Diez microsatélites para alpacas y llamas fueron usados para evaluar parentesco en 47 alpacas registradas de la Estación Experimental IVITA - Maranganí, provenientes de la provincia de Canchis (Cusco - Perú). El análisis se llevo a cabo utilizando dos metodologías: secuenciador automático (ABI 377 DNA sequencersâ) y técnica de tinción con nitrato de plata. Los microsatélites fueron amplificados en tres reacciones de PCR múltiple y diez reacciones de PCR simple. Los 10 microsatélites fueron polimórficos para ambas metodologías. El número de alelos vario entre 4 y 20, las frecuencias alélicas y probabilidad de exclusión (PE) fueron calculadas utilizando el software Cervus 2.0. Todos los loci, a excepción de dos, se encontraron dentro de los rangos publicados por Lang et al. (1996) y Penedo et al. (1998). La probabilidad de exclusión acumulada para los 10 loci de 0.9999. La probabilidad de exclusión acumulada para cada reacción de PCR múltiple fue mayor a 0.90. Ambas metodologías obtuvieron los mismos resultados. Los resultados confirmaron la paternidad en 17 casos, sin embargo, en más de un 22% de los casos, padres alternativos fueron identificados como padres comparando con los registros. / Ten microsatellites for alpacas and llamas were used to evaluate paternity in 47 alpacas registered at IVITA Research Station Maranganí, Canchis Province (Cusco – Perú). Analysis was carried out using both methodologies: Automatic Sequencer (ABI 377 DNA sequencersâ) and silver staining techniques. Microsatellites were amplified in three multiplex reactions and ten single PCR reactions. They were polymorphic for all alpaca samples using both methodologies. The number of alleles varied between 4 and 20, the allelic frequencies and the exclusion probability were calculated using Cervus 2.0. All loci, except for two, were within the range published by Lang et al. (1996) and Penedo et al. (1998). The accumulated exclusion probability for the ten loci was 0.9999. For each multiplex reaction the accumulated exclusion probability was more than 0.90. Both methodologies yielded the same results. It was possible obtain the same results using both methodologies. The results confirmed paternity in 17 cases of parent-offspring pairs, however in a further 22% of cases alternative adults were identified as parents compared with the register.

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / El género pestivirus pertenece a la familia Flaviviridae e incluye a virus que afectan a rumiantes domésticos como bovinos, ovinos, caprinos y camélidos sudamericanos así como también a rumiantes silvestres y cerdos. En los últimos años, en la literatura internacional, se han descrito cuatro especies de pestivirus: virus de la diarrea viral bovina genotipo 1 y 2 (VDVB-1 y VDVB-2), virus de la enfermedad de la frontera (VEF) y virus de la peste porcina clásica (VPPC). Dentro del género pestivirus, el VDVB es de distribución mundial, produce cuadros clínicos de distinta gravedad y produce grandes pérdidas económicas sobre todo por el daño a nivel reproductivo que causa en el ganado y por la presencia de animales persistentemente infectados los que actúan como reservorio de la enfermedad. Por medio de estudios moleculares, se han determinado varios subgrupos dentro de cada especie viral de pestivirus, así como también, se han propuesto nuevos pestivirus propios de especies silvestres lo que ha incentivado estudios para determinar si pequeños rumiantes y especies silvestres han sufrido contagio desde el ganado bovino vía interespecies, o bien, poseen especies virales propias de pestivirus. El objetivo de esta memoria de título fue determinar el parentesco genético de aislados de pestivirus obtenidos de ovejas, cabras, alpacas y llamas naturalmente infectadas mediante el análisis de una fracción del gen de la proteína E2. Para esto, se trabajó con 25 aislados de pestivirus, los cuales fueron reactivados por medio de sucesivos pasajes por cultivos celulares y posteriormente confirmados como positivos por prueba de inmunofluorescencia directa. Se realizó extracción del ARN viral de los aislados, para poder realizar la amplificación por RT-PCR, utilizando partidores específicos. Finalmente, se realizó alineamiento de secuencias nucleotídicas y análisis filogenético, el que incluyó cepas de referencia internacionales y secuencias de aislados de bovinos chilenos. El análisis por filogenia molecular determinó que del total de 25 aislados analizados, 21 (84%) corresponden al subgrupo VDVB-1e. Los 4 aislados restantes (16%) fueron clasificados dentro del subgrupo VDVB-1b. Esto permite concluir que en pequeños rumiantes en Chile se encuentran presentes los subgrupos 1b y 1e del VDVB, estrechamente relacionados genéticamente con los aislados bovinos nacionales. / Proyecto FONDECYT 1080130

