Orientadora: Ana Maria Pires Soubhia / Banca: Glauco Issamu Miyahara / Banca: Alan Roger dos Santos Silva / Resumo: O presente estudo teve como objetivo investigar em glândulas submandibulares de ratos tratados com aguardente de cana, a morfologia, atividade funcional das fosfatases e níveis de mucina. 24 ratos machos e adultos foram divididos em 4 grupos (n=6) de acordo com o tipo de bebida fornecida, aguardente de cana (39º GL) ou água, e ao tempo de tratamento de 75 ou 105 dias. Após os períodos de tratamento, os animais foram submetidos à cirurgia para remoção das glândulas submandibulares, seguido da eutanásia. As glândulas submandibulares do lado direito foram processadas para análise histomorfométrica (Image J) dos ductos estriados, ductos granulosos e ácinos. As glândulas do lado esquerdo foram pesadas e armazenadas a -80 °C, para avaliação da atividade funcional da fosfatase ácida total (FAT), fosfatase ácida resistente ao tartarato (FART), fosfatase alcalina (FAL) e determinação dos níveis de mucina. Para isso foram feitos ensaios bioquímicos por métodos espectrofotométricos. Os dados quantitativos foram submetidos à análise estatística (p<0,05). Os pesos absolutos e relativos das glândulas submandibulares apresentam-se reduzidos em relação aos controles (p<0,05). Na análise histomorfométrica, observamos que houve relevante redução da área dos ácinos (p<0,05) e redução não significativa dos ductos estriados (p>0,05). Nos ductos granulosos ocorreu aumento não significativo da área (p>0,05). As atividades de FAT e FART se apresentaram expressivamente diminuídas nos grupos experim... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The present study aimed to investigate submandibular glands of rats treated with cane brandy, morp hology, functional activity of phosphatases and levels of mucin. 24 male and adult rats were divided into 4 groups (n = 6) according to the type of beverage provided, cane brandy (39° GL) or water, and treatment time of 75 or 105 days. After the treatment periods, the animals were submitted to surgery to remove the submandibular glands, followed by euthanasia. The submandibular glands on the right side were processed for histomorphometric analysis (Image J) of the striated ducts, granular ducts and acini. T he left glands were weighed and stored at - 80 °C for evaluation of the functional activity of total acid phosphatase (TAP), tartrate - resistant acid phosphatase (TRAP), alkaline phosphatase (ALP), and determination of mucin levels. For this, biochemical tes ts were carried out by spectrophotometric methods. Quantitative data were submi tted to statistical analysis (p <0.05). The absolute and relative weights of the submandibular glands are reduced in relation to the controls (p <0.05). In the histomorphometric analysis, we observed that there was a significant reduction of the acini area (p <0.05) and a non - significant reduc tion of the striated ducts (p> 0.05). In the granular ducts a not significant in crease of the area occurred (p> 0.05). The TAP and TRAP activi ties were significantly decrease d in the experimental groups (p <0.05), while the ALP functional activity decrease d moderately (p> 0.05). There was a significant reduction of mucin levels by the effect of chronic alcoholism (p <0.05). From these data it was p ossible to conclude that chronic alcoholism due to the use of cane brandy affects the biochemical functionality and morphology of the submandibular gland / Mestre

Os nucleotídeos da adenina são moléculas sinalizadoras no meio extracelular e estão envolvidas em importantes condições fisiológicas e patológicas. O papel do ATP como um mediador extracelular e neurotransmissor têm sido descrito em vários sistemas, inclusive na glândula salivar. Nas glândulas salivares, o ATP é liberado juntamente com acetilcolina e noradrenalina a partir do sistema de inervação da glândula. Esse ATP atua sobre os receptores P2X4, P2X7, P2Y1 e P2Y2, regulando importantes processos secretórios. Os eventos induzidos pelos nucleotídeos extracelulares são controlados pelas ectonucleotidases, que incluem membros da família das ecto-nucleosídeo trifosfato difosfoidrolases (E-NTPDases), ecto-nucleotídeo pirofosfatase/fosfodiesterases (E-NPPs) e ecto-5’-nucleotidase (ecto-5’N). Assim, no presente estudo nós investigamos a presença dessas ectonucleotidases nas células acinares da glândula submandibular. A presença de uma E-NTPDase e uma ecto-5'-nucleotidase foi identificada com as seguintes propriedades bioquímicas para a hidrólise de ATP, ADP e AMP: pH ótimo entre 6,5-8,0, requerimento de cátions divalentes (Ca2+ e Mg2+) e valores de Kmapp na faixa de micromolar. As células acinares das glândulas salivares também foram capazes de hidrolisar o p-Nph-5´-TMP, sugerindo