Enzymatic hydrolysis of fish waste has been examined using proteolytic enzymes under different conditions of pH, enzyme to substrate ratio, and substrate concentration. Proteolytic enzymes have then been used to synthesise a protein-like product (plastein). The particular enzymes used in both parts of this study were bromelein, a-chymotrypsin, pepsin and papain. Reasonable yield was obtained. The yield of plastein was found as a function of substrate concentration. enzyme to substrate ratio, degree of hydrolysis and enzyme used. Generally, the plastein appeared to be odourless, yellowish to creamy in colour. tasteless and rich nutritionally. The insoluble plastein formed was washed, dried and then tested for its functional properties, particularly with respect to water absorption capacity, swelling capacity, oil absorption capacity. foam and foam stability, emulsion stability, gelatination, viscosity, and heat-setting properties. The functional properties of the plastein precursor (fw*hydrolysate) and of commercial proteins have also been examined. The dried plastein which was tested under different conditions was found not only to possess functional properties such as fat/water absorption, swelling and emulsion stability. but also excellent foaming properties were observed. Although plastein appeared to be gel-like before drying, it was, however. not able to retain its gelatinity after drying. Therefore, it would be possible to use it in a food system as an alternative to the material substituted without changing the texture (e.g. in cereal products). The viscosity of the plastein was varied under the conditions used. It was found to be mainly a function of the temperature and the concentration. Finally. it was noted that plastein shows heatsetting properties when prepared under certain conditions.

A mandioca (Manihot esculenta Crantz) é uma das principais culturas do mundo, havendo grande variabilidade genética. As variedades são classificadas com base na palatabilidade e toxicidade das raízes, em mansas ou doces e bravas ou amargas. Apesar da importância, o potencial da mandioca é pouco explorado, não sendo conhecidos, em nível molecular, os elementos determinantes para as suas características. Assim, pretendeu-se identificar, empregando a 2D-PAGE, proteínas que possam estar associadas com as diferenças físico-químicas das raízes tuberosas de variedades de mesa (IAC 576-70 e IAC 06-01), indústria (Cigana Preta, IAC 12 e IAC 90) e de uso misto (Vassourinha Paulista). Após extração de proteínas e separação por 2D-PAGE, as imagens dos géis foram analisadas no programa Delta2D (DECODON), sendo realizada análise estatística utilizando-se ANOVA (p<0,01), Heat Map e Análises de Componentes Principais (ACP) e de Agrupamentos. Os 146 spots de interesse foram removidos dos géis e suas proteínas digeridas e sequenciadas por espectrometria de massas. Algumas proteínas refletiram as características fenotípicas das variedades em estudo, especialmente entre as de mesa e indústria. Pela ACP, foram explicados 54,54% da variabilidade entre as amostras. A primeira componente separou as variedades exclusivamente de mesa de todas as demais, enquanto a segunda separou a IAC 90 de todas as outras, sendo esta caracterizada por um perfil proteico diferente das demais amostras de uso industrial. A IAC 576-70 e a IAC 12 apresentaram alta correlação positiva, assim como, a Vassourinha e a Cigana. A Análise de Agrupamentos corroborou as informações da ACP, revelando que o proteoma das raízes tuberosas refletiu diferenças fenotípicas entre as variedades. / Cassava (Manihot esculenta Crantz) is a main crop with large genetic variability. The varieties are classified according palatability and toxicity of the roots as sweet or bitter cassavas. Despite its importance, little is known about the molecular basis of phenotypic characteristics. Therefore, this study aimed to identify proteins associated to the differences between the sweet (\'IAC 576-70\' e \'IAC 06-01\'), bitter (\'Cigana Preta\', \'IAC 12\' e \'IAC 90\') and the mixed-use (\'Vassourinha Paulista\') varieties by 2D-PAGE. After the protein extraction and separation by 2D-PAGE, the gel images were analyzed through the software Delta 2D (DECODON), and the statistical analysis were performed with ANOVA (p<0,01), Heat Map, Principal Component Analysis (PCA) and Cluster Analysis. The 146 significant spots were removed from the gels, digested and sequenced by mass spectrometry. Some proteins were related to the physico-chemical characteristics of the varieties, especially between the sweet and the bitter. Variability of the samples was explained at the level of 54,54% by the PCA. The first component separated the sweet varieties from all others while the second one separated the \'IAC 90\' from all others. This variety was characterized by a different protein profile among the bitter cassavas. The \'IAC 576-70\' and the \'IAC 12\' were positively correlated, as well as, \'Vassourinha\' and the \'Cigana\'. Cluster Analysis agreed the PCA information, revealing that the proteomes of the tuberous roots reflected phenotypic differences among the varieties.

