Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2009. / Submitted by Allan Wanick Motta (allan_wanick@hotmail.com) on 2010-05-27T20:39:23Z No. of bitstreams: 1 LILIAN AZEVEDO FIGUEIREDO.pdf: 510722 bytes, checksum: 7d19a1025be105a28bb3694687343801 (MD5) / Approved for entry into archive by Marília Freitas(marilia@bce.unb.br) on 2010-05-31T17:39:01Z (GMT) No. of bitstreams: 1 LILIAN AZEVEDO FIGUEIREDO.pdf: 510722 bytes, checksum: 7d19a1025be105a28bb3694687343801 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-05-31T17:39:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 LILIAN AZEVEDO FIGUEIREDO.pdf: 510722 bytes, checksum: 7d19a1025be105a28bb3694687343801 (MD5) Previous issue date: 2009 / Os herpesvírus bovinos 1 (BoHV-1) e 5 (BoHV-5) são vírus de DNA de fita dupla, com envelope glicoprotéico, que pertencem à subfamília Alphaherpesvirinae, gênero Varicellovirus. A principal propriedade biológica dessa subfamília é a capacidade de estabelecer latência após a infecção aguda, quando não é possível sua detecção, exceto quando são utilizadas técnicas moleculares de hibridização in situ e a reação em cadeia pela polimerase (PCR). O BoHV-1 é principalmente atribuído a problemas respiratórios e reprodutivo e raramente à encefalite, como o BoHV-5. Dificuldades de isolamento do BoHV-5 têm sido descritas, o que torna a PCR um importante meio de diagnóstico. O objetivo deste trabalho foi avaliar a importância da técnica da PCR para a detecção do BoHV-5 e do BoHV-1 em SNC de bovinos com encefalite por BoHV-5, com outras encefalopatias e normais. Foram utilizadas amostras de SNC de bovinos atendidos nos Hospitais Veterinários da Universidade de Brasília (HV-UnB) e da Universidade Estadual de Londrina (HV-UEL), além de amostras de matadouros. Nenhuma amostra apresentou resultado positivo para o BoHV-1. Das amostras positivas para o BoHV-5, foram 21 das 68 (30,88%) provenientes do HV-UnB, 2 das 30 (7%) provenientes do matadouro e 2 de 17 (11,76%) provenientes do HVUEL. Dos 21 animais positivos do HV-UnB 3 casos foram de amostras de animais sem diagnóstico conclusivo, 7 casos de animais com diagnóstico confirmado de raiva, 7 casos com encefalite por BoHV-5, 1 caso de animal com polioencefalomalácia, 1 caso de animal com botulismo, 1 caso de animal com encefalite bacteriana e 1 caso de animal com carbúnculo sintomático. Das amostras positivas provenientes do HV-UEL todas eram de animais com diagnóstico de encefalite por BoHV-5 e do matadouro eram de animais sadios. A PCR para detecção do genoma do BoHV-5 em bovinos com encefalopatia não deve ser utilizada isoladamente no diagnóstico, e sim associada aos sinais clínicos, histopatologia, isolamento e imunoistoquímica. __________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Bovine herpesvirus 1 and 5 are enveloped double-stranded DNA viruses belonging to the Herpesviridae family, subfamily Alphaherpesvirinae, genus Varicellovirus. This family major property is to establish a lifelong latent infection after acute infection, when it is not possible to detect the virus, except when molecular techniques as situ hybridization and polymerase chain reaction are used. BoHV-1 is primarily associated with respiratory and reproductive disease in cattle, while BoHV-5 is commonly associated to encephalitis. Difficulties in isolation of BoHV-5 have been described, which makes PCR an important tool of diagnosis. The aim of this study was to evaluate the applicability of PCR assay for the detection of BoHV-1 and BoHV-5 in CNS of bovines with meningoencephalitis, other encephalitis and healthy animals. For the present study, brain fragments samples of bovines were obtained from necropsy routine at Veterinary Hospital of University of Brasília (Hv-UnB) and State University of Londrina (HV-UEL), besides slaughterhouse samples. All CNS fragments were negative for BoHV-1. In 21 of 68 (30,88%) samples from Hv-UnB, 2 of 30 (7%) samples from slaughterhouse and 2 of 17 (11,76%) samples from HV-UEL the results were positive for BoHV-5. Among the 21 positive animals from HV-UnB, 3 where from samples of non-conclusive diagnosis cases, 7 from confirmed rabies diagnosis, 7 from animals with BoHV-5 encephalitis, 1 case of polioencephalomalacia, 1 animal with botulism, 1 with bacterial encephalitis and 1 animal with carbunculus. All positive samples from HV-UEL were from animals with BoHV-5 encephalitis diagnosis and from the slaughterhouse all animals were healthy. The PCR detection of BoHV-5 genome in bovines with encephalopathies must not be used alone as diagnosis but associated with clinical signs, histopathological findings, isolation and immunohistochemistry.

