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Orientador: Irene Bastos Franceschini Vicentini / Banca: Elizabeth Romagosa / Banca: Maíra Aparecida Stefanini / Banca: Bruno Cezar Stefanini / Banca: Silvana Martinez Baraldi Artoni / Resumo: A carcinicultura de água doce tem sido reconhecida como uma forma para a produção de crustáceos com baixo impacto ambiental. O camarão Macrobrachium amazonicum apresenta grande potencial para a aqüicultura. Nos últimos anos, vários trabalhos sobre a biologia dessa espécie têm sido realizados com o intuito de desenvolver um pacote tecnológico sustentável para o cultivo de Macrobrachium amazonicum. Esse trabalho teve como objetivo descrever a estrutura microscópica do sistema reprodutor masculino (testículos, ductos deferentes e glândulas androgênicas) e do hepatopâncreas dos diferentes morfotipos de Macrobrachium amazonicum. Para tanto 40 machos adultos foram divididos em quatro grupos morfotípicos, sendo denominados de TC (Translucent Claw), CC (Cinnamon Claw), GC1 (Green Claw 1) e GC2 (Green Claw 2). Os animais foram pesados e foram realizadas medições do comprimento corpóreo total e do comprimento do segundo quelípodo direito. Após, os animais foram mortos e tiveram seus testículos, ductos deferentes, glândulas androgênicas e hepatopâncreas retirados e submetidos à rotina histológica de historesina. Foi observada a diferenciação de três morfotipos, segundo as análises realizadas, sendo eles, TC (Translucent Claw), CC (Cinnamon Claw) e GC(Green Claw). Entretanto estudos enfatizando o comportamento reprodutivo, assim como, a histoquímica e a ultraestrutura do sistema reprodutivo e do hepatopâncreas, durante a diferenciação morfotípica devem ser realizados para que se possa conhecer a dinâmica morfotípica dos machos adultos de Macrobrachium amazonicum. / Abstract: The culture of the freshwater prawns has been recognized as a way to produce crustaceans with a low enviromental impact. Macrobrachium amazonicum is the South American prawn with the greatest potencial for aquaculture. Since 2001 a multidisciplinary and multi-institutional research program has been developed technology for Macrobrachium amazonicum culture in Brazil. Thus, this study attemped to characterize the light microscope structures of the reproductive system (testes, vas deferens and androgenic gland) and the hepatopancreas of the differents morphotypes of the Macrobrachium amazonium. Specimens were collected and classified in four morphotypical groups: TC, CC, GC1 and GC2. The specimens were weight, and the total length and the cheliped length were measured. Then the testes, vas deferens, androgenic gland and hepatopancreas were fixed for histological routine of historesin. Three distinct morphological morphotypes were identified, TC (Translucent Claw), CC (Cinnamon Claw) and GC (Green Claw) morphotypes. Therefore more studies concerning to the reproductive behavior and the histochemical and ultrastrucutral studies need to be accomplished to elucitade the morphotypic differentiation of the male adults of Macrobrachium amazonicum. / Doutor

Aquatic ecotoxicology is the study of toxic chemicals and its effects on aquatic biological systems with the aim of minimising threats to human health and ensure self-sustained ecosystems. Freshwater bivalves are excellent sentinels for use in ecotoxilogical research due to their filter feeding properties, stationary lifestyle and inability to regulate body temperature. This project aimed to assess the feasibility and use of nanopore sequencing, a real-time single-molecule sequencing technology in comparative expression analysis by sequencing transcriptomic RNA from the freshwater mussel Anodonta anatina following exposure to copper. RNAs were extracted from 80 mg hepatopancreas tissue, followed by poly(A) RNA selection. Furthermore, the poly(A) RNA was used to construct a nanopore sequencing library. Sequencing a total amount of 560 ng poly(A) RNA over the course of two separate runs generated 239,448 reads, in which 75% of the reads were obtained during the first run (control) and 25% of the reads were obtained during the second run (case). The median read lengths ranged between 534-650 nucleotides, with a base call accuracy <90%. Due to the big differences in sequence data output between the two sequencing runs, the data was ineligible for comparative analysis. The findings conclude that nanopore sequencing is capable of generating longer read lengths when compared to other sequencing platforms. However, the technology is error-prone in terms of accurate base call identifications and relies on other platforms for error corrections. Future advances include de novo transcriptome assembly for efficient use of Anodonta anatina as a bioindicator in aquatic ecotoxicology.