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / El Terrier Chileno es una nueva raza de perros que recientemente ha sido reconocida por el Kennel Club Chile como la primera raza originada en Chile. En la actualidad hay más de cinco generaciones registradas en el pedigrí, pero no existe información sobre la estructura genética de la raza. En el presente trabajo se investigó la variabilidad genética y se estimaron los niveles de endogamia de esta nueva población. Adicionalmente, el objetivo fue validar un conjunto de marcadores del tipo microsatélites para análisis de paternidad. El ADN se obtuvo de cincuenta fundadores de la raza no emparentados, elegidos de acuerdo a datos de pedigrí. Diecisiete microsatélites fueron genotipados y todos resultaron ser altamente polimórficos, con un número de alelos que osciló entre 4 y 14. El coeficiente de endogamia estimado para cada marcador varió de -0,02 a 0,52. Nueve microsatélites mostraron desviaciones significativas del equilibrio Hardy-Weinberg, probablemente causada por deficiencia de heterocigosidad. Se sugiere que este fenómeno podría ser consecuencia de un aislamiento poblacional ocurrido durante el desarrollo de la raza, pero se requiere mayor investigación al respecto para confirmar esta hipótesis. La probabilidad de exclusión combinada para todos los marcadores fue 0,9999. La información generada en este trabajo representa una herramienta importante que puede ser usada para conducir mejoras en la crianza del Terrier Chileno durante los próximos años y contribuirá con el proyecto que busca que la Federación Cinológica Internacional reconozca al Terrier Chileno como una raza canina oficial / Laboratorio de Investigaciones en Biotecnología y Genómica Animal (FAVET-INBIOGEN

Com o objetivo de caracterizar os órgãos e detectar variações durante o desenvolvimento foram comparados os perfis eletroforéticos de proteínas desnaturadas (SDS-PAGE) de folhas, colmo, pendão, espiga e grãos em sete genótipos de milho. Cada órgão apresentou um perfil eletroforético característico exibindo diferenças no número e concentração proteica das bandas; o mesmo acontecendo em dado órgão nos diferentes genótipos. Essas diferenças foram maiores entre órgãos do mesmo genótipo, que aquelas observadas entre genótipos diferentes considerando o mesmo órgão e estágio de desenvolvimento. As folhas, colmos e grãos apresentaram variações nas concentrações de grande número de bandas com comportamento similar nos vários genótipos durante o desenvolvimento da planta. Verificou-se alto valor percentual de bandas com concentração maior ou igual às bandas de maior concentração de suas linhas parentais, especialmente em folhas e colmo. A presença de bandas no híbrido não existentes nos parentais; e a ausência de bandas no híbrido, existentes em ambas as linhagens parentais sugerem sistemas regulatórios envolvendo mais de um fator trans, agindo na expressão de alguns polipeptídeos. As estimativas de distâncias genéticas entre linhagens e híbridos, demonstram que os valores de distância são influenciados pela escolha do órgão e estágio / Electrophoretic patterns of denatured proteins (SDS-PAGE) of leaves, stalks, tassels, ears and grains, were used to characterize and search for protein during the development of strains and hybrids of maize. Each organ showed a characteristic band pattern, in respect to number and concentration as measured by densitometry, the same observed for every genotype wich was also possible to characterize this way. However the differences among organs were greater than those observed among genotypes for a specific organ and stage of development. The leaves, stalks and grains showed similar variations in the concentration of the bands in the genotypes, and for the ears and tassels most of the variations in the concentration of the bands seemed be related to the genotype. In the simple crosses, most bands presented higher concentration, specially in leaves and stalks, than in respective parental lines. In some cases, in the hybrid, the bands resembled the parental line with high band concentration. The presence of the bands in the hybrid that are absent in their parent lines; and absence of the bands in the hybrids, although present in both parent lines, suggest regulatory systems involving more than one trans factor acting in some polypeptides expression. It was proceded the evaluation of genetic distances among lines and hybris through of the multivariate analysis. The results led to te conclusion that it is possible to obtain genetic distance values consistents with the parental relationships, but influenced by the types and stages of the organs

