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L’infection par le virus de l’hépatite C est fréquente chez les patients infectés par le VIH. Chez les patients co-infectés VIH-VHC, les lésions hépatiques sont plus sévères et évoluent plus rapidement vers la cirrhose et ses complications. Cette thèse est consacrée à la description des patients co-infectés pris en charge, en France (2006-2008), à l’évaluation de la prévalence et des facteurs de stéatose hépatique chez ces patients, et à la question de l’évaluation non invasive de la fibrose hépatique. La prise en charge des patients co-infectés VIH-VHC devrait inclure un dépistage systématique de la stéatose hépatique. L’évaluation de la fibrose hépatique par l’utilisation de deux scores non invasifs (Fibroscan-Apri, Fibroscan-Fibrotest, par exemple) pourrait être envisagée. En cas de discordance entre les résultats de ces scores, une biopsie hépatique doit être réalisée. / Chronic hepatitis C virus (HCV) infection is common in patients with human immunodeficiency virus (HIV). HIV-HCV Co-infection is associated with more severe and more rapid progression of HCV, leading to increased incidence of fibrosis, cirrhosis, and end-stage liver disease. Our work is devoted to the description of HIV-HCV co-infected patients (2006-2008). We also evaluated the prevalence and factors associated with liver steatosis in these patients. Lastly, we addressed the issue of the non-invasive assessment of liver fibrosis. The management of HIV-HCV co-infected patients should comprise a systematic screening of liver steatosis. The assessment of liver fibrosis using two non-invasive tests (eg Fibroscan-Apri, Fibroscan-Fibrotest) should be considered. In case of discordance between the results of these tests, a liver biopsy must be performed.

Les infections humaines par Schistosoma japonicum et Schistosoma mansoni provoquent des pathologies hépatospléniques conduisant à la fibrose hépatique sévère chez 5 à 30% des sujets infectés vivant en zone endémique. Plusieurs études ont montré que le développement de cette fibrose était régulé par des cytokines mais aussi par des chimiokines. Les chimiokines sont des cytokines chimioattractantes produites par une variété des cellules immunes et non immunes, et qui ont été impliqués dans la régulation de l'inflammation granulomateuse et la fibrose pulmonaire et hépatique chez la souris et chez l'homme. Nous avons donc étudié la modulation des chimiokines et récepteurs dans le foie et la rate des patients hépatospléniques exposés à l'infection par S.japonicum. Notre étude démontre que les transcrits de chimiokines de type CXC et CC ainsi que des récepteurs sont augmentés dans le foie des patients hépatospléniques, lesquels ne sont pas significativement augmentés dans la rate au cours de l'infection. Cette augmentation des transcrits de chimiokines n'est pas restreinte aux chimiokines inflammatoires, une augmentation des transcrits des chimiokines homéostatiques CCL19 et CCL21 est aussi observée dans le foie des patients hépatospléniques. Nous avons également observé une corrélation des niveaux d'expression des ligands CXCR3 entre eux, dans le foie des sujets hépatospléniques. Ces observations suggèrent que les chimiokines régulent l'inflammation hépatique induite par les œufs de schistosomes et jouent probablement un rôle dans la fibrose hépatique. / Human infections with Schistosoma japonicum and Schistosoma mansoni causes hepatosplenic diseases leading to severe hepatic fibrosis in 5 to 30% of infected subjects living in endemic areas. Several studies demonstrated that the development of this fibrosis was regulated by cytokines but also by chemokines. Chemokines are the chemoattractant cytokines produced by a variety of immune and non-immune cells, and have been involved in the regulation of inflammation and granulomatous pulmonary and hepatic fibrosis in mice and humans. We therefore studied the modulation of chemokines and receptors in the liver and spleen of hepatosplenic patients exposed to infection with S.Japonicum. Our study demonstrates that the transcripts of CXC and CC chemokines and their receptors are increased in the liver of hepatosplenic patients, which were not significantly increased in the spleen during infection. This increase of transcripts of chemokines is not restricted to inflammatory chemokines, an increase of transcripts of homeostatic chemokines CCL19 and CCL21 is also observed in the liver of hepatosplenic patients. Moreover, the proportion of CD3+ lymphocytes but not CD14+ monocytes/macrophages is increased in the liver. We also observed a correlation of expression levels of CXCR3 ligands between them, in the liver of hepatosplenic subjects. These observations suggest that chemokines regulate hepatic inflammation induced by schistosoma eggs and probably play a role in liver fibrosis ensuing.

