SILVA, Lilianne Brito da. Caracterização clínica, hematológica e molecular dos pacientes com anemia falciforme em Fortaleza, Ceará. 2009. 75 f. Dissertação (Mestrado em Patologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2009. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2011-12-21T15:55:40Z No. of bitstreams: 1 2009_dis_lbsilva.pdf: 1279336 bytes, checksum: 99b7beb606dc53352dd46882758c40db (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-02-02T16:15:37Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_dis_lbsilva.pdf: 1279336 bytes, checksum: 99b7beb606dc53352dd46882758c40db (MD5) / Made available in DSpace on 2012-02-02T16:15:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_dis_lbsilva.pdf: 1279336 bytes, checksum: 99b7beb606dc53352dd46882758c40db (MD5) Previous issue date: 2009 / Introduction: The sickle cell anemia is the result of a point mutation in the β-globin gene, leading to a substitution of glutamic acid by valine at the sixth position of the polypeptide chain. The sickle cell anemia presents heterogeneous clinical manifestations, which may be related to the type of haplotype associated with the gene for HbS and HbF levels. Objective: Clinical characterization, molecular and haematological patients with sickle cell anemia in Fortaleza, Ceará. Methods: We analyzed 47 patients with sickle cell anemia, adults of both sexes. The determination of hematological values was performed on blood cells automated meter; the determination of the presence of HbSS was performed by alkaline hemoglobin electrophoresis on cellulose acetate tapes and by differentiation electrophoresis on agar-phosphate pH 6.2; the levels of HbF were determined by alkali denaturation technique; and the analysis of the haplotypes of the ßS mutation was done by polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP). Statistical analysis was developed in the program GraphPad Prism (version 5.0) and the level of significance was set p <0.05. Results: The distribution of the haplotypes of βS-globin gene - 63% of the Bantu type, 25% of the Benin type and 12% atypical – was in conformity with that observed for the entire Brazilian population, in which the Bantu haplotype is most prevalent, followed by the Benin and Senegal. There was no significant difference between the results found in this study and those found for the cities of Rio de Janeiro, Porto Alegre, Campinas and Ribeirão Preto; but there was a significant difference with the results obtained for the cities of Salvador and Belém and the state of Amazonas, and by other researchers in Ceará. The distribution of haplotype frequencies of the βS-globin gene in the different studies is in line with the history of the formation of the Brazilian population, except for the results of a previous study carried out in Ceará, in which the Benin haplotype was found to be most prevalent. According to the historical information on the origins of the slave population brought to Ceará, the Bantu haplotype should be the most prevalent. In the comparison between the haplotypes and the haematological characteristics studied, only the values of HbF and Ht showed statistically significant difference. The levels of HbF were higher in the Benin haplotype, followed by the Bantu haplotype, which is in accordance with the literature. Was demonstrated greater presence of painful episodes and episodes of pneumonia in Benin haplotype/Atypical haplotype than in Bantu/Atypical and increased presence of urinary infection crises in Benin haplotype/Atypical haplotype than in Benin/Benin. There was no statistically significant difference between the haplotypes Bantu/Bantu and Benin/Benin for clinical complications, however it was observed that the haplotype Bantu/Bantu has a higher frequency in all studied clinical events when compared to Benin/Benin. Among the results was shown a trend of fewer patients with painful episodes and of leg ulcers with increased levels of HbF. There was no statistically significant difference in the comparison between the levels of HbF and the values of red blood cells, hemoglobin, hematocrit, leukocytes