Submitted by Alessandra Portugal (alessandradf@ioc.fiocruz.br) on 2013-09-24T15:19:37Z No. of bitstreams: 1 Fernando Ricardo Serejo de Castro.pdf: 2042022 bytes, checksum: 4c1258f6d4ddae7e1ae9a1ecaf90f618 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-09-24T15:19:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Fernando Ricardo Serejo de Castro.pdf: 2042022 bytes, checksum: 4c1258f6d4ddae7e1ae9a1ecaf90f618 (MD5) Previous issue date: 2012 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A hanseníase neural pura (NP) caracteriza-se pelo comprometimento nervoso sem o aparecimento de lesões cutâneas. O objetivo do estudo foi descrever as alterações neurológicas observadas na forma NP e caracterizar a funcionalidade e as incapacidades encontradas nestes pacientes. Trata-se de um estudo retrospectivo, realizado com dados de 79 pacientes que confirmaram diagnóstico de NP acompanhados no Ambulatório Souza Araújo (ASA), no período de 2000 a 2010. As informações foram obtidas a partir de prontuários médicos e de bancos de dados. A Classificação Internacional de Funcionalidade, Incapacidade e Saúde (CIF) foi aplicada a partir da análise das avaliações neurológicas e fisioterapêuticas. Foi realizada uma análise de frequência para verificar a distribuição dos casos de NP em relação às variáveis demográficas, socioeconômicas e epidemiológicas (no diagnóstico), às variáveis do exame neurológico, ao grau de incapacidade física (GIF) e aos códigos da CIF (no diagnóstico e na alta). Para avaliar as características demográficas, socioeconômicas e epidemiológicas, foi realizada uma comparação entre o grupo de pacientes NP com o grupo de 634 pacientes com hanseníase paucibacilar (PB), acompanhados no ASA, no mesmo período dos pacientes NP. Além disso, foi investigada a relação do grau de incapacidade física no diagnóstico com as variáveis socioeconômicas e demográficas dos dois grupos de pacientes, através do teste de qui-quadrado (2). A maioria dos pacientes NP (71%) e PB (57,5%) era do sexo masculino e em relação à faixa etária, os pacientes NP foram acometidos mais tardiamente pela hanseníase do que os pacientes PB. A maior proporção dos pacientes NP (55%) e PB (47,5%) estava empregada e trabalhava no mercado informal. A renda familiar mensal não diferiu significativamente entre os grupos. Quanto à escolaridade, a maior parte dos pacientes apresentava até oito anos de estudo. Em relação ao modo de detecção, a maior proporção dos pacientes foi encaminhada ao ASA por meio algum serviço público de saúde. Quanto às alterações neurológicas nos pacientes NP, o sintoma inicial relatado com mais frequência foi a parestesia (52%) e o sinal predominante observado no exame diagnóstico foi a alteração de sensibilidade (87%). Na avaliação de alta, houve uma menor proporção de todos os sinais e sintomas neurológicos. Em relação ao GIF, 44,3% dos pacientes apresentaram algum GIF e na alta, 24% dos indivíduos permaneceram com algum grau de incapacidade. No tocante à CIF, dentro do domínio ―Estruturas do Corpo‖, o código mais frequente foi ―nervos raquidianos‖ (s1201) e no domínio ―Função do Corpo‖, o código mais frequente foi ―sensibilidade à temperatura‖ (b2700) no diagnóstico e ―sensibilidade a estímulos nocivos‖ (b2703) na alta. Este estudo apontou uma associação entre baixas condições socioeconômicas e um pior escore de GIF e caracterizou funcionalmente os pacientes NP. / The Pure Neural Leprosy (PNL) is characterized by neural involvement without the appearance of skin lesions. The goal of the study was to describe the neurological changes observed in the PNL and to characterize the functionality and the disabilities found in these patients. This is a retrospective study, conducted with 79 patients who confirmed diagnosis of PNL accompanied at Souza Araújo Clinic (ASA), from 2000 to 2010.The information was obtained from patient records and databases. The International Classification of Functioning, Disability and Health (ICF) was applied from the neurological and physiotherapeutic evaluations. A frequency analysis was conducted to verify the distribution of cases of PNL in relation to demographic and socioeconomic variables (diagnosis), neurological examination variables, grade of disability (GD) and ICF codes (upon diagnosis and release from treatment). In order to assess demographic and socioeconomic characteristics, a comparative study was undertaken between the PNL patients and the 634 paucibacillary leprosy (PB) patients, accompanied at ASA, during the same period as the PNL patients. Furthermore, the relationship between the GD at diagnosis with socioeconomic and demographic variables of two groups of patients