Orientador: João Pessoa Araújo Junior / Resumo: A análise de transcriptoma é essencial para determinar a relação entre as informações codificadas num genoma, a sua expressão e variação genotípica. O transcriptoma é o conjunto completo de transcritos e a quantidade gerada, relacionado a um estágio de desenvolvimento específico ou condição fisiológica da célula. Estes transcritos podem ser mapeados utilizando genomas como referência, para investigação de expressão do genes. Para isso, exige procedimentos de mineração de grandes volumes de dados de RNA-Seq para extrair conhecimentos biológicos. As ferramentas de bioinformática foram desenvolvidas para facilitar e agilizar essas análises, transformando dados em informações. Assim, alguns desses recursos foram empregados na análise de dados gerados pelo RNAseq, a partir de RNAm de cultura celular MDCK infectada por herpesvírus canino tipo 1 (1CaHV-1 - Canid alphaherpesvirus type 1) em diferentes momentos pós infecção. Dessa forma, foi realizado um dual RNAseq, em que foi avaliado tanto a expressão gênica celular do hospedeiro como do patógeno viral, no curso da infecção. Para isso, foram analisados o transcriptoma das atividades celulares e os processos envolvidos no ciclo de infecção viral, até o momento 32h-pi. Assim, foram identificados as atividades de respostas celulares à infecção viral, mecanismos regulatórios induzidos pelo vírus, transcrição de genes virais imediatos, iniciais e tardios. Dentre eles, foi verificado a elevação da expressão do gene COX-2 induzido pela... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Doutor

Resumo: A meningoencefalite herpética bovina é uma infecção viral do SNC causada pelo BoHV-5, um vírus DNA de fita dupla, envelopado, pertencente á família Herpesviridae, subfamília Alphaherpesvirinae. A meningoencefalite acomete principalmente animais jovens, ocorrendo principalmente em forma de surtos de casos isolados ou de surtos com morbidade baixa e letalidade é alta. A doença não possui caráter sazonal e nem predileção por raça ou sexo. Surtos de meningoencefalite por BHV-5 têm sido relatados após algumas práticas de manejo, todas associadas a situações de estresse. O diagnóstico final baseiase nos achados clínicos, epidemiológicos, macro e microscópicos e o isolamento viral associado a técnicas como imunoperoxidase, restrição da endonuclease e PCR. Entrentanto, o isolamento viral nem sempre é possível devido a distância das fazendas e ao tempo entre a morte dos animais e a coleta das amostras. Nestes casos a imunoistoquímica e a PCR são ferramentas diagnósticas úteis. Além disso, estas técnicas permitem o diagnóstico a partir de tecido fixado em formol e incluído em parafina. O objetivo deste trabalho foi descrever as alterações histopatológicas nas diferentes regiões do sistema nervoso central de bovinos infectados experimentalmente pelo BoHV-5 e relacionar a intensidade e o tipo das lesões encontradas com os resultados da PCR e da imunoistoquímica (IHQ) para detecção do BoHV-5. Para isso, blocos de parafina do sistema nervoso central de seis bovinos provenientes de animais inoculados experimentalmente pelo BoHV-5 foram avaliados microscopicamente e pelas técnicas da IHQ e da PCR. Todos os animais apresentaram alterações histopatológicas de meningoencefalite não supurativa, com intensidade variável entre as áreas e os animais, sendo que as regiões do córtex cerebral apresentaram alterações microscópicas mais acentuadas... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Bovine meningoencephalitis is a viral infection caused by BHV-5, a doublestranded DNA and enveloped virus, that belongs to the Herpesviridae family, subfamily Alphaherpesvirinae. Meningoencephalitis mainly occurs in young animals, causing individual deaths or outbreaks with low morbidity and high mortality. The disease has no seasonal character or predilection for breed or gender. Outbreaks of meningoencephalitis have been reported associated with stressful factors like weaning, vaccinations, transport, changes in feeding. The final diagnosis is based on clinical, epidemiological, gross and microscopic findings and virus isolation associated with others techniques like immunoperoxidase, endonucleases restriction and PCR. Wherever, virus isolation is no always possible due the distance of farms and time from animal death to the samples collection. Immunohistochemistry and PCR are better diagnostic tools in this cases. Besides this two techniques could be used in formalin-fixed, paraffin-embedded tissues. The aim of this study was to describe the histological changes in the CNS of BHV-5 experimentally infected calves and associate it with the PCR and IHC results. For this purpose, formalin-fixed, paraffin-embedded CNS tissue from previously BHV-5 inoculated calves (Cunha, 2010) were microscopically evaluated and were tested by immunohistochemistry (IHC) and polymerase chain reaction (PCR). All animals presented non-suppurative meningoencephalitis that had variable distribution among the cases and among the various sections of brain regions in each case. The cerebral cortex had more accentuated lesions. From 108 evaluated areas, 32.41% and 35.19% were positives by IHC and PCR, respectively. The IHQ and PCR positive areas had more accentuated microscopic lesions. These findings extend the knowledge about the BHV-5 distribution in the CNS of calves and show that IHC and PCR could be useful / Orientador: Alexandre Secorun Borges / Coorientador: Renée Laufer Amorim / Banca: Júlio Lopes Sequeira / Banca: Paulo Henrique Jorge da Cunha / Mestre

Os herpesvírus bovino tipo 1 (BoHV-1) e tipo 5 (BoHV-5) são responsáveis por uma série de patologias em bovinos. A diferenciação entre tipos e subtipos desses vírus é importante para a compreensão da epidemiologia das infecções associadas a eles, assim como para permitir a tomada de medidas de controle adequadas. No presente estudo foram efetuadas análises antigênicas utilizando anticorpos monoclonais (AcMs) preparados contra antígenos específicos de herpesvírus bovinos. Quarenta e cinco amostras virais foram examinadas com um painel de 36 AcMs previamente preparados, em testes de imunoperoxidase em monocamada. Quatro amostras virais, sendo três BoHV-1 e uma BoHV-5, não apresentaram reatividade frente a nenhum dos AcMs avaliados. Oito dos 36 AcMs reagiram com todas as demais 41 amostras de herpesvírus bovinos. Por outro lado, oito amostras virais (três BoHV-5 e cinco BoHV-1) reagiram com todos os AcMs testados. Um AcM foi capaz de diferenciar o subtipo “c” do BoHV- 5 das demais amostras. Os demais resultados obtidos sugerem que não há uma clara correlação entre tipos e subtipos genomicamente determinados de herpesvírus bovinos e os AcMs aqui avaliados. / Bovine herpesvirus 1(BoHV-1) and 5 (BoHV-5) are associated to different clinical conditions of cattle. The differentiation between types and subtypes of these viruses maybe important for a better understanding of the epidemiology of bovine herpesvirus infections, as well as to provide support for adequate control measures. In the present study, antigenic analyses were performed with monoclonal antibodies (Mabs) prepared to bovine herpesviruses specific antigens. Fourty five virus isolates/strains were examined with a panel of 36 previously prepared Mabs, immunoperoxidase monolayer assays. Four virus isolates, of which three BoHV-1 and one BoHV-5, did not react with any of the Mabs tested. Eight of the 36 Mabs reacted with all other 41 bovine herpeviruses. On the other hand, eight viruses (three BoHV-5 and five BoHV-1) reacted with all Mabs tested. One Mab was capable of distinguishing BoHV-5 subtype “c” from the other subtypes. Additional results revealed that no clearcut correlation could be established between bovine herpesviruses types and subtypes determinated by molecular methods and the Mabs here evaluated.