and platelets. Conclusions: The determination of haplotypes of sickle cell anemia is of great importance not only for monitoring and prognosis of patients, but also as a tool for anthropological studies which help in clarifying the origin of Africans who have contributed so much in training ethnological, economic, cultural and social Brazil. / Introdução: A anemia falciforme é o resultado de uma mutação pontual (GAGGTG) no códon do gene da globina β, conduzindo a uma substituição de ácido glutâmico por valina na sexta posição da cadeia polipeptídica. A anemia falciforme apresenta manifestações clínicas heterogêneas, que podem ser relacionadas ao tipo de haplótipo associado ao gene da HbS e aos níveis de HbF. Objetivo: Caracterização clínica, hematológica e molecular dos pacientes com anemia falciforme em Fortaleza, Ceará. Metodologia: Foram analisados 47 pacientes com anemia falciforme, adultos e de ambos os sexos. A determinação dos valores hematológicos foi realizada em contador automático de células sangüíneas; a determinação da presença de HbSS foi realizada por eletroforese em pH alcalino em fitas de acetato de celulose e por eletroforese de diferenciação em Ágar-fostato pH 6.2; os níveis de HbF foram determinados pela técnica da desnaturação alcalina; e a análise dos haplótipos da mutação ßS foi realizada por meio da técnica da reação em cadeia mediada pela polimerase para polimorfismo dos comprimentos dos fragmentos de restrição (PCR-RFLP). As análises estatísticas foram desenvolvidas no programa GraphPad Prism (versão 5.0) e o nível de significância estabelecido foi p < 0,05. Resultados: A distribuição dos haplótipos do gene da βS-globina, 63% do tipo Bantu, 25% do tipo Benin e 12% do tipo Atípico, está em conformidade com a observada para a população brasileira, em que o haplótipo Bantu é o mais prevalente, seguido pelo Benin e Senegal. Não houve diferença significativa entre o presente estudo e os resultados encontrados no Rio de Janeiro, Porto Alegre, Campinas e Ribeirão Preto; porém uma diferença significativa foi observada quando o estudo foi comparado aos resultados obtidos em Salvador, Belém, Amazonas e por outros pesquisadores no Ceará. A distribuição das freqüências dos haplótipos do gene da βS-globina nos diferentes estudos está condizente com a história da formação da população brasileira, exceto nos resultados do estudo anterior realizado no Ceará, que obteve o haplótipo Benin com maior prevalência. Conforme os dados históricos sobre as origens da população negra trazida ao estado do Ceará, o haplótipo Bantu seria o mais prevalente. Na comparação entre os haplótipos e as características hematológicas estudadas, apenas os valores de HbF e Ht apresentaram diferença estatisticamente significativa. Os níveis de HbF foram maiores no haplótipo Benin, seguido do haplótipo Bantu, o que está em conformidade com os dados da literatura. Foi demonstrada maior presença de crises vaso-oclusivas e episódios de pneumonia no haplótipo Benin/Atípico do que no haplótipo Bantu/Atípico; e maior presença de crises de infecção urinária no haplótipo Benin/Atípico do que no haplótipo Benin/Benin. Não houve diferença estatisticamente significativa entre os haplótipos Bantu/Bantu e Benin/Benin em relação às complicações clínicas, entretanto foi observado que o haplótipo Bantu/Bantu tem uma maior freqüência em todos os eventos clínicos estudados quando comparado ao Benin/Benin. Dentre os resultados foi demonstrada uma tendência de menor número de pacientes com crises vasos-oclusivas e úlceras de perna com o aumento dos níveis de HbF. Não houve diferença estatisticamente significativa na comparação entre os níveis de HbF e os valores de Hemácias, Hemoglobina, Hematócrito, Leucócitos e Plaquetas. Conclusões: A determinação dos haplótipos da anemia falciforme é de grande importância não só para o acompanhamento e prognóstico dos pacientes, como também como ferramenta para estudos antropológicos que contribuam no esclarecimento da origem dos africanos que tanto contribuíram na formação etnológica, econômica, cultural e social do Brasil.

