction with elastic fibres degradation and collagen fibres degradation. There are many argues about the presence of systemic inflammation in the COPD patients. The atherosclerosis process can be part of this inflammation spectrum from the presence of endothelial damage. The von Willebrand factor is a marker of endothelial damage and may be measured in a quantitative and qualitative form. This study demonstrates a significant statistically difference in both qualitative and quantitative form of von Willebrand factor in smokers and COPD patients compared to the control group. When analyzing subgroups in COPD patients considering four different classifications: GOLD 2006, GOLD 2011, degree of symptoms from the MRC dyspnea scale and number of exacerbations in the last year. We observed a significant statistically difference in the level of qualitative von Willebrand factor only in the subgroup of the degree of symptoms. Inverse correlation was observed with the percent of forced expiratory volume in one second (FEV1%) and the qualitative von Willebrand factor. Thus, the von Willebrand factor is increased in COPD patient and could be a possible serum marker of the presence of symptoms in this patient. We cannot identify the severity of COPD patients in GOLD classification using von Willebrand factor, but we established a inverse correlation between qualitative von Willebrand factor and FEV1%, what may suggest a participation in the progression of the disease.

A doença de von Willebrand (DvW) é um defeito qualitativo/quantitativo do fator de von Willebrand (FvW), uma glicoproteína que desempenha um papel essencial na adesão e agregação plaquetária. Cães acometidos por esta diátese hemorrágica hereditária podem ser assintomáticos, ou apresentar sinais clínicos de um problema hemostático primário, especialmente hemorragias em superfícies mucosas. O diagnóstico da DvW baseia-se na quantificação do FvW plasmático, este sendo atualmente realizado por ELISA – antígeno FvW (Ag:FvW). O presente trabalho desenvolveu um ensaio para quantificação do Ag:FvW em amostras caninas e aplicou o teste em uma população de cães. Também determinou intervalos de referência para o ensaio e para tempos de coagulação. O ensaio apresentou R² médio de 0,9810, com coeficientes de variação intra-teste de 1,83 a 4,54% e entre-teste de 9,02 a 17,75%. Valores de referência para Ag:FvW, Tempo de Protrombina e Tempo de Tromboplastina Parcial Ativada obtidos foram de 24,87 a 224,5%, 6,0 a 9,3 segundos e 15,2 a 24,5 segundos, respectivamente. Completando, foi feita uma revisão da literatura sobre a doença em cães. Em conclusão, a determinação do Ag:FvW é um teste essencial para pacientes com histórico de diátese hemorrágica sem coagulopatia e/ou trombocitopenia e pode ser conclusivo para o diagnóstico de DvW. Obter valores de referência para a população local e padronizar os reagentes e instrumentos utilizados são extremamente importantes para um diagnóstico acurado dos distúrbios de hemostasia. Finalmente, um caso clínico de um cão com DvW também foi descrito. / The von Willebrand disease (vWD) is a von Willebrand factor (vWF) quantitative/qualitative defect. This glycoprotein plays a crucial role on platelet adhesion and aggregation. Dogs affected by the hemorrhagic diathesis may be asymptomatics, or show clinical signs of a primary hemostatic disturbance, such as bleeding from mucosal surfaces. The diagnosis is based on vWF quantification by ELISA techniques – vWF antigen (vWF:Ag). The current study developed an assay for vWF:Ag quantification on canine samples, and the test was conducted on a dog population. Also, reference intervals were determined for this assay and for clotting times. The assay achieved a mean R² of 0.9810, with coefficient of variation for intra-assay of 1.83 to 4.54% and for inter-assay of 9.02 to 17.75%. The vWF:Ag assay, Prothrombin Time and activated Partial Thromboplastin Time reference intervals were 24.87 to 224.5%, 6.0 to 9.3 seconds and 15.2 to 24.5 seconds, respectively. In addition, a literature review about the disease in dogs was done. In conclusion, vWF:Ag determination is an essential assay for patients with hemorrhagic diathesis history without coagulopathy and/or thrombocytopenia, and might be conclusive for the disease diagnosis. Reference values for local population and standard protocols are extremely important for an accurate diagnosis of disorders of hemostasis. Finally, a case report of a dog with vWD was also described.