Os herpesvírus bovino tipo 1 (BoHV-1) e tipo 5 (BoHV-5) são responsáveis por uma série de patologias em bovinos. A diferenciação entre tipos e subtipos desses vírus é importante para a compreensão da epidemiologia das infecções associadas a eles, assim como para permitir a tomada de medidas de controle adequadas. No presente estudo foram efetuadas análises antigênicas utilizando anticorpos monoclonais (AcMs) preparados contra antígenos específicos de herpesvírus bovinos. Quarenta e cinco amostras virais foram examinadas com um painel de 36 AcMs previamente preparados, em testes de imunoperoxidase em monocamada. Quatro amostras virais, sendo três BoHV-1 e uma BoHV-5, não apresentaram reatividade frente a nenhum dos AcMs avaliados. Oito dos 36 AcMs reagiram com todas as demais 41 amostras de herpesvírus bovinos. Por outro lado, oito amostras virais (três BoHV-5 e cinco BoHV-1) reagiram com todos os AcMs testados. Um AcM foi capaz de diferenciar o subtipo “c” do BoHV- 5 das demais amostras. Os demais resultados obtidos sugerem que não há uma clara correlação entre tipos e subtipos genomicamente determinados de herpesvírus bovinos e os AcMs aqui avaliados. / Bovine herpesvirus 1(BoHV-1) and 5 (BoHV-5) are associated to different clinical conditions of cattle. The differentiation between types and subtypes of these viruses maybe important for a better understanding of the epidemiology of bovine herpesvirus infections, as well as to provide support for adequate control measures. In the present study, antigenic analyses were performed with monoclonal antibodies (Mabs) prepared to bovine herpesviruses specific antigens. Fourty five virus isolates/strains were examined with a panel of 36 previously prepared Mabs, immunoperoxidase monolayer assays. Four virus isolates, of which three BoHV-1 and one BoHV-5, did not react with any of the Mabs tested. Eight of the 36 Mabs reacted with all other 41 bovine herpeviruses. On the other hand, eight viruses (three BoHV-5 and five BoHV-1) reacted with all Mabs tested. One Mab was capable of distinguishing BoHV-5 subtype “c” from the other subtypes. Additional results revealed that no clearcut correlation could be established between bovine herpesviruses types and subtypes determinated by molecular methods and the Mabs here evaluated.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:47Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-02-15Bitstream added on 2014-06-13T20:51:06Z : No. of bitstreams: 1 cagnini_dq_me_botfmvz.pdf: 1790427 bytes, checksum: 7e7453715dc898af589170842b6953fe (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A meningoencefalite herpética bovina é uma infecção viral do SNC causada pelo BoHV-5, um vírus DNA de fita dupla, envelopado, pertencente á família Herpesviridae, subfamília Alphaherpesvirinae. A meningoencefalite acomete principalmente animais jovens, ocorrendo principalmente em forma de surtos de casos isolados ou de surtos com morbidade baixa e letalidade é alta. A doença não possui caráter sazonal e nem predileção por raça ou sexo. Surtos de meningoencefalite por BHV-5 têm sido relatados após algumas práticas de manejo, todas associadas a situações de estresse. O diagnóstico final baseiase nos achados clínicos, epidemiológicos, macro e microscópicos e o isolamento viral associado a técnicas como imunoperoxidase, restrição da endonuclease e PCR. Entrentanto, o isolamento viral nem sempre é possível devido a distância das fazendas e ao tempo entre a morte dos animais e a coleta das amostras. Nestes casos a imunoistoquímica e a PCR são ferramentas diagnósticas úteis. Além disso, estas técnicas permitem o diagnóstico a partir de tecido fixado em formol e incluído em parafina. O objetivo deste trabalho foi descrever as alterações histopatológicas nas diferentes regiões do sistema nervoso central de bovinos infectados experimentalmente pelo BoHV-5 e relacionar a intensidade e o tipo das lesões encontradas com os resultados da PCR e da imunoistoquímica (IHQ) para detecção do BoHV-5. Para isso, blocos de parafina do sistema nervoso central de seis bovinos provenientes de animais inoculados experimentalmente pelo BoHV-5 foram avaliados microscopicamente e pelas técnicas da IHQ e da PCR. Todos os animais apresentaram alterações histopatológicas de meningoencefalite não supurativa, com intensidade variável