Foram estudadas progênies de irmãos germanos obtidas por cruzamentos em cadeia em quatro subpopulações de milho, submetidas à seleção divergente para tamanho do pendão (NR) e altura de espigas, (AE), mais a população original ESALQ PB1. Foram analisados os caracteres florescimento feminino (FF), prolificidade (PRO), altura de plantas (AP), altura de espigas (AE), número de ramificações do pendão (NR) e peso de grãos (PG). Os ensaios foram conduzidos nas localidades de Londrina e Vila Velha, ambas no estado do Paraná. Os parâmetros estimados foram as médias populacionais, variância entre progênies, herdabilidade ao nível de médias e correlações entre os seis caracteres. Os valores estimados em cada subpopulação (R+, R-, E+ e E- , representando seleção para aumento e diminuição de NR e AE, respectivamente) foram comparados com os estimados na população original com o objetivo de se avaliar o efeito da seleção divergente. Os resultados obtidos mostraram que na seleção R- , não só diminuiu o caráter (NR) , mas reduziu também AP, AE e FF, verificando-se aumento em PRO. Na seleção R+ houve aumento de NR, AP, AE e FF. A seleção E-, reduziu AP, AE, NR e FF e na linha divergente E+, verificou-se aumentos em AP, AE, NR e FF. Os dados relativos à peso de grãos foram altos em todas as populações, não se verificando efeitos marcantes da seleção sobre esse caráter. Registrou-se ligeiro aumento de PG em E+. A subpopulação E- mostrou pequena redução em PG, e em R- e R+ apenas indícios de menor PG em relação à população original. Verificou-se uma ampliação da variância para o caráter PRO nas populações R-e E+ e para o caráter NR na população R+. Para os demais, registrou-se um decréscimo da variância. As reduções mais expressivas ocorreram para o caráter NR na população R-, para o caráter FF na população E+ e para os caracteres AP, AE e PG em E-. As estimativas de herdabilidade, não sofreram alterações significativas com os ciclos de seleção. Os valores mais altos de correlação foram verificados para a associação APxAE. Verificou-se também valores altos de correlação para as associações PGxAP e PGxPRO. De um modo geral, as populações apresentaram bom potencial produtivo e ampla variabilidade para tal caráter, sendo que as populações R- e E- por possuírem outras características agronômicas desejáveis, são mais indicadas para inclusão em um programa de melhoramento. A continuidade do processo de seleção divergente poderá permitir novas inferências e melhor conheci- mento do efeito da seleção sobre a estrutura genética destas populações. / The present study was based on evaluation of full sib families obtained from chain crosses in four maize subpopulation submitted to divergent selection for tasseI size (NR) and ear placement (AE) and compared with progenies of the original population (ESALQ-PB1, PO). The character analized were days to silking (FF), prolificacy (PRO), plant height (AP), ear heigth (AE), tassel branch number (NR) and grain yield (PG). The experiments were planted at Londrina and Vila Velha, both in Paraná State. The estimated parameters were populations means, variance between progenies, heritability (broad sense) and correlation between the six characters. The estimated values in each subpopulation (R-, R+, E- e E+, representing selection to increase and decrease NR e AE respectively) were compared with the values estimated for ESALQ PBI-PO in order to evaluate the effect of divergent selection. It was observed that in R- selection there was a decrease not only in character (NR) but also in AP, AE and an increase in PRO. R+ selection also increased AP, AE and FF and in the divergent line E+ it was found an increase in AP, AE, NR, FF and PRO. The yield was high in all populations but without remarkable effects of the selection on this character. It was found a small increase of PG in E+. The subpopulation E- showed a small decrease in PG and the R- and R+ only a trend to smaller PG in relation to the original population. It was found an increase in the variance for the character PRO in the subpopulations R- and E+ and also for the character NR in R+. In the others characters it was observed a decrease of variance in all populations. The greater reductions were observed for the character NR in the R- subpopulation, for FF in E+ and for AP, AE and PG in E-. The heritability did not change significantly after five cycles of selection. In a general way, all populations exhibited good potential of grain yield and large variability for this character. The populations R- and E-, by having others desirable features are more indicated to be included in a breeding program The continuity of the divergent selection process may allow novel and better inferences and knowledge about the genetic bases of these populations.

