A utilização de cultivares resistentes às viroses de plantas tornou-se estratégia relevante para o cultivo de tomateiro. Para isso fontes de resistência são incluídas em programas de melhoramento genético visando à obtenção de linhagens e/ou novas cultivares resistentes a esses patógenos. As tospoviroses são responsáveis por grandes perdas econômicas em cultivos do tomateiro em todo o mundo, visto que, elevadas taxas de infecção tem acarretado em perdas econômicas consideráveis para inúmeros países. O objetivo do trabalho visou a caracterização de linhagens de tomateiro de hábito de crescimento determinado resistentes a tospovírus, utilizando caracteres agronômicos e marcadores associados a genes de resistência à doença. Foram utilizados 16 genótipos de tomateiro de hábito de crescimento determinado, sendo doze linhagens experimentais e quatro testemunhas comerciais. Usou-se delineamento em blocos casualizados, com 16 tratamentos e 3 repetições. Avaliaram-se uniformidade de planta (UP), vigor da planta (VP), altura de planta (AP), pegamento de fruto (PGF), cobertura foliar (CF), massa média do fruto (MMF), comprimento (C), diâmetro equatorial (D), razão entre comprimento e diâmetro (R C/D), tamanho da cicatriz peduncular (CP), forma da base (FB), firmeza do fruto (FF), espessura do pericarpo (EP), número de lóculos (NL), produção total (PT), número de frutos descartados (NFD), produção descartada (PD) e produção comercial (PC). Para a análise molecular, utilizou-se o par de primers Sw-5-2 (F = 5\' AATTAGGTTCTTGAAGCCCATCT 3\'; R = 5\' TTCCGCATCAGCCAATAGTGT 3\'). Nas condições em que o presente trabalho foi conduzido e, de acordo com os resultados obtidos, concluiu-se que todas as linhagens estudadas confirmaram a presença do gene Sw-5 em análise molecular, portanto, são resistentes a tospovírus, sendo recomendadas para serem utilizadas como genitoras. / Resistance of cultivars to viruses has become a relevant strategy for tomato cultivation. Sources of resistance are included in breeding programs to obtain lines and /or resistant hybrids. The tospoviroses are responsible for large economic losses in tomato crops worldwide. The objective of this work was the characterization of tomato lines resistant to Tospovirus, using agronomic traits and molecular markers. We used sixteen tomatoes genotypes, twelve of them were experimental lines and four were commercial controls. The experiment was carried out at the research field area with random blocks design with sixteen treatments and three replications. The following agronomical traits were assessed: plant uniformity (UP), plant vigour (VP), plant height (AP), fruit setting (PGF), leaf cover (CF), average fruit weight (PMF), fruit length (C), fruit width (D), relation between length and width fruit (R C/D), size of the peduncular scar (CP), pistil scar (FB), fruit firmness (FF), fruit pericarp thickness (EP), fruit loculus number (NL), total production (PT), not marketable fruit yield (PD) and marketable yield (PC). To the molecular analysis, we used the primers pair Sw-5-2 (F = 5’ AATTAGGTTCTTGAAGCCCATCT 3’; R = 5’ TTCCGCATCAGCCAATAGTGT 3’). According to the results, for the conditions in which the present experiment was conducted, we concluded that all genotypes confirmed the presence of the Sw-5 gene in molecular analysis, therefore, they are resistant to tospovirus, recommended to be used as parental lines.