Orientador: Maria de Fatima Sonati / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-09T04:43:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ribeiro_DanielaMaria_D.pdf: 2122347 bytes, checksum: 625fa24f0c7882709f12ba0054267aff (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: A expressão dos genes do cluster da globina a em humanos é regulada pelo a-MRE ( a-Major Regulatory Element), um elemento localizado 40 kb à montante do respectivo cluster na região telomérica do braço curto do cromossomo 16. O a-MRE é geneticamente polimórfico e seis diferentes haplótipos, nomeados de A a F, foram determinados em alguns grupos populacionais da África, Europa e Ásia e em indivíduos pertencentes a duas populações indígenas brasileiras. As substituições de base que resultaram nestes haplótipos estão localizadas entre sítios de ligação para fatores nucleares ou em um sítio não ocupado in vivo, exceto no caso do haplótipo D, em que o polimorfismo altera a seqüência de um dos sítios ocupado in vivo pelo fator NF-E2. Não há, de nosso conhecimento, nenhum estudo experimental feito para avaliar se essa variabilidade pode influenciar a expressão gênica. Assim, no presente trabalho foi analisada e comparada a expressão do gene repórter da luciferase em células K562 transientemente transfectadas com construções que tiveram como enhancers os diferentes haplótipos do a-MRE, além de 3 dos polimorfismos isoladamente (+130, +199 e +209). Os resultados revelaram redução da expressão do gene da luciferase com todas as construções em relação à do haplótipo selvagem A: os haplótipos B e C corresponderam a 19% do grau de expressão do haplótipo A, o D a 21%, o E a 15%, o F a 3%, o polimorfismo +130 a 24%, o +199 a 32% e o +209 a 3%. Em seu conjunto, eles demonstram que os polimorfismos responsáveis pelos diferentes haplótipos do a-MRE, em sua maioria situados nas seqüências flanqueadoras dos sítios de ligação para proteínas regulatórias, reduzem a expressão gênica in vitro / Abstract: The expression of human a-like globin genes is regulated by the a-MRE (a-Major Regulatory Element), an element located 40 kb upstream of the a cluster in the short arm of chromosome 16. The a-MRE is genetically polymorphic and six different haplotypes, named A to F, have been identified in some population groups from Europe, Africa and Asia and in native Indians from two Brazilian Indian tribes. The base substitutions that resulted in these haplotypes are located between binding sites for nuclear factors or in a site that is considered not to be active in vivo, with the exception of haplotype D, in which the polymorphism changes the first binding site for the NF-E2 factor occupied in vivo. To our knowledge, there are no experimental studies evaluating whether this variability may influence gene expression. Thus, the present work analyzed and compared the expression of the luciferase reporter gene in K562 cells transiently transfected with constructs that have, as enhancers, the different a-MRE haplotypes, besides three isolated polymorphisms (+130, +199 and +209). The results demonstrated a reduction in luciferase gene expression with all the constructs compared with the wild type a-MRE (A haplotype): the B and C haplotypes corresponded to 19% of the A haplotype expression, the D to 21%, the E to 15%, the F to 3%, the polymorphism +130 to 24%, the +199 to 32% and the +209 to 3%. They demonstrate that the polymorphisms responsible for the a-MRE haplotypes, most located in the flanking sequences of the regulatory protein binding sites, decrease in vitro gene expression / Doutorado / Ciencias Biomedicas / Doutor em Ciências Médicas

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / IntroduÃÃo: A anemia falciforme à o resultado de uma mutaÃÃo pontual (GAG&#61614;GTG) no cÃdon do gene da globina &#946;, conduzindo a uma substituiÃÃo de Ãcido glutÃmico por valina na sexta posiÃÃo da cadeia polipeptÃdica. A anemia falciforme apresenta manifestaÃÃes clÃnicas heterogÃneas, que podem ser relacionadas ao tipo de haplÃtipo associado ao gene da HbS e aos nÃveis de HbF. Objetivo: CaracterizaÃÃo clÃnica, hematolÃgica e molecular dos pacientes com anemia falciforme em Fortaleza, CearÃ. Metodologia: Foram analisados 47 pacientes com anemia falciforme, adultos e de ambos os sexos. A determinaÃÃo dos valores hematolÃgicos foi realizada em contador automÃtico de cÃlulas sangÃÃneas; a