Made available in DSpace on 2014-06-12T15:53:15Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo5106_1.pdf: 3183906 bytes, checksum: 2e940415f50a8b240c639a58645d7142 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2004 / A levedura Kluyveromyces marxianus Hansen tem sido apontada como sistema biológico para estudos genéticos e biotecnológicos baseado nas suas vantagens fisiológicas e bioquímicas. Contudo, a ausência de plasmídios naturais e o pouco conhecimento sobre sua genética e comportamento têm sido os principais entraves para estudos mais aplicados. Sua capacidade de utilizar lactose como fonte de carbono possibilita o uso do soro de queijo, atualmente um importante poluente da indústria de laticínios, como matéria-prima para outros processos industriais. Buscou-se, portanto, construir vetores plasmidiais eficientes e compatíveis com a levedura K. marxianus para avaliar a capacidade de linhagens recombinantes utilizarem o soro de queijo como meio de crescimento de baixo custo no processo de expressão de genes de interesse industrial, tais como enzimas extracelulares ou peptídeos antimicrobianos. Este trabalho permitiu verificar que: um método simples e rápido de transformação mediado por acetato de lítio permitiu um aumento da eficiência de transformação de células de K. marxianus em 2,5 vezes em relação ao método convencional; o crescimento de células de leveduras recombinantes transformadas com pDblet ou seus derivados não foi afetado pela alta concentração de lactose no soro de queijo, apresentando perfil de crescimento similar ao de células parentais. Esses dados sugerem a possibilidade do uso de linhagens recombinantes de Kluyveromyces marxianus portadoras de plasmídios baseados no pDblet para processos biotecnológicos a partir do soro de queijo advindo das indústrias de laticínios

Os fungos filamentosos são utilizados em larga escala na produção de produtos biotecnológicos na indústria devido a sua versatilidade e um dos exemplos são as peptidases que representam uma das principais classes de enzimas hidrolíticas. As peptidases são hidrolases que catalisam a quebra das ligações peptídicas das proteínas e que nos microrganismos são responsáveis por funções fisiológicas e patológicas, além de ter muitas aplicações em diversos campos industriais. Neste estudo foram analisados diferentes bioprocessos fermentativos para produção de peptidases pelo fungo Aspergillus terreus. Este microrganismo foi capaz de produzir peptidases em ambos os bioprocessos, sólido ou submerso, obtendo melhor performance e o pico de produção no bioprocesso fermentativo sólido de valor 677U/mL, nas condições 5g de farelo de trigo, 72 horas, 30°C e 75% de umidade. Utilizando o bioprocesso fermentativo submerso também obtivemos resultados satisfatórios com pico de atividade de 360U/mL, nas condições de meio padrão suplementado com Caseína 0,5%, 72 horas e 35°C. A caracterização bioquímica parcial dos extratos dos dois bioprocessos mostrou semelhanças entre algumas características das enzimas produzidas como a faixa extensa de pH ótimo abrangendo regiões ácidas, neutra e alcalinas, temperatura ótima pontual de 55°C e perfil de inibição pelo PMSF e EDTA. Contudo, os perfis de estabilidade (pH e temperatura) e comportamento frente a adição de íons apresentaram respostas diferentes entre si, o que sugere a produção de enzimas diferentes produzidas pelo mesmo fungo em meios distintos. A microencapsulação por Spray Drying como processo de estabilização foi satisfatória obtendo rendimentos de 37,5-58,2% e com níveis acima de 50% de atividade enzimática. Em contrapartida, a imobilização enzimática demonstrou ser eficaz na etapa de ligação ao suporte, mas não foi capaz de estabilizar a enzima presente no extrato, o que ficou caracterizado pela perda de atividade proteolítica. / Filamentous fungi are extensively used in the production of biotechnological products in industry because of their versatility and one of the examples are peptidases which constitute a major class of hydrolytic enzymes. The peptidases are hydrolases which catalyze the cleavage of peptide bonds of proteins and microorganisms that are responsible for the physiological and pathological roles, in addition to having many applications in various industrial fields. This study evaluated various bioprocesses for fermentative production of peptidases by the fungus Aspergillus terreus. This microorganism was able to produce peptidase in both bioprocess, solid or submerged, achieving better performance in the solid bioprocess with peak of production of 677U/mL under the conditions 5g wheat bran, 72 hours, 30°C and 75% humidity . Using submerged fermentation bioprocess we also obtained satisfactory results with peak of activity of 360U/mL with conditions of standard medium supplemented with 0.5% casein, 72 hours and 35°C. Biochemical characterization of the two partial purified extracts showed similarities between some characteristics of the enzymes produced, as large optimum pH range spanning regions acidic, neutral and alkaline point temperature optimum of 55 ° C and the inhibition profile of PMSF and EDTA. However, the stability profiles (pH and temperature) and behavior in addition ions showed different responses to each extract, which suggests the production of different enzymes in different ways. Microencapsulation by Spray Drying and stabilization process was obtaining satisfactory yields of 37.5 to 58.2%, with levels above 50% of enzyme activity. In contrast, the enzyme immobilization step was effective in bonding the support, but was not able to stabilize the enzyme present in the extract, which was characterized by the loss of proteolytic activity