A doença de von Willebrand (DvW) é um defeito qualitativo/quantitativo do fator de von Willebrand (FvW), uma glicoproteína que desempenha um papel essencial na adesão e agregação plaquetária. Cães acometidos por esta diátese hemorrágica hereditária podem ser assintomáticos, ou apresentar sinais clínicos de um problema hemostático primário, especialmente hemorragias em superfícies mucosas. O diagnóstico da DvW baseia-se na quantificação do FvW plasmático, este sendo atualmente realizado por ELISA – antígeno FvW (Ag:FvW). O presente trabalho desenvolveu um ensaio para quantificação do Ag:FvW em amostras caninas e aplicou o teste em uma população de cães. Também determinou intervalos de referência para o ensaio e para tempos de coagulação. O ensaio apresentou R² médio de 0,9810, com coeficientes de variação intra-teste de 1,83 a 4,54% e entre-teste de 9,02 a 17,75%. Valores de referência para Ag:FvW, Tempo de Protrombina e Tempo de Tromboplastina Parcial Ativada obtidos foram de 24,87 a 224,5%, 6,0 a 9,3 segundos e 15,2 a 24,5 segundos, respectivamente. Completando, foi feita uma revisão da literatura sobre a doença em cães. Em conclusão, a determinação do Ag:FvW é um teste essencial para pacientes com histórico de diátese hemorrágica sem coagulopatia e/ou trombocitopenia e pode ser conclusivo para o diagnóstico de DvW. Obter valores de referência para a população local e padronizar os reagentes e instrumentos utilizados são extremamente importantes para um diagnóstico acurado dos distúrbios de hemostasia. Finalmente, um caso clínico de um cão com DvW também foi descrito. / The von Willebrand disease (vWD) is a von Willebrand factor (vWF) quantitative/qualitative defect. This glycoprotein plays a crucial role on platelet adhesion and aggregation. Dogs affected by the hemorrhagic diathesis may be asymptomatics, or show clinical signs of a primary hemostatic disturbance, such as bleeding from mucosal surfaces. The diagnosis is based on vWF quantification by ELISA techniques – vWF antigen (vWF:Ag). The current study developed an assay for vWF:Ag quantification on canine samples, and the test was conducted on a dog population. Also, reference intervals were determined for this assay and for clotting times. The assay achieved a mean R² of 0.9810, with coefficient of variation for intra-assay of 1.83 to 4.54% and for inter-assay of 9.02 to 17.75%. The vWF:Ag assay, Prothrombin Time and activated Partial Thromboplastin Time reference intervals were 24.87 to 224.5%, 6.0 to 9.3 seconds and 15.2 to 24.5 seconds, respectively. In addition, a literature review about the disease in dogs was done. In conclusion, vWF:Ag determination is an essential assay for patients with hemorrhagic diathesis history without coagulopathy and/or thrombocytopenia, and might be conclusive for the disease diagnosis. Reference values for local population and standard protocols are extremely important for an accurate diagnosis of disorders of hemostasis. Finally, a case report of a dog with vWD was also described.