determinaÃÃo da presenÃa de HbSS foi realizada por eletroforese em pH alcalino em fitas de acetato de celulose e por eletroforese de diferenciaÃÃo em Ãgar-fostato pH 6.2; os nÃveis de HbF foram determinados pela tÃcnica da desnaturaÃÃo alcalina; e a anÃlise dos haplÃtipos da mutaÃÃo ÃS foi realizada por meio da tÃcnica da reaÃÃo em cadeia mediada pela polimerase para polimorfismo dos comprimentos dos fragmentos de restriÃÃo (PCR-RFLP). As anÃlises estatÃsticas foram desenvolvidas no programa GraphPad Prism (versÃo 5.0) e o nÃvel de significÃncia estabelecido foi p < 0,05. Resultados: A distribuiÃÃo dos haplÃtipos do gene da &#946;S-globina, 63% do tipo Bantu, 25% do tipo Benin e 12% do tipo AtÃpico, està em conformidade com a observada para a populaÃÃo brasileira, em que o haplÃtipo Bantu à o mais prevalente, seguido pelo Benin e Senegal. NÃo houve diferenÃa significativa entre o presente estudo e os resultados encontrados no Rio de Janeiro, Porto Alegre, Campinas e RibeirÃo Preto; porÃm uma diferenÃa significativa foi observada quando o estudo foi comparado aos resultados obtidos em Salvador, BelÃm, Amazonas e por outros pesquisadores no CearÃ. A distribuiÃÃo das freqÃÃncias dos haplÃtipos do gene da &#946;S-globina nos diferentes estudos està condizente com a histÃria da formaÃÃo da populaÃÃo brasileira, exceto nos resultados do estudo anterior realizado no CearÃ, que obteve o haplÃtipo Benin com maior prevalÃncia. Conforme os dados histÃricos sobre as origens da populaÃÃo negra trazida ao estado do CearÃ, o haplÃtipo Bantu seria o mais prevalente. Na comparaÃÃo entre os haplÃtipos e as caracterÃsticas hematolÃgicas estudadas, apenas os valores de HbF e Ht apresentaram diferenÃa estatisticamente significativa. Os nÃveis de HbF foram maiores no haplÃtipo Benin, seguido do haplÃtipo Bantu, o que està em conformidade com os dados da literatura. Foi demonstrada maior presenÃa de crises vaso-oclusivas e episÃdios de pneumonia no haplÃtipo Benin/AtÃpico do que no haplÃtipo Bantu/AtÃpico; e maior presenÃa de crises de infecÃÃo urinÃria no haplÃtipo Benin/AtÃpico do que no haplÃtipo Benin/Benin. NÃo houve diferenÃa estatisticamente significativa entre os haplÃtipos Bantu/Bantu e Benin/Benin em relaÃÃo Ãs complicaÃÃes clÃnicas, entretanto foi observado que o haplÃtipo Bantu/Bantu tem uma maior freqÃÃncia em todos os eventos clÃnicos estudados quando comparado ao Benin/Benin. Dentre os resultados foi demonstrada uma tendÃncia de menor nÃmero de pacientes com crises vasos-oclusivas e Ãlceras de perna com o aumento dos nÃveis de HbF. NÃo houve diferenÃa estatisticamente significativa na comparaÃÃo entre os nÃveis de HbF e os valores de HemÃcias, Hemoglobina, HematÃcrito, LeucÃcitos e Plaquetas. ConclusÃes: A determinaÃÃo dos haplÃtipos da anemia falciforme à de grande importÃncia nÃo sà para o acompanhamento e prognÃstico dos pacientes, como tambÃm como ferramenta para estudos antropolÃgicos que contribuam no esclarecimento da origem dos africanos que tanto contribuÃram na formaÃÃo etnolÃgica, econÃmica, cultural e social do Brasil. / Introduction: The sickle cell anemia is the result of a point mutation in the &#946;-globin gene, leading to a substitution of glutamic acid by valine at the sixth position of the polypeptide chain. The sickle cell anemia presents heterogeneous clinical manifestations, which may be related to the type of haplotype associated with the gene for HbS and HbF levels. Objective: Clinical characterization, molecular and haematological patients with sickle cell anemia in Fortaleza, CearÃ. Methods: We analyzed 47 patients with sickle cell anemia, adults of both sexes. The determination of hematological values was performed on blood cells automated meter; the determination of the presence of HbSS was performed by alkaline hemoglobin electrophoresis on cellulose acetate tapes and by differentiation electrophoresis on agar-phosphate pH 6.2; the levels of HbF were determined by alkali denaturation technique; and the analysis of the haplotypes of the ÃS mutation was done by polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP). Statistical analysis was developed in the program GraphPad Prism (version 5.0) and the level of significance was set p <0.05. Results: The distribution of the haplotypes of &#946;S-globin gene - 63% of the Bantu type, 25% of the Benin type and 12% atypical â was in conformity with that observed for the