a presença de uma E-NPP. A enzima descrita nesse estudo é dependente de cátions metálicos divalentes (Ca+2 e Mg+2), sendo que a hidrólise do p-Nph-5´-TMP foi máxima na presença de níveis basais de cátions e em pH entre 8,5 e 9,0. Também se analisou o efeito de vários compostos sobre a hidrólise do ATP, ADP e p-Nph-5´-TMP e verificou-se que aazida sódica, inibidor de várias NTPDases, inibiu a hidrólise do ATP e do ADP, e não teve efeito sobre o p-Nph-5´-TMP.A ouabaína e o NEM, inibidores clássicos de ATPases, não afetaram significativamente a hidrólise de ATP, ADP e p-Nph-5´- TMP, já o AMP, inibiu a hidrólise do p-Nph-5´-TMP. Esses resultados sugerem a co-existência de diferentes ectonucleotidases nas células acinares, que estão relacionadas com a hidrólise dos nucleotídeos e que podem atuar em diferentes situações. Também avaliamos o efeito de fármacos antidepressivos na atividade e expressão das enzimas envolvidas na hidrólise dos nucleotídeos. Em relação à atividade enzimática, observamos que a fluoxetina induziu um aumento na hidrólise de ATP e ADP e o moclobemide e a imipramina induziram um aumento significativo na hidrólise de todos os nucleotídeos (ATP, ADP e AMP). A expressão relativa da NTPDase1-3 aumentou e da ecto-5´-nucleotidase diminuiu com a imipramina. A fluoxetina aumentou a expressão relativa da NTPDase3 e ecto-5´-nucleotidase e inibiu a expressão relativa da NTPDase2. O moclobemide aumentou a expressão relativa de todas as enzimas. Em relação à atividade enzimática da NPP, os tratamentos com imipramina, fluoxetina e moclobemide levaram a um aumento significativo dessa atividade, enquanto as expressões relativas das NPP-1, NPP-2 e NPP-3 não apresentaram alteração. A presença de ectonucleotidases modulando os níveis dos nucleotídeos nas células acinares é importante tendo em vista o papel do ATP nos mecanismos de secreção salivar. / Adenine nucleotides are extracellular signaling molecules and are involved in important physiological and pathological conditions. The role of adenosine triphosphate (ATP) as an extracellular mediator and neurotransmitter has been described in various systems, including salivary glands. In salivary glands, extracellular ATP is co-released with acetylcholine and noradrenaline from glands nerve system. ATP acts on P2X4, P2X7, P2Y1 e P2Y2 receptors and may regulate important secretory processes in salivary gland cells. The events induced by extracellular nucleotides are controlled by ectonucleotidases, that include family members of ecto-nucleoside triphosphate diphosphohydrolase (E-NTPDase), ectopyrophosphatases/ phosphodiesterases (E-NPP) and ecto-5’-nucleotidase. The presence of an E-NTPDase and ecto-5'-nucleotidase was identified with the following biochemical characteristics for ATP, ADP, and AMP hydrolysis: optimum pH between 6.5-8.0, dependence of divalent cations (Ca2+ e Mg2+) and Kmapp values in micromolar range. Acinar cells from salivary glands were capable to hydrolyze p-Nph-5´-TMP, suggesting the presence of an E-NPP. The enzyme described in this study is divalent cations-dependent (Ca+2 e Mg+2), and the p-Nph- 5´-TMP hydrolysis was maximal with basal levels of cations in pH between 8,5 and 9,0. The effect of different compounds in ATP, ADP e p-Nph-5´-TMP hydrolysis was evaluated and sodium azide, an inhibitor of several NTPDases, inhibited ATP and ADP hydrolysis, but have no effect in p-Nph-5´-TMP hydrolysis. Ouabain, NEM, classical ATPases inhibitors did not affect ATP, ADP e p-Nph-5´-TMPhydrolysis; however, AMP inhibited the p-Nph-5´-TMP hydrolysis. These results suggest the co-existence of different ectonucleotidases in acinar cells that are related with nucleotide hydrolysis and can act under different situations. The effect of antidepressants in activity and expression of enzymes involved in nucleotide hydrolysis was also evaluated. In relation to enzymatic activity, fluoxetine induced an increase only in ATP and ADP hydrolysis, whereas moclobemide and imipramine induced a significant increase in hydrolysis of all nucleotides (ATP, ADP and AMP). The relative expression of NTPDase1-3 was enhanced and for ecto-5´-nucleotidase was diminished with imipramine. Fluoxetine enhanced relative expression of NTPDase3 and ecto-5´-nucleotidase and inhibited the relative expression of NTPDase2. Moclobemide enhanced the relative expression of all enzymes. In relation to E-NPPs activities, imipramine, fluoxetine e moclobemide treatmens lead to a significant increase in this activity whereas the relative expression of NPP-1, NPP-2, and NPP-3 did not show modifications. The presence of ectonucleotidases modulating the levels of nucleotides in acinar cells is important considering the ATP role in the mechanisms of salivary secretion.