A análise do perfil metabólico de frutos em amadurecimento pode prover informações a respeito de quais as vias metabólicas são ativadas e inativadas durante o processo. Tais informações podem auxiliar na identificação de genes expressos nessa fase do ciclo de vida do fruto, ampliando o conhecimento sobre os mecanismos envolvidos no amadurecimento. Usando esta abordagem, este trabalho tem por objetivo identificar mudanças significativas nos níveis de metabólitos da banana durante o amadurecimento induzido pelo etileno. Para tal utilizou-se a cromatografia em fase gasosa acoplada a espectrometria de massas para a análise em função do poder de resolução da técnica. Utilizando a biblioteca de espectros de massa NIST 98 foi possível identificar 70 substâncias na fração polar e 40 substâncias na fração apoiar incluindo aminoácidos, açúcares, ácidos orgânicos, lipídeos entre outros. A análise de perfil metabólico revelou importantes variações nos níveis metabólicos de açúcares e ácidos orgânicos, provavelmente devido ao aumento na taxa respiratória do fruto. A maltose e o mio-inositol foram os metabólitos escolhidos para uma análise mais detalhada, que evidenciou a influência de outros metabólitos independentes do etileno na regulação dos eventos da degradação do amido. / The analysis of the metabolic profile of fruits can provide information regarding which metabolic ways are activated and inactivated during the ripening. Such information may help the identification of expressed genes in this process extending the knowledge on the involved mechanisms of ripening. Using this approach, the aim of this work was identify significant changes in the levels of metabolites of the banana during the ripening induced by ethylene. In this way it was used gas chromatography connected the mass spectrometry for these analysis, due to the high resolution of this technique. Using the NIST 98 library of mass spectra it was possible to identify about 70 substances in the polar fraction and 40 substances in the apolar fraction, including amino acids, sugars, organic acid, lipids, and others. The analysis of metabolic profile revealed important variations in the metabolic levels of organic acid sugars and, probably due to an increase in the respiratory rate of the fruit. A detailed analysis was conducted with maltose and myo-inosytol and revealed the influence of other metabolites which independed of ethylene, in the regulation of starch degradation.

