Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2015. / Submitted by Cristiane Mendes (mcristianem@gmail.com) on 2015-07-08T15:01:58Z No. of bitstreams: 1 2015_JoaoNunesDeMatosNeto.pdf: 8778671 bytes, checksum: 63017cd0d75960e2a52ce5f3e7f9c5f8 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2015-07-28T12:32:47Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_JoaoNunesDeMatosNeto.pdf: 8778671 bytes, checksum: 63017cd0d75960e2a52ce5f3e7f9c5f8 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-07-28T12:32:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_JoaoNunesDeMatosNeto.pdf: 8778671 bytes, checksum: 63017cd0d75960e2a52ce5f3e7f9c5f8 (MD5) / O câncer de mama ainda continua sendo uma epidemia mundial, com taxas importantes de incidência e prevalência no mundo todo. De forma geral, a taxa de mortalidade do câncer de mama gira em torno de 15% nos países desenvolvidos e em torno de 40% nos países em desenvolvimento em 05 anos. Vários fatores de risco tem sido identificados na gênese do câncer de mama. Nenhuma isolada, porém, explica de forma completa, a carcinogênese do câncer de mama. A classificação do câncer de mama em subtipos moleculares, baseada no perfil de expressão de receptores hormonais e no receptor do HER-2 trouxe uma base racional para o tratamento desta doença. Mutações em alguns genes supressores tumorais, como o BRCA-1 e BRCA-2, além do p53 e PTEN, tem papel relevante conhecido na transformação tumoral da célula mamária normal. Vários tumores, porém, não apresentam alterações nestes genes. Por outro lado, alterações epigenéticas têm se mostrado cada vez mais relevantes na gênese de vários tumores. Estas alterações têm como característica básica não causar modificações na sequência do DNA, mas promover expressão seletiva dos genes dependente do nível do empacotamento do DNA, com áreas de eucromatina frouxa, que permitem mais facilmente a transcrição gênica, e áreas de heterocromatima, que dificultam a transcrição. Dentre os efetores epigenéticos de maior relevância estão as enzimas metiltransferases, capazes de promover a metilação das histonas. Desregulação na expressão ou atividade destas enzimas estão entre as principais alterações epigenéticas envolvidas na carcinogênese. A família SETD é uma família de metiltransferases composta por 10 genes que codificam proteínas com domínio SET. Este domínio está envolvido na metilação de resíduos de lisina em histonas e proteínas não-histonas. Até o momento, pouco se sabe sobre a relação de genes da família SETD com a carcinogênese mamária. No presente estudo foi realizada a avaliação de expressão relativa de todos os genes da família SETD em amostras de tecidos tumorais e normais de pacientes portadoras de câncer de mama através de técnica de PCR em tempo real. O perfil de expressão comparativa desta família de genes foi correlacionado com as informações clínico-patológicas de maior relevância prognóstica, disponíveis das pacientes. Posteriormente realizamos avaliação imunohistoquímica em lâmina de microarranjo de tecidos. Notamos que o gene SETMAR encontra-se significativamente hiperexpresso nas amostras tumorais quando comparadas às amostras normais de pacientes com câncer de mama. Quando avaliamos apenas as pacientes com perfil imuno-histoquímico do tipo triplo negativo, comparadas com as amostras normais, há novamente uma hiperexpressão relativa do gene SETMAR. Os genes SETD5 e SETD8 encontram-se hiperexpressos em tumores com mais de 10 linfonodos positivos para metástase de câncer de mama, além de estarem também hiperexpressos nas pacientes com estadiamento acima do estádio IIB. Além disso, há uma significativa correlação na expressão de ambos os genes no pool de amostras tumorais. O gene SETD8 encontra-se ainda hiperexpresso em pacientes que apresentam invasão angiolinfática. Outro gene que se apresentou significativamente alterado é o SETD1B, cuja expressão está aumentada nos tecidos tumorais comparados aos tecidos normais em amostras pareadas. Entre as amostras tumorais pareadas também foi verificada uma estreita correlação de co-expressão dos genes SETD1B, SETD5, SETD8, SETMAR. Analisados em conjunto, estes dados apontam para o provável papel dos genes SETMAR e SETD1B na carcinogênese mamária, com implicações clínicas relevantes, além de um possível envolvimento dos genes SETD5 e SETD8 em estádios mais avançados da doença. A correlação da expressão gênica de alguns membros da família SETD com fatores clínicos prognósticos em câncer de mama abre o caminho para explorá-los não só como alvos terapêuticos, mas também como novos marcadores prognósticos. / Breast cancer still remains a global epidemic, with significant rates of incidence and prevalence worldwide. Overall, their mortality rate is around 15 % in developed countries and around 40 % in developing countries in 05 