No intuito de promover a saúde e reduzir o risco de doenças, a nutrição de animais de companhia tem evoluído de forma semelhante à humana, na busca por alimentos funcionais. Neste sentido, as Saccharomyces cerevisiea são leveduras com potencial prebiótico, pois podem estimular a produção de substâncias com propriedades imunoestimulatórias e aumentar a capacidade de prevenir a colonização de bactérias patogênicas no trato gastrintestinal. Porém, a composição e processo de produção podem influenciar na sua capacidade de atuação. Este estudo objetivou avaliar os efeitos da inclusão de teores crescentes de leveduras com metabólitos ativos (LMA) dietéticos na digestibilidade aparente dos nutrientes, microbiota e produtos da fermentação fecal e parâmetros imunológicos de cães adultos. Foram utilizados 18 cães adultos hígidos, machos e fêmeas, peso corporal médio de 15,8±7,37kg, distribuídos em delineamento inteiramente casualizado constituído de três tratamentos experimentais, denominados: DC (dieta controle), LMA 0,3 (dieta controle com 0,3% de leveduras com metabólitos ativos) e LMA 0,6 (dieta controle com 0,6% de leveduras com metabólitos ativos). As médias dos resultados obtidos foram comparadas pelo teste de Tukey (p<0,05) no SAS. Pôde-se verificar que a inclusão do aditivo alterou a digestibilidade aparente da fibra bruta, da proteína bruta, extrativos não nitrogenados e energia metabolizável (p<0,05). Os produtos de fermentação não foram afetados pelo aumento da inclusão do prebiótico (P>0,05). O índice de fagocitose foi maior nas dietas LMA 0,3 e LMA 0,6 (P<0,05). Nas dosagens de LMA 0,3 e 0,6 as concentrações fecais de Prevotela, Allobaculum, Fusobacterium reduziram e Clostridium aumentaram (p<0,05). Collinsela aumentou em LMA 0,6 (p<0,05). Blautia apresentou tendência de aumento em LMA 0,3 e 0,6 e Lactobacillus em LMA 0,3 (p<0,10). De acordo com os teores de inclusão e os parâmetros avaliados neste estudo, o aditivo pode apresentar possível efeito na imunidade inata e inespecífica e promover modestas alterações na microbiota fecal de cães adultos saudáveis. / In order to promote health and reduce the risk of diseases, pet nutrition has evolved in a similar way to human, in the search for functional foods. In this sense, Saccharomyces cerevisiaa are yeasts with high prebiotic capacity, since they stimulate the production of substances with immunostimulatory properties and increase the capacity to prevent the colonization of pathogenic bacteria in the gastrointestinal tract. However, its composition and production process determine the ability to act, based on the substrate and medium in which it was nourished. The objective of this study was to evaluate the effects of increasing levels of yeast with active metabolites (YAM), based on the fermentation of specific substrates, on the apparent digestibility of dietary nutrients, fecal fermentation products, microbiota, and immunological parameters of adult dogs. Eighteen adult healthy male and female dogs with a mean body weight of 15.8 ± 7.37 kg were distributed in a completely randomized design consisting of three experimental treatments: CD (control diet), YAM 0.3 (control diet with 0.3% of yeasts with active metabolites) and YAM 0.6 (control diet with 0.6% of yeasts with active metabolites). The mean of the obtained results were compared by the Tukey test (p<0,05) in the SAS. It can be verified that the inclusion of the additive altered the apparent digestibility of crude fiber, crude protein, nitrogen free extract and metabolizable energy (p<0.05). Regarding the fermentation products, they were not affected by the prebiotic (P>0.05). The phagocytosis index was higher in the diets YAM 0.3 and YAM 0.6 (P<0.05). At the dosages of YAM 0.3 and 0.6, fecal concentrations of Prevotela, Allobaculum, Fusobacterium reduced and Clostridium increased (p<0.05). Collinsela increased with LMA 0.6 (p<0.05). Blautia tended to increase with YAM 0.3 and 0.6 and Lactobacillus with YAM 0.3 (p<0.10). According to the inclusion levels and the parameters evaluated in this study, the additive may present a possible effect on innate and nonspecific immunity and promote modest changes in the fecal microbiota of healthy adult dogs.