No amadurecimento ocorrem alterações bioquímicas que têm impacto nas características organolépticas dos frutos, tais como cor, sabor, odor, maciez, etc e também na composição química com reflexos no valor nutricional. Nesse processo altamente coordenado, em que enzimas são sintetizadas de novo, a expressão gênica desempenha um papel importante em seu controle. Porém no que tange a frutos tropicais, em especial a banana (fruto de estudo), as informações relativas ao controle de expressão gênica, se restringem a algumas enzimas-chave. Assim sendo, uma abordagem ampla, e não restrita somente a alguns genes, pode contribuir para o entendimento da regulação de algumas etapas metabólicas do amadurecimento. Deste modo, o objetivo desse trabalho foi identificar genes com variação de expressão durante o amadurecimento da banana. O trabalho experimental foi feito com dois tipos de amostras, uma referente ao período pré-climatérico e a outra ao climatérico. Para tanto, foram utilizadas duas técnicas com princípios diferentes: \"differential display\" RT-PCR e a biblioteca de subtração de cDNA, de modo a otimizar e ampliar a possibilidade de se obterem genes diferentes, e que, por ventura, fossem obtidos por uma técnica, mas não por outra. Ambas metodologias tiveram como ponto de partida a extração de RNA de amostras de banana referentes aos dois períodos em estudo. Ao utilizar a técnica \"differential display\" RT-PCR foram obtidos nove genes com variação de expressão, quatro com aumento de expressão em bananas pré-climatéricas, similares à imunofilina, translocador de adenina nucleotídeo, proteína de cloroplasto e proteína bacteriana e cinco com aumento de expressão no período climatérico, similares à aquaporina, legumina, desoxiguanosina quinase, NADH dehidrogenase e proteína bacteriana. Com a biblioteca de subtração de cDNA foram obtidos cinco genes com aumento de expressão em bananas climatéricas, os quais foram similares à expansina, omega-3-desaturase, taumatina, NADH mitocôndrial e metalotioneína. / During ripening many biochemistry modifications have impact in organoleptical characteristics of fruits, like colour, flavor, softness, etc and also in chemical composition (nutritional value). In this process highly coordinated, which enzymes are de novo synthesize, genic expression has an important role in this control. However, in tropical fruits, especially banana (fruit choosen), some information relative to gene expression control, are restrict to some key enzymes. An approach, not only restrict to some genes, can contribute to understand some ripening metabolic steps. So, the objective ot this work was obtain and identify genes with altered expression in banana ripening, defining two analysis fases, about respiratory period and ethylene pick. The experimental work used two kinds of sample, one of them before climateric period and the other after climateric period. They were applied two tecniques with different principle: differential display RT-PCR and cDNA subtraction library, to optimize and increase the possibility to obtain different genes, and which can be obtain by one technique but not in other. Both metodologies had the same first step, the RNA extraction. Following, genes with altered expression were obtained, identified and confirmed. In differential display RT-PCR were obtained nine genes, four of them had an increase of expression before climateric bananas and they were similar to immunophilin, adenine nucleotide translocator, chloroplast protein and bacterial protein and five with an increase of expression after climateric which were similar to aquaporin, legumin, desoxiguanosine quinase, NADH dehydrogenase and bacterial protein. Using cDNA subtraction Iibrary were obtained five genes with an increase of expression in post-climateric bananas and these sequences were similar to expansin, omega-3-desaturase, thaumatin, NADH mithocondrial and methalotionein.

Dependendo da cultivar, a banana acumula entre 15 e 22% de amido de reserva, durante o desenvolvimento. Este amido é degradado durante o amadurecimento, com a síntese e acúmulo concomitantes de 12 a 20% de açúcares solúveis. Dentre as várias mudanças que a banana sofre durante o amadurecimento, esta é uma das mais complexas e ainda muito pouco conhecida. Dentre as várias enzimas possivelmente relacionadas à degradação do amido, foi detectada a atividade da &#945;-(1,4) glicosidase em extratos de polpa de banana em amadurecimento. Neste trabalho, estudou-se a atividade da &#945;-(1,4) glicosidase, a clonagem do seu gene e a transcrição do respectivo mRNA da &#945;-(1,4) durante o amadurecimento da banana tratada ou não com 100 ppm de etileno. Ambas as isoformas, neutra e ácida, tiveram perfis de atividade paralela à degradação do amido, compatível com uma possível atuação sobre compostos derivados da degradação do amido. Já que nenhuma das isoformas atua sobre a maltose, parece não tratar-se de uma maltase típica. Além disso, o seqüenciamento de parte do gene da isoforma neutra mostrou alta homologia com glicosidases de outros vegetais, confirmando a sua identidade. Em amostras de banana não tratadas foi observada um aumento no nível de transcrito de &#945;-glicosidase neutra, contudo, com alterações no perfil de atividade. Quando as amostras de banana foram tratadas com 100 ppm de etileno, foi observado um aumento nos níveis de transcrito de &#945;-glicosidase constante durante todo o amadurecimento. / Banana fruit accumulates between 15 and 22% of reserve starch, during development, depending on the cultivar. The starch is degraded during banana ripening, in concomitance with soluble sugars accumulation (12-20%). Among the changes that banana fruit suffers during ripening, this is one of most complex and still very little known. Alpha-(1,4) glucosidase activity was already detected before in banana pulp extracts. Here we report the study of the &#945;-(1,4) glucosidase activity, the clone of its gene and the transcription of respective mRNA of &#945;-(1,4) during the banana (treated or not with 100 ppm of ethylene) ripening. Both isoformas, neutral and acid, had an increase in activity concomitant with starch degradation. Since both forms do not act on maltose, it is possible that they utilize oligossacharides derived from starch degradation as substrate. Moreover, a partial cDNA sequence of neutral isoform, showed high similarity with glucosidases of other vegetables. Bananas samples treated with 100 ppm of ethylene, showed an increase in the constant transcript levels of &#945;-(1,4) glucosidase during all the ripening.