was investigated using the chi-squared test, (2). The majority of PNL patients (71%) and PB (57.5%) were male and PNL patients were affected by leprosy at a later age than PB patients. The largest proportion of PNL patients (55%) and PB (47.5%) was employed in the informal market. The monthly household income did not differ significantly between groups. With regard to schooling, most patients had up to eight years of study. In relation to detection, the largest proportion of patients was referred to ASA from other public health services. With regard to neurological alterations in PNL patients, the most frequently reported initial symptom was the paresthesia (52%) and the predominant sign observed in the examination diagnosis was sensory alteration (87%). At evaluation after release from treatment, there was an overall reduction of all neurological signs and symptoms. Regarding GD, 44.3% of the patients had some GD, and at release from treatment, while 24% of individuals remained with some grade of disability. Regarding ICF, within the domain "Body Structures", the most frequent code was "spinal nerves" (s1201) and in the field "Body Functions", the most frequent code was "Sensitivity to Temperature" (b2700) at diagnosis and "Sensitivity to Noxious Stimuli" (b2703) at release from treatment. This study noted an association between low socio-economic conditions and a worse ICF score and characterized PNL patients functionally.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O diagnóstico da hanseníase neural pura baseia-se em dados clínicos e laboratoriais do paciente, incluindo a histopatologia de espécimes de biópsia de nervo e detecção de DNA de Mycobacterium leprae (M. leprae) pelo PCR. Como o exame histopatológico e a técnica PCR podem não ser suficientes para confirmar o diagnóstico, a imunomarcação de lipoarabinomanana (LAM) e/ou Glicolipídio fenólico 1 (PGL1) - componentes de parede celular de M. leprae foi utilizada na primeira etapa deste estudo, na tentativa de detectar qualquer presença vestigial do M. leprae em amostras de nervo sem bacilos. Além disso, sabe-se que a lesão do nervo na hanseníase pode diretamente ser induzida pelo M. leprae nos estágios iniciais da infecção, no entanto, os mecanismos imunomediados adicionam severidade ao comprometimento da função neural em períodos sintomáticos da doença. Este estudo investigou também a expressão imuno-histoquímica de marcadores envolvidos nos mecanismos de patogenicidade do dano ao nervo na hanseníase. Os imunomarcadores selecionados foram: quimiocinas CXCL10, CCL2, CD3, CD4, CD8, CD45RA, CD45RO, CD68, HLA-DR, e metaloproteinases 2 e 9. O estudo foi desenvolvido em espécimes de biópsias congeladas de nervo coletados de pacientes com HNP (n=23 / 6 BAAR+ e 17 BAAR - PCR +) e pacientes diagnosticados com outras neuropatias (n=5) utilizados como controle. Todas as amostras foram criosseccionadas e submetidas à imunoperoxidase. Os resultados iniciais demonstraram que as 6 amostras de nervos BAAR+ são LAM+/PGL1+. Já entre as 17 amostras de nervos BAAR-, 8 são LAM+ e/ou PGL1+. Nas 17 amostras de nervos BAAR-PCR+, apenas 7 tiveram resultados LAM+ e/ou PGL1+. A detecção de imunorreatividade para LAM e PGL1 nas amostras de nervo do grupo HNP contribuiu para a maior eficiência diagnóstica na ausência recursos a diagnósticos moleculares. Os resultados da segunda parte deste estudo mostraram que foram encontradas imunoreatividade para CXCL10, CCL2, MMP2 e MMP9 nos nervos da hanseníase, mas não em amostras de nervos com outras neuropatias. Além disso, essa imunomarcação foi encontrada predominantemente em células de Schwann e em macrófagos da população celular inflamatória nos nervos HNP. Os outros marcadores de ativação imunológica foram encontrados em leucócitos (linfócitos T e macrófagos) do infiltrado inflamatório encontrados nos nervos. A expressão de todos os marcadores, exceto CXCL10, apresentou associação com a fibrose, no entanto, apenas a CCL2, independentemente dos outros imunomarcadores, estava associada a esse excessivo depósito de matriz extracelular. Nenhuma diferença na frequência da imunomarcação foi detectada entre os subgrupos BAAR+ e BAAR-, exceção feita apenas às células CD68+ e HLA-DR+, que apresentaram discreta diferença entre os grupos BAAR + e BAAR- com granuloma epitelioide. A expressão de MMP9 associada com fibrose é consistente com os resultados anteriores do grupo de pesquisa. Estes resultados indicam que as quimiocinas CCL2 e CXCL10 não são determinantes para o estabelecimento das lesões com ou sem bacilos nos em nervo em estágios avançados da doença, entretanto, a CCL2 está associada com o recrutamento de macrófagos e com o