Orientador: Joyce Annichino-Bizzacchi / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-13T01:42:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bittar_LuisFernando_M.pdf: 1309049 bytes, checksum: 8d7bbcbc4a659300d128bc58336cbb88 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: Níveis elevados de fator VIII (FVIII) são um fator de risco independente e prevalente para trombose venosa profunda (TVP), e tem influência do FvW. A ADAMTS13 é responsável pela modulação do tamanho molecular do FvW, clivando os multímeros de altíssimo peso molecular. Alterações moleculares no gene da ADAMTS13 têm correlação com sua atividade. Neste estudo avaliamos a prevalência do polimorfismo A4751G no gene do FvW (região de ligação com a ADAMTS13), os polimorfismos C1797T e C1852G e a mutação C4006T no gene da ADAMTS13 em 435 pacientes com TVP (156M/279F; idade mediana=37) e 580 controles (170M/410F, idade mediana=35). Investigamos a relação entre os genótipos e a dosagem de FVIII e FvW no plasma e o risco de TVP. A dosagem de FVIII:C foi realizada por método coagulométrico de um estágio, e as dosagens de FVIII:Ag e FvW:Ag por método imunoenzimático. As alterações moleculares foram determinadas por PCR e digestão com enzimas específicas, ou SSCP e sequenciamento para confirmação. Pacientes com TVP mostraram níveis significantemente aumentados de FVIII:C (203.7 UI/dl vs. 127 UI/dl; p<0.001), FVIII:Ag (109.6 UI/dl vs. 82.4 UI/dl; p<0.001) e FvW:Ag (154.2 UI/dl vs. 108 UI/dl; p<0.001) quando comparados com o grupo controle. Não houve diferença significativa entre os grupos na prevalência das alterações moleculares estudadas. Os indivíduos com genótipo AG (FvW A4751G) apresentavam níveis significativamente reduzidos de FVIII:C (p=0.04). Embora também tenha demonstrado uma discreta associação com níveis diminuídos de FvW:Ag, esta não foi estatisticamente significativa (p= 0.07). Os indivíduos com genótipo CG (ADAMTS13 C1852G) apresentavam níveis significativamente aumentados de FVIII:Ag (p=0.05) e FvW:Ag (p= 0.01). Apesar da relação com diminuição do FVIII o polimorfismo A4751G não mostrou um efeito protetor para TVP. O polimorfismo ADAMTS13 C1852G está associado à diminuição desta metaloprotease, e sua associação com níveis aumentados de FVIII:Ag e FvW:Ag neste estudo favorece essa hipótese. / Abstract: Elevated levels of factor VIII (FVIII) are a prevalent and independent risk factor for deep venous thrombosis (DVT), and are affected by von Willebrand factor (vWF) levels. ADAMTS13 is responsible for the modulation of the molecular size of vWF, cleaving the ultra large multimers. Mutations and polymorphisms in the ADAMTS13 gene are related with its activity. This study evaluated the prevalence of polymorphism A4751G in the vWF gene, polymorphisms C1797T, C1852G and the mutation C4006T in the ADAMTS13 gene in 435 patients with DVT and 580 healthy controls. Subsequently, we investigated the relationship between the genotypes and plasma levels of FVIII and vWF and DVT risk. FVIII:C was measured by a one-stage clotting method, and FVIII:Ag and vWF:Ag were measured by chromogenic method. The molecular changes were determined by restriction endonucleases or single strand conformation polymorphism followed by sequencing. Statistical test:U Mann-Whitney, = 0.05. Patients with DVT had higher plasma levels of FVIII:C (mean 203,7 UI/dl vs. 127 UI/dl; p<0.001), FVIII:Ag (mean 109,6 UI/dl vs. 82,4 UI/dl; p<0.001) and vWF:Ag (154,2 UI/dl vs. 108 UI/dl; p<0.001) when compared to controls. We observed no statistical difference in the prevalence of all molecular changes studied between patients and controls. A4751G heterozygotes had significantly reduced levels of FVIII:C (p=0,04). Althought there was a slight association with reduced levels of vWF: Ag, this association was not statistically significant (p= 0,07). C1852G heterozygotes had significantly elevated levels of FVIII:Ag (p=0.05) and vWF:Ag (p= 0,01). Despite the relative decline of FVIII:C with the A4751G polymorphism there was no protective effect for DVT. The C1852G polymorphism is associated with a reduction of ADAMTS13, and its association with increased levels of FVIII: Ag and vWF: Ag observed in this study supports this hypothesis. / Mestrado / Biologia Estrutural, Celular, Molecular e do Desenvolvimento / Mestre em Fisiopatologia Médica