Les bilharzioses hépatospléniques sont des maladies parasitaires provoquées essentiellement par Schistosoma japonicum et Schistosoma mansoni. Ces infections provoquent une fibrose hépatique sévère chez 5 à 20% des sujets infectées vivant en zone endémique. Plusieurs études ont démontré que le développement de cette fibrose était régulé par des cytokines et chemokines et que la susceptibilité génétique à cette maladie dépendait chez l'homme d'un locus majeur sur le chromosome humain 6 en position q23. L'IL-22 est une cytokine produite essentiellement par les lymphocytes T auxiliaires et les cellules NK et qui a été impliqué dans la protection du foie et de l'intestin chez la souris. Le gène IL22RA2 codant pour le récepteur inhibiteur soluble de l'IL-22 (IL-22BP) est localisé dans la région de susceptibilité à la FH (6q23). Nous avons donc étudié l'implication de l'IL-22 dans la pathologie bilharzienne par une approche immunogénétique. Notre étude démontre que la production d'IL-22 est augmentée en réponse aux œufs de S. japonicum et aux antigènes d'œufs de S. mansoni dans des cultures de cellules mononuclées du sang périphérique d'individus chinois et brésiliens vivant dans des zones endémiques. Le traitement par le Praziquantel, qui favorise l'élimination des parasites et la réversion de la fibrose, est associé à une augmentation des taux d'IL-22 en culture. Nous avons observé que dans le sang des patients chinois, l'IL-22 est produit majoritairement par les lymphocytes T CD4+ et des cellules CD3-CD4- ne produisant pas d'IL-17A. Les taux d'IL-22 en culture et la proportion des cellules CD3-CD4-IL22+ sont inversement corrélés à la FH. / Hepatosplenic schistosomiasis is a parasitic disease caused primarily by Schistosoma japonicum and Schistosoma mansoni. These infections cause severe hepatic fibrosis (HF) in 5-20% of infected subjects living in endemic areas. Several studies have shown that the development of this fibrosis was regulated by cytokines and chemokines. Our laboratory has shown that genetic susceptibility to HF map to a major locus on human chromosome 6 at position q23. IL-22 is a cytokine produced primarily by T cells and NK cells and has been involved in protecting the liver and intestine in mice. The gene IL22RA2, encoding the soluble inhibitor receptor of IL-22 (IL-22BP), is located in the region of susceptibility to HF (6q23). We therefore examined the involvement of IL-22 in schistosomiasis pathology by an immunogenetic approach. Our study shows that the production of IL-22 is increased in response to eggs of S. japonicum and egg antigens of S. mansoni in cultures of peripheral blood mononuclear cells from Chinese and Brazilian subjects living in endemic areas. Treatment with praziquantel, which helps eliminate parasites and reversion of HF, is associated with increased levels of IL-22 in culture. We observed that in the blood of Chinese patients, IL-22 is produced mainly by CD4+ T cells and CD3-CD4-cells that do not produce IL-17A. The levels of IL-22 in culture and the proportion of CD3+CD4-IL22+ are inversely correlated with HF. These observations suggest that IL-22 may play a protective role in HF. To confirm this implication, we performed association studies between SNPs located in IL22 and IL22RA2 genes and HF.