Se a população mundial crescer de acordo com o previsto nas próximas décadas, estratégias ainda mais criativas serão necessárias para aumentar o rendimento e reduzir os custos da produção global de alimentos. Para superar esse imenso desafio, novos cultivares vem sendo desenvolvidos, através de diferentes técnicas, e com diferentes características, para se alcançar uma maior produção de alimentos. Para conservação dessa produção vários métodos podem ser empregados, e a radiação ionizante do Cobalto-60 constitui um método seguro e eficaz para o aumento no tempo de vida útil dos alimentos. Devido à importância comercial e nutricional da soja, possíveis alterações promovidas devem ser estudadas. O presente trabalho visa determinação dessas possíveis alterações causadas pela irradiação (com doses de 2, 4 e 8 kGy) em grãos crus e cozidos, de cinco diferentes cultivares de soja (BRS 212, BRS 213, BRS 214, BRS 231 e E48) através de análises físicas de tempo de cocção e hidratação, e de análises químicas de composição centesimal, digestibilidade in vitro de proteínas, porcentagem de desaminação, análises de compostos fenólicos totais, inibidores de tripsina e taninos. A quantidade de água absorvida pelos grãos variou de 14 a 16,66 mL, e o tempo de cocção de 119,67 a 291,33 minutos. Dentro da composição química foram encotrados valores para cinza que variaram de 4,90 a 6,08%, para proteína de 21,23 a 36,99%, para gordura de 19,22 a 24,84%, para fibras solúveis de 1,37 a 4,03% e para insolúveis de 15,97 a 18,87%. A porcentagem de desaminação nas diferentes amostras variou de 17,34 a 57,79% e a digestibilidade in vitro de 84,45 a 89,11%. Dentro dos fatores antinutricionais, os compostos fenólicos totais variaram de 3,9 a 9,7 mg/g, as unidades de tripsina inibidas de 24,75 a 57,53 UTI/g e os taninos de 0,02 a 0,32 mg/g. Para as análises físicas houve diferenças no tempo de hidratação entre os cultivares e a irradiação promoveu redução no tempo, mas não na quantidade de água absorvida; no tempo de cocção houve diminuição com o aumento das doses de radiação; as diferenças encontradas na composição centesimal não tiveram influencia do tratamento de irradiação, e sim dos diferentes cultivares; para a digestibilidade foram encontradas alterações somente com o tratamento de cocção, sendo que houve aumento após o cozimento dos grãos; o tratamento de irradiação promoveu aumento na porcentagem de desaminação das amostras com o aumento das doses; com relação aos fatores antinutricionais, todos sofreram redução conforme aumento da dose de radiação, tanto nas amostras cruas quanto nas amostras cozidas; a cocção também promoveu redução no teor dos antinutrientes analisados. Assim sendo, o tratamento de irradiação não promoveu redução nas qualidades nutricionais dos grãos de soja, sendo efetivo na melhora das mesmas com a diminuição nos teores de antinutrientes presentes. / With the increasement of the world population, criative strategies will be necessary to control food prodution. To achieve this chalenge, new cultivars have been development, though different tecniques and characteristics. To improve food conservation, a planty of methods can be used. The use of Cobalto-60 radiation is a secure and useful method to increase the life time of foods. Due to the commercial and nutritional importance of soybean, some alterations must be studied. This study has the objective to determinate this alterations caused by irradiation (with doses of 2, 4 and 8 kGy) in raw and cooked grain of five different cultivars of soybean (BRS 212, BRS 213, BRS 214, 231 BRS and E48), this study inclues analysis of time cooking and hidratation, and chemical