entre as áreas e os animais, sendo que as regiões do córtex cerebral apresentaram alterações microscópicas mais acentuadas... / Bovine meningoencephalitis is a viral infection caused by BHV-5, a doublestranded DNA and enveloped virus, that belongs to the Herpesviridae family, subfamily Alphaherpesvirinae. Meningoencephalitis mainly occurs in young animals, causing individual deaths or outbreaks with low morbidity and high mortality. The disease has no seasonal character or predilection for breed or gender. Outbreaks of meningoencephalitis have been reported associated with stressful factors like weaning, vaccinations, transport, changes in feeding. The final diagnosis is based on clinical, epidemiological, gross and microscopic findings and virus isolation associated with others techniques like immunoperoxidase, endonucleases restriction and PCR. Wherever, virus isolation is no always possible due the distance of farms and time from animal death to the samples collection. Immunohistochemistry and PCR are better diagnostic tools in this cases. Besides this two techniques could be used in formalin-fixed, paraffin-embedded tissues. The aim of this study was to describe the histological changes in the CNS of BHV-5 experimentally infected calves and associate it with the PCR and IHC results. For this purpose, formalin-fixed, paraffin-embedded CNS tissue from previously BHV-5 inoculated calves (Cunha, 2010) were microscopically evaluated and were tested by immunohistochemistry (IHC) and polymerase chain reaction (PCR). All animals presented non-suppurative meningoencephalitis that had variable distribution among the cases and among the various sections of brain regions in each case. The cerebral cortex had more accentuated lesions. From 108 evaluated areas, 32.41% and 35.19% were positives by IHC and PCR, respectively. The IHQ and PCR positive areas had more accentuated microscopic lesions. These findings extend the knowledge about the BHV-5 distribution in the CNS of calves and show that IHC and PCR could be useful

Os herpesvírus bovino tipo 1 (BoHV-1) e tipo 5 (BoHV-5) são responsáveis por uma série de patologias em bovinos. A diferenciação entre tipos e subtipos desses vírus é importante para a compreensão da epidemiologia das infecções associadas a eles, assim como para permitir a tomada de medidas de controle adequadas. No presente estudo foram efetuadas análises antigênicas utilizando anticorpos monoclonais (AcMs) preparados contra antígenos específicos de herpesvírus bovinos. Quarenta e cinco amostras virais foram examinadas com um painel de 36 AcMs previamente preparados, em testes de imunoperoxidase em monocamada. Quatro amostras virais, sendo três BoHV-1 e uma BoHV-5, não apresentaram reatividade frente a nenhum dos AcMs avaliados. Oito dos 36 AcMs reagiram com todas as demais 41 amostras de herpesvírus bovinos. Por outro lado, oito amostras virais (três BoHV-5 e cinco BoHV-1) reagiram com todos os AcMs testados. Um AcM foi capaz de diferenciar o subtipo “c” do BoHV- 5 das demais amostras. Os demais resultados obtidos sugerem que não há uma clara correlação entre tipos e subtipos genomicamente determinados de herpesvírus bovinos e os AcMs aqui avaliados. / Bovine herpesvirus 1(BoHV-1) and 5 (BoHV-5) are associated to different clinical conditions of cattle. The differentiation between types and subtypes of these viruses maybe important for a better understanding of the epidemiology of bovine herpesvirus infections, as well as to provide support for adequate control measures. In the present study, antigenic analyses were performed with monoclonal antibodies (Mabs) prepared to bovine herpesviruses specific antigens. Fourty five virus isolates/strains were examined with a panel of 36 previously prepared Mabs, immunoperoxidase monolayer assays. Four virus isolates, of which three BoHV-1 and one BoHV-5, did not react with any of the Mabs tested. Eight of the 36 Mabs reacted with all other 41 bovine herpeviruses. On the other hand, eight viruses (three BoHV-5 and five BoHV-1) reacted with all Mabs tested. One Mab was capable of distinguishing BoHV-5 subtype “c” from the other subtypes. Additional results revealed that no clearcut correlation could be established between bovine herpesviruses types and subtypes determinated by molecular methods and the Mabs here evaluated.