Orientador: Fabio Porto-Foresti / Banca: Daniela Cristina Ferreira / Banca: José Carlos Pansonato Alves / Resumo: A hibridação interespecífica é considerada por diversos autores um método de melhoramento genético de difícil compreensão, uma vez que os produtos obtidos do acasalamento de diferentes espécies podem originar diversos produtos genéticos tais como Ginogenéticos e Androgenéticos Haplóides ou Diplóides, Híbridos Diplóides simples, Triplóides ou até indivíduos Tetraplóides. A aplicação da hibridação Interespecífica é utilizada no sistema de manejo nas grandes Pisciculturas que visa produzir animais que possuam melhor desempenho que as espécies parentais (vigor híbrido), como o aumento da taxa de crescimento, melhor qualidade da carne, resistência a doenças e capacidade de tolerar variações ambientais, além do aperfeiçoamento de diversas outras características a fim produzir peixes mais proveitosos para o cultivo. Dentre aproximadamente 40 espécies de peixes de interesse comercial no Brasil, destaca-se o gênero Brycon, de grande interesse nos centros de Pisciculturas devido à qualidade da carne, ao hábito alimentar, ao rápido crescimento e ganho de peso.Com o objetivo de compreender o mecanismo de hibridação, foram analisados 10 exemplares de cada espécie parental B.amazonicus (Matrinxã) e B.hilarii (Piraputanga) e 10 exemplares da respectiva geração Filial. Através da técnica de coloração com Giemsa, observou-se um conjunto diplóide 2n = 50 cromossomos em todos os indivíduos analisados das espécies parentais e da geração Filial. No entanto, houve diferenciação na formação cariotípica dos parentais e da geração filial.O parental Matrinxã (B.amazonicus) e sua geração Filial apresentaram uma constituição cariotíca de seis cromossomos do tipo metacêntrico, nove cromossomos submetacêntrico e dez cromossomos subtelocêntrico, enquanto que o parental Piraputanga (B.hilarii) apresentou uma constituição cariotípica de dez pares... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Interspecific hybridization is considered by many authors as a method of breeding that is difficult to understand, since the mating products obtained from different species can cause many genetic products, such as gynogenetic and androgenetic haploid or diploid, diploid hybrid simple, triploid or even individuals tetraploids. The application of Interspecific hybridization is used in the management system in major fisheries that aims to produce animals that have better performance than the parental species (hybrid vigor), as increased growth rate, meat quality, disease resistance and ability to tolerate environmental changes besides the improvement of several other characteristics in order to produce more profitable fish farming.Out of approximately 40 fish species of commercial interest in Brazil, there is the genus Brycon, of great interest in the centers of fish farms due to meat quality, the feeding habits of the rapid growth and weight gain. Aiming to understand the mechanism of hybridization, we analyzed 10 specimens of each parental species B.amazonicus (Matrinxã) and B.hilarii (Piraputanga) and 10 of filial generation. By staining with Giemsa, all specimens analyzed have a number diploid with 2n = 50 chromosomes. However, there was karyotypic differentiation in the formation of parental and filial generation. The parental Matrinxã (B.amazonicus) and his generation branch had a karyotype constitution of six chromosomes of metacentric type, nine submetacentric chromosomes and ten subtelocêntric chromosomes, while the parental Piraputanga (B.hilarii) showed a karyotype constitution of ten pairs of chromosomes metacentric, nine pairs of chromosomes submetacentric and six subtelocentric chromosomes pairs.The detection of Nucleolar Organizer Regions (RONs) was obtained by the technique of impregnation by silver nitrate (Ag-NORs) that showed markings on the telomeric region... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Lilian Castiglioni / Coorientador: Eduardo Alves de Almeida / Banca: Hermione Elly Melara de Campos Bicudo / Banca: Uderlei Doniseti Silveira Covizzi / Resumo: O gênero Macrobrachium Bate, 1868, pertence à família Palaemonidae, a qual é amplamente distribuída pelas regiões tropicais e subtropicais, apresentando grande importância nos ecossistemas que habitam. As esterases pertencem a um grupo de enzimas que hidrolisam, preferencialmente, os ésteres de ácidos carboxílicos. Diferentes tipos de esterases têm sido caracterizadas em inúmeros organismos, fato este que comprova sua importância fisiológica. Os organofosforados (OP) e carbamatos (CM) compõem um grupo importante de praguicidas que agem inibindo um vasto grupo de enzimas, dentre elas, as esterases. A avaliação da atividade de acetilcolinesterase (AChE) e carboxilesterase (CbE) tem sido empregada com sucesso para monitorar a presença destes praguicidas no ambiente. O presente trabalho teve como objetivo geral estudar a variabilidade genética de duas espécies pertencentes ao gênero Macrobrachium (M. jelskii e M. amazonicum), a partir da caracterização bioquímica das esterases do hepatopâncreas de machos e fêmeas adultos, e avaliar o comportamento das mesmas perante a exposição ao Diazinon e Clorpifos (OPs) e Carbaril (CM). No presente trabalho, esse sistema enzimático foi analisado nas duas espécies de camarões citadas acima. Foram visualizadas 12 bandas esterásicas em ambas as espécies, compreendendo quatro classes diferentes das mesmas (acetilesterase, arilesterase, carboxilesterase e colinesterase). Nenhuma diferença qualitativa na presença de bandas interespecíficas, e nem quanto ao sexo, essas diferenças existem apenas nas frequências das mesmas. Em M. amazonicum o diazinon inibiu parcialmente a AChEs, in vitro, e apresentou pequena inibição em CbE. Por outro lado este composto não atuou efetivamente em nenhuma das enzimas testadas em... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The genus Macrobrachium Bate, 1868, belongs to the Palaemonidae family, which is widely distributed throughout tropical and subtropical regions, with great importance in their habitat. Esterases belong to a group of enzymes which hydrolyze rather carboxylic acids esters. Different kind of esterases have been characterized in numerous organisms, this fact proves their physiologic importance. Organophosphate and carbamate compose an important group of pesticide which acts inhibiting a large group of enzymes, including esterases. The activity evaluation of acetylcholinesterase (AChE) and carboxilesterase (CbE) have been successfully employed to monitor this pesticides presence in environment. The present study has as general aim studying the genetic variability of two species from Macrobrachium genus (M. jelskii e M. amazonicum) from the esterases biochemistry characterization in hepatopancreas of adult male and female, and evaluates the behavior of these enzymes before the exposure to Diazinon and Clorpifos (OPs) and Carbaril (CM), important pesticides widely used in our region. In this work, this enzymatic system was analyzed in two prawns species mentioned above. Twelve esterasic bands were observed in both species, comprising four different classes of them (acetilesterase, arilesterase, carboxilesterase e colinesterase). No qualitative difference in the presence of interespecific bands, neither about the sexes was observed. These differences are only in their frequencies. In M. amazonicum, diazinon inhibited partially AChE and showed small inhibition of CbE. On the other hand this chemical did not operate in none of the enzymes tested for M. jelskii. Chlorpirifos induced a great inhibition as in AChE as in CbE to the tested species, but this inhibitory effect was... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Agricultores tradicionais autóctones são responsáveis por manter etnovariedades conservadas in situ, e são responsável por processos dinâmicos de amplificação de variabilidade genética. A variabilidade manipulada por estes agricultores pode ser maior do que a variabilidade reconhecida e nomeada sob a forma de etnovariedades. Através da avaliação da variabilidade de mandioca (Manihot esculenta Crantz) manejada por agricultores tradicionais autóctones do sul do litoral paulista e do Vale do Ribeira de Iguape, foram estudadas 10 roças, com os seguintes objetivos: a) Determinar a variabilidade intraespecífica de mandioca, ao nível das etnovariedades, presente num sistema agrícola de corte e queima, através do uso de marcadores bioquímicos (isoenzimas), e de caracteres morfológicos; b) Avaliar e comparar a variabilidade reconhecida e nomeada pelo