Os nucleotídeos da adenina são moléculas sinalizadoras no meio extracelular e estão envolvidas em importantes condições fisiológicas e patológicas. O papel do ATP como um mediador extracelular e neurotransmissor têm sido descrito em vários sistemas, inclusive na glândula salivar. Nas glândulas salivares, o ATP é liberado juntamente com acetilcolina e noradrenalina a partir do sistema de inervação da glândula. Esse ATP atua sobre os receptores P2X4, P2X7, P2Y1 e P2Y2, regulando importantes processos secretórios. Os eventos induzidos pelos nucleotídeos extracelulares são controlados pelas ectonucleotidases, que incluem membros da família das ecto-nucleosídeo trifosfato difosfoidrolases (E-NTPDases), ecto-nucleotídeo pirofosfatase/fosfodiesterases (E-NPPs) e ecto-5’-nucleotidase (ecto-5’N). Assim, no presente estudo nós investigamos a presença dessas ectonucleotidases nas células acinares da glândula submandibular. A presença de uma E-NTPDase e uma ecto-5'-nucleotidase foi identificada com as seguintes propriedades bioquímicas para a hidrólise de ATP, ADP e AMP: pH ótimo entre 6,5-8,0, requerimento de cátions divalentes (Ca2+ e Mg2+) e valores de Kmapp na faixa de micromolar. As células acinares das glândulas salivares também foram capazes de hidrolisar o p-Nph-5´-TMP, sugerindo a presença de uma E-NPP. A enzima descrita nesse estudo é dependente de cátions metálicos divalentes (Ca+2 e Mg+2), sendo que a hidrólise do p-Nph-5´-TMP foi máxima na presença de níveis basais de cátions e em pH entre 8,5 e 9,0. Também se analisou o efeito de vários compostos sobre a hidrólise do ATP, ADP e p-Nph-5´-TMP e verificou-se que aazida sódica, inibidor de várias NTPDases, inibiu a hidrólise do ATP e do ADP, e não teve efeito sobre o p-Nph-5´-TMP.A ouabaína e o NEM, inibidores clássicos de ATPases, não afetaram significativamente a hidrólise de ATP, ADP e p-Nph-5´- TMP, já o AMP, inibiu a hidrólise do p-Nph-5´-TMP. Esses resultados sugerem a co-existência de diferentes ectonucleotidases nas células acinares, que estão relacionadas com a hidrólise dos nucleotídeos e que podem atuar em diferentes situações. Também avaliamos o efeito de fármacos antidepressivos na atividade e expressão das enzimas envolvidas na hidrólise dos nucleotídeos. Em relação à atividade enzimática, observamos que a fluoxetina induziu um aumento na hidrólise de ATP e ADP e o moclobemide e a imipramina induziram um aumento significativo na hidrólise de todos os nucleotídeos (ATP, ADP e AMP). A expressão relativa da NTPDase1-3 aumentou e da ecto-5´-nucleotidase diminuiu com a imipramina. A fluoxetina aumentou a expressão relativa da NTPDase3 e ecto-5´-nucleotidase e inibiu a expressão relativa da NTPDase2. O moclobemide aumentou a expressão relativa de todas as enzimas. Em relação à atividade enzimática da NPP, os tratamentos com imipramina, fluoxetina e moclobemide levaram a um aumento significativo dessa atividade, enquanto as expressões relativas das NPP-1, NPP-2 e NPP-3 não apresentaram alteração. A presença de ectonucleotidases modulando os níveis dos nucleotídeos nas células acinares é importante tendo em vista o papel do ATP nos mecanismos de secreção salivar. / Adenine nucleotides are extracellular signaling molecules and are involved in important physiological and pathological conditions. The role of adenosine triphosphate (ATP) as an extracellular mediator and neurotransmitter has been described in various systems, including salivary glands. In salivary glands, extracellular ATP is co-released with acetylcholine and noradrenaline from glands nerve system. ATP acts on P2X4, P2X7, P2Y1 e P2Y2 receptors and may regulate important secretory processes in salivary gland cells. The events induced by extracellular nucleotides are controlled by ectonucleotidases, that include family members of ecto-nucleoside triphosphate diphosphohydrolase (E-NTPDase), ectopyrophosphatases/ phosphodiesterases (E-NPP) and ecto-5’-nucleotidase. The presence of an E-NTPDase and ecto-5'-nucleotidase was identified with the following biochemical characteristics for ATP, ADP, and AMP hydrolysis: optimum pH between 6.5-8.0, dependence of divalent cations (Ca2+ e Mg2+) and Kmapp values in micromolar range. Acinar cells from salivary glands were capable to hydrolyze p-Nph-5´-TMP, suggesting the presence of an E-NPP. The enzyme described in this study is divalent cations-dependent (Ca+2 e Mg+2), and the p-Nph- 5´-TMP hydrolysis was maximal with basal levels of cations in pH between 8,5 and 9,0. The effect of different compounds in ATP, ADP e p-Nph-5´-TMP hydrolysis was evaluated and sodium azide, an inhibitor of several NTPDases, inhibited ATP and ADP hydrolysis, but have no effect in p-Nph-5´-TMP hydrolysis. Ouabain, NEM, classical ATPases inhibitors did not affect ATP, ADP e p-Nph-5´-TMPhydrolysis; however, AMP inhibited the p-Nph-5´-TMP hydrolysis. These results suggest the co-existence of different ectonucleotidases in acinar cells that are related with nucleotide hydrolysis and can act under different situations. The effect of antidepressants in activity and expression of enzymes involved in nucleotide hydrolysis was also evaluated. In relation to enzymatic activity, fluoxetine induced an increase only in ATP and ADP hydrolysis, whereas moclobemide and imipramine induced a significant increase in hydrolysis of all nucleotides (ATP, ADP and AMP). The relative expression of NTPDase1-3 was enhanced and for ecto-5´-nucleotidase was diminished with imipramine. Fluoxetine enhanced relative expression of NTPDase3 and ecto-5´-nucleotidase and inhibited the relative expression of NTPDase2. Moclobemide enhanced the relative expression of all enzymes. In relation to E-NPPs activities, imipramine, fluoxetine e moclobemide treatmens lead to a significant increase in this activity whereas the relative expression of NPP-1, NPP-2, and NPP-3 did not show modifications. The presence of ectonucleotidases modulating the levels of nucleotides in acinar cells is important considering the ATP role in the mechanisms of salivary secretion.