Todas as células eucarióticas apresentam mecanismos para controlar e operar o cálcio (Ca2+). Apesar desse íon não ser importante para regulação osmótica e manutenção da concentração iônica da hemolinfa em crustáceos, ele é finamente regulado, pois desempenha papel fundamental no enrijecimento do exoesqueleto desses organismos. Dessa forma o crescimento e fisiologia desses organismos estão ligados ao massivo transporte de Ca2+ que ocorre através das células epiteliais durante o ciclo da muda. Para avaliar os mecanismos transportadores de Ca2+ presentes na membrana plasmática, foram utilizadas células isoladas a partir de hepatopâncreas de D. pagei, um crustáceo dulcícola. Quando essas células foram submetidas a um pulso de 1mM de ATP externo, ocorreu uma queda rápida (50 s) na concentração de cálcio intracelular ([Ca2+]i), que foi totalmente inibida por 10mM de vanadato e parcialmente por 2mM de amiloride, sugerindo que o efluxo ocorreu através de uma Ca-ATPase (PMCA) e de um trocador Na+/Ca2+ (NCX ou NHE), respectivamente. Essa queda foi seguida de uma recuperação dos valores iniciais, que pode ter ocorrido via influxo de Ca2+ do meio externo, sensível ao verapamil (1mM), ou através da liberação de Ca2+ de estoque intracelulares. Células incubadas em meio livre de Ca2+ apresentam uma redução no [Ca2+]i e quando são submetidas a um pulso de Ca2+ externo ocorre um influxo imediato do íon, que é sensível tanto a 1mM de verapamil quanto a 2mM de amiloride, sugerindo que a entrada ocorra via canais para cálcio e via trocador Na+/Ca2+, respectivamente. Juntos esses resultados sugerem que o transporte de cálcio em células isoladas de hepatopâncreas de D. pagei parece ocorrer de maneira semelhante ao modelo proposto em outros crustáceos: efluxo via Ca-ATPase (PMCA) sensível ao vanadato e via trocador Na+/Ca2+ (NCX ) sensível ao amiloride; influxo via canais para Ca2+ sensíveis ao verapamil e modo de influxo de Ca2+ do trocador Na+/Ca2+ ou trocador Na+/H+ (NHE) operando como Ca2+ /(n) Na+, sensíveis ao amiloride. Esses dados contribuem para um maior entendimento do transporte de cálcio em D. pagei (e outros crustáceos) e sua importância para a homeostase e o ciclo da muda. / All eukaryotic cells display several mechanisms to control and operate calcium (Ca2+). Although there is no apparent importance for hemolymph osmo-ionic regulation, it plays an essential role on exoskeleton calcification (hardening). Crustaceans growth and physiology are linked to massive calcium transport during molting cycle. The aim of this work was to evaluate calcium transport mechanisms in hepatopancreatic cells of the freshwater crab D. pagei. When these cells were exposed to external ATP pulse (1mM), it was observed a decrease in intracellular calcium concentration ([Ca2+]i), inhibited by 10mM vanadate and partially by 2mM amiloride, suggesting the involvement of a Ca-ATPase (PMCA) and Na+/Ca2+ exchanger (NCX ou NHE), respectively. Recovery of [Ca2+]i was inhibited by 1mM verapamil, a calcium channel blocker. The same was observed in calcium free environment and so, calcium must have been provided by intracellular stocks (endoplasmatic reticulum and/or mitochondria). When cells incubated in calcium free environment were exposed to calcium pulse (1mM or 10mM), a rapid rise in [Ca2+]i was observed, suggesting calcium influx. This could be partially inhibited by 1mM verapamil or 2mM amiloride, suggesting the participation of calcium channels and Na+/Ca2+ exchanger (Ca2+ influx mode), respectively. Calcium transport in these cell appears to be the same as described for other crustaceans: efflux occurs via a vanadate sensitive Ca-ATPase (PMCA) and by an amiloride sensitive Na+/Ca2+ (NCX exchanger); influx is mediated by a verapamil sensitive calcium channel and by an amiloride sensitive Na+/Ca2+ or Na+/H+ (NHE) operating as Ca2+ /(n) Na+ exchanger. Taken together, these data contributes to a better understanding of D. pagei calcium homeostasis and the moult cycle.