agricultor e a variabilidade intra-roça presente e não necessariamente reconhecida; c) Interpretar os padrões de variabilidade sob um modelo de dinâmica evolutiva da mandioca. Foram utilizadas para estes fins, 3 técnicas de amostragem em 10 roças em locais diferentes, e em ciclos agrícolas diferentes: 1) coleta de amostras de etnovariedades nomeadas pelo agricultor com interferência dele na escolha de cada amostra; 2) coleta de amostras de etnovariedades nomeadas pelo agricultor sem interferência dele na escolha de cada amostra; 3) amostragem aleatória dentro da roça sem nomeação individualizada. Ao todo foram estudados 356 indivíduos, sendo avaliados 21 caracteres e sendo feitas posteriormente as seguintes análises: cálculo de distância euclidiana média entre amostras, análise de agrupamento, e análise de componentes principais (PCA). Os indivíduos foram submetidos à eletroforese de isoenzimas, sendo então utilizada presença e ausência de bandas isoenzimáticas, cálculo do índice de similaridade genética (coeficiente de semelhança simples,"Simple Matching'), análise de agrupamento e análise de coordenadas principais (PCO). As distâncias obtidas a partir de cada conjunto de dados foram comparadas através de correlação de Mantel. A partir dos resultados, foi possível concluir que os agricultores subestimam a variabilidade presente intra-roça, dando o mesmo nome a genótipos diferentes. Além disso, foi possível concluir que cada etnovariedade de mandioca é constituída por genótipos distintos, com grande semelhança na morfologia, compondo uma população heterogênea. Através da interpretação dos resultados sob o modelo de dinâmica evolutiva de mandioca é possível inferir sobre a origem destes genótipos via hibridação intraespecífica. Sendo assim, os processos sexuais existentes amplificam a variabilidade de mandioca dentro das roças, interagindo com as técnicas de manejo empregadas secularmente. / not available

Trabajo de Investigación Requisito para optar al Título de Cirujano Dentista / Introducción: La fisura labiopalatina no sindrómica (FL/PNS) corresponde a la malformación congénita de mayor frecuencia que afecta al territorio máxilofacial. En Chile es un problema de Salud pública debido a la alta incidencia, el alto impacto en la calidad de vida de los pacientes, el elevado costo de su tratamiento y los pocos especialistas existentes en el país, más aún en el servicio público. En el marco de los estudios metabólicos y genéticos que tienen relación con la etiología de estas malformaciones, la investigación en torno al rol del folato, su metabolismo y el impacto en los niveles de metilación global del ADN, el presente estudio tiene como objetivo evaluar la relación entre los niveles de 5-metil-citosina en ADN de origen leucocitario y el riesgo de presentar FL/PNS en una muestra de la población chilena. Material y métodos: Se llevó a cabo un estudio piloto basado en el diseño de casos y controles. El estudio incluyó un grupo de individuos con FL/PNS provenientes de hospitales públicos de la región Metropolitana (casos, N=20); quienes presentaban alteración de labio, y podían o no presentar compromiso de reborde alveolar, paladar secundario y/o velo palatino; con presentación unilateral o bilateral. El grupo control fue constituido por individuos sanos (control, N=20), pareado por edad y género, compuesto por estudiantes de Odontología de la Universidad de Chile. El ADN genómico se obtuvo a partir de leucocitos de sangre periférica de los individuos enrolados en este estudio. Los niveles de metilación global de ADN fueron determinados mediante el uso del kit MethylFlash™ Methylated DNA Quantification (Epigentek), el cual utiliza una plataforma ELISA de escala colorimétrica. Este método utiliza anticuerpos de captura específicos para 5-metil-citosina. Los niveles fueron cuantificados y comparados entre los individuos de los grupos caso y control. Resultados: Los niveles globales de ADN metilado fueron significativamente menores en los individuos del grupo caso en comparación con los individuos del grupo control (p<0,0001). Conclusiones: Los resultados de nuestro estudio sugieren fuertemente que existe una contribución de la disminución del ADN metilado al aumento del riesgo de desarrollar fisuras labiopalatinas no sindrómicas; esto apoya la hipótesis de que el metabolismo del folato y su relación con la capacidad de metilación podría jugar un rol importante en la etiología de las FL/PNS. Sin embargo, estos resultados deben ser corroborados en muestras de mayor tamaño y analizando varias otras variables. / Adscrito a Proyecto FIOUCH-Enlace 004/2015