Os nucleotídeos da adenina são moléculas sinalizadoras no meio extracelular e estão envolvidas em importantes condições fisiológicas e patológicas. O papel do ATP como um mediador extracelular e neurotransmissor têm sido descrito em vários sistemas, inclusive na glândula salivar. Nas glândulas salivares, o ATP é liberado juntamente com acetilcolina e noradrenalina a partir do sistema de inervação da glândula. Esse ATP atua sobre os receptores P2X4, P2X7, P2Y1 e P2Y2, regulando importantes processos secretórios. Os eventos induzidos pelos nucleotídeos extracelulares são controlados pelas ectonucleotidases, que incluem membros da família das ecto-nucleosídeo trifosfato difosfoidrolases (E-NTPDases), ecto-nucleotídeo pirofosfatase/fosfodiesterases (E-NPPs) e ecto-5’-nucleotidase (ecto-5’N). Assim, no presente estudo nós investigamos a presença dessas ectonucleotidases nas células acinares da glândula submandibular. A presença de uma E-NTPDase e uma ecto-5'-nucleotidase foi identificada com as seguintes propriedades bioquímicas para a hidrólise de ATP, ADP e AMP: pH ótimo entre 6,5-8,0, requerimento de cátions divalentes (Ca2+ e Mg2+) e valores de Kmapp na faixa de micromolar. As células acinares das glândulas salivares também foram capazes de hidrolisar o p-Nph-5´-TMP, sugerindo a presença de uma E-NPP. A enzima descrita nesse estudo é dependente de cátions metálicos divalentes (Ca+2 e Mg+2), sendo que a hidrólise do p-Nph-5´-TMP foi máxima na presença de níveis basais de cátions e em pH entre 8,5 e 9,0. Também se analisou o efeito de vários compostos sobre a hidrólise do ATP, ADP e p-Nph-5´-TMP e verificou-se que aazida sódica, inibidor de várias NTPDases, inibiu a hidrólise do ATP e do ADP, e não teve efeito sobre o p-Nph-5´-TMP.A ouabaína e o NEM, inibidores clássicos de ATPases, não afetaram significativamente a hidrólise de ATP, ADP e p-Nph-5´- TMP, já o AMP, inibiu a hidrólise do p-Nph-5´-TMP. Esses resultados sugerem a co-existência de diferentes ectonucleotidases nas células acinares, que estão relacionadas com a hidrólise dos nucleotídeos e que podem atuar em diferentes situações. Também avaliamos o efeito de fármacos antidepressivos na atividade e expressão das enzimas envolvidas na hidrólise dos nucleotídeos. Em relação à atividade enzimática, observamos que a fluoxetina induziu um aumento na hidrólise de ATP e ADP e o moclobemide e a imipramina induziram um aumento significativo na hidrólise de todos os nucleotídeos (ATP, ADP e AMP). A expressão relativa da NTPDase1-3 aumentou e da ecto-5´-nucleotidase diminuiu com a imipramina. A fluoxetina aumentou a expressão relativa da NTPDase3 e ecto-5´-nucleotidase e inibiu a expressão relativa da NTPDase2. O moclobemide aumentou a expressão relativa de todas as enzimas. Em relação à atividade enzimática da NPP, os tratamentos com imipramina, fluoxetina e moclobemide levaram a um aumento significativo dessa atividade, enquanto as expressões relativas das NPP-1, NPP-2 e NPP-3 não apresentaram alteração. A presença de ectonucleotidases modulando os níveis dos nucleotídeos nas células acinares é importante tendo em vista o papel do ATP nos mecanismos de secreção salivar. / Adenine nucleotides are extracellular signaling molecules and are involved in important physiological and pathological conditions. The role of adenosine triphosphate (ATP) as an extracellular mediator and neurotransmitter has been described in various systems, including salivary glands. In salivary glands, extracellular ATP is co-released with acetylcholine and noradrenaline from glands nerve system. ATP acts on P2X4, P2X7, P2Y1 e P2Y2 receptors and may regulate important secretory processes in salivary gland cells. The events induced by extracellular nucleotides are controlled by ectonucleotidases, that include family members of ecto-nucleoside triphosphate diphosphohydrolase (E-NTPDase), ectopyrophosphatases/ phosphodiesterases (E-NPP) and ecto-5’-nucleotidase. The presence of an E-NTPDase and ecto-5'-nucleotidase was identified with the following biochemical characteristics for ATP, ADP, and AMP hydrolysis: optimum pH between 6.5-8.0, dependence of divalent cations (Ca2+ e Mg2+) and Kmapp values in micromolar range. Acinar cells from salivary glands were capable to hydrolyze p-Nph-5´-TMP, suggesting the presence of an E-NPP. The enzyme described in this study is divalent cations-dependent (Ca+2 e Mg+2), and the p-Nph- 5´-TMP hydrolysis was maximal with basal levels of cations in pH between 8,5 and 9,0. The effect of different compounds in ATP, ADP e p-Nph-5´-TMP hydrolysis was evaluated and sodium azide, an inhibitor of several NTPDases, inhibited ATP and ADP hydrolysis, but have no effect in p-Nph-5´-TMP hydrolysis. Ouabain, NEM, classical ATPases inhibitors did not affect ATP, ADP e p-Nph-5´-TMPhydrolysis; however, AMP inhibited the p-Nph-5´-TMP hydrolysis. These results suggest the co-existence of different ectonucleotidases in acinar cells that are related with nucleotide hydrolysis and can act under different situations. The effect of antidepressants in activity and expression of enzymes involved in nucleotide hydrolysis was also evaluated. In relation to enzymatic activity, fluoxetine induced an increase only in ATP and ADP hydrolysis, whereas moclobemide and imipramine induced a significant increase in hydrolysis of all nucleotides (ATP, ADP and AMP). The relative expression of NTPDase1-3 was enhanced and for ecto-5´-nucleotidase was diminished with imipramine. Fluoxetine enhanced relative expression of NTPDase3 and ecto-5´-nucleotidase and inhibited the relative expression of NTPDase2. Moclobemide enhanced the relative expression of all enzymes. In relation to E-NPPs activities, imipramine, fluoxetine e moclobemide treatmens lead to a significant increase in this activity whereas the relative expression of NPP-1, NPP-2, and NPP-3 did not show modifications. The presence of ectonucleotidases modulating the levels of nucleotides in acinar cells is important considering the ATP role in the mechanisms of salivary secretion.

