Submitted by Sara Ribeiro (sara.ribeiro@ucb.br) on 2018-11-16T19:33:03Z No. of bitstreams: 1 ClaudiaSofiadeFreitasCorreiaPopovTeseParcial2017.pdf: 709320 bytes, checksum: 74c3fb3e34fa9828bc490124e9d19b7b (MD5) / Approved for entry into archive by Sara Ribeiro (sara.ribeiro@ucb.br) on 2018-11-16T19:33:23Z (GMT) No. of bitstreams: 1 ClaudiaSofiadeFreitasCorreiaPopovTeseParcial2017.pdf: 709320 bytes, checksum: 74c3fb3e34fa9828bc490124e9d19b7b (MD5) / Made available in DSpace on 2018-11-16T19:33:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ClaudiaSofiadeFreitasCorreiaPopovTeseParcial2017.pdf: 709320 bytes, checksum: 74c3fb3e34fa9828bc490124e9d19b7b (MD5) Previous issue date: 2018-12-13 / Anurans represent a valuable source of bioactive molecules. These substances constitute a primary line of defense against predators and pathogenic microorganisms such as bacteria and fungi. Secreted peptides by granular glands represent a source of potential pharmacological agents with diverse functions. The structural and functional characterization of these biomolecules allows a better understanding of their function and biotechnological applications. Thus, in this work, the new peptides were isolated from H. raniceps with variable size between 11 and 16 amino acid residues, all of which contain two cysteines in their primary structure and with immunomodulatory activity: AC12, DK16 and RC11. A nuclear magnetic resonance analysis allowed to determinate a structure of these β-sheet molecules, as well as the presence of disulfide bridges that gives stability to the peptides. Regarding the structural analysis, none of the samples showed effective antimicrobial action. The immunomodulatory action profile of the samples was also checked. For this, a cytotoxicity essay of the molecules was initially tested. AC12 and DK16 did not reduce the viability of RAW 264.7 cells, decreasing inflammatory markers such as NO, IL-12 and TNF-α. They also decreased IL-10 production, a pro-inflammatory cytokine, but associated with several types of neoplasms. The peptide RC11 was shown to be toxic in RAW 264.7 strain. However, all samples were shown to be safe when tested at different concentrations in erythrocytes of Balb/c mice, presenting low hemolysis rates. In the in vivo tests, the three peptides reduced the paw edema caused by carrageenan, standing out the peptide AC12. Such data were corroborated by histological analysis of paw tissue. Regarding the immunomodulatory action with carrageenan-induced peritonitis assay, peptide AC12 was again the most significant, reducing the TNF-α dosed from the peritoneal lavage and increasing IL-10. In conclusion, AC12 has shown to be a good candidate as an anti-inflammatory agent, and could be used in the treatment of several inflammatory conditions. / Os anuros representam uma fonte valiosa de moléculas bioativas. Essas substâncias constituem a linha de defesa primária contra predadores e microrganismos patogênicos como bactérias e fungos. Peptídeos secretados pelas glândulas granulares representam uma fonte de potenciais agentes farmacológicos com funções diversas. A caracterização estrutural e funcional dessas biomoléculas permite um melhor entendimento da sua função e aplicações biotecnológicas. Assim, neste trabalho foram descritos três novos peptídeos isolados de H. raniceps com tamanho variável entre 11 e 16 resíduos de aminoácidos, todos eles contendo duas cisteínas na sua estrutura primária e com propriedades imunomoduladoras: AC12, DK16 e RC11. A análise por ressonância magnética nuclear permitiu determinar a estrutura dessas moléculas em folha-β, bem como a presença de pontes de dissulfeto que fornecem resistência e estabilidade às moléculas. Referente à análise estrutural, nenhuma das amostras mostrou ter ação antimicrobiana efetiva. Foi também verificado o perfil de ação imunomoduladora das amostras. Para tal, inicialmente foi testada a citotoxicidade das moléculas. AC12 e DK16 não alteraram a viabilidade das células RAW 264.7, diminuindo marcadores inflamatórios como NO, IL-12 e TNF-α. Também diminuíram a produção de IL-10, uma citocina pró-inflamatória, porém, associada a vários tipos de neoplasias. O peptídeo RC11 mostrou ser tóxico na linhagem RAW 264.7. Porém, todas as amostras mostraram-se seguras quando testadas em diferentes concentrações em eritrócitos de camundongos Balb/c, apresentando taxas de hemólise pouco significativas. Nos testes in vivo, os três peptídeos reduziram o edema da pata provocado por carragenina, sobressaindo o peptídeo AC12. Tais dados foram corroborados pela análise histológica do tecido da pata. Relativamente à ação imunomoduladora no ensaio de peritonite provocada por carragenina, novamente, o peptídeo AC12 teve destaque, reduzindo o TNF-α dosado do lavado peritoneal e aumentando a IL-10. Deste modo, o peptídeo AC12 mostrou ser um bom candidato a agente anti-inflamatório, podendo ser utilizado no tratamento de diversos quadros inflamatórios.