Orientador: Claudia Regina Bonini Domingos São José do Rio Preto - SP 2014 / Banca: Flávia Cristina Rodrigues Lisoni / Banca: Isabeth da Fonseca Estevão / Resumo: As talassemias do tipo beta são afecções genéticas frequentes na população mundial e seus portadores podem apresentar elevação nos níveis de hemoglobina A2 (Hb A2) e hemoglobina fetal (Hb F). As mutações presentes nos indivíduos podem estar associadas a diferentes haplótipos do grupamento da β-globina. Os objetivos do trabalho consistiram em investigar as frequências do polimorfismo XmnI (-158 CT) e do padrão de haplótipos da β-globina em indivíduos heterozigotos e homozigotos para a beta talassemia, relacioná-las com os níveis de Hb F, e compará-las com indivíduos sem hemoglobinopatias. Foram analisadas 150 amostras de indivíduos beta talassêmicos heterozigotos; 22 de indivíduos homozigotos e 150 de indivíduos sem hemoglobinopatias (grupo controle). Todas as amostras foram submetidas aos testes clássicos de diagnóstico de hemoglobinopatias e à análises moleculares por PCR Alelo Específico (PCR-AE) para confirmação da mutação de beta talassemia, e PCR para polimorfismos de comprimento de fragmentos de restrição (PCR-RFLP) para a identificação do polimorfismo XmnI e dos sítios de haplótipos da β-globina. Os testes estatísticos foram realizados com o software STATISTICA 8.0 e Haploview 4.2. Nos indivíduos beta talassêmicos heterozigotos, a mutação CD39 foi a mais frequente (62%) e nos homozigotos, a IVS-I-6 (22%). Foi observada diferença significativa nos níveis de Hb F entre os indivíduos que possuem mutações ainda não identificadas, em relação aos que possuem a mutação IVS-I-110 (p<0,05), no grupo de heterozigotos. A presença do polimorfismo XmnI foi observada em todos os grupos estudados, porém, somente para os indivíduos com talassemia beta heterozigota houve diferença estatística em relação aos níveis aumentados de Hb F (p=0,007). Nos três grupos foram observados os padrões típicos de haplótipos I, II, IV, VI, VII e IX. Para os indivíduos com beta talassemia ... / Abstract: The beta thalassemia are frequent genetic disorders and sufferers may have increased levels of hemoglobin A2 (Hb A2) and fetal hemoglobin (Hb F). The mutations present in individuals may be associated with different haplotypes of β-globin grouping. The objectives of this study consisted in investigating the frequencies of the XmnI polymorphism (-158 CT) and the pattern of the β-globin haplotypes in heterozygous and homozygous individuals for beta thalassemia, relate them to the levels of Hb F, and compare them with individuals without hemoglobinopathies. We analyzed 150 samples from heterozygous individuals with beta thalassemia, 22 homozygous and 150 individuals without hemoglobinopathies (control group). All samples were tested for classical hemoglobinopathies diagnosis and molecular analyzes Allele Specific PCR (AE-PCR) to confirm the mutation of beta thalassemia and PCR length polymorphism restriction fragment (PCR-RFLP) for identification of the polymorphism XmnI and sites of the β-globin haplotypes. Statistical tests were performed using STATISTICA 8.0 and Haploview 4.2 software. In beta thalassemia heterozygous individuals, mutation CD39 was the most common (62%) and in homozygous was the IVS-I-6 (22 %). We observed a significant difference in the levels of Hb F among the unidentified mutations and IVS-I-110 (p<0.05) in heterozygous individuals. The presence of the XmnI polymorphism was observed in all groups, but only heterozygous individuals for beta thalassemia was statistical difference in relation to increased levels of Hb F (p = 0.007). In the three groups were observed haplotype patterns I, II, IV, VI, VII and IX. For individuals heterozygous to beta thalassemia, the patterns II (24.3 %) and VII (32 %) were the most frequent, for individuals with beta thalassemia homozygous, the patterns I (29.5 %) and VII (38.6 %) and individuals without hemoglobinopathies, the patterns I (31%) and VII (28.3%). There was ... / Mestre