A identificação de novos alvos terapêuticos no tratamento de glioblastomas multiformes (GBMs) se faz necessária devido ao mau prognóstico e ineficiência das terapias associadas a esses tumores. Nesta dissertação, avaliamos o envolvimento do Fator Nuclear kappaB (NFkappaB) e da via da PI3K/Akt no crescimento in vitro de glioblastomas, e o potencial uso dos inibidores de NFkappaB e de PI3K/Akt como possíveis agentes antitumorais. Com esta finalidade foram utilizados os inibidores farmacológicos de NFkappaB (partenolide), e de PI3K/Akt (quercetina e Ly294002), e o inibidor misto de NFkappaB/Akt (curcumina). Os inibidores de NFkappaB causaram uma significativa diminuição na viabilidade dos GBMs quando comparado com os inibidores de outras vias de sinalização (MAPK, MEK/ERK1/2, EGFr e JNK1/2), a qual foi tipo dose resposta. Além disso, os inibidores de NFkappaB apresentaram extravasamento de LDH no meio de cultura e perda de integridade da membrana plasmática que foi vista através da técnica do Iodeto de Propideo (PI). Já os inibidores de PI3K/Akt apresentaram um menor efeito do que o apresentado pelos inibidores de NFkappaB, não demonstrando uma curva do tipo dose resposta, ainda assim, diminuíram a viabilidade dos GBMs. Entretanto, não apresentaram extravasamento de LDH no meio de cultura, e não houve incorporação de PI, mostrando que, diferentemente do que ocorre com os inibidores de NFkappaB, a perda de viabilidade vista nas células tratadas com os inibidores de PI3K/Akt está preponderavelmente relacionada com uma diminuição na proliferação, e não com morte celular. Vimos também que os inibidores foram capazes de alterar o imunoconteúdo de fatores relacionados com morte e sobrevivência celular, tais como caspase 3, LC3 A/B, PARP e Hsp70, assim como o ciclo celular. Portanto, nossos resultados demonstram que a via da PI3K/Akt parece estar preferencialmente relacionada com a proliferação celular, enquanto a via do NFkappaB preferencialmente com sobrevivência. / The identification of new therapeutic targets for treatment of glioblastoma multiforme (GBMs) is necessary due to poor prognosis and ineffective therapies associated with these tumors. In this study we have assessed the role of Nuclear Factor-kappaB (NFkappaB) and the PI3K/Akt pathway in glioblastomas in vitro growth, and their inhibitors as potential antitumor agents. For this we used the pharmacological inhibitors of NFkappaB (Parthenolide), and PI3K/Akt (LY294002 and quercetin), and mixed inhibitor of NFkB / Akt (curcumin). NFkappaB inhibitors yielded a significant decrease in viability of GBMs compared to inhibitors of other signaling pathways (MAPK, MEK/ERK1/2, EGFr and JNK1 / 2), which was dose-dependent. Furthermore, inhibitors of NFkappaB showed LDH releasing in culture medium and membrane integrity losing, evaluated through the Propidium Iodide (PI)-based method. The PI3K/Akt inhibitors showed a smaller effect than NFkappaB inhibitors, also decreasing GBMs viability but playing no dose-dependence response. Despite there was not LDH releasing in culture medium and PI incorporation, showing that the loss of viability observed in cells treated with inhibitors of PI3K/Akt is associated with a decrease in the proliferation, unlike what happens with inhibitors of NFkappaB, no cell death was observed. We have also seen that the inhibitors were able to alter the contents of immune-related factors death and cell survival, such as caspase-3, LC3 A / B, PARP and Hsp70, as well as the cell cycle. Therefore, our results demonstrate that the PI3K/Akt pathway seems to be related to cell proliferation, while the NFkappaB pathway to survival.