analysis of proximate composition, in vitro digestibility of proteins, percentage of deamidation , phenolics compounds, trypsin inhibitors and tannins. The amount of water absorved by each grain varied from 14.00 to 16.66mL, and the time cooking varied from 119.67 to 291.33 minutes. The values found for asch were 4.90 to 6.08%, for protein from 21.23 to 36.99%, for fat from 19.22 to 24.84%, soluble staple fibres from 1.37 to 4.03% and insoluble staple fibres from 15.97 to 18.87%. The deamidation percentage in the different samples varied of 17,34 to 57.79% and the digestibility in vitro from 84.45 to 89.11%. Inside of the antinutritionals factors, the total compounds phenolics varied from 3.9 to 9.7 mg/g, the units of trypsin inhibited from 24.75 to 57.53 UTI/g and the tannins from 0.02 to 0.32 mg/g. For the physical analyses it showed differences in the time of hidratation among them and the irradiation promoted reduction in the time, but not in the amount of absorbed water; in the cooking time it had reduction with the increase of the doses of radiation; the differences found in the proximate composition didn´t have influence with the irradiation, but with the different cultivars; for the digestibility alterations only with the cooking treatment had been found, showing an increasement after the baking; the treatment of irradiation promoted a higher percentage of deamidation of the samples with the increase of the doses; regard to the antinutritional factors, all them had a reduction as the doses radiation increased. The cooking also promoted a reduction in the antinutritional factors in the raw and baked samples. So the treatment of irradiation did not promote reduction in the nutritional qualities of the soybean grains, being effective in the improvement of them with the reduction in the antinutrients factors.

Se a população mundial crescer de acordo com o previsto nas próximas décadas, estratégias ainda mais criativas serão necessárias para aumentar o rendimento e reduzir os custos da produção global de alimentos. Para superar esse imenso desafio, novos cultivares vem sendo desenvolvidos, através de diferentes técnicas, e com diferentes características, para se alcançar uma maior produção de alimentos. Para conservação dessa produção vários métodos podem ser empregados, e a radiação ionizante do Cobalto-60 constitui um método seguro e eficaz para o aumento no tempo de vida útil dos alimentos. Devido à importância comercial e nutricional da soja, possíveis alterações promovidas devem ser estudadas. O presente trabalho visa determinação dessas possíveis alterações causadas pela irradiação (com doses de 2, 4 e 8 kGy) em grãos crus e cozidos, de cinco diferentes cultivares de soja (BRS 212, BRS 213, BRS 214, BRS 231 e E48) através de análises físicas de tempo de cocção e hidratação, e de análises químicas de composição centesimal, digestibilidade in vitro de proteínas, porcentagem de desaminação, análises de compostos fenólicos totais, inibidores de tripsina e taninos. A quantidade de água absorvida pelos grãos variou de 14 a 16,66 mL, e o tempo de cocção de 119,67 a 291,33 minutos. Dentro da composição química foram encotrados valores para cinza que variaram de 4,90 a 6,08%, para proteína de 21,23 a 36,99%, para gordura de 19,22 a 24,84%, para fibras solúveis de 1,37 a 4,03% e para insolúveis de 15,97 a 18,87%. A porcentagem de desaminação nas diferentes amostras variou de 17,34 a 57,79% e a digestibilidade in vitro de 84,45 a 89,11%. Dentro dos fatores antinutricionais, os compostos fenólicos totais variaram de 3,9 a 9,7 mg/g, as unidades de tripsina inibidas de 24,75 a 57,53 UTI/g e os taninos de 0,02 a 0,32 mg/g. Para