years. Several risk factors have been identified in the genesis of breast cancer, but no one alone, explains the carcinogenesis of breast cancer. The classification of breast cancer in molecular subtypes based on the expression profile of hormone receptors and HER -2 receptor has brought a rational basis for treatment of this disease. Mutations in tumor suppressor genes, such as BRCA 1 and BRCA-2, p53 and PTEN, plays an important role in the tumor transformation of normal breast cells. However, not all breast tumors carry changes in these genes. Epigenetic alterations have recently been recognized to play an important role in the genesis of many tumor types. These changes are characterized by not causing any kind of mutations in the DNA sequence but by inducing selective expression of genes dependent on the the DNA packaging level, with areas of loose euchromatin, allowing more easily gene transcription, and areas of heterocromatin, that hamper transcription. Among the most relevant epigenetic effectors, the methyltransferases enzymes are capable of promoting histone methylation. Dysregulation in the expression or activity of these enzymes is among the major epigenetic alterations involved in carcinogenesis. The SETD family is a family of methyltransferases composed of 10 genes encoding proteins with SET domain. This domain is involved in the methylation of lysine residues on histones and non-histone proteins. So far, little is known about the relation of SETD family genes with mammary carcinogenesis. In the present study we evaluated the relative expression of all SETD family genes in breast tumor samples and non-tumor breast tissues of patients with breast cancer by real time q-PCR. The comparative expression profile of each gene of this family was correlated with the most relevant clinicopathologic prognostic information, available from patients. We note that there is a significant overexpression of the gene SETMAR in tumor samples compared to normal samples from patients with breast cancer. When we evaluated only patients with immunohistochemical profile of the triple negative type, compared with the normal samples, we observed again a significant overexpression of SETMAR. The SETD5 and SETD8 genes are overexpressed in tumors with more than 10 positive lymph nodes for breast cancer metastasis, and also are overexpressed in patients with advanced stage. Furthermore, there is a significant correlation in expression of both genes in pool of tumor samples. The SETD8 gene is still overexpressed in patients with angiolymphatic invasion. Another gene that is significantly changed is the SETD1B, whose expression is increased in tumor tissues compared to corresponding normal tissues samples. The paired tumor samples also showed a close correlation of co-expression of genes SETD1B, SETD5, SETD8, SETMAR. Taken together, these data point to the likely role of SETMAR and SETD1B genes in mammary carcinogenesis, with relevant clinical implications, and possible involvement of SETD5 and SETD8 genes in more advanced stages of the disease. The correlation of gene expression of some members of the SETD family with clinical prognostic factors in breast cancer opens the way to exploit them not only as therapeutic targets, but also as a new prognostic markers.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2015. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2015-11-25T14:47:40Z No. of bitstreams: 1 2015_FlaviaZattarPiazera.pdf: 5140389 bytes, checksum: 90224636e1ced48a74926f8c49f65060 (MD5) / Approved for entry into archive by Patrícia Nunes da Silva(patricia@bce.unb.br) on 2016-05-27T14:32:09Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_FlaviaZattarPiazera.pdf: 5140389 bytes, checksum: 90224636e1ced48a74926f8c49f65060 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-27T14:32:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_FlaviaZattarPiazera.pdf: 5140389 bytes, checksum: 90224636e1ced48a74926f8c49f65060 (MD5) / A Leucemia Linfocítica Crônica (LLC) é a neoplasia linfoide crônica mais comum na população ocidental. Assim, várias pesquisas têm sido desenvolvidas para elucidação dos fatores genéticos envolvidos na biologia e progressão da LLC. Alterações epigenéticas têm se mostrado cada vez mais relevantes na gênese de vários tumores e em especial nas neoplasias linfóides agudas e crônicas, e tem como características básicas não causar modificações na sequência do DNA. A metilação de histonas é um dos principais e mais estudados eventos epigenéticos. A família SETD é composta por 10 genes que codificam proteínas com domínio SET. Este domínio está envolvido na metilação de resíduos de lisina em histonas e proteínas não histonas. Até o momento, desconhece-se a relação de genes da família SETD com a leucemogênese da LLC. No presente estudo, foi