Orientador: Margareth Castro Ozelo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-15T13:42:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Damian_GuilhermeBenedini_M.pdf: 1979799 bytes, checksum: 8b7242b6fe37a1f5f52bc6f26ca9d829 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: A doença de von Willebrand (DVW) é a doença hemorrágica hereditária mais freqüente. Dentre os subtipos relacionados à DVW, o tipo 2N apresenta exclusivamente diminuição da afinidade do fator de von Willebrand (FVW) ao fator VIII (FVIII). Como conseqüência, esses pacientes apresentam redução do FVIII plasmático. Por essa razão, comumente esses casos são diagnosticados erroneamente como portadores de hemofilia A. Em um recente estudo brasileiro, foi observado que cerca de 10% dos casos de hemofílicos A leve sem antecedente familiar prévio para a doença, na verdade tratavam-se de DVW tipo 2N (SIMON & ROISENBERG, 2004). Para o diagnóstico de certeza da DVW tipo 2N, a avaliação molecular é o método mais utilizado, uma vez que os testes laboratoriais confirmatórios não apresentam boa reprodutividade. Esse estudo tem como objetivos fazer a investigação molecular de casos previamente diagnosticados ou com suspeita de DVW tipo 2N baseados na história clínica, familiar e dados laboratoriais. Além disso, pacientes diagnosticados com hemofilia A moderada e leve, foram investigados para a presença das quatro mutações mais freqüentes relacionadas à DVW tipo 2N. Esse estudo avaliou oito casos não relacionados de paciente com suspeita ou diagnóstico de DVW tipo 2N, acompanhados no Hemocentro da UNICAMP (Campinas, SP) e no Hemocentro do Espírito Santo (Vitória, ES). Os oito casos foram investigados para mutações presentes na região que corresponde ao local do sítio de ligação do FVIII ao FVW, localizada entre os éxons 18 a 27 do gene do FVW. Apenas um caso foi conclusivo, com a presença da mutação em homozigose R816W no gene do FVW Essa mutação corresponde à 11% dos casos de DVW tipo 2N. Os outros sete casos foram exaustivamente investigados para mutações nessa região, incluindo o seqüenciamento do DNA genômico e codificante da região entre éxon 18 a 27 do gene do FVW e não foram conclusivos. Esses mesmos casos foram investigados através do seqüenciamento do gene do FVIII, para avaliar a presença de mutação associada à hemofilia A. Em um dos casos do sexo feminino, foi possível a identificação de uma mutação em homozigose G265 +1 G>T no íntron 3 do gene do FVIII. Trata-se de uma mutação não descrita no local de um sítio doador de splice. Foram avaliados ainda 67 pacientes não relacionados com diagnóstico de hemofilia A leve ou moderada para as quatro mutações mais freqüentes relacionadas à DVW tipo 2N. Em nenhum desses casos essas mutações estavam presente, nem mesmo em heterozigose. Em conclusão, na avaliação de oito casos não relacionados com suspeita de DVW tipo 2N, em apenas um caso esse diagnóstico foi confirmado. Em outro caso do sexo feminino foi confirmado o diagnóstico de hemofilia A grave/moderada. Ao contrário do que foi observado em outra população brasileira estuda, entre os pacientes diagnosticados com hemofilia A leve e moderada aqui estudos, as quatro mutações mais freqüentes na região do sítio de ligação do FVIII ao FVW estavam ausentes em todos os casos. O diagnóstico de certeza entre a DVW tipo 2N e hemofilia A é de extrema importância para o tratamento correto desses casos e para o aconselhamento genético. A investigação molecular continua sendo a melhor maneira para a diferenciação desses casos / Abstract: The von Willebrand disease (VWD) is the most frequently hemorrhagic disease. Among the different types of VWD, the type 2N VWD is characterized by a markedly decreased affinity of von Willebrand factor (VWF) to factor VIII (FVIII). As consequence, the clearance of FVIII is accelerated and these patients while maintaining