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2018-06-12T15:11:24Z No. of bitstreams: 1 Talita DPaula Tavares Pereira Muniz.pdf: 1521651 bytes, checksum: bf2f40091e04a63399190573c50927ea (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-12T15:11:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Talita DPaula Tavares Pereira Muniz.pdf: 1521651 bytes, checksum: bf2f40091e04a63399190573c50927ea (MD5) Previous issue date: 2018-02-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Equine herpesvirus is one of the main viral diseases that causes negative impacts on equidae culture, especially on equine reproduction. This study’s objective to conduct an epidemiological investigation of herpesvirus infection in horses in the micro-region of the Ipojuca Valley, in the state of Pernambuco, Brazil. A viral seroneutralization was performed in 322 non-vaccinated horses against herpetic infection, from 42 properties of 16 municipalities belonging to the Ipojuca Valley Microregion. An investigated questionnaire was used to analyze the risk factors associated with equine herpesvirus infection. The occurrence of 23.3% (75/322; 95% confidence interval (CI): 18.9 - 28.4%) for herpesvirus infection in horses was observed. In addition, 61.9% (26/42) of the good possessing at least one positive animal, with variation of the occurrence of infection between 5 to 100% inter-herds. (OR: 6.64, 95% CI: 2.66% - 16.58%) and farm type (OR: 1.88, 95% CI: 0.99-3.57) and farms (OR : 2.76, 95% CI: 1.42-5.35). When analyzing reproductive indexes, associate with herpetic infection: a use of reproductive biotechniques with a natural mount (p = 0.003); history of perinatal mortality without herds (p = 0.004); interval between deliveries greater than two years (p = 0.003); and reproductive seasonality, with presence of mares with irregular cycles in the herd (p = 0.041). This is the first record of herpesvirus infection in horses in the state of Pernambuco, Brazil. From the results obtained, it is suggested to adopt prophylactic measures directed to the identified risk factors, in order to reduce the occurrence of herpetic infection in the studied region. / A herpesvirose equina é uma das principais afecções virais que causa impactos negativos na equideocultura, principalmente na reprodução de equinos. Objetivou-se com este estudo realizar um inquérito epidemiológico da infecção por herpesvírus em equinos na microrregião do Vale do Ipojuca, agreste do estado de Pernambuco, Brasil. A soroneutralização viral foi realizada em 322 equinos não vacinados contra a infecção herpética, procedentes de 42 propriedades de 16 municípios pertencentes à Microrregião do Vale do Ipojuca. Um questionário investigativo foi utilizado para análise dos fatores de risco associados à infecção por herpesvírus equino. Observou-se ocorrência de 23,3% (75/322; Índice de confiança (IC) 95%: 18,9 – 28,4%) para infecção por herpesvírus em equinos. Além disso, 61,9% (26/42) das propriedades possuíam pelo menos um animal positivo, com variação da ocorrência de infecção entre 5 a 100% inter-rebanhos. Foram considerados fatores de risco associados à infecção: criação consorciada de equinos com muares (Odds ratio - OR: 6,64; IC 95%: 2,66% - 16,58%) e tipo da propriedade, fazenda (OR: 1,88; IC 95%: 0,99-3,57) e haras (OR: 2,76; IC 95%: 1,42-5,35). Ao analisar índices reprodutivos, associou-se à infecção herpética: a utilização de biotécnicas reprodutivas com a monta natural (p = 0,003); histórico de mortalidade perinatal no rebanho (p = 0,004); intervalo entre partos superior a dois anos (p = 0,003); e a sazonalidade reprodutiva, com a presença de éguas com ciclos irregulares no rebanho (p = 0,041). Este é o primeiro registro da infecção por herpesvírus em equinos no estado de Pernambuco, Brasil. A partir dos resultados obtidos, sugere-se a adoção de medidas profiláticas direcionadas aos fatores de risco identificados, a fim de reduzir a ocorrência da infecção herpética na região estudada.