Os processos biotecnológicos com células animais tem despertado interesse crescente devido à sua capacidade de sintetizar moléculas complexas de altíssimo valor agregado, mesmo exigindo condições especiais de cultivo. Torna-se portanto fundamental o correto monitoramento de tais processos, para se manter seus parâmetros dentro de limites desejados. O objetivo deste trabalho foi efetuar cultivos de células animais em processo de perfusão, aos quais se acoplavam sistemas de monitoramento visando melhor controle, de modo a contribuir para o aumento da produtividade. Realizaram-se ensaios com células BHK e hibridoma em biorreator de 12L em alta densidade celular (20E6 cel/mL), para produção de fator de coagulação FVIII e anticorpo anti-TNF. O processo de perfusão foi analisado, buscando-se melhoria em seu controle através da correta estimativa da concentração celular. O sistema de transferência de oxigênio através de membranas de silicone foi estudado, tendo-se elaborado uma simplificação para a estimativa da velocidade de consumo de oxigênio, baseando-a na pressão média da membrana de silicone, e tendo-se determinado a influência da concentração de oxigênio no crescimento e na produção e seu valor limitante (entre 5 e 10%). Por fim, estudou-se o efeito da osmolalidade do meio no processo, tanto com relação ao crescimento e consumo de substratos, como na produtividade. Observou-se o aumento do tamanho da célula com o aumento da osmolalidade (até 470mmol/kg) e como este fato influencia o cálculo da velocidade específica de produção. Tentou-se sem sucesso fazer um monitoramento on-line deste aumento de tamanho, com o uso da sonda Lasentec FBRM. No entanto esta se mostrou capaz de estimar a concentração celular. O trabalho demonstra a importância de se efetuar um adequado monitoramento do processo para garantir a correta operação, em especial em cultivos com células animais em perfusão. / Animal cell culture technology has become apparent, due to its capacity to synthesize highly valuable complex molecules, even requiring special attention. In this scenario, adequate process monitoring becomes essential to keep its parameters well controlled. The aim of this work is to perform perfusion cultures with animal cells, and couple them to monitoring systems, in order to improve the efficiency of the control and consequently productivity. Runs were realized with BHK and hibridoma cells in a 12-L bioreactor at high cell density (20E6 cel/mL), to produce clotting factor FVIII and antibody anti-TNF. The perfusion process was analyzed, to enhance its control through reliable cell density estimate. Oxygen transfer system through silicone tubing was studied, resulting in a simple way to estimate oxygen uptake rate and establishing the influence of oxygen partial pressure in the growth and production. At last, medium osmolality effect was investigated related to growth, substrate consumption, and productivity. Cell enlargement was observed at higher osmolalities (till 470mmol/kg) and its results over the specific production rate were analyzed. The cell size change was measured off-line. Lasentec FBRM probe could not follow the size change, but showed capable to estimate cell density This work makes evident the importance in having adequate monitoring systems, in order to assure correct process operation, and specially cell culture perfusion processes.