A identificação de novos alvos terapêuticos no tratamento de glioblastomas multiformes (GBMs) se faz necessária devido ao mau prognóstico e ineficiência das terapias associadas a esses tumores. Nesta dissertação, avaliamos o envolvimento do Fator Nuclear kappaB (NFkappaB) e da via da PI3K/Akt no crescimento in vitro de glioblastomas, e o potencial uso dos inibidores de NFkappaB e de PI3K/Akt como possíveis agentes antitumorais. Com esta finalidade foram utilizados os inibidores farmacológicos de NFkappaB (partenolide), e de PI3K/Akt (quercetina e Ly294002), e o inibidor misto de NFkappaB/Akt (curcumina). Os inibidores de NFkappaB causaram uma significativa diminuição na viabilidade dos GBMs quando comparado com os inibidores de outras vias de sinalização (MAPK, MEK/ERK1/2, EGFr e JNK1/2), a qual foi tipo dose resposta. Além disso, os inibidores de NFkappaB apresentaram extravasamento de LDH no meio de cultura e perda de integridade da membrana plasmática que foi vista através da técnica do Iodeto de Propideo (PI). Já os inibidores de PI3K/Akt apresentaram um menor efeito do que o apresentado pelos inibidores de NFkappaB, não demonstrando uma curva do tipo dose resposta, ainda assim, diminuíram a viabilidade dos GBMs. Entretanto, não apresentaram extravasamento de LDH no meio de cultura, e não houve incorporação de PI, mostrando que, diferentemente do que ocorre com os inibidores de NFkappaB, a perda de viabilidade vista nas células tratadas com os inibidores de PI3K/Akt está preponderavelmente relacionada com uma diminuição na proliferação, e não com morte celular. Vimos também que os inibidores foram capazes de alterar o imunoconteúdo de fatores relacionados com morte e sobrevivência celular, tais como caspase 3, LC3 A/B, PARP e Hsp70, assim como o ciclo celular. Portanto, nossos resultados demonstram que a via da PI3K/Akt parece estar preferencialmente relacionada com a proliferação celular, enquanto a via do NFkappaB preferencialmente com sobrevivência. / The identification of new therapeutic targets for treatment of glioblastoma multiforme (GBMs) is necessary due to poor prognosis and ineffective therapies associated with these tumors. In this study we have assessed the role of Nuclear Factor-kappaB (NFkappaB) and the PI3K/Akt pathway in glioblastomas in vitro growth, and their inhibitors as potential antitumor agents. For this we used the pharmacological inhibitors of NFkappaB (Parthenolide), and PI3K/Akt (LY294002 and quercetin), and mixed inhibitor of NFkB / Akt (curcumin). NFkappaB inhibitors yielded a significant decrease in viability of GBMs compared to inhibitors of other signaling pathways (MAPK, MEK/ERK1/2, EGFr and JNK1 / 2), which was dose-dependent. Furthermore, inhibitors of NFkappaB showed LDH releasing in culture medium and membrane integrity losing, evaluated through the Propidium Iodide (PI)-based method. The PI3K/Akt inhibitors showed a smaller effect than NFkappaB inhibitors, also decreasing GBMs viability but playing no dose-dependence response. Despite there was not LDH releasing in culture medium and PI incorporation, showing that the loss of viability observed in cells treated with inhibitors of PI3K/Akt is associated with a decrease in the proliferation, unlike what happens with inhibitors of NFkappaB, no cell death was observed. We have also seen that the inhibitors were able to alter the contents of immune-related factors death and cell survival, such as caspase-3, LC3 A / B, PARP and Hsp70, as well as the cell cycle. Therefore, our results demonstrate that the PI3K/Akt pathway seems to be related to cell proliferation, while the NFkappaB pathway to survival.