A utilização de cultivares resistentes às viroses de plantas tornou-se estratégia relevante para o cultivo de tomateiro. Para isso fontes de resistência são incluídas em programas de melhoramento genético visando à obtenção de linhagens e/ou novas cultivares resistentes a esses patógenos. As tospoviroses são responsáveis por grandes perdas econômicas em cultivos do tomateiro em todo o mundo, visto que, elevadas taxas de infecção tem acarretado em perdas econômicas consideráveis para inúmeros países. O objetivo do trabalho visou a caracterização de linhagens de tomateiro de hábito de crescimento determinado resistentes a tospovírus, utilizando caracteres agronômicos e marcadores associados a genes de resistência à doença. Foram utilizados 16 genótipos de tomateiro de hábito de crescimento determinado, sendo doze linhagens experimentais e quatro testemunhas comerciais. Usou-se delineamento em blocos casualizados, com 16 tratamentos e 3 repetições. Avaliaram-se uniformidade de planta (UP), vigor da planta (VP), altura de planta (AP), pegamento de fruto (PGF), cobertura foliar (CF), massa média do fruto (MMF), comprimento (C), diâmetro equatorial (D), razão entre comprimento e diâmetro (R C/D), tamanho da cicatriz peduncular (CP), forma da base (FB), firmeza do fruto (FF), espessura do pericarpo (EP), número de lóculos (NL), produção total (PT), número de frutos descartados (NFD), produção descartada (PD) e produção comercial (PC). Para a análise molecular, utilizou-se o par de primers Sw-5-2 (F = 5\' AATTAGGTTCTTGAAGCCCATCT 3\'; R = 5\' TTCCGCATCAGCCAATAGTGT 3\'). Nas condições em que o presente trabalho foi conduzido e, de acordo com os resultados obtidos, concluiu-se que todas as linhagens estudadas confirmaram a presença do gene Sw-5 em análise molecular, portanto, são resistentes a tospovírus, sendo recomendadas para serem utilizadas como genitoras. / Resistance of cultivars to viruses has become a relevant strategy for tomato cultivation. Sources of resistance are included in breeding programs to obtain lines and /or resistant hybrids. The tospoviroses are responsible for large economic losses in tomato crops worldwide. The objective of this work was the characterization of tomato lines resistant to Tospovirus, using agronomic traits and molecular markers. We used sixteen tomatoes genotypes, twelve of them were experimental lines and four were commercial controls. The experiment was carried out at the research field area with random blocks design with sixteen treatments and three replications. The following agronomical traits were assessed: plant uniformity (UP), plant vigour (VP), plant height (AP), fruit setting (PGF), leaf cover (CF), average fruit weight (PMF), fruit length (C), fruit width (D), relation between length and width fruit (R C/D), size of the peduncular scar (CP), pistil scar (FB), fruit firmness (FF), fruit pericarp thickness (EP), fruit loculus number (NL), total production (PT), not marketable fruit yield (PD) and marketable yield (PC). To the molecular analysis, we used the primers pair Sw-5-2 (F = 5’ AATTAGGTTCTTGAAGCCCATCT 3’; R = 5’ TTCCGCATCAGCCAATAGTGT 3’). According to the results, for the conditions in which the present experiment was conducted, we concluded that all genotypes confirmed the presence of the Sw-5 gene in molecular analysis, therefore, they are resistant to tospovirus, recommended to be used as parental lines.