desenvolvimento da fibrose do nervo na lesão neural da hanseníase. / The diagnosis of pure neural leprosy (PNL) is based on clinical and laboratory data, including the histopathology of nerve biopsy specimens and detection of M. leprae DNA by polymerase chain reaction (PCR). Given that histopathological examination and PCR methods may not be sufficient to confirm diagnosis, immunolabeling of lipoarabinomanan (LAM) and/or phenolic glycolipid 1 (PGL1) M. leprae wall components were utilized in the first step of this investigation in an attempt to detect any vestigial presence of M. leprae in AFB- nerve samples. Furthermore, its well known that nerve damage in leprosy can be directly induced by Mycobacterium leprae in the early stages of infection; however, immunomediated mechanisms add gravity to the impairment of neural function in symptomatic periods of the disease. Therefore, this study also investigated the immunohistochemical expression of immunomarkers involved in the pathogenic mechanisms of leprosy nerve damage. These markers selected were CXCL10, CCL2 chemokines and CD3, CD4, CD8, CD45RA, CD45RO, CD68, HLA-DR, metalloproteinases 2 and 9 in nerve biopsy specimens collected from leprosy (23) and nonleprosy patients (5) suffering peripheral neuropathy. Twenty-three PNL nerve samples (6 AFB+ and 17 AFB-PCR+) were cryosectioned and submitted to LAM and PGL1 immunohistochemical staining by immunoperoxidase; 5 nonleprosy nerve samples were used as controls. The 6 AFB-positive samples showed LAM/PGL1 immunoreactivity. Among the 17 AFB- samples, only 8 revealed LAM and/or PGL1 immunoreactivity. In 17 AFB-PCR+ patients, just 7 had LAM and/or PGL1-positive nerve results. In the PNL cases, the detection of immunolabeled LAM and PGL1 in the nerve samples would have contributed to enhanced diagnostic efficiency in the absence of molecular diagnostic facilities. The results of the second part of this study showed that CXCL10-, CCL2-, MMP2- and MMP9-immunoreactivities were found in the leprosy nerves but not in nonleprosy samples. Immunolabeling was predominantly found in recruited macrophages and Schwann cells composing the inflammatory cellular population in the leprosy-affected nerves. The immunohistochemical expression of all the markers, but CXCL10, was associated with fibrosis; however, only CCL2 was, independently from the other markers, associated with this excessive deposit of extracellular matrix. No difference in the frequency of the immunolabeling was detected between the AFB+ and AFB- leprosy subgroups of nerves, exception made to some statistical tendency to difference in regard to CD68+ and HLA-DR+ cells in the AFB- nerves exhibiting epithelioid granuloma. MMP9 expression associated with fibrosis is consistent with previous results of this research group. The findings conveys the idea that CCL2 and CXCL10 chemokines at least in advanced stages of leprosy nerve lesions are not determinant for the establishment of AFB+ or AFB- leprosy lesions, however, CCL2 is associated with macrophage recruitment and fibrosis.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O diagnóstico da hanseníase neural pura baseia-se em dados clínicos e laboratoriais do paciente, incluindo a histopatologia de espécimes de biópsia de nervo e detecção de DNA de Mycobacterium leprae (M. leprae) pelo PCR. Como o exame histopatológico e a técnica PCR podem não ser suficientes para confirmar o diagnóstico, a imunomarcação de lipoarabinomanana (LAM) e/ou Glicolipídio fenólico 1 (PGL1) - componentes de parede celular de M. leprae foi utilizada na primeira etapa deste estudo, na tentativa de detectar qualquer presença vestigial do M. leprae em amostras de nervo sem bacilos. Além disso, sabe-se que a lesão do nervo na hanseníase pode diretamente ser induzida pelo M. leprae nos estágios iniciais da infecção, no entanto, os mecanismos imunomediados adicionam severidade ao comprometimento da função neural em períodos sintomáticos da doença. Este estudo investigou também a expressão imuno-histoquímica de marcadores envolvidos nos mecanismos de patogenicidade do dano ao nervo na hanseníase. Os imunomarcadores selecionados foram: quimiocinas CXCL10, CCL2, CD3, CD4, CD8, CD45RA, CD45RO, CD68, HLA-DR, e metaloproteinases 2 e 9. O estudo foi desenvolvido em espécimes de biópsias congeladas de nervo coletados de pacientes com HNP (n=23 / 6 BAAR+ e 17 BAAR - PCR +) e pacientes diagnosticados com outras neuropatias (n=5) utilizados como controle. Todas as amostras foram criosseccionadas e submetidas à imunoperoxidase. Os resultados iniciais demonstraram que as 6 amostras de nervos BAAR+ são LAM+/PGL1+. Já entre as 17 amostras de nervos BAAR-, 8 