Submitted by Jos? Henrique Henrique (jose.neves@ufvjm.edu.br) on 2018-02-07T18:45:29Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) camila_cristina_rodrigues.pdf: 1879433 bytes, checksum: 62f0da52d006b25928023dcba20ee6c0 (MD5) / Approved for entry into archive by Rodrigo Martins Cruz (rodrigo.cruz@ufvjm.edu.br) on 2018-03-09T19:14:07Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) camila_cristina_rodrigues.pdf: 1879433 bytes, checksum: 62f0da52d006b25928023dcba20ee6c0 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-03-09T19:14:07Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) camila_cristina_rodrigues.pdf: 1879433 bytes, checksum: 62f0da52d006b25928023dcba20ee6c0 (MD5) Previous issue date: 2017 / As leveduras do g?nero Saccharomyces, em especial as da esp?cie Saccharomyces cerevisiae, s?o microrganismos eucari?ticos unicelulares do Reino Fungi. Possuem um papel importante em processos de fermenta??o, como na utiliza??o para a produ??o de bebidas alco?licas e p?es, sendo considerados micro-organismos seguros para alimentos. O monitoramento das mat?rias-primas e da prolifera??o de leveduras ? uma necessidade para o sucesso do processo fermentativo. Nesse sentido, a citometria de fluxo, que ? um m?todo r?pido e preciso, pode se apresentar como ferramenta promissora no campo da fermenta??o e no controle de bioprocessos. Assim, o objetivo desse trabalho foi realizar a an?lise do crescimento e heterogeneidade populacional de uma linhagem comercial de Saccharomyces cerevisiae pela t?cnica de citometria de fluxo. Para isso foi utilizada a marca??o intracelular com o fluorocromo ?ster succinimid?lico de diacetato de carboxifluoresce?na. A suspens?o de levedura incorporada com o fluorocromo foi transferida para tubos de ensaio contendo 10 mL de YEPD e incubada a 25? C e foram analisadas, ap?s diferentes tempos, por citometria de fluxo, microscopia confocal e espectrofotometria. Os resultados demonstraram que foi poss?vel observar, por citometria de fluxo, altera??es morfol?gicas da linhagem Saccharomyces cerevisiae ao longo do tempo, bem como quantificar o decaimento da fluoresc?ncia do corante CFSE ap?s sucessivos processos mit?ticos. Por essa t?cnica tamb?m foi poss?vel mensurar o n?mero de c?lulas da linhagem estudada ao longo do processo de multiplica??o comparando-se ?s outras metodologias comumente utilizadas para este fim. Conclui-se com esse estudo que a citometria de fluxo mostrou-se como uma ferramenta confi?vel e sens?vel para a an?lise do crescimento e heterogeneidade populacional de Saccharomyces cerevisiae. / Disserta??o (Mestrado) ? Programa de P?s-gradua??o em Ci?ncias Farmac?uticas, Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri, 2017. / Yeasts of the genus Saccharomyces, especially those of the species Saccharomyces cerevisiae, are unicellular eukaryotic microorganisms of the Fungi Kingdom. They have an important role in fermentation processes, such as in the use for the production of alcoholic beverages and breads, being considered microorganisms safe for food. The monitoring of raw materials and the proliferation of yeasts is a necessity for the success of the fermentation process. In this sense, flow cytometry, which is a fast and precise method, can be presented as a promising tool in the field of fermentation and in the control of bioprocesses. Thus, the objective of this work was to analyze the growth and population heterogeneity of a commercial strain of Saccharomyces cerevisiae by the flow cytometry technique. For this, intracellular labeling was used with the fluorochrome succinimidyl ester of carboxyfluorescein diacetate. The yeast suspension incorporated with the fluorochrome was transferred into test tubes containing 10 ml of YEPD and incubated at 25 ? C and analyzed after different times by flow cytometry, confocal microscopy and spectrophotometry. The results demonstrated that it was possible to observe, by flow cytometry, morphological alterations of the Saccharomyces cerevisiae lineage over time, as well as to quantify the decay of CFSE dye fluorescence after successive mitotic processes. By this technique it was also possible to measure the number of cells of the lineage studied throughout the multiplication process, comparing to the other methodologies commonly used for this purpose. It is concluded with this study that flow cytometry proved to be a reliable and sensitive tool for the analysis of the growth and population heterogeneity of Saccharomyces cerevisiae.