Submitted by Cleber Casali (clebercasali@ufv.br) on 2017-06-28T17:17:51Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 598650 bytes, checksum: 028a6d83725fd48a983ea2b8264aaa29 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-28T17:17:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 598650 bytes, checksum: 028a6d83725fd48a983ea2b8264aaa29 (MD5) Previous issue date: 2001-01-23 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O presente trabalho objetivou: 1) avaliar a resistência de acessos de Lycopersicon spp. a tospovírus; 2) estudar a herança da resistência em algumas dessas fontes e 3) clonar e caracterizar molecularmente alelos do loco Sw-5 provenientes de Lycopersicon spp. Plantas de 12 acessos de tomateiro, pertencentes às espécies L. peruvianum, L. chilense e L. hirsutum foram inoculadas com cinco isolados de tospovírus, pertencentes às espécies TSWV, TCSV, CSNV e GRSV. A reação das plantas foi avaliada periodicamente por 30 dias. Ao final desse período, as plantas assintomáticas foram confirmadas como resistentes, mediante DAS-ELISA. A resistência na maioria dos materiais foi de amplo espectro (efetiva contra todos isolados), porém em alguns casos a resistência foi do tipo isolado-es pecífica. Os materiais mais promissores foram os acessos PI 126928, LA 444/1, LA 371 e PI 126944 de L. peruvianum e LA 130 e LA 2753 de L. chilense. Esses materiais constituem fontes de resistência alternativas para o manejo das tospoviroses do tomateiro. O estudo de herança da resistência em L. hirsutum PI 134417 indicou que a resistência nessa fonte é condicionada por dois genes independentes, um dominante e um recessivo. Num teste de alelismo, o gene dominante segregou independentemente do gene Sw-5, indicando que são genes distintos. Em L. peruvianum PI 126928, a resistência segregou como uma característica condicionada por dois ou mais genes dominantes não ligados. Na terceira etapa do trabalho, comparou-se o nível de conservação de alelos do loco Sw-5 em Lycopersicon spp. Os alelos foram obtidos mediante PCR de longo alcance, utilizando-se o sistema ELONGASE TM (Gibco-BRL) para amplificação. Nas reações de amplificação foram utilizadas três combinações de oligonucleotídeos desenhados com base na seqüência do gene Sw-5. Como molde foi utilizado DNA extraído de plantas cuja reação a tospovírus já era conhecida. Foram obtidos 16 alelos do loco Sw-5, provenientes de quatro espécies do gênero Lycopersicon. Após uma pré-caracterização mediante clivagem com enzimas de restrição, 10 clones foram selecionados para seqüenciamento. A análise de seqüência dos alelos revelou identidade de nucleotídeos superior a 91% para a ORF completa. Quando a comparação foi realizada para os diferentes domínios que compõem o gene Sw-5, observou-se que as maiores divergências residem nas extremidades 5’ e 3’ do gene. A comparação entre as proteínas codificadas pelo alelo Sw-5 1 (confere resistência) e seu alelo sw-5 2 (confere suscetibilidade) revelou 53 substituições ao nível de aminoácidos. Destas substituições, 14 são não-sinônimas e se concentram na extremidade amino e nas LRR, indicando o provável envolvimento dessas regiões na especificidade da resistência. A análise funcional dos alelos do loco Sw-5 e a construção de quimeras entre os alelos Sw-5 e sw-5 2 estão em andamento e auxiliarão a estabelecer as bases moleculares da resistência do tomateiro a tospovírus. / Lycopersicon peruvianum, L. chilense and L. hirsutum germplasm was inoculated with five isolates from the tospovirus species Tomato spotted wilt virus , Tomato chlorotic spot virus , Chrysanthemum stem necrosis virus, and Groundnut ringspot virus. Several introductions showed resistance to all isolates. However, in some cases, resistance isolate-specific was also observed. PI 126928, LA 444/1, LA 371 and PI 126944 of L. peruvianum and LA 130 and LA 2753 of L. chilense were the most resistant materials. Inheritance studies showed that two independent genes, one dominant and one recessive, control the PI 134417 resistance. Allelism tests revealed that this dominant gene is not an allele of the Sw-5 locus. The resistance derived from PI 126928 segregated as a trait controlled by two or more non-linked dominant genes. Sixteen alleles of the Sw-5 locus were PCR-amplified from four Lycopersicon species, cloned and sequenced. The alleles possess more than 91% of identity at nucleotide level; the largest divergence was observed in the 5 ́and 3 ́ extremities. Sequence comparisons between the resistance allele Sw-5 1 and the susceptible allele Sw-5 2, revealed 53 amino acid substitutions; fourteen substitutions are non-synonymous and located at the amino and carboxi terminus of the protein. The functional analysis of the other alleles and the construction of chimeras between Sw-5 1 and Sw-5 2 will allow to identify the protein region involved in the resistance specificity.