são LAM+ e/ou PGL1+. Nas 17 amostras de nervos BAAR-PCR+, apenas 7 tiveram resultados LAM+ e/ou PGL1+. A detecção de imunorreatividade para LAM e PGL1 nas amostras de nervo do grupo HNP contribuiu para a maior eficiência diagnóstica na ausência recursos a diagnósticos moleculares. Os resultados da segunda parte deste estudo mostraram que foram encontradas imunoreatividade para CXCL10, CCL2, MMP2 e MMP9 nos nervos da hanseníase, mas não em amostras de nervos com outras neuropatias. Além disso, essa imunomarcação foi encontrada predominantemente em células de Schwann e em macrófagos da população celular inflamatória nos nervos HNP. Os outros marcadores de ativação imunológica foram encontrados em leucócitos (linfócitos T e macrófagos) do infiltrado inflamatório encontrados nos nervos. A expressão de todos os marcadores, exceto CXCL10, apresentou associação com a fibrose, no entanto, apenas a CCL2, independentemente dos outros imunomarcadores, estava associada a esse excessivo depósito de matriz extracelular. Nenhuma diferença na frequência da imunomarcação foi detectada entre os subgrupos BAAR+ e BAAR-, exceção feita apenas às células CD68+ e HLA-DR+, que apresentaram discreta diferença entre os grupos BAAR + e BAAR- com granuloma epitelioide. A expressão de MMP9 associada com fibrose é consistente com os resultados anteriores do grupo de pesquisa. Estes resultados indicam que as quimiocinas CCL2 e CXCL10 não são determinantes para o estabelecimento das lesões com ou sem bacilos nos em nervo em estágios avançados da doença, entretanto, a CCL2 está associada com o recrutamento de macrófagos e com o desenvolvimento da fibrose do nervo na lesão neural da hanseníase. / The diagnosis of pure neural leprosy (PNL) is based on clinical and laboratory data, including the histopathology of nerve biopsy specimens and detection of M. leprae DNA by polymerase chain reaction (PCR). Given that histopathological examination and PCR methods may not be sufficient to confirm diagnosis, immunolabeling of lipoarabinomanan (LAM) and/or phenolic glycolipid 1 (PGL1) M. leprae wall components were utilized in the first step of this investigation in an attempt to detect any vestigial presence of M. leprae in AFB- nerve samples. Furthermore, its well known that nerve damage in leprosy can be directly induced by Mycobacterium leprae in the early stages of infection; however, immunomediated mechanisms add gravity to the impairment of neural function in symptomatic periods of the disease. Therefore, this study also investigated the immunohistochemical expression of immunomarkers involved in the pathogenic mechanisms of leprosy nerve damage. These markers selected were CXCL10, CCL2 chemokines and CD3, CD4, CD8, CD45RA, CD45RO, CD68, HLA-DR, metalloproteinases 2 and 9 in nerve biopsy specimens collected from leprosy (23) and nonleprosy patients (5) suffering peripheral neuropathy. Twenty-three PNL nerve samples (6 AFB+ and 17 AFB-PCR+) were cryosectioned and submitted to LAM and PGL1 immunohistochemical staining by immunoperoxidase; 5 nonleprosy nerve samples were used as controls. The 6 AFB-positive samples showed LAM/PGL1 immunoreactivity. Among the 17 AFB- samples, only 8 revealed LAM and/or PGL1 immunoreactivity. In 17 AFB-PCR+ patients, just 7 had LAM and/or PGL1-positive nerve results. In the PNL cases, the detection of immunolabeled LAM and PGL1 in the nerve samples would have contributed to enhanced diagnostic efficiency in the absence of molecular diagnostic facilities. The results of the second part of this study showed that CXCL10-, CCL2-, MMP2- and MMP9-immunoreactivities were found in the leprosy nerves but not in nonleprosy samples. Immunolabeling was predominantly found in recruited macrophages and Schwann cells composing the inflammatory cellular population in the leprosy-affected nerves. The immunohistochemical expression of all the markers, but CXCL10, was associated with fibrosis; however, only CCL2 was, independently from the other markers, associated with this excessive deposit of extracellular matrix. No difference in the frequency of the immunolabeling was detected between the AFB+ and AFB- leprosy subgroups of nerves, exception made to some statistical tendency to difference in regard to CD68+ and HLA-DR+ cells in the AFB- nerves exhibiting epithelioid granuloma. MMP9 expression associated with fibrosis is consistent with previous results of this research group. The findings conveys the idea that CCL2 and CXCL10 chemokines at least in advanced stages of leprosy nerve lesions are not determinant for the establishment of AFB+ or AFB- leprosy lesions, however, CCL2 is associated with macrophage recruitment and fibrosis.