Les maladies chroniques du foie constituent un problème majeur de santé publique. L’évaluation précise du degré de fibrose hépatique apporte au clinicien une estimation du pronostic dès la prise en charge initiale de ces patients, mais permet également la réalisation d’une surveillance évolutive, et intervient dans la décision et le choix d’un traitement. L’évaluation noninvasive de la fibrose hépatique par élastographie a permis de révolutionner la prise en charge des malades atteints d’une maladie chronique du foie. L’objectif de notre travail est d’évaluer les performances diagnostiques d’une nouvelle technique d’élastographie hépatique, appelée « Supersonic ShearImaging » (SSI), et d’analyser sa plus-value dans l’évaluation non-invasive des maladies chroniques du foie.Dans une première étude, nous avons prospectivement analysé et comparé les performances diagnostiques de l’élastographie SSI par rapport au FibroScan et l’ARFI pour le staging de la fibrose hépatique sur une série de 349 patients avec une maladie chronique du foie diagnostiquée et gradée par ponction-biopsiehépatique.Dans une seconde étude, nous avons prospectivement étudié l’impact diagnostique de l’élastographie SSIsur le foie et la rate chez une population de 401 patients avec cirrhose pour l’évaluation de la gravité de la maladie cirrhotique.Dans une troisième étude, nous avons réalisé une analyse prospective bicentrique (Angers et Bordeaux)de la performance diagnostique de l’élastographie SSI par rapport au FibroScan et l’ARFI dans l’évaluation non invasive de la fibrose hépatique sur une série de 291 patients avec stéatopathie non-alcoolique et ponction-biopsiehépatique. / Abstract :The management and the prognosis for chronic liver diseases are widely based on the presence and the development of a liver fibrosis. The progressive worsening of liver fibrosis leads in a certain number of patients to the development of cirrhosis and its complications. Thus, the development of non-invasive diagnostic tools for the diagnosis and the monitoring of the liver fibrosis is of crucial interest. Liver elastography is one of the most promising techniques that have recently emerged in the field of chronic liver diseases. In this study, we aim to assess the diagnostic accuracy of a new elastography technique, named “Supersonic Shear Imaging” (SSI), and toanalyse its added value in the non invasive diagnosis of chronic liver diseases.In a first study, we prospectively analysed and compared the diagnostic performances of SSI elastography versus FibroScan and ARFI for the staging of liver fibrosis in a cohort of 349 patients with chronic liver diseases that consecutively underwent a liver biopsy. In a second study, we prospectively analysed the impact of liver and spleen SSI elastography in a cohortof 401 cirrhotic patients for the non invasive diagnosis of cirrhosis severity and oesophageal varices.In a third study, we assessed the clinical use of liver stiffness measurement evaluated by SSI, FibroScan,and ARFI in a cohort of nonalcoholic fatty liver disease patients who underwent liver biopsy. A total of 291 NAFLD patients were prospectively enrolled at 2 French university hospitals (Angers and Bordeaux).

La voie de signalisation de l’inflammasome est impliquée dans plusieurs pathologies inflammatoires dont la fibrose pulmonaire et plus récemment, elle a été mise en lumière dans le développement de la fibrose hépatique. L’activation de ce complexe permet la maturation et la libération de la cytokine pro-inflammatoire IL-1β par les cellules immunitaires telles les macrophages, après reconnaissance de motifs bactériens ou de signaux de danger. L’objectif de cette thèse était de montrer les mécanismes moléculaires et cellulaires par lesquelles l’inflammasome est impliqué dans la fibrose hépatique. Par une première approche avec un hepatotoxique, le CCl4, chez la souris, nous avons observé que nos stratégies bloquantes de la signalisation de l’inflammasome ne permettent pas de faire le lien direct avec le développement de la fibrogénèse. Dans une seconde approche in vitro, nous avons montré que les fibroblastes hépatiques répondent à des médiateurs pro-inflammatoires comme l’IL-1β, le TNF-α et l’IL-8 par un déséquilibre de la balance MMP/TIMP favorable à la fibrolyse, une exacerbation de la réponse inflammatoire et la diminution de l’expression d’un marqueur d’activation des fibroblastes, l’α-SMA. Enfin, la mise en co-culture de ces fibroblastes avec différents macrophages a montré des effets similaires après activation de l’inflammasome par le LPS et les cristaux de MSU dans les cellules immunitaires, suggérant ainsi un rôle indirect de l’activation de l’inflammasome sur la réponse des fibroblastes hépatiques activés. / Inflammasome pathway is implicated in several inflammatory diseases such as pulmonary fibrosis. Nowadays, several data exist and suggest the implication of this pathway in liver fibrosis development. Once activated, the inflammasone pathway leads to the production and the release of IL-1β, a pro-inflammatory cytokine, by immune cells such as macrophages. The aim of this thesis was to describe the molecular and the cellular mechanism underlining the implication of the inflammasome pathway in liver fibrosis development. To assess this hypothesis, we have firstly inhibited inflammasome pathway in CCl4 hepatotoxicity mouse model. However, this approach did not clearly establish the implication of this pathway in liver fibrosis development. Thus in a second part, we have used an in vitro approach and demonstrate that liver fibroblasts response to pro-inflammatory mediators such as IL-1β, TNF-α and IL-8, and lead to a change in MMP/TIMP balance. The changes conduce to fibrosolysis, an exacerbation of the inflammatory response and the decrease in the expression of α-SMA, an activation marker of fibroblasts. Finally, by co-culturing the fibroblasts with different macrophages, we showed similar effects after inflammasome activation by LPS and the MSU crystals in immune cells, suggesting an indirect role of the activation of inflammasome on the response of activated liver fibroblasts.