Submitted by Luiza Maria Pereira de Oliveira (luiza.oliveira@ufpe.br) on 2015-05-18T15:20:59Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO Isis Regina Cypriano de Melo.pdf: 761788 bytes, checksum: 023dc18ee65f911eb3f3a7a947f05243 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-05-18T15:20:59Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO Isis Regina Cypriano de Melo.pdf: 761788 bytes, checksum: 023dc18ee65f911eb3f3a7a947f05243 (MD5) Previous issue date: 2014-02-25 / Pacientes portadores de distúrbios neurológicos apresentam dificuldade de contenção de saliva, hipersalivação ou sialorréia. Uma nova opção terapêutica para o tratamento destes pacientes surge com a aplicação de toxina botulínica em glândulas salivares com objetivo de reduzir a quantidade de saliva dos mesmos. Por outro lado, sabe-se que, ao diminuir a salivação pode-se favorecer a modificação de algumas espécies bacterianas. Assim sendo este trabalho objetivou estudar a composição bacteriana da saliva de ratas quando submetidas à injeção intraglandular de toxina botulínica tipo A em glândulas submandibulares. Para tal, foram utilizadas 30 ratas albinas (Wistar), divididas em três grupos: grupo I (controle), grupo II (tratado com gelatina bovina a 0,1 ml) e grupo III (tratado com toxina botulínica 2,5U, diluído em 0,1ml de soro fisiológico). Os grupos II e III foram subdivididos de acordo com o tempo de tratamento em grupos com 15 e com 28 dias. Coletas da microbiota oral foram realizadas na saída do ducto da glândula submandibular direita através de “swab” antes, e com 15 e 28 dias após o tratamento. Os resultados mostraram que o percentual de UFCs no grupo I foi de 18%, no grupo II foi de 16% no 15º dia e 17% no 28º. No grupo III foi de 24% no 15º dia e 25% no 28º dia, ocorrendo um aumento significativo das mesmas no grupo III (p< 0,05). Na comparação das espécies bacterianas, houve uma maior variedade no grupo III em relação ao grupo controle e ao grupo II (p< 0,05). As espécies bacterianas mais frequentes no grupo I foram E. viridans (42,86%), seguidas da S. aureus (28,57%). No grupo III, ao 15º dia houve a presença da S. saprophyticus (33,33%), seguido de E. bovis (22,22%) e, no grupo II, ao 28º dia houve uma maior porcentagem das bactérias do grupo viridans, com frequência de 75% do total de bactérias (p< 0,05). Ocorreu ainda o surgimento de bactérias gram-negativas no grupo III, que não foi observada nos grupos I e II. Concluiu-se que, a toxina botulínica interferiu na microbiota oral das ratas, alterando-a quantitativa e qualitativamente. Ao passo que, quando tratadas com gelatina bovina constatou-se uma alteração qualitativa das espécies bacterianas encontradas.

Dissertação (mestrado) - Pontifícia Universidade Católica do Paraná, Curitiba, 2011 / Bibliografia: f. 51-65 / O objetivo desta pesquisa é testar um método inovador de conservação extracorpórea de glândulas salivares submandibulares. O método mpregado foi do resfriamento a temperaturas abaixo de 0°C (criopreservação) para futuro reimplante, baseado no método de cr / Objective: The objective of this research is test a new method of extracorporeal preservation of the submandibular glands. The method used was cooling to temperatures below 0 ° C (cryopreservation) for future reimplantation based on the method of cryopre

O diabetes mellitus (DM) pode levar à disfunção das glândulas salivares. A ativação do receptor de produtos finais de glicosilação avançada e de seus ligantes tem sido reportado em várias doenças crônicas, entre estas, a diabetes e suas complicações. Este estudo analisou a expressão do RAGE, proteína do grupo de alta mobilidade B1 (HMGB1) e de produtos de glicosilação avançada (AGE), bem como os efeitos da irradiação com laser de baixa potência (ILBP) em glândulas salivares submandibulares (GSMs) de ratas diabéticas. Ratas Wistar com 12 semanas de vida foram divididas em 3 grupos: controle (C), diabético (D) e diabético com laser (DL). A indução de DM nos grupos D e DL foi realizada com injeção intraperitoneal de estreptozotocina 60 mg/kg de peso corporal, no 1° dia experimental. No 29°dia, os animais do grupo DL receberam a ILBP (660 nm, 70 mW, 20 J/cm² e 0,56 J por ponto), aplicado no total de quarenta pontos cobrindo a área correspondente as GSMs, e os seus efeitos foram avaliados 24 h após a irradiação (eutanásia). As análises de parâmetros metabólicos, histológicos e de marcadores de inflamação, apoptose e proliferação foram realizadas. Nossos achados mostram que a ILBP diminuiu a glicemia das ratas diabéticas irradiadas, melhorando a resistência à insulina (HOMA-IR), sensibilidade à insulina (HOMA-IS) e função de células beta (HOMA-?). Em GSM, o DM parece aumentar a expressão do eixo HMGB1/AGE/RAGE, possivelmente associado à ativação do fator de transcrição nuclear kappa B (NF?B). A ILBP reduziu os marcadores de inflamação, HMGB1 e TNF-? em GSM de ratas diabéticas, e parece regular a expressão de proteínas relacionadas à proliferação e à apoptose, pela via do AMP cíclico, parcialmente mediado por proteína kinase regulada por sinais extracelulares. No entanto, mais estudos são necessários para melhor entender os efeitos do laser neste tecido. / Diabetes (DM) can lead to dysfunction of the secretory capacity in salivary glands. Since the activation of the receptor for advanced glycation end-products (RAGE) and its ligands has been suggested to participate in chronic disorders, such as diabetes and its complications. This study analyzed the expression of RAGE, high mobility group box protein B1 (HMGB1) and advanced glycation end-products (AGEs) were evaluated, as well as the effects of low-power laser irradiation (ILBP), in diabetic submandibular glands (GSM). Wistar rats 12 weeks-old were divided in three groups: control (C), diabetic (D) and diabetic with laser (DL). The D and DL rats were intraperitoneally injected with streptozotocin 60 mg/kg, in the 1st experimental day. On the 29° day, the DL rats received the ILBP (660 nm, 70 mW, 20 J/cm² e 0,56J per point), with a total of forty points covering the GSMs area, its effects were evaluated 24h after irradiation (euthanasia). Metabolic parameters, histology and the inflammatory, apoptosis and proliferation markers were evaluated. Our findings show that ILBP reduced the blood glucose levels of the irradiated diabetic rats, improving their insulin resistance (HOMA-IR), insulin sensitivity (HOMA-IS) e beta cell function (HOMA-?). In GSM, DM seems to upregulate the expression of HMGB1/AGE/RAGE axis, possibly associated with the activation of the nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated B cells (NF?B). The ILBP reduced the inflammatory markers HMGB1 and TNF-? in diabetic GSM, and seems to regulate the expression of proteins related to proliferation and apoptosis, by cyclic AMP pathway, partially mediated by extracellular signal-regulated kinase. However, more studies are necessary to better understand the laser effects on this tissue.