As condições para uma eficiente transfecção pelo método de fosfato de cálcio podem variar substancialmente. Neste estudo foi estabelecido o tipo de célula apropriada para transfecção de herpesvírus bovino tipo 5 (BoHV-5). Para atingir este objetivo foram testadas amostras de DNA de células infectadas com BoHV-1gE-, DNA purificado de BoHV-5, assim como DNA de 3 plasmídeos. Este material foi transfectado em células de rim de macaco verde africano (VERO), de rim de suíno (PKsC3), de testículo de terneiro (TT) e células de rim de bovino (MDBK) e células resistentes a vírus da diarréia viral bovina (CRIB). Os procedimentos da transfecção com DNA plasmideal expressando o gene repórter EGFP foram feitos para identificar as melhores células transfectadas. Os resultados mostraram um percentual de 0,5% de células fluorescentes para VERO, 2,9% para PKsC3, 4,5% para TT e 0,05% para MDBK. Foi averiguada a capacidade do BoHV-5 de se replicar nestes quatro tipos de células. Uma amostra de vírus foi titulada em células VERO, PKsC3, TT e MDBK. Células VERO e PKsC3 apresentaram um título de 103,3 TCID/mL, enquanto que as células MDBK mostraram um título de 106,8 TCID/mL, o mesmo encontrado para as células TT. Quando células PKsC3 e TT foram transfectadas com 0,5 µg de DNA purificado de BoHV-5, somente as células TT apresentaram resultado positivo com duas placas virais por poço em placa de seis poços. Para investigar a influência da concentração de DNA viral, células TT foram transfectadas com 0,5 µg e 1 µg de DNA purificado de BoHV-5, sendo verificadas 2 e 4 placas, respectivamente. Estes resultados indicam que as células TT são boas candidatas para serem utilizadas na transfecção de DNA de BoHV-5, no entanto, experimentos adicionais são necessários para melhorar a eficiência de transfecção neste tipo de célula. / The conditions for efficient transfection using the calcium phosphate technique may vary substantially. In this study it was the type of cell suitable for transfection of bovine herpesvirus type 5 (BoHV-5). To achieve this goal DNA samples from cells infected with BoHV-1gE-, purified DNA from BoHV-5, as well as three plasmid DNA were tested. This material was transfected into cells of African green monkey kidney (VERO), pig kidney cells (PKsC3), calf testicle cells (TT), bovine kidney cells (MDBK) and kidney cells resistant to bovine viral diarrhea virus (CRIB). The procedures of transfection with DNA plasmideal expressing the EGFP reporter gene were carried out to identify the best transfected cells. Results showed 0.5% of fluorescent cells for VERO, 2.9% for PKsC3, 4.5% for TT and 0.05% for MDBK cells. It was also investigated the ability of BoHV-5 to replicate in these four types of cells. A sample of virus was titrated in VERO, PKsC3, TT and MDBK cells. VERO and PKsC3 cells presented a titre of 103,3 TCID/mL, whereas MDBK cells reached a value of 106,8 TCID/mL, the same displayed by TT cells. When PKsC3 and TT cells were transfected with 0.5µg of BoHV-5 purified DNA, only TT cells gave positive result with two viral plaques per well in six-well plate. To investigate the influence of viral DNA concentration, TT cells were transfected with 0.5 µg and 1µg of BoHV-5 purified DNA, which yielded 2 and 4 plates, respectively. These results indicate that TT cells are good candidates for using in transfection of BoHV-5 DNA, however, additional experiments are needed to improve the efficiency of transfection in this type of cell.