Dans les maladies chroniques du foie, l’angiogenèse et la fibrose sont étroitement liées. Nosprécédents travaux ont permis de montrer que les myofibroblastes portaux (MFP)contribuaient de façon importante à la fibrogenèse hépatique. L’objectif de ma thèse était dedéterminer si les MFP pouvaient aussi contribuer à l’angiogenèse hépatique. Nous avonsidentifié un nouveau marqueur spécifique des MFP, le collagène XV, grâce auquel nousavons pu mettre en évidence une prolifération des MFP dans des stades avancés de fibrose, àla fois dans des modèles animaux et chez les patients atteints d’hépatopathie chronique. Cetteprolifération des MFP était corrélée à celle des cellules endothéliales. Dans le foie cirrhotiquehumain, les MFP présentaient une distribution périvasculaire, entourant les capillaires àproximité de la réaction ductulaire. L’effet des MFP sur les cellules endothéliales a ensuite étéévalué par des tests d’angiogensèse in vitro et in vivo. Le milieu conditionné des MFPaugmentait la migration et la tubulogenèse des cellules endothéliales et stimulaitl’angiogenèse dans les implants de Matrigel chez la souris. En co-culture, les MFPdeveloppaient des jonctions intercellulaires avec les cellules endothéliales et augmentaient latubulogenèse. Nous avons montré que les MFP secrétaient des microparticules contenant duVEGF-A, capables d’activer VEGFR-2 dans les cellules endothéliales et de médier leur effetpro-angiogénique. Enfin, les cholangiocytes étaient capables d’accroître l’effet proangiogéniquedes MFP. En conclusion, les MFP jouent un rôle clef dans le remodelagevasculaire associé à la fibrose hépatique. / Liver angiogenesis and fibrogenesis are closely linked and most of studies have shown thatangiogenesis could worsen fibrosis in chronic liver diseases. Our previous works havedemonstrated that portal myofibroblasts (PMF) greatly contributed to liver fibrogenesis. Theaim of this present work was to determine if PMF could also contribute to liver angiogenesis.We identified collagene XV (col15a1) as a new specific marker for PMF. In vivo, weobserved PMF proliferation (measured by expression of col15a1) at advanced stages offibrosis both in liver from animals models ( CCl4 and BDL) and in livers from patients withchronic liver disease (primary biliary cirrhosis and non alcoolic fatty liver disease). PMFproliferation was correlated with endothelial proliferation. In human cirrhotic liver, PMF werelocated around vessels in fibrotic septa, in proximity to ductular reaction. PMF effects onendothelial cells were assessed in angiogenic tests in vitro and in vivo. PMF conditionedmedium enhanced migration and tubulogenesis of endothelial cells and stimulatedvascularization of matrigel plugs in mice. In coculture, PMF developed junctions withendothelial cells (demosomes and gap junctions) and enhanced endothelial tubulogenesis. Weshowed that PMF secreted VEGFA containing microparticles, able to activate VEGFR-2 inendothelial cells and to mediate their angiogenic function. Cholangiocytes could increasePMF angiogenic properties by stimulating VEGFA expression and microparticles secretion.In conclusion, PMF, studied with a new marker, col15a1, are key cells in hepatic vascularremodeling.