the concentration of VWF and its ability to normal platelet aggregation have reduced plasma FVIII. Frequently these cases are misdiagnosed as carriers of hemophilia A (HA). In a recent Brazilian study, it was observed that about 10% of cases of mild hemophilia A with no family history, it was actually type 2N VWD (SIMON & ROISENBERG, 2004). The molecular investigation is the best method to confirm the diagnosis of type 2N VWD once the confirmatory test, VWF:FVIII binding assay (VWF:FVIIIB) it is not reproducible. This study aims investigate the molecular diagnosis of cases previously diagnosed or with suspect of type 2N VWD, based on clinical and family history, and laboratorial data. Furthermore, patients diagnosed with mild or moderate hemophilia A, were investigated for the presence of the four most frequent mutations related to type 2N VWD. The study evaluated eight unrelated cases with suspect or diagnosis of type 2N VWD followed at Hemocentro UNICAMP (Campinas, SP) and Hemocentro do Espírito Santo (Vitória, ES). The eight cases were investigated for mutations in the region that corresponds to the location of the binding site of FVIII to VWF, located between exons 18 to 27 of the VWF gene. Only one case was conclusive, with the presence of the R816W mutation in the VWF gene. This mutation corresponds to 11% of type 2N VWD. The other seven cases were repeatedly investigated for mutations in this region, including the sequencing of genomic DNA and the coding region of exon 18 to 27 of the VWF gene and were not conclusive. These same cases were investigated by sequencing of the FVIII gene to assess the presence of mutations associated with hemophilia A. In one female case, it was possible to determine the presence in homozigose of a mutation G265 +1 G>T, a donor splicing region in the intron 3 of the FVIII gene. This mutation was not previously described. In addition, we evaluated 67 unrelated patients with diagnosis of mild or moderate hemophilia A for the four most frequent mutations related to type 2N VWD. None of these cases showed the presence of these mutations, even in heterozygosis. In conclusion, the evaluation of eight unrelated cases for type 2N VWD showed that just one case this diagnosis was confirmed. Different to what was observed in another Brazilian population studied, among mild and moderate hemophilia A followed at the Hemocentro UNICAMP, the four mutations in the binding site of FVIII to VWF were absent in all the cases. The confirmatory diagnosis between type 2N VWD and hemophilia A is extremely important for the correct treatment and the appropriate genetic counselling. The molecular investigation remains the best way to differentiate these cases / Mestrado / Clinica Medica / Mestre em Clinica Medica

Made available in DSpace on 2014-06-12T18:31:35Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo8121_1.pdf: 4893176 bytes, checksum: dcfd4807444393253e57d529e1936a2c (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2007 / Com o objetivo de se verificar a existência de alterações da morfologia plaquetária, de seus antígenos de superfície, da agregação das plaquetas e da dosagem do antígeno do Fator de von Willebrand (FvW:Ag) em portadores de esquistossomose mansônica na sua forma hepatoesplênica compensada, foram estudados 45 indivíduos, adultos, entre 22 a 83 anos, de ambos os sexos, com ou sem plaquetopenia, sem comorbidades, com sorologia para hepatite viral B ou C negativa, sem passado transfusional nos últimos 90 dias que antecederam à coleta do sangue, não alcoolatras, nem usuários de medicamentos hepatotóxicos, anticoagulantes ou antiagregantes plaquetários. Foram realizados hemograma completo, ultra-som do abdome superior, endoscopia digestiva alta, agregação plaquetária com ADP, Epinefrina, Colágeno e Ristocetina, Imunofenotipagem por citometria de fluxo com os anticorpos CD42b e CD41. O antígeno do FvW foi determinado pelo teste de ELISA (Stago diagnostica). Após o estudo, constatou-se que mais de 90% dos pacientes não apresentavam alterações dos antígenos de membrana GPIb e IIb/IIIa avaliados pelos