A Camellia sinensis, vem sendo amplamente estudada, em função das suas propriedades medicinais, devido aos polifenóis com funções antioxidantes, tendo seu uso propostos como terapêutica para algumas doenças metabólicas como o Diabetes mellitus. A ingestão diária de antioxidantes, principalmente com compostos fenólicos pode retardar o aparecimento destas doenças. O atual trabalho o avaliou possível efeito terapêutico do chá verde (Camellia Sinensis) em ratos diabéticos induzido pela estreptozotocina, parâmetros clínicos (peso, ingestão hídrica) e laboratoriais (glicemia de jejum, colesterol total, triglicérides, proteínas totais, albumina e uréia) esse efeito na glândula submandibular pelo método morfométrico. Cento e sessenta ratos machos com 2 meses de idade foram distribuídos inicialmente em controle (n = 80) e diabéticos (n = 80). Os animais do grupo controle água (CA) e diabético água (DA) consumiram água como dieta líquida e os animais dos grupos controle chá (CC) e diabético chá (DC) receberam apenas dieta líquida de chá verde. Os parâmetros bioquímicos e morfométricos foram avaliados nos períodos experimentais de 15, 30, 60 e 90 dias (n = 5), após a indução. Os resultados mostraram que: a) a ingestão hídrica dos animais dos grupos DA e DC foram em média 6 vezes maior em relação aos controles; b) aos 15 dias, todos os animais dos grupos CA, CC e DA apresentaram aumento nos índices glicêmicos final de, respectivamente, 45 mg/dL, 65 mg/dL e 88mg/dL em relação ao período inicial, enquanto que todos os animais do grupo DC tiveram seus índices glicêmicos reduzidos em média de 119 mg/dL; c) nos ratos diabéticos o perfil bioquímico das proteínas totais e albumina foram menores em relação aos controles e o da uréia maior, enquanto que, o colesterol total, triglicérides não apresentaram diferenças; d) os ácinos das glândulas submandibulares dos animais dos grupos DA e DC exibiram aumento da eosinofilia citoplasmática e ausência da bosofilia basal, indicativos de alteração no conteúdo protéico e na síntese protéica, além de núcleos picnóticos, indicativos de morte celular por apoptose. Morfometricamente, o volume individual das células acinosas aumentou, enquanto que, o número total de células diminuiu, mantendo o volume total dos ácinos constante durante todo período experimental; e) os ductos granulosos, no grupo CA apresentaram aumento de 125% no seu volume total entre 15 e 90 dias, decorrente do desenvolvimento desta estrutura, aumentando o número e o volume celular. Já, nos DA e DC, o número e o volume individual das células mantiveram-se constante durante todo período experimental. Com base nos resultados obtidos, podemos inferir que a glândula submandibular é um órgão afetado pelo diabetes e a terapêutica utilizada neste experimento (Camellia sinensis) não foi efetiva para o tratamento do diabetes crônica. / The Camellia sinensis, has been widely studied because of their medicinal properties due to the polyphenols with antioxidant functions, and proposed its use as treatment for various metabolic disorders such as diabetes mellitus. The daily intake of antioxidants, mainly phenolic compounds may prevent or delay onset of these diseases. In this study, the possible therapeutic action of green tea (Camellia Sinensis) in diabetic rat induced chemically by streptozotocin was evaluated by clinical (weight, water intake) and laboratory parameters (fasting glucose, total cholesterol, triglycerides, total protein, albumin and urea) and its effect in the submandibular glands by morphometric methods. One hundred and sixty male rats with 2 months of age were distributed initially in control (n = 80) and diabetic (n = 80). The animals of the water control (WC) and water diabetic (WD) groups received only regular drinking water and green tea control (GTC) and green tea diabetic (GTD) groups received green tea solution ad libitum. Morphometric and biochemical parameters were evaluated after 15, 30, 60 and 90 days (n = 5) after induction. The results showed that: a) the water intake of animals from group WD and GTD were six times higher on average than control groups; b) at 15 days, all animals of the WC, WD and GTC groups showed an increase of the glycemic index of, respectively, 45 mg/dL, 65 mg/dL and 88 mg/dL compared to the initial period, while that all animals in CTD group, showed a decrease of 119mg/dL; c) in the diabetic rats of WD and GTD groups the total protein and albumin levels were lower than control groups and urea level higher, whereas, the total cholesterol and triglyceride did not show significant differences, d) the acini of submandibular glands of animals in groups WD and GTD showed increase of the cytoplasmic eosinophilia and absence of the basal basophilia, which may be indicative of changes in protein content and/or structure, and pyknotic nuclei indicative of cell death. Morphometrically, the volume of acinar cells increased, whereas the cell number decreased, maintaining the total volume of acini constant throughout the experimental period, e)the granular convoluted tubules in development showed an increase of 125% between 15 and 90 days in the WC group, due to increase in the number and volume of its cells. In DA and DC groups, the number and volume of cells remained constant throughout the experimental period. Based on the results, we infer that the submandibular gland is an organ affected by diabetes and that the green tea (Camellia sinensis) therapy used in this experiment is not effective for the treatment of chronic diabetes.