Animais presentes em regiões de maior contaminação apresentam diferenças fisiológicas, quando comparados com animais de regiões menos contaminadas, provavelmente permitindo a sua sobrevivência em ambientes poluídos. Assim, o objetivo da tese foi caracterizar o transporte de cádmio em brânquias e hepatopâncreas de Ucides cordatus, como também comparar o transporte nestes órgãos, em animais de regiões poluídas (Itanhaém) e não poluídas (Juréia), além de analisar a porcentagem de ácidos graxos na membrana, níveis de metalotioneína (MT), lipoperoxidação (LPO) e mecanismo de acúmulo do metal. Assim, as células de brânquias anteriores (BA), posteriores (BP) e hepatopâncreas (H) foram separadas. Em seguida, realizou-se o transporte de cádmio em BA, BP, e em cada tipo celular do H, com ou sem a utilização de inibidores; o mesmo procedimento foi utilizado para caracterizar o transporte de cádmio em cada região estudada. Também foram analisadas a porcentagem de ácidos graxos, níveis de MT, LPO e mecanismos de detoxificação de cádmio. Observou-se um maior transporte através de canais de cálcio e trocadores Na+/Ca2+ em BP e nas células E, R e F de H, pois são células específicas para as trocas iônicas. Em animais de regiões poluídas, observou-se um maior transporte que ocorreu nos mesmos parâmetros, devido aos tipos celulares específicos envolvidos. Em animais de regiões contaminadas verificou-se maior porcentagem de MUFA em hepatopâncreas, acarretando em menor fluidez na membrana, e maior índice de LPO, devido ao estresse causado pela presença do contaminante no meio. Já em animais de regiões não poluídas, observou-se maior porcentagem de PUFA, com maior fluidez na membrana, e maior quantidade de MT, principalmente no hepatopâncreas, resultando na detecção de pequenas alterações ambientais. Nas brânquias, o cádmio se acumula em organelas intracelulares, enquanto em hepatopâncreas se ligam a MTs do citoplasma celular. Portanto, acredita-se que estes animais apresentaram diferentes mecanismos fisiológicos que permitiram a sua sobrevivência na região poluída / Animals resident in regions polluted by metals must have physiological mechanisms for survival, compared with animals from unpolluted regions. Therefore, the objective of this study was to characterize cadmium transport in gills and hepatopancreas of Ucides cordatus, and to compare this transport in animals from polluted (Itanhaém) and unpolluted (Juréia) regions. In addition, the animals were analyzed for cell membrane fatty acids composition, metallothionein levels (MT), lipid peroxidation (LPO) and mechanisms of accumulation of intracellular Cd. The anterior gills (BA), posterior gills (BP) and hepatopancreas (H) cells were separated. After, the transport of cadmium was realized in BA, BP and in each cellular type of H, with or without various inhibitors present. The same approach was utilized to characterize cadmium transport from crabs of polluted and unpolluted regions: fatty acids composition, MT levels, LPO and cadmium detoxification mechanisms were also analyzed. An increase in the transport of cadmium was observed through calcium channels and Na+/Ca2+ exchangers, in BP and in E, R and F cells of H, probably because they are specific cells for ion transport. In animals from polluted regions, we observed an increase in cell cadmium transport when compared with animals from unpolluted regions. Animals from polluted environments also presented more MUFA in H, leading to lower membrane fluidity, and higher LPO, probably due to the stress caused by pollution. In animals from unpolluted regions, we observed more PUFA in the plasma membrane, resulting in higher membrane fluidity, and more MT levels, mainly in H. In gills, intracellular cadmium accumulation occurred in organelles, whereas in H, Cd binding to MT in cellular cytoplasm was more evident. Therefore, we believe that animals from metal polluted environments present the above-described physiological mechanisms to deal with Cd, allowing their survival in this environment