as análises físicas houve diferenças no tempo de hidratação entre os cultivares e a irradiação promoveu redução no tempo, mas não na quantidade de água absorvida; no tempo de cocção houve diminuição com o aumento das doses de radiação; as diferenças encontradas na composição centesimal não tiveram influencia do tratamento de irradiação, e sim dos diferentes cultivares; para a digestibilidade foram encontradas alterações somente com o tratamento de cocção, sendo que houve aumento após o cozimento dos grãos; o tratamento de irradiação promoveu aumento na porcentagem de desaminação das amostras com o aumento das doses; com relação aos fatores antinutricionais, todos sofreram redução conforme aumento da dose de radiação, tanto nas amostras cruas quanto nas amostras cozidas; a cocção também promoveu redução no teor dos antinutrientes analisados. Assim sendo, o tratamento de irradiação não promoveu redução nas qualidades nutricionais dos grãos de soja, sendo efetivo na melhora das mesmas com a diminuição nos teores de antinutrientes presentes. / With the increasement of the world population, criative strategies will be necessary to control food prodution. To achieve this chalenge, new cultivars have been development, though different tecniques and characteristics. To improve food conservation, a planty of methods can be used. The use of Cobalto-60 radiation is a secure and useful method to increase the life time of foods. Due to the commercial and nutritional importance of soybean, some alterations must be studied. This study has the objective to determinate this alterations caused by irradiation (with doses of 2, 4 and 8 kGy) in raw and cooked grain of five different cultivars of soybean (BRS 212, BRS 213, BRS 214, 231 BRS and E48), this study inclues analysis of time cooking and hidratation, and chemical analysis of proximate composition, in vitro digestibility of proteins, percentage of deamidation , phenolics compounds, trypsin inhibitors and tannins. The amount of water absorved by each grain varied from 14.00 to 16.66mL, and the time cooking varied from 119.67 to 291.33 minutes. The values found for asch were 4.90 to 6.08%, for protein from 21.23 to 36.99%, for fat from 19.22 to 24.84%, soluble staple fibres from 1.37 to 4.03% and insoluble staple fibres from 15.97 to 18.87%. The deamidation percentage in the different samples varied of 17,34 to 57.79% and the digestibility in vitro from 84.45 to 89.11%. Inside of the antinutritionals factors, the total compounds phenolics varied from 3.9 to 9.7 mg/g, the units of trypsin inhibited from 24.75 to 57.53 UTI/g and the tannins from 0.02 to 0.32 mg/g. For the physical analyses it showed differences in the time of hidratation among them and the irradiation promoted reduction in the time, but not in the amount of absorbed water; in the cooking time it had reduction with the increase of the doses of radiation; the differences found in the proximate composition didn´t have influence with the irradiation, but with the different cultivars; for the digestibility alterations only with the cooking treatment had been found, showing an increasement after the baking; the treatment of irradiation promoted a higher percentage of deamidation of the samples with the increase of the doses; regard to the antinutritional factors, all them had a reduction as the doses radiation increased. The cooking also promoted a reduction in the antinutritional factors in the raw and baked samples. So the treatment of irradiation did not promote reduction in the nutritional qualities of the soybean grains, being effective in the improvement of them with the reduction in the antinutrients factors.