Submitted by KETELIN JULIANE DAL PRÁ null (k.dalpra@hotmail.com) on 2017-01-20T02:22:12Z No. of bitstreams: 1 Dissertação de Mestrado Ketelin J. Dal Prá - FOA UNESP.pdf: 1380407 bytes, checksum: aa6eb3e50dc3c4e8a803bd7b396157fa (MD5) / Approved for entry into archive by LUIZA DE MENEZES ROMANETTO (luizamenezes@reitoria.unesp.br) on 2017-01-24T12:22:26Z (GMT) No. of bitstreams: 1 dalpra_kj_me_araca.pdf: 1380407 bytes, checksum: aa6eb3e50dc3c4e8a803bd7b396157fa (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-24T12:22:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dalpra_kj_me_araca.pdf: 1380407 bytes, checksum: aa6eb3e50dc3c4e8a803bd7b396157fa (MD5) Previous issue date: 2016-12-16 / O presente estudo teve como objetivo investigar em glândulas submandibulares de ratos tratados com aguardente de cana, a morfologia, atividade funcional das fosfatases e níveis de mucina. 24 ratos machos e adultos foram divididos em 4 grupos (n=6) de acordo com o tipo de bebida fornecida, aguardente de cana (39º GL) ou água, e ao tempo de tratamento de 75 ou 105 dias. Após os períodos de tratamento, os animais foram submetidos à cirurgia para remoção das glândulas submandibulares, seguido da eutanásia. As glândulas submandibulares do lado direito foram processadas para análise histomorfométrica (Image J) dos ductos estriados, ductos granulosos e ácinos. As glândulas do lado esquerdo foram pesadas e armazenadas a -80 °C, para avaliação da atividade funcional da fosfatase ácida total (FAT), fosfatase ácida resistente ao tartarato (FART), fosfatase alcalina (FAL) e determinação dos níveis de mucina. Para isso foram feitos ensaios bioquímicos por métodos espectrofotométricos. Os dados quantitativos foram submetidos à análise estatística (p<0,05). Os pesos absolutos e relativos das glândulas submandibulares apresentam-se reduzidos em relação aos controles (p<0,05). Na análise histomorfométrica, observamos que houve relevante redução da área dos ácinos (p<0,05) e redução não significativa dos ductos estriados (p>0,05). Nos ductos granulosos ocorreu aumento não significativo da área (p>0,05). As atividades de FAT e FART se apresentaram expressivamente diminuídas nos grupos experimentais (p<0,05), enquanto a atividade funcional de FAL diminuiu de forma moderada (p>0,05). Houve redução significativa dos níveis de mucina pelo efeito do alcoolismo crônico (p<0,05). A partir desses dados foi possível concluir que o alcoolismo crônico, por uso de aguardente de cana afeta a funcionalidade bioquímica e a morfologia da glândula submandibular. / The present study aimed to investigate submandibular glands of rats treated with cane brandy, morphology, functional activity of phosphatases and levels of mucin. 24 male and adult rats were divided into 4 groups (n = 6) according to the type of beverage provided, cane brandy (39° GL) or water, and treatment time of 75 or 105 days. After the treatment periods, the animals were submitted to surgery to remove the submandibular glands, followed by euthanasia. The submandibular glands on the right side were processed for histomorphometric analysis (Image J) of the striated ducts, granular ducts and acini. The left glands were weighed and stored at -80 °C for evaluation of the functional activity of total acid phosphatase (TAP), tartrate-resistant acid phosphatase (TRAP), alkaline phosphatase (ALP), and determination of mucin levels. For this, biochemical tests were carried out by spectrophotometric methods. Quantitative data were submitted to statistical analysis (p <0.05). The absolute and relative weights of the submandibular glands are reduced in relation to the controls (p <0.05). In the histomorphometric analysis, we observed that there was a significant reduction of the acini area (p <0.05) and a non-significant reduction of the striated ducts (p> 0.05). In the granular ducts a not significant increase of the area occurred (p> 0.05). The TAP and TRAP activities were significantly decreased in the experimental groups (p <0.05), while the ALP functional activity decreased moderately (p> 0.05). There was a significant reduction of mucin levels by the effect of chronic alcoholism (p <0.05). From these data it was possible to conclude that chronic alcoholism due to the use of cane brandy affects the biochemical functionality and morphology of the submandibular gland.