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:30Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-09-29Bitstream added on 2014-06-13T19:40:13Z : No. of bitstreams: 1 ribeiro_k_dr_jabo.pdf: 876100 bytes, checksum: b597a24953597a3c3b054ab257922bbb (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / O presente trabalho realizou o estudo dos aspectos estruturais do hepatopâncreas, ovários e da caracterização hormonal de fêmeas de Macrobrachium amazonicum, nos diferentes estágios de maturação gonadal. Para tanto utilizaram-se 150 fêmeas adultas subdivididas entre os cinco diferentes estágios de maturação ovariana. Após serem capturados os animais foram pesados e mortos por choque térmico. Ovários e hepatopâncreas foram coletados e pesados individualmente para obtenção dos índices gonadossomático (IGS) e hepatossomático (IHS). Para as análises de microscopia de luz e eletrônica de transmissão, ovários e hepatopâncreas foram fixados em solução de Karnovsky e seguiram os procedimentos de rotina de inclusão. Os ovários, hepatopâncreas e hemolinfa destinados à quantificação hormonal foram armazenados em ependorfes e preservados em nitrogênio líquido a -70ºC, para posterior processamento de radioimunoensaio visando avaliação das concentrações de estradiol, progesterona e testosterona. Os resultados relacionados ao IGS e IHS demonstram uma correlação inversa entre os ovários e o hepatopâncreas nos diferentes estágios de maturação gonadal. Em relação ao desenvolvimento ovariano, observa-se a distribuição de cinco tipos celulares ao longo dos cinco estágios de maturação gonadal. Desta forma encontram-se as ovogônias ou células germinativas mais jovens no estágio I de maturação ovariana. As células pré-vitelogênicas, observadas a partir do estágio II, apresentam vesículas de retículo endoplasmático rugoso. Essas vesículas são importantes nas fases de vitelogênese endógena e exógena. Os ovócitos em vitelogênese inicial, característicos do estágio III, apresentam a deposição de vitelo endógeno. As células em vitelogênese avançada, próprias do estágio IV de maturação gonadal, são o alvo principal da vitelogênese... / This study described the structural aspects of the hepatopancreas and ovaries, and the hormonal features of females of the freshwater prawn Macrobrachium amazonicum, during the reproductive cycle. The specimens were captured and killed by thermic chock. The gonadosomatic (GSI) and hepatosomatic (HSI) indices were calculated as the percentage of the weight of the gonad and hepatopancreas to total body weight, respectively. Ovaries and hepatopancreas were fixed in Karnovsky solution and destined to light and ultrastructural microscopy studies. Small portions of the ovary, hepatopancreas and hemolymph were frozen in liquid nitrogen, for later steroid quantification (estradiol, progesterone and testosterone). The relationships between GSI and HSI demonstrate an inverse correlation between ovary and hepatopancreas during the maturation cycle. The oocytes distribution is variable depending on the ovarian maturation degree. The ovary in stage I consists of oogonia. The ovary in stage II consists mainly by previtellogenic oocytes that possess vesicles of the endoplasmic reticulum. These vesicles are important to endogenous and exogenous vitelogenesis. Initial vitellogenic oocytes are mainly observed in the ovary in stage III and possess vitelline reserve, called as endogenous vitelogenesis. Ovary in stage IV is composed of late vitellogenic oocytes that uptake exogenous vitellogenin. Mature oocytes present a corion formation. The hepatopancreas is composed by tubules that are lined by a pseudostratified epithelium, which consists of five cell types, identified as E (embryonic), F (fibrillar), B (blisterlike), R (resorptive) and M (basal). These cells present relationships with digestion and nutrient storage, which are very important for the reproductive processes ...