This research was conducted for evaluating the productivity, nutritional value and fermentative characteristics of winter cereal silages submitted or not to harvest in the Depressão Central do Rio Grande do Sul. So, experimental pastures were established in May 2013, and the treatments were composed by two varieties of white oats (Avena sativa L. cv. UPF 18 and cv. IPR 126) and two of wheat (Triticum sativum L. cv. BRS Tarumã and BRS Umbu), in two management conditions (half of the plots submitted to cuts during the cycle and the other half without cuts), totaling eight treatments, with four replications, in a completely randomized experimental design. Silage was made at the paste grain stage with approximately 30 to 35% dry matter, and after 60 days of fermentation, were opened for evaluation. To evaluate the level of nitrogen fertilization of winter cereal through the critical curve of nitrogen dilution by DM accumulation, five samples were taken per plot, every 21 days from te moment when the forage presented more of one tonne of dry matter per hectare. We used the model of N dilution in plant tissue, proposed by Lemaire and Salette (1984). The UPF 18 oats present higher productivity, with lower protein levels. IPR 126 oats have better nutritional characteristics such as NDFap, NFC and TDN. Fermentative characteristics of different studied silages are similar. As for the in vitro degradability parameters of the silages, wheat cultivars obtained higher gas production and CH4, showing to be more degradable than oats. The UPF 18 oat cultivar presented a lower concentration of SCFA. BRS Umbu wheat presented lower production of propionic acid, thus increasing the C2/C3 ratio. Nitrogen nutrition was deficient in all cultivars and developmental stages, and BRS Umbu wheat pasture was the one that most approached the model in relation to the others in the initial and intermediate phases of the cycle, with a higher NNI, but it was also the hich presented more nitrogen dilution during the cycle. IPR 126 oats had the lowest dilution of nitrogen over time. UPF 18 oats was more productive, however, IPR 126 oats presented best nutritional characteristics. wheat cultivars silage and IPR 126 oats are more digestible than the UPF 18 oats silage. Evaluated pastures presented nitrogen fertilization deficiency in all cultivars and developmental stages. / Esta pesquisa foi conduzida com o objetivo de avaliar a produtividade, o valor nutricional e as características fermentativas de silagens de cereais de inverno submetidos ou não a cortes na Depressão Central do Rio Grande do Sul. Para isso, as pastagens experimentais foram estabelecidas em maio de 2013, sendo os tratamentos compostos por dois genótipos de aveia branca (Avena sativa L. cv. UPF 18 e cv. IPR 126) e dois de trigo (Triticum sativum L. cv. BRS Tarumã e cv. BRS Umbu), em duas condições de manejo (metade das parcelas submetidas a cortes no decorrer do ciclo e a outra metade sem cortes), totalizando quatro tratamentos, com quatro repetições, em um delineamento experimental inteiramente casualizado. A ensilagem foi realizada no estádio de grão pastoso com aproximadamente 30 a 35% de matéria seca (MS). Após 60 dias de fermentação, os silos foram abertos para avaliação das silagens. Também para avaliar o nível de adubação nitrogenada de cultura de cereais de inverno através da curva crítica de diluição do nitrogênio (N) em função do acúmulo de MS, foram feitas cinco amostragens por parcela, a cada 21 dias a partir do momento em que a forragem apresentou mais de uma tonelada de matéria seca por hectare. Utilizou-se o modelo de diluição do N no tecido vegetal, proposto por Lemaire e Salette (1984). A aveia UPF 18 apresentou maior produtividade, com menores teores de proteína. A aveia IPR 126 apresentou melhores características nutricionais como FDNcp, CNF e NDT. As características fermentativas das diferentes silagens estudadas são semelhantes. Já para os parâmetros de degradabilidade “in vitro” das silagens, os cultivares de trigo obtiveram maior produção de gás e CH4, mostrando serem mais degradáveis que a aveia. A cultivar de aveia UPF 18 apresentou menor concentração de AGCC. O trigo BRS Umbu apresentou menor produção de ácido propiônico, aumentando assim a relação C2/C3. A nutrição de nitrogênio foi deficiente em todos os cultivares e estádios de desenvolvimento, e a pastagem de trigo BRS Umbu foi a que mais se aproximou ao modelo em relação às demais nas fases iniciais e intermediárias do ciclo, com maior INN, mas também foi a que mais apresentou diluição do nitrogênio no decorrer do ciclo. A aveia IPR 126 foi a que apresentou menor diluição do nitrogênio no decorrer do tempo. A aveia UPF 18 foi mais produtiva, porém, a aveia IPR 126 que apresentou as melhores características nutricionais. A silagem das cultivares de trigo e a aveia IPR 126 são mais digestíveis que a silagem de aveia UPF 18. As pastagens avaliadas apresentam deficiência na adubação nitrogenada em todos os cultivares e estádios de desenvolvimento.