realizada a avaliação de expressão relativa dos genes da família SETD em 59 amostras de sangue periférico de pacientes portadores de LLC e 10 controles normais através da técnica de PCR em tempo real. O perfil de expressão comparativa dessa família de genes foi correlacionado com as informações clínicas, citogenéticas, imunofenotípicas e hematológicas de maior relevância prognóstica dos pacientes. Notamos que a hipoexpressão do geneSETD1Aapresenta-se correlacionado com instabilidade cromossômica. O gene SETD2 apresentou elevada contagem de leucócitos no grupo de alta expressão, inferindo elevada massa tumoral. A superexpressão do gene SETD5 define um marcador de progressão da doença devido a elevada contagem de leucócitos nos pacientes do grupo de baixa expressão associado a anormalidades citogenéticas. O gene SETD6 apresentou hipoexpressão nos portadores de LLC em relação aos controles. O gene SETMAR apresentou-se hiperexpresso nos portadores de LLC em relação aos controles. Entretanto, no grupo de pacientes com baixa expressão a contagem leucocitária mostrou-se elevada estando associado a predominância de anormalidades citogenéticas e baixa contagem plaquetária. Sugerimos que nos portadores de LLC, a hipoexpressão do gene SETMAR esteja associada com instabilidade cromossômica e progressão da massa tumoral (aumento da leucocitose). Concluímos que os genes da família SETD possam futuramente ser considerados marcadores evolutivos da LLC. / The Chronic lymphocytic leukemia (CLL) is the most common chronic lymphoid malignancy in the western population. Thus, several studies have been developed to elucidate the genetic factors involved in biology and progression of CLL. Epigenetic changes have been shown to be increasingly important in the genesis of various tumors and especially in acute and chronic lymphoid malignancies, and its basic features do not cause changes in the DNA sequence. The histone methylation is one of the leading and most studied epigenetic events. The SETD family consists of 10 genes encoding proteins with SET domain. This domain is involved in methylation of lysine residues on histones and non-histone proteins. So far, unknown whether the genes ratio SETD family with the leukemogenesis LLC. In the present study, we evaluatedthe expression of all SETD family genes in peripheral blood from 59 CLL patients and 10 healthy donors by real time PCR. The expression profile of this gene family was correlated with the most relevant clinical, cytogenetic, immunophenotypic and hematologic prognostic factors of CLL patients. We note that hipoexpressionofSETD1A gene correlated with chromosomal instability.SETD2 gene expression was associated with a high white blood cell count in a dicotomized group of patients with high expression this gene, implying high tumor mass formation when SETD2 is over-expressed. In addition, overexpression of the gene SETD5 sets a marker of disease progression due to higher leukocyte count in patients in the low expression group associated with cytogenetic abnormalities. In the other hand, gene SETD6 was significantely downregulated in patients with CLL compared to controls. Finally, SETMAR gene was found to be upregulated in patients with CLL compared to controls. However, in patients with low expression of SETMAR, we found an increase in leukocyte count as well as in the predominance of cytogenetic abnormalities and low platelet count. We suggest that in patients with CLL, the low expression of SETMAR is associated with chromosomal instability and progression of the tumor mass (increased leukocytosis). We conclude that SETD family genes can be considered future evolutionary markers for CLL.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2014. / Submitted by Ana Cristina Barbosa da Silva (annabds@hotmail.com) on 2014-10-30T14:14:14Z No. of bitstreams: 1 2014_MarthaSilvaEstrela.pdf: 2513527 bytes, checksum: c69499a20e04f540457a226399f7f1f9 (MD5) / Approved for entry into archive by Tania Milca Carvalho Malheiros(tania@bce.unb.br) on 2014-10-30T15:07:03Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_MarthaSilvaEstrela.pdf: 2513527 bytes, checksum: c69499a20e04f540457a226399f7f1f9 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-10-30T15:07:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_MarthaSilvaEstrela.pdf: 2513527 bytes, checksum: c69499a20e04f540457a226399f7f1f9 (MD5) / O câncer colorretal (CCR) é o terceiro tipo de câncer mais comum entre os homens e o segundo entre as mulheres em todo o mundo. O rastreamento regular pode prevenir muitos casos de CCR e resultar na detecção e diagnóstico precoce, quando pode ser altamente curável. Vários fatores de risco tem sido identificados na gênese do CCR, porém nenhum de forma isolada explica completamente a carcinogênese do cólon e reto. O CCR se desenvolve