(Complete abstract, click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:30Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-08-20Bitstream added on 2014-06-13T20:00:47Z : No. of bitstreams: 1 papa_lp_dr_jabo.pdf: 7799287 bytes, checksum: 948c753d894690d4395d036a7f4ea60f (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A carcinicultura de água doce tem sido reconhecida como uma forma para a produção de crustáceos com baixo impacto ambiental. O camarão Macrobrachium amazonicum apresenta grande potencial para a aqüicultura. Nos últimos anos, vários trabalhos sobre a biologia dessa espécie têm sido realizados com o intuito de desenvolver um pacote tecnológico sustentável para o cultivo de Macrobrachium amazonicum. Esse trabalho teve como objetivo descrever a estrutura microscópica do sistema reprodutor masculino (testículos, ductos deferentes e glândulas androgênicas) e do hepatopâncreas dos diferentes morfotipos de Macrobrachium amazonicum. Para tanto 40 machos adultos foram divididos em quatro grupos morfotípicos, sendo denominados de TC (Translucent Claw), CC (Cinnamon Claw), GC1 (Green Claw 1) e GC2 (Green Claw 2). Os animais foram pesados e foram realizadas medições do comprimento corpóreo total e do comprimento do segundo quelípodo direito. Após, os animais foram mortos e tiveram seus testículos, ductos deferentes, glândulas androgênicas e hepatopâncreas retirados e submetidos à rotina histológica de historesina. Foi observada a diferenciação de três morfotipos, segundo as análises realizadas, sendo eles, TC (Translucent Claw), CC (Cinnamon Claw) e GC(Green Claw). Entretanto estudos enfatizando o comportamento reprodutivo, assim como, a histoquímica e a ultraestrutura do sistema reprodutivo e do hepatopâncreas, durante a diferenciação morfotípica devem ser realizados para que se possa conhecer a dinâmica morfotípica dos machos adultos de Macrobrachium amazonicum. / The culture of the freshwater prawns has been recognized as a way to produce crustaceans with a low enviromental impact. Macrobrachium amazonicum is the South American prawn with the greatest potencial for aquaculture. Since 2001 a multidisciplinary and multi-institutional research program has been developed technology for Macrobrachium amazonicum culture in Brazil. Thus, this study attemped to characterize the light microscope structures of the reproductive system (testes, vas deferens and androgenic gland) and the hepatopancreas of the differents morphotypes of the Macrobrachium amazonium. Specimens were collected and classified in four morphotypical groups: TC, CC, GC1 and GC2. The specimens were weight, and the total length and the cheliped length were measured. Then the testes, vas deferens, androgenic gland and hepatopancreas were fixed for histological routine of historesin. Three distinct morphological morphotypes were identified, TC (Translucent Claw), CC (Cinnamon Claw) and GC (Green Claw) morphotypes. Therefore more studies concerning to the reproductive behavior and the histochemical and ultrastrucutral studies need to be accomplished to elucitade the morphotypic differentiation of the male adults of Macrobrachium amazonicum.