entire Brazilian population, in which the Bantu haplotype is most prevalent, followed by the Benin and Senegal. There was no significant difference between the results found in this study and those found for the cities of Rio de Janeiro, Porto Alegre, Campinas and RibeirÃo Preto; but there was a significant difference with the results obtained for the cities of Salvador and BelÃm and the state of Amazonas, and by other researchers in CearÃ. The distribution of haplotype frequencies of the &#946;S-globin gene in the different studies is in line with the history of the formation of the Brazilian population, except for the results of a previous study carried out in CearÃ, in which the Benin haplotype was found to be most prevalent. According to the historical information on the origins of the slave population brought to CearÃ, the Bantu haplotype should be the most prevalent. In the comparison between the haplotypes and the haematological characteristics studied, only the values of HbF and Ht showed statistically significant difference. The levels of HbF were higher in the Benin haplotype, followed by the Bantu haplotype, which is in accordance with the literature. Was demonstrated greater presence of painful episodes and episodes of pneumonia in Benin haplotype/Atypical haplotype than in Bantu/Atypical and increased presence of urinary infection crises in Benin haplotype/Atypical haplotype than in Benin/Benin. There was no statistically significant difference between the haplotypes Bantu/Bantu and Benin/Benin for clinical complications, however it was observed that the haplotype Bantu/Bantu has a higher frequency in all studied clinical events when compared to Benin/Benin. Among the results was shown a trend of fewer patients with painful episodes and of leg ulcers with increased levels of HbF. There was no statistically significant difference in the comparison between the levels of HbF and the values of red blood cells, hemoglobin, hematocrit, leukocytes and platelets. Conclusions: The determination of haplotypes of sickle cell anemia is of great importance not only for monitoring and prognosis of patients, but also as a tool for anthropological studies which help in clarifying the origin of Africans who have contributed so much in training ethnological, economic, cultural and social Brazil.

Orientador: Fernando Ferreira Costa / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-06T00:23:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Andrade_TiagoGomesde_D.pdf: 2136964 bytes, checksum: be76264a603d3b420701714d5a04072b (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: Persistência Hereditária de Hemoglobina Fetal (PHHF) consiste num grupo heterogêneo de alterações hereditárias, sem manifestações clínicas significativas, onde ocorrem falhas na mudança perinatal normal de hemoglobina fetal para hemoglobina adulta, resultando em altos níveis de Hb F durante a vida adulta. Nos tipos delecionais ocorre normalmente aumento de ambas as cadeias, ? A e ? G, até 30%, estando associadas a deleções de seqüências de DNA dentro do grupo de genes ß. As (dß)º - talassemias também se originam a partir de deleções, em muitos casos bastante similares às que originam as formas delecionais de PHHF, entretanto com níveis de Hb F aumentados em menor proporção (5-20%), sendo acompanhadas nos heterozigotos por hipocromia e microcitose nas hemácias. Três hipóteses principais foram propostas para explicar a relação destas deleções com a ausência de supressão normal dos genes ? na fase adulta: competição entre promotores pelo LCR (Locus Control Region); justaposição de elementos acentuadores, normalmente encontrados a 3' do cluster, nas proximidades dos genes ?; remoção de elementos silenciadores, localizados entre ? A e d. Neste trabalho, realizamos estudos funcionais com uma região intergênica, aqui denominada R/PYR, potencialmente envolvida com o silenciamento de ? e a troca na síntese das cadeias de globinas. Os resultados obtidos com transfecção estável em células MEL apontam uma possível participação deste elemento na regulação dos genes de globina. Também investigamos o possível envolvimento de fatores de transcrição, construindo Bibliotecas de cDNA Subtrativas Supressivas para identificar transcritos diferencialmente expressos em reticulócitos de um sujeito com PHHF-2. A análise dos perfis diferenciais de expressão gênica em reticulócitos de PHHF-2 