Submitted by Irene Nascimento (irene.kessia@ufpe.br) on 2016-10-04T19:18:31Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação_Sabrina_Concluída 22.04.15_Corrigido_VERSÃO FINAL sem assinaturas_com ficha catalografica_com menção de APROV~1.pdf: 1129690 bytes, checksum: 50a74fb8c1db07ca01d5877c4b969206 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-04T19:18:31Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação_Sabrina_Concluída 22.04.15_Corrigido_VERSÃO FINAL sem assinaturas_com ficha catalografica_com menção de APROV~1.pdf: 1129690 bytes, checksum: 50a74fb8c1db07ca01d5877c4b969206 (MD5) Previous issue date: 2015-02-27 / Facepe / Pigmentos carotenóides são largamente distribuídos na natureza, podendo ser encontrados em vegetais, animais, e micro-organismos tais como as leveduras do gênero Rhodotorula que apresentam elevada produção destes compostos. O objetivo deste estudo foi avaliar a produção de pigmentos carotenóides por Rhodotorula spp. em fermentação submersa, utilizando como fonte de carbono o resíduo (glicerina residual) da produção de biodiesel. As leveduras utilizadas foram: R. glutinis UFRPE; R. glutinis URM6683; R. aurantiaca URM6687; R. glutinis URM6691; R. glutinis URM6692; R. minuta URM6693; e R. glutinis URM6695. A seleção das leveduras foi realizada determinando-se o crescimento em meio de cultivo a base de glicerina residual (30 a 100 g.L-1) como substrato (único ou adicionado de glicose) e duas diferentes fontes de nitrogênio (uréia e sulfato de amônio). A extração dos carotenóides foi realizada com os solventes DMSO (Dimetil Sulfóxido), acetona e éter de petróleo. Os carotenóides totais foram determinados por espectrofotometria e o betacaroteno por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (HPLC/CLAE). O estudo demonstrou que o fornecimento de glicerina residual e sulfato de amônio numa relação carbono/nitrogênio (C/N) igual a 1,07 favoreceu o crescimento das leveduras e a produção de carotenóides. Todas as leveduras produziram carotenóides em quantidades variáveis sendo que a R. minuta URM6693 apresentou uma produção volumétrica de betacaroteno igual a 1,021 mg.L-1 determinado pelo HPLC. Conclui-se que a glicerina residual pode ser utilizada como fonte de carbono para a produção de carotenóides, entre eles o betacaroteno. / Pigments carotenoids are widely distributed in nature and can be found in plants, animals, and microorganisms such as the Rhodotorula yeasts that present high production of these compounds. The objective of this study was to evaluate the production of carotenoid pigments by Rhodotorula spp. in submerged fermentation, using as a source of carbon residue (residual glycerin) of biodiesel production. The yeasts were: R. glutinis UFRPE; R. glutinis URM6683; R. aurantiaca URM6687; R. glutinis URM6691; R. glutinis URM6692; R. minuta URM6693; and, R. glutinis URM6695. The selection of yeast was performed by determining growth in the fermentation medium based on the residual glycerin (30 a 100 g.L-1) as substrate (single or glucose added) and two different nitrogen sources (urea and ammonium sulfate). The extraction of carotenoids was performed with the solvents DMSO (Dimethyl Sulfoxide), acetone and petroleum ether. Total carotenoids were determined by spectrophotometry and beta-carotene by High Performance Liquid Cromatography (HPLC). The study showed that the supply of residual glycerine and ammonium sulfate in a ratio carbon/nitrogen (C/N) equal to 1,07 favored the growth of yeast and production of carotenoids. All yeasts produced carotenoids in varying amounts being that R. minuta URM6693 presented a volumetric production of beta-carotene equal to 1,021 mg.L-1 certain by HPLC. It follows that the residual glycerin can be used as a carbon source for the production of carotenoids, including beta-carotene.

Os processos biotecnológicos com células animais tem despertado interesse crescente devido à sua capacidade de sintetizar moléculas complexas de altíssimo valor agregado, mesmo exigindo condições especiais de cultivo. Torna-se portanto fundamental o correto monitoramento de tais processos, para se manter seus parâmetros dentro de limites desejados. O objetivo deste trabalho foi efetuar cultivos de células animais em processo de perfusão, aos quais se acoplavam sistemas de monitoramento visando melhor controle, de modo a contribuir para o aumento da produtividade. Realizaram-se ensaios com células BHK e hibridoma em biorreator de 12L em alta densidade celular (20E6 cel/mL), para produção de fator de coagulação FVIII e anticorpo anti-TNF. O processo de perfusão foi analisado, buscando-se melhoria em seu controle através da correta estimativa da concentração celular. O sistema de transferência de oxigênio através de membranas de silicone foi estudado, tendo-se elaborado uma simplificação para a estimativa da velocidade de consumo de oxigênio, baseando-a na pressão média da membrana de silicone, e tendo-se determinado a influência da concentração de oxigênio no crescimento e na produção e seu valor limitante (entre 5 e 10%). Por fim, estudou-se o efeito da osmolalidade do meio no processo, tanto com relação ao crescimento e consumo de substratos, como na produtividade. Observou-se o aumento do tamanho da célula com o aumento da osmolalidade (até 470mmol/kg) e como este fato influencia o cálculo da velocidade específica de produção. Tentou-se sem sucesso fazer um monitoramento on-line deste aumento de tamanho, com o uso da sonda Lasentec FBRM. No entanto esta se mostrou capaz de estimar a concentração celular. O trabalho demonstra a importância de se efetuar um adequado monitoramento do processo para garantir a correta operação, em especial em cultivos com células animais em perfusão. / Animal cell culture technology has become apparent, due to its capacity to synthesize highly valuable complex molecules, even requiring special attention. In this scenario, adequate process monitoring becomes essential to keep its parameters well controlled. The aim of this work is to perform perfusion cultures with animal cells, and couple them to monitoring systems, in order to improve the efficiency of the control and consequently productivity. Runs were realized with BHK and hibridoma cells in a 12-L bioreactor at high cell density (20E6 cel/mL), to produce clotting factor FVIII and antibody anti-TNF. The perfusion process was analyzed, to enhance its control through reliable cell density estimate. Oxygen transfer system through silicone tubing was studied, resulting in a simple way to estimate oxygen uptake rate and establishing the influence of oxygen partial pressure in the growth and production. At last, medium osmolality effect was investigated related to growth, substrate consumption, and productivity. Cell enlargement was observed at higher osmolalities (till 470mmol/kg) and its results over the specific production rate were analyzed. The cell size change was measured off-line. Lasentec FBRM probe could not follow the size change, but showed capable to estimate cell density This work makes evident the importance in having adequate monitoring systems, in order to assure correct process operation, and specially cell culture perfusion processes.