No amadurecimento ocorrem alterações bioquímicas que têm impacto nas características organolépticas dos frutos, tais como cor, sabor, odor, maciez, etc e também na composição química com reflexos no valor nutricional. Nesse processo altamente coordenado, em que enzimas são sintetizadas de novo, a expressão gênica desempenha um papel importante em seu controle. Porém no que tange a frutos tropicais, em especial a banana (fruto de estudo), as informações relativas ao controle de expressão gênica, se restringem a algumas enzimas-chave. Assim sendo, uma abordagem ampla, e não restrita somente a alguns genes, pode contribuir para o entendimento da regulação de algumas etapas metabólicas do amadurecimento. Deste modo, o objetivo desse trabalho foi identificar genes com variação de expressão durante o amadurecimento da banana. O trabalho experimental foi feito com dois tipos de amostras, uma referente ao período pré-climatérico e a outra ao climatérico. Para tanto, foram utilizadas duas técnicas com princípios diferentes: \"differential display\" RT-PCR e a biblioteca de subtração de cDNA, de modo a otimizar e ampliar a possibilidade de se obterem genes diferentes, e que, por ventura, fossem obtidos por uma técnica, mas não por outra. Ambas metodologias tiveram como ponto de partida a extração de RNA de amostras de banana referentes aos dois períodos em estudo. Ao utilizar a técnica \"differential display\" RT-PCR foram obtidos nove genes com variação de expressão, quatro com aumento de expressão em bananas pré-climatéricas, similares à imunofilina, translocador de adenina nucleotídeo, proteína de cloroplasto e proteína bacteriana e cinco com aumento de expressão no período climatérico, similares à aquaporina, legumina, desoxiguanosina quinase, NADH dehidrogenase e proteína bacteriana. Com a biblioteca de subtração de cDNA foram obtidos cinco genes com aumento de expressão em bananas climatéricas, os quais foram similares à expansina, omega-3-desaturase, taumatina, NADH mitocôndrial e metalotioneína. / During ripening many biochemistry modifications have impact in organoleptical characteristics of fruits, like colour, flavor, softness, etc and also in chemical composition (nutritional value). In this process highly coordinated, which enzymes are de novo synthesize, genic expression has an important role in this control. However, in tropical fruits, especially banana (fruit choosen), some information relative to gene expression control, are restrict to some key enzymes. An approach, not only restrict to some genes, can contribute to understand some ripening metabolic steps. So, the objective ot this work was obtain and identify genes with altered expression in banana ripening, defining two analysis fases, about respiratory period and ethylene pick. The experimental work used two kinds of sample, one of them before climateric period and the other after climateric period. They were applied two tecniques with different principle: differential display RT-PCR and cDNA subtraction library, to optimize and increase the possibility to obtain different genes, and which can be obtain by one technique but not in other. Both metodologies had the same first step, the RNA extraction. Following, genes with altered expression were obtained, identified and confirmed. In differential display RT-PCR were obtained nine genes, four of them had an increase of expression before climateric bananas and they were similar to immunophilin, adenine nucleotide translocator, chloroplast protein and bacterial protein and five with an increase of expression after climateric which were similar to aquaporin, legumin, desoxiguanosine quinase, NADH dehydrogenase and bacterial protein. Using cDNA subtraction Iibrary were obtained five genes with an increase of expression in post-climateric bananas and these sequences were similar to expansin, omega-3-desaturase, thaumatin, NADH mithocondrial and methalotionein.