e normais mostram alterações em larga escala e que podem estar associadas com o fenótipo de PHHF. Estas modificações podem ser decorrentes de perturbações nas interações cromossômicas e/ou nos níveis de RNAs regulatórios não codificantes e ajudarem a melhor compreender a disposição e organização dos genes transcricionalmente ativos no genoma, e de que maneira são regulados. A presença de fatores de transcrição e remodeladores de cromatina, como ARID1B, TSPYL1 e ZHX2, dentre outros, com expressão alterada indicam fortemente que outros mecanismos genéticos estão envolvidos com o aumento da síntese de gama globina no estágio adulto, além dos modelos previamente descritos na literatura. Além disto, são candidatos potenciais a reguladores de globina que ainda não haviam sido descritos, e podem ajudar a compreender as diferenças fenotípicas encontradas entre dß-talassemia e PHHF delecional. Identificamos ainda outros genes com expressão diferencial, além de seqüências sem similaridade a genes categorizados, como ORFs, ESTs e seqüências genômicas, que podem ter papel importante na fisiologia normal das células vermelhas ou nas hemoglobinopatias hereditárias. Além disto, a observação de que os níveis de RNAm de alfa globina estão diminuídos em PHHF-2 e dß-Talassemia Siciliana sugere um mecanismo de regulação pós-transcripcional compensatório para as cadeias de globina ou de regulação gênica por interação física direta entre os cromossomos 11 e 16. Ao nosso conhecimento, esta é a primeira descrição demonstrando as implicações na expressão gênica em larga escala em células contendo alterações no DNA como as deleções apresentada / Abstract: The genetic mechanisms underlying the continued expression of the ?-globin genes during the adult stage in deletional hereditary persistence of fetal hemoglobin (HPFH) and dß-thalassemias are not completely understood. For deletional HPFH, three main hypotheses were proposed to explain the relationship between these deletions and the non-suppression of ? -genes in the adult; 1- the removal of competitive regions that interact with the LCR; 2- the juxtaposition of enhancer elements located downstream from the breakpoint region; and 3- the removal of gene silencer elements. Herein, we studied a region, called R/PYR, that lies 1-3 Kb upstream from the d gene. This region has been implicated in ? globin repression and globin gene switching. Stable transfections in MEL cells suggest a possible involvement of R/PYR in globin regulation. We also investigated the possible involvement of transcription factors, using the SSH method to identify differentially expressed transcripts in reticulocytes from a normal and a HPFH-2 subject. Some of the detectable transcripts may participate in globin gene regulation. Quantitative RT-PCR experiments confirmed the downregulation of ZHX2, a transcriptional repressor, in two HPFH-2 subjects and in a carrier of the Sicilian dß-thalassemia trait. The chromatin remodeling factors ARID1B and TSPYL1 had a very similar pattern of expression with an incremental increase in HPFH and decreased expression in dß-thalassemia. These differences suggest a mechanism to explain the heterocellular and pancellular distribution of F cells in dß-thalassemia and deletional HPFH, respectively. Interestingly, a-globin mRNA levels were decreased, similar to ß-globin in all reticulocyte samples analyzed, which may be the result of a common regulatory process affecting a-like and ß-like globin synthesis. Part of the altered gene expression detected within the subtracted libraries may be an indirect effect due to the increased concentration of HbF in the cells. However, genetic alterations similar to those presented in this work may be implicated in the perturbation of chromosome interactions and/or disruption of the expression of regulatory non-coding transcripts with functional consequences for cellular gene expression. Additionally, other genes may have modifications of their expression, but were not detected in our experiments. To our knowledge, this is the first description of wide-ranging gene expression alterations in cells containing deletional HPFH and thalassemia. Finally, the dissection of the differential expression data presented in this study may help elucidate important pathways of erythroid differentiation and maintenance of red cells in peripheral circulation, as well as aid in the understanding of genetic mechanisms involved in erythrocyte pathologies such as sickle cell disease and thalassemias / Doutorado / Biologia Estrutural, Celular, Molecular e do Desenvolvimento / Doutor em Fisiopatologia Medica