As condições para uma eficiente transfecção pelo método de fosfato de cálcio podem variar substancialmente. Neste estudo foi estabelecido o tipo de célula apropriada para transfecção de herpesvírus bovino tipo 5 (BoHV-5). Para atingir este objetivo foram testadas amostras de DNA de células infectadas com BoHV-1gE-, DNA purificado de BoHV-5, assim como DNA de 3 plasmídeos. Este material foi transfectado em células de rim de macaco verde africano (VERO), de rim de suíno (PKsC3), de testículo de terneiro (TT) e células de rim de bovino (MDBK) e células resistentes a vírus da diarréia viral bovina (CRIB). Os procedimentos da transfecção com DNA plasmideal expressando o gene repórter EGFP foram feitos para identificar as melhores células transfectadas. Os resultados mostraram um percentual de 0,5% de células fluorescentes para VERO, 2,9% para PKsC3, 4,5% para TT e 0,05% para MDBK. Foi averiguada a capacidade do BoHV-5 de se replicar nestes quatro tipos de células. Uma amostra de vírus foi titulada em células VERO, PKsC3, TT e MDBK. Células VERO e PKsC3 apresentaram um título de 103,3 TCID/mL, enquanto que as células MDBK mostraram um título de 106,8 TCID/mL, o mesmo encontrado para as células TT. Quando células PKsC3 e TT foram transfectadas com 0,5 µg de DNA purificado de BoHV-5, somente as células TT apresentaram resultado positivo com duas placas virais por poço em placa de seis poços. Para investigar a influência da concentração de DNA viral, células TT foram transfectadas com 0,5 µg e 1 µg de DNA purificado de BoHV-5, sendo verificadas 2 e 4 placas, respectivamente. Estes resultados indicam que as células TT são boas candidatas para serem utilizadas na transfecção de DNA de BoHV-5, no entanto, experimentos adicionais são necessários para melhorar a eficiência de transfecção neste tipo de célula. / The conditions for efficient transfection using the calcium phosphate technique may vary substantially. In this study it was the type of cell suitable for transfection of bovine herpesvirus type 5 (BoHV-5). To achieve this goal DNA samples from cells infected with BoHV-1gE-, purified DNA from BoHV-5, as well as three plasmid DNA were tested. This material was transfected into cells of African green monkey kidney (VERO), pig kidney cells (PKsC3), calf testicle cells (TT), bovine kidney cells (MDBK) and kidney cells resistant to bovine viral diarrhea virus (CRIB). The procedures of transfection with DNA plasmideal expressing the EGFP reporter gene were carried out to identify the best transfected cells. Results showed 0.5% of fluorescent cells for VERO, 2.9% for PKsC3, 4.5% for TT and 0.05% for MDBK cells. It was also investigated the ability of BoHV-5 to replicate in these four types of cells. A sample of virus was titrated in VERO, PKsC3, TT and MDBK cells. VERO and PKsC3 cells presented a titre of 103,3 TCID/mL, whereas MDBK cells reached a value of 106,8 TCID/mL, the same displayed by TT cells. When PKsC3 and TT cells were transfected with 0.5µg of BoHV-5 purified DNA, only TT cells gave positive result with two viral plaques per well in six-well plate. To investigate the influence of viral DNA concentration, TT cells were transfected with 0.5 µg and 1µg of BoHV-5 purified DNA, which yielded 2 and 4 plates, respectively. These results indicate that TT cells are good candidates for using in transfection of BoHV-5 DNA, however, additional experiments are needed to improve the efficiency of transfection in this type of cell.