La fibrose hépatique est la conséquence de toutes les maladies chroniques du foie et se caractérise par un dépôt excessif de matrice extracellulaire synthétisée par les myofibroblastes. Les myofibroblastes portaux (MFP), l'une des sous populations de myofibroblastes, jouent un rôle majeur dans la progression de la fibrose et sont pro-angiogéniques. Des études ont montré un rôle important du stress du réticulum endoplasmique (RE) dans la fibrose du foie. Nos objectifs étaient de déterminer si un stress du RE survient dans les MFP lors de la fibrose et affecte les fonctions de ces cellules, et d'étudier l'effet du TUDCA, une molécule chaperonne utilisée en clinique dans les maladies biliaires, sur le stress du RE. Le phénotype de MFP activés in vivo, isolés à partir de foie de rats fibreux après cholestase, a été comparé à celui de MFP contrôles que nous avons préalablement bien caractérisés. Nos résultats montrent que les MFP activés in vivo subissent un stress du RE se traduisant par l'activation de la voie PERK. Ce stress du RE n'a pas d'effet sur la différenciation myofibroblastique, diminue les capacités de prolifération et de migration des MFP mais augmente leur pouvoir angiogénique. En revanche, le TUDCA n'a aucun effet sur les paramètres étudiés. Les MFP subissent donc un stress du RE lors de leur activation myofibroblastique qui stimule leur propriété pro-angiogénique et pourrait ainsi favoriser la progression de la fibrose. Cependant le stress du RE inhibe également leurs fonctions de prolifération et de migration ce qui pourrait induire une boucle de contrôle négative limitant leur expansion. / Hepatic fibrosis is the consequence of all chronic liver diseases and is characterized by an abnormal extra cellular matrix deposition by myofibroblasts. Portal myofibroblasts (PMF), a subpopulation of hepatic myofibroblasts, play a major role in fibrosis progression and angiogenesis. Accumulating evidences indicate an important role of endoplasmic reticulum (ER) stress in hepatic fibrosis. The aims of this study were to determine whether an ER stress occured in PMF during fibrosis and affected the functions of these cells, and to study the effect of the molecular chaperone TUDCA used in biliary diseases, on ER stress. The phenotype of in vivo activated-PMF obtained from rat fibrotic liver after cholestasis was compared with the phenotype of control PMF that we previously characterized. Our results showed that in vivo activated-PMF underwent ER stress with PERK pathway activation. This ER stress had no effect on myofibroblastic differentiation but reduced PMF proliferation and migration and increased PMF angiogenesis capacity. TUDCA had no effect on these parameters. In conclusion, PMF display ER stress during their activation. ER stress stimulates their pro-angiogenic proprieties and thereby may promote fibrosis progression. However, ER stress also inhibits their proliferation and migration functions, and thereby could provide a negative control loop to restrict their expansion.

L’échoendoscopie thérapeutique occupe une place croissante et incontournable de l’activité médico-chirurgicale en pathologie digestive depuis le développement des sondes sectorielles. Les domaines d’application de cette technique interventionnelle mini-invasive sont de plus en plus nombreux, d’une part en pathologie biliopancréatique et entérale permettant la réalisation d’anastomoses évitant un recours à la chirurgie traditionnelle, et d’autre part en cancérologie digestive car elle permet de délivrer un agent thérapeutique, une source de rayonnement ou des cellules liées au système immunitaire dans une lésion ciblée. L’abord vasculaire est une voie récente et prometteuse de l’échoendoscopie interventionnelle offrant des perspectives thérapeutiques en hépatologie notamment dans le domaine de l’hypertension portale. Ce travail se décompose en trois parties décrivant successivement l’état de l'art des applications de l’échoendoscopie interventionnelle, puis deux travaux originaux expérimentaux : dans un premier temps, le transfert de la technique d’anastomose biliodigestive (réalisée régulièrement dans notre centre) à l’abord vasculaire portosystémique sur animal sain, puis dans un deuxième temps la validité de la technique sur modèle animal de fibrose hépatique. La première série d’expérimentations a permis de mettre au point la technique de création d’un shunt intrahépatique portosystémique par échoendoscopie chez 23 cochons sains, en collaboration avec l’équipe de radiologie vasculaire. Ces procédures ont été réalisées dans une salle de cathétérisme vasculaire expérimentale (laboratoire Caviti) dans le cadre du laboratoire d’accueil ISIT (Image Science for Interventional Techniques, Pr. L. Boyer, Pr. J.