Os fungos filamentosos são utilizados em larga escala na produção de produtos biotecnológicos na indústria devido a sua versatilidade e um dos exemplos são as peptidases que representam uma das principais classes de enzimas hidrolíticas. As peptidases são hidrolases que catalisam a quebra das ligações peptídicas das proteínas e que nos microrganismos são responsáveis por funções fisiológicas e patológicas, além de ter muitas aplicações em diversos campos industriais. Neste estudo foram analisados diferentes bioprocessos fermentativos para produção de peptidases pelo fungo Aspergillus terreus. Este microrganismo foi capaz de produzir peptidases em ambos os bioprocessos, sólido ou submerso, obtendo melhor performance e o pico de produção no bioprocesso fermentativo sólido de valor 677U/mL, nas condições 5g de farelo de trigo, 72 horas, 30°C e 75% de umidade. Utilizando o bioprocesso fermentativo submerso também obtivemos resultados satisfatórios com pico de atividade de 360U/mL, nas condições de meio padrão suplementado com Caseína 0,5%, 72 horas e 35°C. A caracterização bioquímica parcial dos extratos dos dois bioprocessos mostrou semelhanças entre algumas características das enzimas produzidas como a faixa extensa de pH ótimo abrangendo regiões ácidas, neutra e alcalinas, temperatura ótima pontual de 55°C e perfil de inibição pelo PMSF e EDTA. Contudo, os perfis de estabilidade (pH e temperatura) e comportamento frente a adição de íons apresentaram respostas diferentes entre si, o que sugere a produção de enzimas diferentes produzidas pelo mesmo fungo em meios distintos. A microencapsulação por Spray Drying como processo de estabilização foi satisfatória obtendo rendimentos de 37,5-58,2% e com níveis acima de 50% de atividade enzimática. Em contrapartida, a imobilização enzimática demonstrou ser eficaz na etapa de ligação ao suporte, mas não foi capaz de estabilizar a enzima presente no extrato, o que ficou caracterizado pela perda de atividade proteolítica. / Filamentous fungi are extensively used in the production of biotechnological products in industry because of their versatility and one of the examples are peptidases which constitute a major class of hydrolytic enzymes. The peptidases are hydrolases which catalyze the cleavage of peptide bonds of proteins and microorganisms that are responsible for the physiological and pathological roles, in addition to having many applications in various industrial fields. This study evaluated various bioprocesses for fermentative production of peptidases by the fungus Aspergillus terreus. This microorganism was able to produce peptidase in both bioprocess, solid or submerged, achieving better performance in the solid bioprocess with peak of production of 677U/mL under the conditions 5g wheat bran, 72 hours, 30°C and 75% humidity . Using submerged fermentation bioprocess we also obtained satisfactory results with peak of activity of 360U/mL with conditions of standard medium supplemented with 0.5% casein, 72 hours and 35°C. Biochemical characterization of the two partial purified extracts showed similarities between some characteristics of the enzymes produced, as large optimum pH range spanning regions acidic, neutral and alkaline point temperature optimum of 55 ° C and the inhibition profile of PMSF and EDTA. However, the stability profiles (pH and temperature) and behavior in addition ions showed different responses to each extract, which suggests the production of different enzymes in different ways. Microencapsulation by Spray Drying and stabilization process was obtaining satisfactory yields of 37.5 to 58.2%, with levels above 50% of enzyme activity. In contrast, the enzyme immobilization step was effective in bonding the support, but was not able to stabilize the enzyme present in the extract, which was characterized by the loss of proteolytic activity