ao longo de décadas e consiste em uma série de alterações genéticas e epigenéticas que conduzem à transformação maligna. Algumas das alterações genéticas já descritas relacionadas com a carcinogênese colorretal envolvem os genes KRAS, p53 e elementos da via de sinalização TGF-β, como TGFBR2 e SMAD4. Alterações epigenéticas tem se mostrado cada vez mais relevantes na gênese de vários tumores, e tem como característica básica não causar modificações na sequência do DNA, mas sim promover expressão seletiva dos genes dependente do nível do empacotamento do DNA. A metilação de histonas é um dos principais e mais estudados eventos epigenéticos. SETD e NSD são famílias de metiltransferases composta por 10 e 3 genes, respectivamente, que codificam proteínas com domínio SET. Este domínio está envolvido na metilação de resíduos de lisina em histonas e proteínas não-histonas. Até o momento, pouco se sabe sobre a relação de genes das famílias SETD e NSD com a carcinogênese colorretal. No presente estudo foi realizada a avaliação de expressão relativa de todos os genes das famílias SETD e NSD em amostras de tecidos tumorais e normais de pacientes portadores de CCR através de técnica de PCR em tempo real. O perfil de expressão comparativa dessas famílias de genes foi correlacionado com as informações clínico-patológicas de maior relevância prognóstica, disponíveis dos pacientes. Notamos que os genes SETD1A e SETD6 encontram-se significativamente superexpressos nas amostras tumorais de pacientes com até 60 anos quando comparadas às amostras tumorais de pacientes acima de 60 anos. Esses dois genes também apresentaram expressão correlacionada nesse grupo avaliado. Quando analisamos apenas as amostras tumorais de pacientes com invasão perineural não evidenciada, comparadas às amostras tumorais de pacientes com invasão perineural evidenciada, observamos superexpressão do gene NSD3. Em análise pareada de amostras de tecidos normal e tumoral verificamos a hipoexpressão dos genes SETD2 e SETD8 nas amostras tumorais. Esses dois genes também possuem expressão correlacionada nesses tecidos. Desta forma, nossos dados sugerem NSD3 como um possível marcador molecular de melhor prognóstico para pacientes diagnosticados com CCR, além de SETD2 e SETD8 como um possível alvo molecular para o diagnóstico do CCR. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Colorectal cancer (CRC) is the third most common type of cancer among men and the second among women worldwide. Regular screening can prevent many cases of CRC and result in early detection and diagnosis, as can be highly curable. Several risk factors have been identified in the genesis of CRC, but none alone explains the carcinogenesis in colon and rectum. CRC develops over decades and consists of a series of genetic and epigenetic alterations that lead to malignant transformation. Some of these genetic changes related to colorectal carcinogenesis involves KRAS, p53 and signaling pathway components of the TGF-β as TGFBR2 and SMAD4. Epigenetic changes have been shown to be increasingly important in the genesis of many tumor types, and its basic characteristic is not cause changes in the DNA sequence but also induce selective gene expression dependent on DNA packaging level. Histone methylation is one of the leading and most studied epigenetic events. SETD and NSD methyltransferase families are composed of 10 and 3 genes, respectively, encoding proteins with SET domain. This domain is involved in methylation of lysine residues on histones and non-histone proteins. So far, little is known about the relation of SETD and NSD genes with colorectal carcinogenesis. In this study we evaluated relative expression of all genes of SETD and NSD families in samples of normal tissue and tumor tissue of patients with CRC through real time PCR. The comparative expression profile of these gene families was correlated with clinical and pathological information of greater prognostic relevance available from patients. Here we show that SETD1A and SETD6 genes are significantly overexpressed in tumor samples from patients younger than 60 years when compared to tumor samples from patients over 60 years. These two genes also showed correlated expression in this evaluated group. When we analyzed only tumor samples from patients without perineural invasion, compared to tumor samples from patients with perineural invasion, we observed overexpression of NSD3 gene. In paired analysis of normal tissue samples and tumor tissues samples we verified low expression of SETD2 and SETD8 genes in tumor samples. These two genes also have correlated expression in these tissues. Thus, our data suggested NSD3 as a possible molecular marker of better prognostic for patients diagnosed with CRC, and SETD2 and SETD8 as a possible molecular target for the diagnostic of CRC.