Animais presentes em regiões de maior contaminação apresentam diferenças fisiológicas, quando comparados com animais de regiões menos contaminadas, provavelmente permitindo a sua sobrevivência em ambientes poluídos. Assim, o objetivo da tese foi caracterizar o transporte de cádmio em brânquias e hepatopâncreas de Ucides cordatus, como também comparar o transporte nestes órgãos, em animais de regiões poluídas (Itanhaém) e não poluídas (Juréia), além de analisar a porcentagem de ácidos graxos na membrana, níveis de metalotioneína (MT), lipoperoxidação (LPO) e mecanismo de acúmulo do metal. Assim, as células de brânquias anteriores (BA), posteriores (BP) e hepatopâncreas (H) foram separadas. Em seguida, realizou-se o transporte de cádmio em BA, BP, e em cada tipo celular do H, com ou sem a utilização de inibidores; o mesmo procedimento foi utilizado para caracterizar o transporte de cádmio em cada região estudada. Também foram analisadas a porcentagem de ácidos graxos, níveis de MT, LPO e mecanismos de detoxificação de cádmio. Observou-se um maior transporte através de canais de cálcio e trocadores Na+/Ca2+ em BP e nas células E, R e F de H, pois são células específicas para as trocas iônicas. Em animais de regiões poluídas, observou-se um maior transporte que ocorreu nos mesmos parâmetros, devido aos tipos celulares específicos envolvidos. Em animais de regiões contaminadas verificou-se maior porcentagem de MUFA em hepatopâncreas, acarretando em menor fluidez na membrana, e maior índice de LPO, devido ao estresse causado pela presença do contaminante no meio. Já em animais de regiões não poluídas, observou-se maior porcentagem de PUFA, com maior fluidez na membrana, e maior quantidade de MT, principalmente no hepatopâncreas, resultando na detecção de pequenas alterações ambientais. Nas brânquias, o cádmio se acumula em organelas intracelulares, enquanto em hepatopâncreas se ligam a MTs do citoplasma celular. Portanto, acredita-se que estes animais apresentaram diferentes mecanismos fisiológicos que permitiram a sua sobrevivência na região poluída / Animals resident in regions polluted by metals must have physiological mechanisms for survival, compared with animals from unpolluted regions. Therefore, the objective of this study was to characterize cadmium transport in gills and hepatopancreas of Ucides cordatus, and to compare this transport in animals from polluted (Itanhaém) and unpolluted (Juréia) regions. In addition, the animals were analyzed for cell membrane fatty acids composition, metallothionein levels (MT), lipid peroxidation (LPO) and mechanisms of accumulation of intracellular Cd. The anterior gills (BA), posterior gills (BP) and hepatopancreas (H) cells were separated. After, the transport of cadmium was realized in BA, BP and in each cellular type of H, with or without various inhibitors present. The same approach was utilized to characterize cadmium transport from crabs of polluted and unpolluted regions: fatty acids composition, MT levels, LPO and cadmium detoxification mechanisms were also analyzed. An increase in the transport of cadmium was observed through calcium channels and Na+/Ca2+ exchangers, in BP and in E, R and F cells of H, probably because they are specific cells for ion transport. In animals from polluted regions, we observed an increase in cell cadmium transport when compared with animals from unpolluted regions. Animals from polluted environments also presented more MUFA in H, leading to lower membrane fluidity, and higher LPO, probably due to the stress caused by pollution. In animals from unpolluted regions, we observed more PUFA in the plasma membrane, resulting in higher membrane fluidity, and more MT levels, mainly in H. In gills, intracellular cadmium accumulation occurred in organelles, whereas in H, Cd binding to MT in cellular cytoplasm was more evident. Therefore, we believe that animals from metal polluted environments present the above-described physiological mechanisms to deal with Cd, allowing their survival in this environment