anticorpos CD42b e CD41 respectivamente; o número de plaquetas encontrado, na maioria dos pacientes, foi abaixo de 100.000/mm3, levando a hipoagregação com agonistas na maioria dos casos. O FvW:Ag nos pacientes analisados foi elevado ou muito elevado. Estatisticamente, encontrou-se associação inversa significativa para variáveis do número de plaquetas, diâmetro longitudinal do baço e o FvW:Ag (p<0.05). Houve associação entre o FvW:Ag, o diâmetro longitudinal do baço e a presença de varizes de esôfago. Concluiu-se que a elevação do FvW:Ag e os valores numericamente normais do CD 42b, encontrados neste trabalho, parecem manter a adesão plaquetária estável; que a agregação, também parece está normal quando ligada ao fibrinogênio, assim como, a expressão das GPIIb/IIIa pelos resultados obtidos com o CD41, e por fim que os testes de agregação plaquetária, induzidos pelos agonistas (ADP; colágeno; ristocetina e adrenalina) e realizados pelo agregômetro PACKS, mostraram-se alterados nos pacientes com esquistossomose porque, apesar da grande especificidade, pois são dependentes de um número de plaquetas normal. Estes achados explicam a não ocorrência de sintomatologia decorrente da plaquetopenia tais como: petéquias, equimoses, gengivorragias, em pacientes com esquistossomose hepatoesplênica

A doença de von Willebrand (DvW) é uma coagulopatia hereditária, causada por defeitos qualitativos ou quantitativos do fator de von Willebrand. O tratamento e a prevenção das intercorrências da DvW são bastante dispendiosos e, em geral, se baseiam na administração de concentrado de Fator VIII/FvW (CFVIII/FvW) e/ou da Desmopressina (DDAVP). Em muitas situações, o DDAVP é um tratamento eficaz que não expõe os pacientes aos riscos de contaminação viral e apresenta custo inferior quando comparado ao CFVIII/FvW. No entanto, a dificuldade de diagnóstico e classificação da DvW, bem como o baixo número de pacientes que se submetem ao teste para avaliação da resposta ao DDAVP, restringem a indicação do DDAVP como alternativa terapêutica para esses pacientes. O objetivo deste estudo foi avaliar retrospectivamente a indicação, o uso e o custo dos medicamentos no tratamento de pacientes com DvW com DDAVP e CFVIII/FvW no Hemocentro de Belo Horizonte no período entre 2011 a 2013. Este estudo incluiu 124 (24,22%) pacientes com DvW atendidos no hemocentro. Em 18 pacientes (14,52%) o diagnóstico de DvW não pode ser confirmado. Doze pacientes (9,68%) não puderam ser classificados e 73 foram classificados como tipo 1, 19 como tipo 2 e 2 pacientes como tipo 3. Oitenta e um pacientes fizeram o teste de DDAVP, sendo que 87,65% foram considerados responsivos. Nos pacientes tipo 1, a taxa de resposta ao DDAVP foi de 92%. Quase 32% dos pacientes tipo 1 não realizaram o teste. No período avaliado, foram utilizadas 3.794mcg de DDAVP (R$13.165,18) e 1.582.250 UI de CFVIII/FvW (R$1.075.930,00). Vinte por cento dos pacientes responsivos ao DDAVP utilizaram CFVIII/FvW em indicações onde o DDAVP poderia ter sido considerado (69.200UI de CFVIII/FvW versus 131 ampolas de DDAVP). Nos pacientes potencialmente responsivos ao DDAVP 108.700UI de CFVIII/FvW (R$73.916,00) poderiam ter sido substituídas por 247 ampolas de DDAVP (R$3.428,36). A escolha do DDAVP nessas situações poderia representar uma economia de 95,7% do valor gasto no tratamento do grupo de 27 pacientes responsivos e potencialmente responsivos ao DDAVP e 10,6% do valor total gasto para todo o tratamento dos pacientes no período do estudo. Estudos mais complexos de farmacoeconomia serão necessários para avaliar a magnitude da economia gerada com esse uso. O presente estudo mostrou que o DDAVP é uma alternativa terapêutica de menor custo, cuja indicação e utilização podem ser ampliadas no tratamento dos pacientes com DvW. Dessa maneira, a implementação de estratégias visando melhorar o diagnóstico, a classificação da doença, o acesso à testagem quanto à resposta ao DDAVP, bem como a conscientização dos profissionais de saúde e pacientes, quanto ao custo e segurança do DDAVP podem contribuir para o uso racional dos recursos destinados a essa