A identificação de novos alvos terapêuticos no tratamento de glioblastomas multiformes (GBMs) se faz necessária devido ao mau prognóstico e ineficiência das terapias associadas a esses tumores. Nesta dissertação, avaliamos o envolvimento do Fator Nuclear kappaB (NFkappaB) e da via da PI3K/Akt no crescimento in vitro de glioblastomas, e o potencial uso dos inibidores de NFkappaB e de PI3K/Akt como possíveis agentes antitumorais. Com esta finalidade foram utilizados os inibidores farmacológicos de NFkappaB (partenolide), e de PI3K/Akt (quercetina e Ly294002), e o inibidor misto de NFkappaB/Akt (curcumina). Os inibidores de NFkappaB causaram uma significativa diminuição na viabilidade dos GBMs quando comparado com os inibidores de outras vias de sinalização (MAPK, MEK/ERK1/2, EGFr e JNK1/2), a qual foi tipo dose resposta. Além disso, os inibidores de NFkappaB apresentaram extravasamento de LDH no meio de cultura e perda de integridade da membrana plasmática que foi vista através da técnica do Iodeto de Propideo (PI). Já os inibidores de PI3K/Akt apresentaram um menor efeito do que o apresentado pelos inibidores de NFkappaB, não demonstrando uma curva do tipo dose resposta, ainda assim, diminuíram a viabilidade dos GBMs. Entretanto, não apresentaram extravasamento de LDH no meio de cultura, e não houve incorporação de PI, mostrando que, diferentemente do que ocorre com os inibidores de NFkappaB, a perda de viabilidade vista nas células tratadas com os inibidores de PI3K/Akt está preponderavelmente relacionada com uma diminuição na proliferação, e não com morte celular. Vimos também que os inibidores foram capazes de alterar o imunoconteúdo de fatores relacionados com morte e sobrevivência celular, tais como caspase 3, LC3 A/B, PARP e Hsp70, assim como o ciclo celular. Portanto, nossos resultados demonstram que a via da PI3K/Akt parece estar preferencialmente relacionada com a proliferação celular, enquanto a via do NFkappaB preferencialmente com sobrevivência. / The identification of new therapeutic targets for treatment of glioblastoma multiforme (GBMs) is necessary due to poor prognosis and ineffective therapies associated with these tumors. In this study we have assessed the role of Nuclear Factor-kappaB (NFkappaB) and the PI3K/Akt pathway in glioblastomas in vitro growth, and their inhibitors as potential antitumor agents. For this we used the pharmacological inhibitors of NFkappaB (Parthenolide), and PI3K/Akt (LY294002 and quercetin), and mixed inhibitor of NFkB / Akt (curcumin). NFkappaB inhibitors yielded a significant decrease in viability of GBMs compared to inhibitors of other signaling pathways (MAPK, MEK/ERK1/2, EGFr and JNK1 / 2), which was dose-dependent. Furthermore, inhibitors of NFkappaB showed LDH releasing in culture medium and membrane integrity losing, evaluated through the Propidium Iodide (PI)-based method. The PI3K/Akt inhibitors showed a smaller effect than NFkappaB inhibitors, also decreasing GBMs viability but playing no dose-dependence response. Despite there was not LDH releasing in culture medium and PI incorporation, showing that the loss of viability observed in cells treated with inhibitors of PI3K/Akt is associated with a decrease in the proliferation, unlike what happens with inhibitors of NFkappaB, no cell death was observed. We have also seen that the inhibitors were able to alter the contents of immune-related factors death and cell survival, such as caspase-3, LC3 A / B, PARP and Hsp70, as well as the cell cycle. Therefore, our results demonstrate that the PI3K/Akt pathway seems to be related to cell proliferation, while the NFkappaB pathway to survival.

The aim of our study was to evaluate the effects of a resistance exercise session on the vascular action of insulin in superior mesenteric artery of rats. Wistar rats (250-300g) were divided into 3 groups: control (CT, n = 20), electrically stimulated (ES, n = 5) and resistance exercise (RE, n = 20). The exercise was conducted in the apparatus of the squat, where the animals were subjected to 15 sets of 10 repetitions with 3 minutes rest between sets. The intensity was set at 70% of maximum load established by repetition maximum test performed 48h before the exercise session. The animals were kept suspended in EE squat machine and received the same intensity of electrical stimuli applied to the exercised animals. Immediately after the single resistance exercise session, the animals were anesthetized and killed by exsanguination, the superior mesenteric artery was removed and sectioned into rings (1-2 mm) which were mounted on tanks for isolated organ. The endothelium-dependent relaxation was obtained from concentration-response curves for insulin on rings precontracted with phenylephrine. After that, concentration response curves were obtained for groups CT response and ER, in the absence and/or presence of the following inhibitors: L-NAME (NOS inhibitor), TEA (inhibitor nonselective channel for K+), LY294002 (PI3K inhibitor), BQ123 ( ETA receptor