A Camellia sinensis, vem sendo amplamente estudada, em função das suas propriedades medicinais, devido aos polifenóis com funções antioxidantes, tendo seu uso propostos como terapêutica para algumas doenças metabólicas como o Diabetes mellitus. A ingestão diária de antioxidantes, principalmente com compostos fenólicos pode retardar o aparecimento destas doenças. O atual trabalho o avaliou possível efeito terapêutico do chá verde (Camellia Sinensis) em ratos diabéticos induzido pela estreptozotocina, parâmetros clínicos (peso, ingestão hídrica) e laboratoriais (glicemia de jejum, colesterol total, triglicérides, proteínas totais, albumina e uréia) esse efeito na glândula submandibular pelo método morfométrico. Cento e sessenta ratos machos com 2 meses de idade foram distribuídos inicialmente em controle (n = 80) e diabéticos (n = 80). Os animais do grupo controle água (CA) e diabético água (DA) consumiram água como dieta líquida e os animais dos grupos controle chá (CC) e diabético chá (DC) receberam apenas dieta líquida de chá verde. Os parâmetros bioquímicos e morfométricos foram avaliados nos períodos experimentais de 15, 30, 60 e 90 dias (n = 5), após a indução. Os resultados mostraram que: a) a ingestão hídrica dos animais dos grupos DA e DC foram em média 6 vezes maior em relação aos controles; b) aos 15 dias, todos os animais dos grupos CA, CC e DA apresentaram aumento nos índices glicêmicos final de, respectivamente, 45 mg/dL, 65 mg/dL e 88mg/dL em relação ao período inicial, enquanto que todos os animais do grupo DC tiveram seus índices glicêmicos reduzidos em média de 119 mg/dL; c) nos ratos diabéticos o perfil bioquímico das proteínas totais e albumina foram menores em relação aos controles e o da uréia maior, enquanto que, o colesterol total, triglicérides não apresentaram diferenças; d) os ácinos das glândulas submandibulares dos animais dos grupos DA e DC exibiram aumento da eosinofilia citoplasmática e ausência da bosofilia basal, indicativos de alteração no conteúdo protéico e na síntese protéica, além de núcleos picnóticos, indicativos de morte celular por apoptose. Morfometricamente, o volume individual das células acinosas aumentou, enquanto que, o número total de células diminuiu, mantendo o volume total dos ácinos constante durante todo período experimental; e) os ductos granulosos, no grupo CA apresentaram aumento de 125% no seu volume total entre 15 e 90 dias, decorrente do desenvolvimento desta estrutura, aumentando o número e o volume celular. Já, nos DA e DC, o número e o volume individual das células mantiveram-se constante durante todo período experimental. Com base nos resultados obtidos, podemos inferir que a glândula submandibular é um órgão afetado pelo diabetes e a terapêutica utilizada neste experimento (Camellia sinensis) não foi efetiva para o tratamento do diabetes crônica. / The Camellia sinensis, has been widely studied because of their medicinal properties due to the polyphenols with antioxidant functions, and proposed its use as treatment for various metabolic disorders such as diabetes mellitus. The daily intake of antioxidants, mainly phenolic compounds may prevent or delay onset of these diseases. In this study, the possible therapeutic action of green tea (Camellia Sinensis) in diabetic rat induced chemically by streptozotocin was evaluated by clinical (weight, water intake) and laboratory parameters (fasting glucose, total cholesterol, triglycerides, total protein, albumin and urea) and its effect in the submandibular glands by morphometric methods. One hundred and sixty male rats with 2 months of age were distributed initially in control (n = 80) and diabetic (n = 80). The animals of the water control (WC) and water diabetic (WD) groups received only regular drinking water and green tea control (GTC) and green tea diabetic (GTD) groups received green tea solution ad libitum. Morphometric and biochemical parameters were evaluated after 15, 30, 60 and 90 days (n = 5) after induction. The results showed that: a) the water intake of animals from group WD and GTD were six times higher on average than control groups; b) at 15 days, all animals of the WC, WD and GTC groups showed an increase of the glycemic index of, respectively, 45 mg/dL, 65 mg/dL and 88 mg/dL compared to the initial period, while that all animals in CTD group, showed a decrease of 119mg/dL; c) in the diabetic rats of WD and GTD groups the total protein and albumin levels were lower than control groups and urea level higher, whereas, the total cholesterol and triglyceride did not show significant differences, d) the acini of submandibular glands of animals in groups WD and GTD showed increase of the cytoplasmic eosinophilia and absence of the basal basophilia, which may be indicative of changes in protein content and/or structure, and pyknotic nuclei indicative of cell death. Morphometrically, the volume of acinar cells increased, whereas the cell number decreased, maintaining the total volume of acini constant throughout the experimental period, e)the granular convoluted tubules in development showed an increase of 125% between 15 and 90 days in the WC group, due to increase in the number and volume of its cells. In DA and DC groups, the number and volume of cells remained constant throughout the experimental period. Based on the results, we infer that the submandibular gland is an organ affected by diabetes and that the green tea (Camellia sinensis) therapy used in this experiment is not effective for the treatment of chronic diabetes.