parcela da população. / Von Willebrand disease (VWD) is a hereditary coagulopathy caused by qualitative or quantitative defects on von Willebrand factor. The treatment and the prevention of VWD complications is quite expensive and is generally based on the administration of vWF:FVIII Concentrates and/or Desmopressin (DDAVP). In many situations, DDAVP is an effective treatment that does not expose patients to viral contamination risks and presents a lower cost when compared to vWF:FVIII concentrates. However, the difficulty of diagnosis and classification of VWD, as well as the low number of patients tested to their responsiveness to DDAVP, restrict the use of DDAVP as an alternative treatment for these patients. The aim of this study was to evaluate retrospectively the clinical indications, the use and the cost of treatment of VWD patients with DDAVP and vWF:FVIII concentrates in the Blood Center of Belo Horizonte between 2011 and 2013. This study enrolled 124 (24.22%) VWD patients attended at the Blood Center.For18 (14.52%) patients, the diagnosis of VWD could not be confirmed. Twelve patients (9.68%) could not be classified and 73patients were classified as type 1, 19 as type 2 and 2 as type 3. Eighty-one patients were tested for DDAVP response and 87.65% (n=71) were considered responsive for the treatment. For type 1 VWD patients, the response rate to DDAVP was 92%. Almost 32% of type 1 VWD patients were not tested. In the period evaluated, 3,794mcg of DDAVP (R$ 13,165.18) and 1,582,250 IU of vWF:FVIII concentrates (R$ 1,075,930.00) were used. Between the cases with clinical indication of DDAVP use, 20% patients used vWF:FVIII concentrates (69.200UI of vWF:FVIII versus 131ampoules of DDAVP). In patients with good responsive to DDAVP, 108,700 IU of vWF:FVIII concentrates used (R$ 73,916.00) could be replaced by 247 ampoules of DDAVP (R$ 3,428.36). The choice of DDAVP in these situations could represent an economy of 95.7% of the value spent on the treatment of the 27 responsive and potentially responsive patients to DDAVP and 10.6% of the total value spent for the entire treatment of patients in the study period. More detailed studies of pharmacoeconomics are necessary to assess the magnitude of the economy generated by the use of DDAVP. This study demonstrated that DDAVP is a lower cost therapeutic alternative whose indication and use can be enhanced in the treatment of VWD patients. In this context, adoption of strategies to improve the differential diagnosis, expand the DDAVP responsiveness test, and aware health professionals and patients about the costs and safety use of DDAVP, could contribute to the rational use of resources designated to treatment of VWD.

A doença de von Willebrand (DvW) é uma coagulopatia hereditária, causada por defeitos qualitativos ou quantitativos do fator de von Willebrand. O tratamento e a prevenção das intercorrências da DvW são bastante dispendiosos e, em geral, se baseiam na administração de concentrado de Fator VIII/FvW (CFVIII/FvW) e/ou da Desmopressina (DDAVP). Em muitas situações, o DDAVP é um tratamento eficaz que não expõe os pacientes aos riscos de contaminação viral e apresenta custo inferior quando comparado ao CFVIII/FvW. No entanto, a dificuldade de diagnóstico e classificação da DvW, bem como o baixo número de pacientes que se submetem ao teste para avaliação da resposta ao DDAVP, restringem a indicação do DDAVP como alternativa terapêutica para esses pacientes. O objetivo deste estudo foi avaliar retrospectivamente a indicação, o uso e o custo dos medicamentos no tratamento de pacientes com DvW com DDAVP e CFVIII/FvW no Hemocentro de Belo Horizonte no período entre 2011 a 2013. Este estudo incluiu 124 (24,22%) pacientes com DvW atendidos no hemocentro. Em 18 pacientes (14,52%) o diagnóstico de DvW não pode ser confirmado. Doze pacientes (9,68%) não puderam ser classificados e 73 foram classificados como tipo 1, 19 como tipo 2 e 2 pacientes como tipo 3. Oitenta e um pacientes fizeram o teste de DDAVP, sendo que 87,65% foram considerados responsivos. Nos pacientes tipo 1, a taxa de resposta ao DDAVP