Todas as células eucarióticas apresentam mecanismos para controlar e operar o cálcio (Ca2+). Apesar desse íon não ser importante para regulação osmótica e manutenção da concentração iônica da hemolinfa em crustáceos, ele é finamente regulado, pois desempenha papel fundamental no enrijecimento do exoesqueleto desses organismos. Dessa forma o crescimento e fisiologia desses organismos estão ligados ao massivo transporte de Ca2+ que ocorre através das células epiteliais durante o ciclo da muda. Para avaliar os mecanismos transportadores de Ca2+ presentes na membrana plasmática, foram utilizadas células isoladas a partir de hepatopâncreas de D. pagei, um crustáceo dulcícola. Quando essas células foram submetidas a um pulso de 1mM de ATP externo, ocorreu uma queda rápida (50 s) na concentração de cálcio intracelular ([Ca2+]i), que foi totalmente inibida por 10mM de vanadato e parcialmente por 2mM de amiloride, sugerindo que o efluxo ocorreu através de uma Ca-ATPase (PMCA) e de um trocador Na+/Ca2+ (NCX ou NHE), respectivamente. Essa queda foi seguida de uma recuperação dos valores iniciais, que pode ter ocorrido via influxo de Ca2+ do meio externo, sensível ao verapamil (1mM), ou através da liberação de Ca2+ de estoque intracelulares. Células incubadas em meio livre de Ca2+ apresentam uma redução no [Ca2+]i e quando são submetidas a um pulso de Ca2+ externo ocorre um influxo imediato do íon, que é sensível tanto a 1mM de verapamil quanto a 2mM de amiloride, sugerindo que a entrada ocorra via canais para cálcio e via trocador Na+/Ca2+, respectivamente. Juntos esses resultados sugerem que o transporte de cálcio em células isoladas de hepatopâncreas de D. pagei parece ocorrer de maneira semelhante ao modelo proposto em outros crustáceos: efluxo via Ca-ATPase (PMCA) sensível ao vanadato e via trocador Na+/Ca2+ (NCX ) sensível ao amiloride; influxo via canais para Ca2+ sensíveis ao verapamil e modo de influxo de Ca2+ do trocador Na+/Ca2+ ou trocador Na+/H+ (NHE) operando como Ca2+ /(n) Na+, sensíveis ao amiloride. Esses dados contribuem para um maior entendimento do transporte de cálcio em D. pagei (e outros crustáceos) e sua importância para a homeostase e o ciclo da muda. / All eukaryotic cells display several mechanisms to control and operate calcium (Ca2+). Although there is no apparent importance for hemolymph osmo-ionic regulation, it plays an essential role on exoskeleton calcification (hardening). Crustaceans growth and physiology are linked to massive calcium transport during molting cycle. The aim of this work was to evaluate calcium transport mechanisms in hepatopancreatic cells of the freshwater crab D. pagei. When these cells were exposed to external ATP pulse (1mM), it was observed a decrease in intracellular calcium concentration ([Ca2+]i), inhibited by 10mM vanadate and partially by 2mM amiloride, suggesting the involvement of a Ca-ATPase (PMCA) and Na+/Ca2+ exchanger (NCX ou NHE), respectively. Recovery of [Ca2+]i was inhibited by 1mM verapamil, a calcium channel blocker. The same was observed in calcium free environment and so, calcium must have been provided by intracellular stocks (endoplasmatic reticulum and/or mitochondria). When cells incubated in calcium free environment were exposed to calcium pulse (1mM or 10mM), a rapid rise in [Ca2+]i was observed, suggesting calcium influx. This could be partially inhibited by 1mM verapamil or 2mM amiloride, suggesting the participation of calcium channels and Na+/Ca2+ exchanger (Ca2+ influx mode), respectively. Calcium transport in these cell appears to be the same as described for other crustaceans: efflux occurs via a vanadate sensitive Ca-ATPase (PMCA) and by an amiloride sensitive Na+/Ca2+ (NCX exchanger); influx is mediated by a verapamil sensitive calcium channel and by an amiloride sensitive Na+/Ca2+ or Na+/H+ (NHE) operating as Ca2+ /(n) Na+ exchanger. Taken together, these data contributes to a better understanding of D. pagei calcium homeostasis and the moult cycle.

The growth of the Penaeus monodon prawn aquaculture industry in Australia is hampered by a reliance on wild-caught broodstock. This species has proven difficult to breed from if broodstock are reared in captivity. Studies were therefore carried out to investigate factors controlling reproduction and influencing egg quality. Results of the studies revealed that patterns of nutrient accumulation during early ovary development are altered by captive conditions, possibly contributing to reduce larval quality. The sinus gland hormones were shown, together with the environment, to regulate two stages of ovary development. In a separate study it was further revealed that the hormone methyl farnesoate (MF) could negatively regulate the final stages of ovary development. Lastly it was shown that broodstock reared in captivity are less likely to mate and that this is due to inherent problems in both the male and the female prawns.