antagonist), and Ouabain (inhibitor of Na+/K+-ATPase), concentration-response curves to KCl in the absence and/or presence of ouabain. According to the data obtained, we found that there was no significant difference in the relaxation induced by insulin between groups EE and CT, however, the animals in the ER showed a significant increase in relaxation when compared to CT group (p<0.001). After use of L-NAME reducing the relaxation was observed in both groups (p<0.001). When evaluating the involvement of K + channels, using TEA, relaxation was inhibited only in the RE group (p <0.001). In the presence of L-NAME+TEA relaxation in the CT group was reduced and there was a group ER contraction (p<0.001). The presence of these rings LY294002 interestingly responded in similar ways in the presence of L-NAME+TEA, promoting and inhibiting the group CT contraction curve ER group (p<0.001). The BQ123 were able to amplify the relaxation in both groups (p<0.001). Using both inhibitors (LY294002+BQ123) was observed an inhibition of contractile and relaxing effects in both groups (p<0.001). To assess the functional activity of the Na+/K+-ATPase curves were made for insulin and KCl in the absence and presence of ouabain. It was observed that ouabain was a decrease of insulin-induced relaxation only in the ER (p<0.001) and reduced the relaxation promoted by KCl in both groups, this reduction being higher in the ER (p<0.001). These data demonstrate that a single session of resistance exercise promotes adjustments in insulin-induced relaxation, which is mediated by NO, the channels for K+ and the activity of Na+/K+-ATPase. In addition, there was an effect mediated by ET-1 (via ETA receptors), necessary for the control of vascular tone. / O objetivo do nosso estudo foi avaliar o efeito agudo de uma sessão de exercício resistido na ação vascular da insulina em artéria mesentérica superior de ratos. Ratos Wistar (250-300g) foram divididos em 3 grupos: controle (CT, n = 20), eletroestimulado (EE, n = 5) e exercício resistido (ER, n = 20). O exercício foi realizado no aparelho de agachamento, onde os animais foram submetidos a 15 séries de 10 repetições, com 3 minutos de intervalo entre as séries. A intensidade foi fixada em 70% da carga máxima estabelecida pelo teste de repetição máxima, realizado 48 h antes da sessão de exercício. Os animais EE foram mantidos suspensos no aparelho de agachamento e receberam a mesma intensidade de estímulo elétrico aplicadas aos animais exercitados. Imediatamente após a única sessão de exercício resistido, os animais foram anestesiados e mortos por dessangramento, a artéria mesentérica superior foi removida e seccionada em anéis (1-2 mm), os quais foram montados em cubas para órgão isolado. O relaxamento dependente de endotélio foi obtido a de curvas concentração-resposta para a insulina, em anéis pré-contraídos com fenilefrina. Após isto, foram obtidas curvas concentração-respostas para os grupos CT e ER, na ausência e/ou na presença dos seguintes inibidores: L-NAME (inibidor da NOS); TEA (inibidor não seletivo dos canais para K+), LY294002 (inibidor da PI3K); BQ123 (antagonista do receptor ETA); e Ouabaína (inibidor da Na+/K+-ATPase); curvas concentração-resposta para KCl na ausência e/ou presença de ouabaína. De acordo com os dados obtidos, constatamos que não houve diferença significativa no relaxamento induzido por insulina entre os grupos CT e EE, entretanto, os animais do grupo ER apresentaram um aumento significativo do relaxamento quando comparado ao grupo CT (p<0,001). Após a utilização do L-NAME, foi observada redução do relaxamento em ambos os grupos (p<0,001). Quando avaliamos a participação dos canais para K+, utilizando TEA foi observado inibição do relaxamento apenas no ER (p<0,001). Na presença de L-NAME+TEA o relaxamento no grupo CT foi reduzido e no grupo ER houve uma contração (p<0,001). A presença do LY294002 interessantemente estes anéis responderam de formas similares quando na presença de L-NAME+TEA, promovendo uma inibição no grupo CT e uma contração da curva no grupo ER (p<0,001). O BQ123 foi capaz de amplificar o relaxamento em ambos os grupos (p<0,001). Utilizando ambos os inibidores (LY294002+BQ123) foi observada uma inibição tanto dos efeitos contráteis quanto dos efeitos relaxantes em ambos os grupos (p<0,001). Para avaliar a atividade funcional da Na+/K+-ATPase foram feitas curvas para insulina e KCl na ausência e na presença de ouabaína. Foi observado que a ouabaína promoveu uma redução do relaxamento induzido pela insulina apenas no grupo ER (p<0,001) e reduziu o relaxamento promovidos pelo KCl em ambos os grupos, sendo esta redução maior no grupo ER (p<0,001). Estes dados demonstram que uma sessão de exercício resistido promove ajustes no relaxamento induzido por insulina, que é mediado pelo NO, pelos canais para K+ e pela atividade da Na+/K+-ATPase. Além disso, houve um efeito mediado pela ET-1 (via receptores ETA), necessária para o controle do tônus vascular, durante o exercício.