foi de 92%. Quase 32% dos pacientes tipo 1 não realizaram o teste. No período avaliado, foram utilizadas 3.794mcg de DDAVP (R$13.165,18) e 1.582.250 UI de CFVIII/FvW (R$1.075.930,00). Vinte por cento dos pacientes responsivos ao DDAVP utilizaram CFVIII/FvW em indicações onde o DDAVP poderia ter sido considerado (69.200UI de CFVIII/FvW versus 131 ampolas de DDAVP). Nos pacientes potencialmente responsivos ao DDAVP 108.700UI de CFVIII/FvW (R$73.916,00) poderiam ter sido substituídas por 247 ampolas de DDAVP (R$3.428,36). A escolha do DDAVP nessas situações poderia representar uma economia de 95,7% do valor gasto no tratamento do grupo de 27 pacientes responsivos e potencialmente responsivos ao DDAVP e 10,6% do valor total gasto para todo o tratamento dos pacientes no período do estudo. Estudos mais complexos de farmacoeconomia serão necessários para avaliar a magnitude da economia gerada com esse uso. O presente estudo mostrou que o DDAVP é uma alternativa terapêutica de menor custo, cuja indicação e utilização podem ser ampliadas no tratamento dos pacientes com DvW. Dessa maneira, a implementação de estratégias visando melhorar o diagnóstico, a classificação da doença, o acesso à testagem quanto à resposta ao DDAVP, bem como a conscientização dos profissionais de saúde e pacientes, quanto ao custo e segurança do DDAVP podem contribuir para o uso racional dos recursos destinados a essa parcela da população. / Von Willebrand disease (VWD) is a hereditary coagulopathy caused by qualitative or quantitative defects on von Willebrand factor. The treatment and the prevention of VWD complications is quite expensive and is generally based on the administration of vWF:FVIII Concentrates and/or Desmopressin (DDAVP). In many situations, DDAVP is an effective treatment that does not expose patients to viral contamination risks and presents a lower cost when compared to vWF:FVIII concentrates. However, the difficulty of diagnosis and classification of VWD, as well as the low number of patients tested to their responsiveness to DDAVP, restrict the use of DDAVP as an alternative treatment for these patients. The aim of this study was to evaluate retrospectively the clinical indications, the use and the cost of treatment of VWD patients with DDAVP and vWF:FVIII concentrates in the Blood Center of Belo Horizonte between 2011 and 2013. This study enrolled 124 (24.22%) VWD patients attended at the Blood Center.For18 (14.52%) patients, the diagnosis of VWD could not be confirmed. Twelve patients (9.68%) could not be classified and 73patients were classified as type 1, 19 as type 2 and 2 as type 3. Eighty-one patients were tested for DDAVP response and 87.65% (n=71) were considered responsive for the treatment. For type 1 VWD patients, the response rate to DDAVP was 92%. Almost 32% of type 1 VWD patients were not tested. In the period evaluated, 3,794mcg of DDAVP (R$ 13,165.18) and 1,582,250 IU of vWF:FVIII concentrates (R$ 1,075,930.00) were used. Between the cases with clinical indication of DDAVP use, 20% patients used vWF:FVIII concentrates (69.200UI of vWF:FVIII versus 131ampoules of DDAVP). In patients with good responsive to DDAVP, 108,700 IU of vWF:FVIII concentrates used (R$ 73,916.00) could be replaced by 247 ampoules of DDAVP (R$ 3,428.36). The choice of DDAVP in these situations could represent an economy of 95.7% of the value spent on the treatment of the 27 responsive and potentially responsive patients to DDAVP and 10.6% of the total value spent for the entire treatment of patients in the study period. More detailed studies of pharmacoeconomics are necessary to assess the magnitude of the economy generated by the use of DDAVP. This study demonstrated that DDAVP is a lower cost therapeutic alternative whose indication and use can be enhanced in the treatment of VWD patients. In this context, adoption of strategies to improve the differential diagnosis, expand the DDAVP responsiveness test, and aware health professionals and patients about the costs and safety use of DDAVP, could contribute to the rational use of resources designated to treatment of VWD.