No intuito de promover a saúde e reduzir o risco de doenças, a nutrição de animais de companhia tem evoluído de forma semelhante à humana, na busca por alimentos funcionais. Neste sentido, as Saccharomyces cerevisiea são leveduras com potencial prebiótico, pois podem estimular a produção de substâncias com propriedades imunoestimulatórias e aumentar a capacidade de prevenir a colonização de bactérias patogênicas no trato gastrintestinal. Porém, a composição e processo de produção podem influenciar na sua capacidade de atuação. Este estudo objetivou avaliar os efeitos da inclusão de teores crescentes de leveduras com metabólitos ativos (LMA) dietéticos na digestibilidade aparente dos nutrientes, microbiota e produtos da fermentação fecal e parâmetros imunológicos de cães adultos. Foram utilizados 18 cães adultos hígidos, machos e fêmeas, peso corporal médio de 15,8±7,37kg, distribuídos em delineamento inteiramente casualizado constituído de três tratamentos experimentais, denominados: DC (dieta controle), LMA 0,3 (dieta controle com 0,3% de leveduras com metabólitos ativos) e LMA 0,6 (dieta controle com 0,6% de leveduras com metabólitos ativos). As médias dos resultados obtidos foram comparadas pelo teste de Tukey (p<0,05) no SAS. Pôde-se verificar que a inclusão do aditivo alterou a digestibilidade aparente da fibra bruta, da proteína bruta, extrativos não nitrogenados e energia metabolizável (p<0,05). Os produtos de fermentação não foram afetados pelo aumento da inclusão do prebiótico (P>0,05). O índice de fagocitose foi maior nas dietas LMA 0,3 e LMA 0,6 (P<0,05). Nas dosagens de LMA 0,3 e 0,6 as concentrações fecais de Prevotela, Allobaculum, Fusobacterium reduziram e Clostridium aumentaram (p<0,05). Collinsela aumentou em LMA 0,6 (p<0,05). Blautia apresentou tendência de aumento em LMA 0,3 e 0,6 e Lactobacillus em LMA 0,3 (p<0,10). De acordo com os teores de inclusão e os parâmetros avaliados neste estudo, o aditivo pode apresentar possível efeito na imunidade inata e inespecífica e promover modestas alterações na microbiota fecal de cães adultos saudáveis. / In order to promote health and reduce the risk of diseases, pet nutrition has evolved in a similar way to human, in the search for functional foods. In this sense, Saccharomyces cerevisiaa are yeasts with high prebiotic capacity, since they stimulate the production of substances with immunostimulatory properties and increase the capacity to prevent the colonization of pathogenic bacteria in the gastrointestinal tract. However, its composition and production process determine the ability to act, based on the substrate and medium in which it was nourished. The objective of this study was to evaluate the effects of increasing levels of yeast with active metabolites (YAM), based on the fermentation of specific substrates, on the apparent digestibility of dietary nutrients, fecal fermentation products, microbiota, and immunological parameters of adult dogs. Eighteen adult healthy male and female dogs with a mean body weight of 15.8 ± 7.37 kg were distributed in a completely randomized design consisting of three experimental treatments: CD (control diet), YAM 0.3 (control diet with 0.3% of yeasts with active metabolites) and YAM 0.6 (control diet with 0.6% of yeasts with active metabolites). The mean of the obtained results were compared by the Tukey test (p<0,05) in the SAS. It can be verified that the inclusion of the additive altered the apparent digestibility of crude fiber, crude protein, nitrogen free extract and metabolizable energy (p<0.05). Regarding the fermentation products, they were not affected by the prebiotic (P>0.05). The phagocytosis index was higher in the diets YAM 0.3 and YAM 0.6 (P<0.05). At the dosages of YAM 0.3 and 0.6, fecal concentrations of Prevotela, Allobaculum, Fusobacterium reduced and Clostridium increased (p<0.05). Collinsela increased with LMA 0.6 (p<0.05). Blautia tended to increase with YAM 0.3 and 0.6 and Lactobacillus with YAM 0.3 (p<0.10). According to the inclusion levels and the parameters evaluated in this study, the additive may present a possible effect on innate and nonspecific immunity and promote modest changes in the fecal microbiota of healthy adult dogs.