Orientador: Maria de Fátima Sonati / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-19T19:29:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Wobeto_VaniaPerettideAlbuquerque_D.pdf: 2287567 bytes, checksum: ff964a9410a59697f79714370d17c0c7 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: As fosfatidilinositol-fosfato quinases (PIPKs) pertencem a uma família de enzimas lipídio-quinases que geram vários mensageiros lipídicos, incluindo um importante segundo mensageiro denominado fosfatidilinositol-4,5-bifosfato, que participa da regulação de diversas atividades celulares, como a modulação do citoesqueleto de actina, o transporte de vesículas, a formação de adesão focal e diversos eventos nucleares, incluindo a expressão gênica. A subfamília da PIPK está dividida, conforme a especificidade de sinalização, em tipo I (isoformas ?, ? e ?), tipo II (isoformas ?, ? e ?) e tipo III. Em estudo recentemente realizado em nosso laboratório, o gene da PIPKII? mostrou-se diferencialmente expresso em reticulócitos de dois irmãos com Doença de Hemoglobina H, sendo maior no paciente com maior nível de hemoglobina anômala, paralelamente à expressão do gene da globina ?, sugerindo uma possível relação entre a PIPKII? e a produção de globinas. Além disso, análises realizadas durante a diferenciação eritróide de células CD34+, em cultura, demonstraram que as expressões dos genes das PIPKs aumentam à medida que essas células se tornam mais diferenciadas. O papel da PIPK no processo hematopoiético, no entanto, tem sido pouco explorado. No presente trabalho, investigamos a localização celular da PIPKII? e sua expressão gênica e protéica durante a diferenciação eritroide, megacariocítica e granulocítica de células da linhagem hematopoiética e demonstramos que o silenciamento do gene da PIPKII?, em células K562, resulta em diminuição da proliferação deste tipo celular, aumento de expressão do gene da globina ? e uma tendência de elevação da expressão do gene da globina ?. Esses resultados corroboram a sugestão prévia de existência de relação entre a PIPKII? e a expressão dos genes de globinas, relação que deve continuar a ser investigada em células eritróides normais e de pacientes com hemoglobinopatias / Abstract: Phosphatidylinositol-phosphate kinases (PIPKs) belong to a family of lipid kinase enzymes that generate various lipid messengers, including an important second messenger known as phosphatidylinositol-4,5-biphosphate, which participates of the regulation of several cell activities, such as modulation of the actin cytoskeleton, vesicle transport, formation of focal adhesions and various nuclear events, including regulation of gene expression. The PIPK subfamily is divided into types I (isoforms ?, ? and ?), II (?, ? and ?) and III according to signaling specificity. In a recent study in our laboratory, the PIPKII gene was differentially expressed in reticulocytes from two siblings with hemoglobin H disease: expression of this gene, as well as that of the 'beta'-globin gene, was greater in the patient with the higher level of the abnormal hemoglobin, suggesting a possible relationship between PIPKII and the production of globins. In addition, analyses carried out using CD34+ cells from cultures undergoing erythroid differentiation showed that PIPK gene expression increased as the cells became more differentiated. However, there has been little research into the role of PIPK in the hematopoietic process. In this study we investigate the cellular location of PIPKII and the gene and protein expression of this enzyme during erythroid, megakaryocytic and granulocytic differentiation of hematopoietic lineage cells. We show that PIPKII gene silencing in K562 cells results in reduced proliferation of this cell type, increased 'gama'-globin gene expression and a tendency towards increased 'alfa'-globin gene expression. These results corroborate the previous suggestion of a relationship between PIPKII and globin gene expression, a relationship that should be the subject of further investigation in normal erythroid cells and erythroid cells from patients with hemoglobinopathies / Doutorado / Ciencias Biomedicas / Doutor em Ciências Médicas