-Y. Boire, UMR CNRS/UDA 6284). Les résultats ont été concluants puisque le shunt est apparu faisable dans 91% des cas, fonctionnel dans 81% des cas avec une morbidité de 14,2%. La deuxième série d’expérimentations a permis de valider cette technique d’échoendoscopie chez un modèle porcin de fibrose hépatique par embolisation radiologique, en collaboration avec l’Institut National de Recherche Agroalimentaire de Theix pour la stabulation des animaux. Ce travail multidisciplinaire a permis une collaboration étroite entre endoscopistes, radiologues, chirurgiens viscéraux et anatomopathologistes, s’inscrivant dans une démarche de recherche transversale. Les résultats sont encourageants puisqu’un shunt intrahépatique porto-systémique par échoendoscopie s’est révélé techniquement faisable et fonctionnel sur modèle de fibrose hépatique avec une survie à 7 jours des animaux dans deux tiers des cas. Avant d’envisager une étude princeps chez l’homme, des études complémentaires sont néanmoins nécessaires sur des modèles porcins présentant une fibrose hépatique associée à une hypertension portale en augmentant la durée de stabulation, en homogénéisant la procédure de squelettisation de l’artère hépatique et en adaptant la dose de solution injectée. Cette technique pourrait constituer à terme une alternative en cas d’échec de la technique standard pour complications de l’hypertension portale (shunt intrahépatique portosystémique par voie transjugulaire) chez des patients alors en situation d’impasse thérapeutique. / Therapeutic endoscopic ultrasonography is a growing and essential part of the medical and surgical activity in digestive pathology since the development of sectoral probes. The fields of application of this minimally invasive interventional technique are more and more numerous, on the one hand in biliopancreatic and enteral pathology, allowing the realization of anastomoses without traditional surgery, and on the other hand in digestive oncology, because it makes it possible to deliver a therapeutic agent, a source of radiation or cells linked to the immune system in a targeted lesion. The vascular approach is a recent and promising way of interventional endoscopic ultrasound offering therapeutic perspectives in hepatology, especially in the field of portal hypertension.This work is divided into three parts successively describing the state of the art of the applications of interventional ultrasonoscopy, then two original experimental works: initially, the transfer of the technique of biliodigestive anastomosis (performed regularly in our center ) at the portosystemic vascular approach on healthy animal, then in a second time the validity of the animal model technique of liver fibrosis.The first series of experiments led to the development of the technique for the creation of an intrahepatic shunt portosystemic by echoendoscopy in 23 healthy pigs, in collaboration with the vascular radiology team. These procedures were performed in an experimental vascular catheterization room (Caviti laboratory) as part of the ISIT host laboratory (Image Science for Interventional Techniques, Prof. L. Boyer, Pr. J.-Y.Boire, UMR CNRS / UDA 6284). The results were conclusive since the shunt appeared feasible in 91% of cases, functional in 81% of cases with a morbidity of 14.2%. The second series of experiments validated this endoscopic ultrasound technique in a porcine model of liver fibrosis by X-ray embolization, in collaboration with Theix National Institute for Food Research for Animal Stabling. This multidisciplinary work has allowed close collaboration between endoscopists, radiologists, visceral surgeons and anatomopathologists, as part of a transversal research approach. The results are encouraging since a porto-systemic intrahepatic shunt by endoscopic ultrasonography proved to be technically feasible and functional on a hepatic fibrosis model with a 7-day survival of the animals in two-thirds of the cases. Before considering a primary study in humans, additional studies are nevertheless necessary on porcine models presenting hepatic fibrosis associated with portal hypertension by increasing the duration of stabulation, by homogenizing the procedure of skeletonization of the hepatic artery and by adjusting the dose of injected solution. This technique could eventually be an alternative in case of failure of the standard technique for complications of portal hypertension (intrahepatic portosystemic shunt transjugular) in patients then in a situation of therapeutic impasse.

Les techniques de microscopie non linéaire connaissent un essor considérable ensciences du vivant, du fait de leur capacité à imager les tissus biologiques en profondeur et àexploiter différents contrastes dont les plus connus sont la fluorescence excitée à deux photons(2PEF) et la génération de second harmonique (SHG).Ce travail de thèse 'articule autour de la métrologie de milieux diffusants et d'applicationsbiomédicales de la microscopie non linéaire. Après une présentation générale de la technique, nousdécrivons une méthode originale de mesure du coefficient de diffusion μs et du facteur d'anisotropieg de milieux turbides épais basée sur la comparaison des intensités de fluorescence épi-collectéesselon trois modalités de notre microscope non-linéaire. Notre méthode est alors appliquée à lacaractérisation de gels biomimétiques et d'échantillons d'intérêt biologique. Le manuscrit abordeensuite le problème de l'imagerie en profondeur d'explants de peau humaine ré-innervée par desneurones sensoriels de rats nouveau-nés. Le choix du marqueur neuronal fluorescent fait l'objetd'une mesure in situ de la section efficace d'absorption à deux photons de différents fluorophores.La faisabilité d'une imagerie bimodale exploitant la fluorescence de ce marqueur et la réponse SHGdu collagène fibrillaire du derme est démontrée. Le manuscrit s'achève par une étude faisant suiteà des travaux de thèse antérieurs relatifs à la quantification de la fibrose hépatique par microscopieSHG/2PEF couplée. Nous appliquons la méthode de scoring SHG développée précédemment àune cohorte de patients infectés par le virus de l'hépatite C et comparons nos résultats aux testsMETAVIR et Ishak.