Dependendo da cultivar, a banana acumula entre 15 e 22% de amido de reserva, durante o desenvolvimento. Este amido é degradado durante o amadurecimento, com a síntese e acúmulo concomitantes de 12 a 20% de açúcares solúveis. Dentre as várias mudanças que a banana sofre durante o amadurecimento, esta é uma das mais complexas e ainda muito pouco conhecida. Dentre as várias enzimas possivelmente relacionadas à degradação do amido, foi detectada a atividade da &#945;-(1,4) glicosidase em extratos de polpa de banana em amadurecimento. Neste trabalho, estudou-se a atividade da &#945;-(1,4) glicosidase, a clonagem do seu gene e a transcrição do respectivo mRNA da &#945;-(1,4) durante o amadurecimento da banana tratada ou não com 100 ppm de etileno. Ambas as isoformas, neutra e ácida, tiveram perfis de atividade paralela à degradação do amido, compatível com uma possível atuação sobre compostos derivados da degradação do amido. Já que nenhuma das isoformas atua sobre a maltose, parece não tratar-se de uma maltase típica. Além disso, o seqüenciamento de parte do gene da isoforma neutra mostrou alta homologia com glicosidases de outros vegetais, confirmando a sua identidade. Em amostras de banana não tratadas foi observada um aumento no nível de transcrito de &#945;-glicosidase neutra, contudo, com alterações no perfil de atividade. Quando as amostras de banana foram tratadas com 100 ppm de etileno, foi observado um aumento nos níveis de transcrito de &#945;-glicosidase constante durante todo o amadurecimento. / Banana fruit accumulates between 15 and 22% of reserve starch, during development, depending on the cultivar. The starch is degraded during banana ripening, in concomitance with soluble sugars accumulation (12-20%). Among the changes that banana fruit suffers during ripening, this is one of most complex and still very little known. Alpha-(1,4) glucosidase activity was already detected before in banana pulp extracts. Here we report the study of the &#945;-(1,4) glucosidase activity, the clone of its gene and the transcription of respective mRNA of &#945;-(1,4) during the banana (treated or not with 100 ppm of ethylene) ripening. Both isoformas, neutral and acid, had an increase in activity concomitant with starch degradation. Since both forms do not act on maltose, it is possible that they utilize oligossacharides derived from starch degradation as substrate. Moreover, a partial cDNA sequence of neutral isoform, showed high similarity with glucosidases of other vegetables. Bananas samples treated with 100 ppm of ethylene, showed an increase in the constant transcript levels of &#945;-(1,4) glucosidase during all the ripening.

A análise do perfil metabólico de frutos em amadurecimento pode prover informações a respeito de quais as vias metabólicas são ativadas e inativadas durante o processo. Tais informações podem auxiliar na identificação de genes expressos nessa fase do ciclo de vida do fruto, ampliando o conhecimento sobre os mecanismos envolvidos no amadurecimento. Usando esta abordagem, este trabalho tem por objetivo identificar mudanças significativas nos níveis de metabólitos da banana durante o amadurecimento induzido pelo etileno. Para tal utilizou-se a cromatografia em fase gasosa acoplada a espectrometria de massas para a análise em função do poder de resolução da técnica. Utilizando a biblioteca de espectros de massa NIST 98 foi possível identificar 70 substâncias na fração polar e 40 substâncias na fração apoiar incluindo aminoácidos, açúcares, ácidos orgânicos, lipídeos entre outros. A análise de perfil metabólico revelou importantes variações nos níveis metabólicos de açúcares e ácidos orgânicos, provavelmente devido ao aumento na taxa respiratória do fruto. A maltose e o mio-inositol foram os metabólitos escolhidos para uma análise mais detalhada, que evidenciou a influência de outros metabólitos independentes do etileno na regulação dos eventos da degradação do amido. / The analysis of the metabolic profile of fruits can provide information regarding which metabolic ways are activated and inactivated during the ripening. Such information may help the identification of expressed genes in this process extending the knowledge on the involved mechanisms of ripening. Using this approach, the aim of this work was identify significant changes in the levels of metabolites of the banana during the ripening induced by ethylene. In this way it was used gas chromatography connected the mass spectrometry for these analysis, due to the high resolution of this technique. Using the NIST 98 library of mass spectra it was possible to identify about 70 substances in the polar fraction and 40 substances in the apolar fraction, including amino acids, sugars, organic acid, lipids, and others. The analysis of metabolic profile revealed important variations in the metabolic levels of organic acid sugars and, probably due to an increase in the respiratory rate of the fruit. A detailed analysis was conducted with maltose and myo-inosytol and revealed the influence of other metabolites which independed of ethylene, in the regulation of starch degradation.